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基于PCR-CRISPR/Cas12a技术的肠炎沙门菌快速检测方法
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作者 杨天沐 王毅恒 +1 位作者 熊文广 郭剑英 《华南农业大学学报》 北大核心 2025年第3期311-318,共8页
【目的】针对食源性病原菌肠炎沙门菌Salmonella enteritidis,开发一种CRISPR(Clustered regularly interspaced short palindromic repeat)技术结合聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)的检测方法,以实现肠炎沙门菌的早期... 【目的】针对食源性病原菌肠炎沙门菌Salmonella enteritidis,开发一种CRISPR(Clustered regularly interspaced short palindromic repeat)技术结合聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)的检测方法,以实现肠炎沙门菌的早期快速诊断和防控。【方法】根据保守基因sdfI序列,进行PCR引物筛选。使用不同质量浓度的肠炎沙门菌基因组进行灵敏度测试;利用大肠埃希菌Escherichia coli、金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、多杀性巴氏杆菌Pasteurella multocida、粪肠球菌Salmonella choleraesuis、猪霍乱沙门氏菌Enterococcus faecalis基因组进行特异性检验。最后,使用建立的方法检测小肠样品中肠炎沙门菌的污染情况。【结果】该方法可检出小肠样品中的肠炎沙门菌,检测限为1.72×100μL^(−1),特异性良好,且与大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌、粪肠球菌、猪霍乱沙门氏菌均无交叉反应。【结论】本研究建立了一种较为轻便、可用于早期诊断肠炎沙门菌的方法,具有良好的灵敏度和特异性,为肠炎沙门菌快速诊断提供了新方法。 展开更多
关键词 肠炎沙门菌 sdfi基因 聚合酶链式反应 CRISPR/Cas12a系统
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双重PCR检测肠炎沙门氏菌方法的建立 被引量：2
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作者 段小丽 董立伟 +1 位作者 朱国强 朱晓演 《中国家禽》 北大核心 2012年第17期20-22,共3页
沙门氏菌是引起人类食物中毒事件的主要病原之一,其中,肠炎沙门氏菌因其可感染家禽、污染禽蛋而受到广泛关注。本试验根据沙门氏菌属特异性基因片段fimY和肠炎沙门氏菌特异性基因片段sdfI分别设计一对引物,对25株沙门氏菌和大肠杆菌进... 沙门氏菌是引起人类食物中毒事件的主要病原之一,其中,肠炎沙门氏菌因其可感染家禽、污染禽蛋而受到广泛关注。本试验根据沙门氏菌属特异性基因片段fimY和肠炎沙门氏菌特异性基因片段sdfI分别设计一对引物,对25株沙门氏菌和大肠杆菌进行双重PCR扩增,结果显示22株沙门氏菌均出现与理论值大小497bp相符的属特异性条带,作为对照的3株大肠杆菌则未显示该条带,并且7株肠炎沙门氏菌均出现与理论值大小293bp相符的特异性条带。另外,敏感性试验结果显示肠炎沙门氏菌50336和鸡白痢沙门氏菌SP1的模板浓度分别为18ng和15ng时仍能清晰扩增出特异性条带。上述结果表明建立的PCR方法具有快速简便、灵敏性高、特异性强等特点,为公共卫生、食品安全、畜牧兽医及出入境安检等多部门检测和监测沙门氏菌提供了前提基础和技术保障。 展开更多
关键词 肠炎沙门氏菌 fimY sdfi 双重PCR
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AMD3100、CXCR7抗体对自身免疫性脑脊髓炎大鼠脊髓和脾细胞SDF1α、CXCR4、CXCR7 mRNA表达的影响
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作者 李冠宇 王松 +1 位作者 季晓辉 金庆文 《中国神经免疫学和神经病学杂志》 CAS 2011年第3期206-210,共5页
目的研究AMD3100、CXCR7抗体对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune en-cephalomyelitis,EAE)大鼠脊髓和脾脏中趋化因子SDF1α及其受体CXCR4、CXCR7表达的影响。方法采用MBP68-86和完全福氏佐剂配置的完全抗原免疫Lewis... 目的研究AMD3100、CXCR7抗体对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune en-cephalomyelitis,EAE)大鼠脊髓和脾脏中趋化因子SDF1α及其受体CXCR4、CXCR7表达的影响。方法采用MBP68-86和完全福氏佐剂配置的完全抗原免疫Lewis大鼠制备EAE模型。将大鼠随机分为对照组、AMD3100组、CXCR7抗体组和EAE组,于免疫后第0、2、4、6天给予相应药物干预:AMD3100组按体质量2.5mg/kg腹腔注射AMD3100,CXCR7抗体组腹腔注射CXCR7抗体20μg/只,EAE组腹腔注射等量生理盐水。每天对大鼠进行神经功能评分,免疫后第15天行RT-PCR检测各组脊髓及脾脏中SDF1α、CXCR4、CXCR7mRNA表达,行HE染色观察大鼠脊髓组织病理变化。结果 (1)与对照组相比,EAE组大鼠脊髓血管周围有大量性炎细胞浸润,神经功能评分明显增加,AMD3100组、CXCR7抗体组和EAE组脊髓SDF1α、CXCR4、CXCR7 mRNA表达增加(P<0.01),脾细胞SDF1α、CXCR7 mRNA表达减少(P<0.01);(2)与EAE组相比,AMD3100组大鼠神经功能评分增加,脾细胞CXCR4、CXCR7 mRNA表达增加(P<0.01),脊髓SDF1α、CXCR4、CXCR7表达无统计学差异;(3)与EAE组相比,CXCR7抗体组大鼠神经功能评分增加,脾细胞SDF1α、CXCR4、CXCR7 mRNA表达增加(P<0.01),脊髓SDF1α、CXCR4、CXCR7 mRNA表达无统计学差异。结论 AMD3100和CXCR7抗体均能加重EAE病情,上调EAE脾细胞CXCR4和CXCR7 mRNA的表达。 展开更多
关键词 脑脊髓炎 自身免疫性 实验性 多发性硬化 趋化因子SDF1 受体CXCR4 受体CXCR7
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