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用半定量RT-PCR方法分析小麦TaMlo-A1c基因的表达 被引量：28
1
作者 张丽娜 牛吉山 于玲 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期1368-1371,共4页
以小麦稳定表达的肌动蛋白基因(Actin)作为对照,利用半定量反转录聚合酶链式反应(Semi-QRT-PCR)技术,对与抗白粉病有关的小麦(TriticumaestivumL.)TaMlo-A1c基因的表达进行了研究。结果发现:TaMlo-A1c基因在小麦的叶、茎、根中均表达,... 以小麦稳定表达的肌动蛋白基因(Actin)作为对照,利用半定量反转录聚合酶链式反应(Semi-QRT-PCR)技术,对与抗白粉病有关的小麦(TriticumaestivumL.)TaMlo-A1c基因的表达进行了研究。结果发现:TaMlo-A1c基因在小麦的叶、茎、根中均表达,穗中不表达,在白粉菌(Blumeriagraminis(DC.)E.O.Speerf.sp.triticiEm.Marchal,Bgt)诱导不同时间后小麦叶片中的表达稍微有所增强。研究表明,用半定量RT-PCR技术研究小麦基因表达,具有特异性高、操作简便和可靠性强的优点。 展开更多
关键词 小麦 表达 TaMto—Alc基因 肌动蛋白基因 半定量反转录聚合酶链式反应
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胞质雄性不育相关基因的克隆及其表达分析 被引量：5
2
作者 邓晓辉 张蜀宁 +1 位作者 侯喜林 韩建明 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期1859-1863,共5页
根据GenBank中orf224和atp6基因的保守序列设计特异引物,对不结球白菜Pol胞质雄性不育系的基因组DNA进行特异扩增,获得了Pol胞质雄性不育的特异基因orf224和atp6的DNA序列.用Blastn在GenBank中进行同源性比对分析,发现不结球白菜orf224c... 根据GenBank中orf224和atp6基因的保守序列设计特异引物,对不结球白菜Pol胞质雄性不育系的基因组DNA进行特异扩增,获得了Pol胞质雄性不育的特异基因orf224和atp6的DNA序列.用Blastn在GenBank中进行同源性比对分析,发现不结球白菜orf224c和atp6c基因与已报道的orf224和atp6基因的同源性高达100%,在GenBank中的登录号依次为DQ400846、DQ412559.运用半定量RT-PCR对orf224c基因在不同器官中的表达水平进行分析,结果表明:不育系花期叶片中该基因的表达量比长度小于0.5 mm蕾和雄蕊中的明显低,在后2个器官中的表达量无明显差异;而在保持系的上述3个器官中的表达量无明显差异.该结果显示orf224基因表达上调与孢原细胞分化受阻相关. 展开更多
关键词 不结球白菜 胞质雄性不育 orf224 ATP6 半定量RT-PCR
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用半定量RT-PCR法分析基因表达水平的影响因素 被引量：5
3
作者 陈名红 陈毅坚 +2 位作者 叶艳青 苏源 李成云 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2009年第8期28-30,33,共4页
半定量逆转录聚合酶链式反应(Semi-QRT-PCR)以其灵敏、简捷及特异性高等优点已逐渐成为分析基因表达水平的一种有效手段。着重对用半定量RT-PCR法分析基因表达水平的相关影响因素进行了综合论述,并讨论了半定量RT-PCR法在基因表达研究... 半定量逆转录聚合酶链式反应(Semi-QRT-PCR)以其灵敏、简捷及特异性高等优点已逐渐成为分析基因表达水平的一种有效手段。着重对用半定量RT-PCR法分析基因表达水平的相关影响因素进行了综合论述,并讨论了半定量RT-PCR法在基因表达研究方面的应用潜力。 展开更多
关键词 半定量逆转录聚合酶链式反应 基因表达 影响因素
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半巢式荧光定量PCR快速检测登革Ⅰ型病毒成熟microRNA方法的建立 被引量：4
4
作者 滕娟 潘林奇 +4 位作者 李晓杰 何声梅 周文雄 陈莉 陈丽 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2016年第6期554-557,共4页
