目的探讨以si RNA为载体沉默骨髓间充质干细胞(MSC)中核因子E2相关因子2(Nrf2)基因后细胞移植对大鼠心肌梗死后心肌纤维化和心室重构的影响及可能机制。方法建立心肌梗死大鼠模型,随机分为沉默Nrf2基因的MSC移植组(MSCNrf2-/-组)、过表...目的探讨以si RNA为载体沉默骨髓间充质干细胞(MSC)中核因子E2相关因子2(Nrf2)基因后细胞移植对大鼠心肌梗死后心肌纤维化和心室重构的影响及可能机制。方法建立心肌梗死大鼠模型,随机分为沉默Nrf2基因的MSC移植组(MSCNrf2-/-组)、过表达Nrf2基因的MSC移植组(MSCNrf2+/+组)和生理盐水转染MSC移植组(对照组),每组12只。细胞移植后28天,采用Masson染色检测心肌梗死边缘区胶原沉积含量和纤维化程度,Western blot检测梗死心肌Nrf2和血红素氧合酶1(HO-1)蛋白表达水平,超声心动图评价梗死后心功能。结果 si RNA-Nrf2转染MSC后,Nrf2蛋白表达明显减少。移植后第28天,MSCNrf2-/-组心肌组织纤维化程度较对照组加重,MSCNrf2+/+组心肌组织纤维化程度较对照组减轻(P<0.05);MSCNrf2-/-组梗死心肌中Nrf2、HO-1蛋白表达较对照组下降(P<0.05),而MSCNrf2+/+组梗死心肌中Nrf2、HO-1蛋白表达较对照组增加(P<0.05);超声心动图结果显示,与对照组比较,MSCNrf2-/-组左心室舒张期末内经(LVEDD)和左心室收缩期末内经(LVESD)增大,左心室射血分数(LVEF)下降(P<0.05),MSCNrf2+/+组LVEDD和LVESD均减小,LVEF无下降(P<0.05)。结论 si RNA-Nrf2可有效干扰MSC中Nrf2蛋白的表达,降低外源性MSC对梗死心脏的修复能力,增加心肌梗死区胶原沉积,进而促进心室重构,降低心功能。由此推测Nrf2信号通路在干细胞移植治疗心肌梗死后心肌重构和纤维化中起了关键作用。展开更多
目的:研究蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子(cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A,CIP2A)表达对喉癌细胞株Hep-2增殖的影响及相关分子机制。方法:以特异性si RNA和阴性对照序列转染喉癌Hep-2细胞,实验分为CIP2A si RNA组与Control...目的:研究蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子(cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A,CIP2A)表达对喉癌细胞株Hep-2增殖的影响及相关分子机制。方法:以特异性si RNA和阴性对照序列转染喉癌Hep-2细胞,实验分为CIP2A si RNA组与Control si RNA组。平板克隆形成实验检测CIP2A在喉癌细胞增殖中的作用;MTT法检测CIP2A对细胞生长曲线及顺铂敏感性影响;流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡率的改变。real-time PCR检测CIP2A m RNA表达水平,Western blot检测CIP2A及生长相关蛋白c-myc、AKT、p-AKT、cyclin D1的蛋白表达水平。结果:沉默CIP2A后,CIP2A在基因及蛋白水平的表达量明显降低,Hep-2细胞生长减缓,克隆的形成被抑制,Control si RNA组为339.00±34.00,CIP2A si RNA组为126.00±33.00,差异有统计学意义(t=-7.796,P=0.010);沉默CIP2A可增加喉癌细胞对顺铂的敏感性,Control si RNA组IC50为(6.67±0.54)μg/ml,CIP2A si RNA组为(3.53±0.32)μg/ml,差异有统计学意义(t=8.598,P=0.001);细胞周期阻滞于G1期,Control si RNA组G1期细胞比例为66.860±1.972,CIP2A si RNA组为74.613±3.357,差异有统计学意义(t=3.449,P=0.026);S期细胞比例减少,Control si RNA组为23.713±1.564,CIP2A si RNA组为17.747±1.255,差异有统计学意义(t=-5.153,P=0.007);沉默CIP2A没有引起细胞凋亡率的变化(P=0.216)。Western blot结果显示,沉默CIP2A表达可下调Cyclin D1(t=-4.531,P=0.011)、c-myc(t=-4.522,P=0.011)、pAKT(t=-4.574,P=0.010)的表达,但对总AKT蛋白的表达没有影响(t=0.051,P=0.962)。结论:沉默CIP2A基因可抑制喉癌Hep-2细胞生长,增加喉癌细胞对顺铂的敏感性,其机制可能与下调c-myc、p-AKT、cyclin D1的表达有关。展开更多