目的建立外周血中登革病毒微小RNA检测方法,探讨其作为登革热病毒感染生物标记物的可行性。方法设计并筛选半巢式实时荧光定量PCR检测登革病毒miRNA引物,验证方法的灵敏度、特异性和重复性。结果设计的登革病毒茎环引物和扩增引物可区... 目的建立外周血中登革病毒微小RNA检测方法,探讨其作为登革热病毒感染生物标记物的可行性。方法设计并筛选半巢式实时荧光定量PCR检测登革病毒miRNA引物,验证方法的灵敏度、特异性和重复性。结果设计的登革病毒茎环引物和扩增引物可区分健康人和登革热Ⅰ型感染者;重复试验确定Ct≤35为登革病毒感染阳性,Ct〉35为阴性,同一样品内相对标准偏差（RSD）为0.05%,样品间的相对标准偏差（RSD）为0.15%,总体样品的相对标准偏差（RSD）为5%;该方法检测miRNA的灵敏度为1×10^（-7）μmol/L,检测1～10^（-4）μmol/L内的miRNA呈良好的线性关系。该方法也显示了较好的特异性。结论成功建立了半巢式SYBR GreenⅠ荧光定量qRT-PCR检测Ⅰ型DENV的miRNA方法。外周血中成熟的miRNA可以作为一种潜在的DENV感染生物标志物。 展开更多
关键词 成熟miRNA 登革病毒Ⅰ型 半巢式 荧光定量PCR
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发育时期和光诱导对拟南芥AtSUC2基因表达的影响 被引量：2
5
作者 肖红 张立军 +1 位作者 杜国华 崔震海 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期60-64,共5页
蔗糖是高等植物中碳水化合物最主要的转运形式,对于植物的生长发育至关重要。植物体内蔗糖的转运主要依赖蔗糖转运蛋白,因此对于蔗糖转运蛋白基因的研究具有重要意义。拟南芥蔗糖转运蛋白AtSUC2在蔗糖装载中起主要作用,通过半定量RT-PC... 蔗糖是高等植物中碳水化合物最主要的转运形式,对于植物的生长发育至关重要。植物体内蔗糖的转运主要依赖蔗糖转运蛋白,因此对于蔗糖转运蛋白基因的研究具有重要意义。拟南芥蔗糖转运蛋白AtSUC2在蔗糖装载中起主要作用,通过半定量RT-PCR测定拟南芥叶片不同发育时期和不同光强下AtSUC2基因的表达量,研究拟南芥特定发育阶段和光诱导作用下AtSUC2基因表达的影响。结果表明,在野生型拟南芥叶片中,AtSUC2基因在16 d幼叶、30 d营养期叶片、生殖期叶片中均表达,在16 d幼叶和生殖期叶片中表达强度较弱,在营养生长旺盛时(30 d叶龄)表达较高。同时,植株在暗处理12 h时,AtSUC2基因表达量降低,在强光处理12 h时,AtSUC2基因表达量与对照差异不显著,可能AtSUC2基因的表达受光诱导但与光强无关。 展开更多
关键词 拟南芥 AtSUC2基因 蔗糖转运蛋白 半定量PCR
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拟南芥Atkin8a和Atkin8b基因表达特性 被引量：1
6
作者 王文娟 王建武 王海庆 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期654-658,共5页
以拟南芥动蛋白(kinesin)kin-8家族的AtKin8a和AtKin8b这两个动蛋白基因作为研究对象,以组成型表达的肌动蛋白基因(Actin2)作为对照,利用半定量RT-PCR的方法,分析其在拟南芥各器官中的表达状况。结果表明:AtKin8a和AtKin8b基因主要在花... 以拟南芥动蛋白(kinesin)kin-8家族的AtKin8a和AtKin8b这两个动蛋白基因作为研究对象,以组成型表达的肌动蛋白基因(Actin2)作为对照,利用半定量RT-PCR的方法,分析其在拟南芥各器官中的表达状况。结果表明:AtKin8a和AtKin8b基因主要在花器官中特异表达;随后克隆AtKin8a和AtKin8b基因启动子区域并与GUS基因融合,转基因植株花器官GUS染色表明:AtKin8a和AtKin8b基因的表达主要分别在胚珠、花药部位。由此推测它们可能分别在胚珠、花药发育过程中发挥作用。 展开更多
关键词 拟南芥 动蛋白 半定量RT-PCR GUS表达
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红菜薹温敏型胞质雄性不育相关基因的克隆与表达分析 被引量：1
7
作者 邓晓辉 邱正明 +1 位作者 聂启军 朱凤娟 《湖北农业科学》 北大核心 2010年第11期2636-2639,共4页