目的:评估叉头框蛋白M1(forkhead box protein M1,FOXM1)在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)的发生发展中的作用。方法:研究103例原发CRC和配对的正常组织标本,探讨FOXM1表达变化的潜在机制及其对体外CRC细胞模型的增殖和转移的影响。结...目的:评估叉头框蛋白M1(forkhead box protein M1,FOXM1)在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)的发生发展中的作用。方法:研究103例原发CRC和配对的正常组织标本,探讨FOXM1表达变化的潜在机制及其对体外CRC细胞模型的增殖和转移的影响。结果:103例CRC组织染色后FOXM1阳性率为85.44%(88/103),癌旁正常组织中阳性率为20.39%(21/103)。两组间的FOXM1的表达差异具有统计学意义(P<0.001);FOXM1沉默能抑制结肠癌细胞的增殖,且侵袭和迁移也明显受抑。结论:CRC的发病机制可能是由FOXM1介导,FOXM1可能代表CRC分子靶向治疗的选择性靶点。展开更多
目的探讨RNA干扰技术抑制SHBG基因表达对滋养细胞增殖的影响。方法在体外通过RNA干扰技术,将SHBG si RNA转染至原代培养的人绒毛滋养细胞中,MTT法检测滋养细胞增殖情况。结果成功将SHBG si RNA转染人绒毛滋养细胞;转染后24、48、72h,SHB...目的探讨RNA干扰技术抑制SHBG基因表达对滋养细胞增殖的影响。方法在体外通过RNA干扰技术,将SHBG si RNA转染至原代培养的人绒毛滋养细胞中,MTT法检测滋养细胞增殖情况。结果成功将SHBG si RNA转染人绒毛滋养细胞;转染后24、48、72h,SHBG si RNA转染组的细胞生长速度显著减缓,正常对照组(未经转染的细胞)、空白对照组(只转染脂质体,无si RNA)和阴性对照组(转染非特异性si RNA)的组间比较差异均无统计学意义(P>0.05);转染组(SHBG si RNA-I,SHBG si RNA-II,SHBG si RNA-III)之间差异均无统计学意义(P>0.05),各转染组分别与各对照组的组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 si RNA可以有效干扰人绒毛滋养细胞SHBG基因的表达,抑制滋养细胞增殖的增殖活性。展开更多
文摘目的探讨以si RNA为载体沉默骨髓间充质干细胞(MSC)中核因子E2相关因子2(Nrf2)基因后细胞移植对大鼠心肌梗死后心肌纤维化和心室重构的影响及可能机制。方法建立心肌梗死大鼠模型,随机分为沉默Nrf2基因的MSC移植组(MSCNrf2-/-组)、过表达Nrf2基因的MSC移植组(MSCNrf2+/+组)和生理盐水转染MSC移植组(对照组),每组12只。细胞移植后28天,采用Masson染色检测心肌梗死边缘区胶原沉积含量和纤维化程度,Western blot检测梗死心肌Nrf2和血红素氧合酶1(HO-1)蛋白表达水平,超声心动图评价梗死后心功能。结果 si RNA-Nrf2转染MSC后,Nrf2蛋白表达明显减少。移植后第28天,MSCNrf2-/-组心肌组织纤维化程度较对照组加重,MSCNrf2+/+组心肌组织纤维化程度较对照组减轻(P<0.05);MSCNrf2-/-组梗死心肌中Nrf2、HO-1蛋白表达较对照组下降(P<0.05),而MSCNrf2+/+组梗死心肌中Nrf2、HO-1蛋白表达较对照组增加(P<0.05);超声心动图结果显示,与对照组比较,MSCNrf2-/-组左心室舒张期末内经(LVEDD)和左心室收缩期末内经(LVESD)增大,左心室射血分数(LVEF)下降(P<0.05),MSCNrf2+/+组LVEDD和LVESD均减小,LVEF无下降(P<0.05)。结论 si RNA-Nrf2可有效干扰MSC中Nrf2蛋白的表达,降低外源性MSC对梗死心脏的修复能力,增加心肌梗死区胶原沉积,进而促进心室重构,降低心功能。由此推测Nrf2信号通路在干细胞移植治疗心肌梗死后心肌重构和纤维化中起了关键作用。