根据GenBank中orf224和atp6基因的保守序列设计特异引物对红菜薹温敏型(Pol)胞质雄性不育系的基因组DNA进行特异扩增,获得了红菜薹Pol胞质雄性不育特异基因orf224p和atp6p的DNA序列,红菜薹orf224p和atp6p基因与已报道的orf224和atp6基... 根据GenBank中orf224和atp6基因的保守序列设计特异引物对红菜薹温敏型(Pol)胞质雄性不育系的基因组DNA进行特异扩增,获得了红菜薹Pol胞质雄性不育特异基因orf224p和atp6p的DNA序列,红菜薹orf224p和atp6p基因与已报道的orf224和atp6基因的同源性高达100%。运用半定量RT-PCR对atp6p基因在不同器官中的表达水平进行了分析。结果表明,不育系花期叶片中该基因的表达量比蕾(长度小于0.5mm)和雄蕊中的明显低,在后2个器官中的表达量无明显差异;而在保持系的上述3个器官中的表达量无明显差异。该结果显示,atp6p基因表达上调与孢原细胞分化受阻相关。 展开更多
关键词 红菜薹 胞质雄性不育 orf224 ATP6 半定量RT-PCR
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菠萝AcRCI2A基因克隆及其在抗黑心病处理中的表达分析
8
作者 宋康华 洪克前 谷会 《广东农业科学》 2026年第1期13-22,共10页
【目的】克隆菠萝稀有冷诱导2基因(AcRCI2A)并探究其在菠萝抗黑心病处理中的表达情况,为通过该基因遗传改良菠萝果实黑心病抗性奠定基础。【方法】以‘巴厘’菠萝果肉为材料,克隆AcRCI2A基因并进行生物信息学分析。利用同源重组方法将Ac... 【目的】克隆菠萝稀有冷诱导2基因(AcRCI2A)并探究其在菠萝抗黑心病处理中的表达情况,为通过该基因遗传改良菠萝果实黑心病抗性奠定基础。【方法】以‘巴厘’菠萝果肉为材料,克隆AcRCI2A基因并进行生物信息学分析。利用同源重组方法将AcRCI2基因构建到C端融合GFP的pCAMBIA1300-35S载体上,并进行亚细胞定位分析。采用半定量RT-PCR检测AcRCI2A基因在2022年不同月份采收‘巴厘’菠萝果实中的表达情况。进一步采用qRT-PCR分析AcRCI2A基因在热空气、脱落酸(ABA)、低温处理以及对照菠萝果实贮藏过程中的表达模式,初步明确其响应非生物胁迫情况及与菠萝黑心病发生的关系。【结果】成功克隆AcRCI2A基因,其编码区全长165 bp,编码54个氨基酸,在菠萝基因组网站未查到该序列,在NCBI网站上比对序列号为XM_020253166.1;生物信息学分析表明,AcRCI2A具有RCI2蛋白家族典型的保守结构域PMP3,包含2个跨膜结构域,无信号肽;进化树分析结果表明,AcRCI2A属于Group I家族,与拟南芥AtRCI2C、AtRCI2H亲缘关系较近,可能在维持Na+/K+离子稳态和膜电位平衡中发挥重要作用;亚细胞定位分析显示AcRCI2A定位于质膜。菠萝果实黑心病发病率与采收时AcRCI2A的表达水平密切相关,采后易发生黑心病的菠萝果实中AcRCI2A表达量极低。进一步分析热空气、ABA和低温处理后菠萝果实黑心病发病率和AcRCI2A基因的表达情况,发现3种处理均显著降低菠萝采后黑心病发病率,其中热空气处理的抑制效果最佳,贮藏3、6、9 d时黑心病发病率仅为0%、0%、1%;AcRCI2A基因表达受热空气和ABA处理诱导,但受低温抑制,其高表达对应着菠萝果实采后成熟衰老过程中较低的黑心病发病率和发病指数。【结论】AcRCI2A是典型的稀有冷诱导2蛋白,定位于质膜,其表达受热空气和ABA处理诱导和低温的抑制,与菠萝黑心病的抗性密切相关。 展开更多
关键词 菠萝 AcRCI2A 抗黑心病 亚细胞定位 半定量RT-PCR qRT-PCR
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不同体色草金鱼鳞片墨蝶呤还原酶mRNA表达水平研究
9
作者 李俊茹 胡菊 +2 位作者 冯彩 崔长海 王良炎 《河南水产》 2020年第3期26-28,共3页
为探究墨蝶呤还原酶(sepiapterin reductase,SPR)基因在草金鱼(Carassius auratus)体色形成中的作用,本研究利用半定量反转录聚合酶链式反应(Semi-QRT-PCR)技术,对spr基因在不同体色草金鱼鳞片的mRNA表达水平进行了研究。结果显示,spr... 为探究墨蝶呤还原酶(sepiapterin reductase,SPR)基因在草金鱼(Carassius auratus)体色形成中的作用,本研究利用半定量反转录聚合酶链式反应(Semi-QRT-PCR)技术,对spr基因在不同体色草金鱼鳞片的mRNA表达水平进行了研究。结果显示,spr在草金鱼不同颜色鳞片中表达程度不同,且在黄色、黑色鳞片中表达量较高。本实验初步探究了spr与草金鱼体色形成的关系,旨在为进一步探究spr在体色形成中的作用提供参考资料。 展开更多
关键词 半定量反转录聚合酶链式反应 草金鱼 SPR 体色
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