文摘目的:研究蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子(cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A,CIP2A)表达对喉癌细胞株Hep-2增殖的影响及相关分子机制。方法:以特异性si RNA和阴性对照序列转染喉癌Hep-2细胞,实验分为CIP2A si RNA组与Control si RNA组。平板克隆形成实验检测CIP2A在喉癌细胞增殖中的作用;MTT法检测CIP2A对细胞生长曲线及顺铂敏感性影响;流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡率的改变。real-time PCR检测CIP2A m RNA表达水平,Western blot检测CIP2A及生长相关蛋白c-myc、AKT、p-AKT、cyclin D1的蛋白表达水平。结果:沉默CIP2A后,CIP2A在基因及蛋白水平的表达量明显降低,Hep-2细胞生长减缓,克隆的形成被抑制,Control si RNA组为339.00±34.00,CIP2A si RNA组为126.00±33.00,差异有统计学意义(t=-7.796,P=0.010);沉默CIP2A可增加喉癌细胞对顺铂的敏感性,Control si RNA组IC50为(6.67±0.54)μg/ml,CIP2A si RNA组为(3.53±0.32)μg/ml,差异有统计学意义(t=8.598,P=0.001);细胞周期阻滞于G1期,Control si RNA组G1期细胞比例为66.860±1.972,CIP2A si RNA组为74.613±3.357,差异有统计学意义(t=3.449,P=0.026);S期细胞比例减少,Control si RNA组为23.713±1.564,CIP2A si RNA组为17.747±1.255,差异有统计学意义(t=-5.153,P=0.007);沉默CIP2A没有引起细胞凋亡率的变化(P=0.216)。Western blot结果显示,沉默CIP2A表达可下调Cyclin D1(t=-4.531,P=0.011)、c-myc(t=-4.522,P=0.011)、pAKT(t=-4.574,P=0.010)的表达,但对总AKT蛋白的表达没有影响(t=0.051,P=0.962)。结论:沉默CIP2A基因可抑制喉癌Hep-2细胞生长,增加喉癌细胞对顺铂的敏感性,其机制可能与下调c-myc、p-AKT、cyclin D1的表达有关。
文摘目的:评估叉头框蛋白M1(forkhead box protein M1,FOXM1)在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)的发生发展中的作用。方法:研究103例原发CRC和配对的正常组织标本,探讨FOXM1表达变化的潜在机制及其对体外CRC细胞模型的增殖和转移的影响。结果:103例CRC组织染色后FOXM1阳性率为85.44%(88/103),癌旁正常组织中阳性率为20.39%(21/103)。两组间的FOXM1的表达差异具有统计学意义(P<0.001);FOXM1沉默能抑制结肠癌细胞的增殖,且侵袭和迁移也明显受抑。结论:CRC的发病机制可能是由FOXM1介导,FOXM1可能代表CRC分子靶向治疗的选择性靶点。
文摘目的探讨RNA干扰技术抑制SHBG基因表达对滋养细胞增殖的影响。方法在体外通过RNA干扰技术,将SHBG si RNA转染至原代培养的人绒毛滋养细胞中,MTT法检测滋养细胞增殖情况。结果成功将SHBG si RNA转染人绒毛滋养细胞;转染后24、48、72h,SHBG si RNA转染组的细胞生长速度显著减缓,正常对照组(未经转染的细胞)、空白对照组(只转染脂质体,无si RNA)和阴性对照组(转染非特异性si RNA)的组间比较差异均无统计学意义(P>0.05);转染组(SHBG si RNA-I,SHBG si RNA-II,SHBG si RNA-III)之间差异均无统计学意义(P>0.05),各转染组分别与各对照组的组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 si RNA可以有效干扰人绒毛滋养细胞SHBG基因的表达,抑制滋养细胞增殖的增殖活性。
