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AphA蛋白促进副溶血弧菌c-di-GMP合成和生物膜形成
被引量:
4
1
作者
黄倩
张义全
+5 位作者
胡小许
王丽
杨瑞馥
钟青萍
周冬生
黎晓敏
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第5期525-531,共7页
【目的】综合运用表型和分子生化实验研究AphA蛋白对副溶血弧菌生物膜形成的调节机制。【方法】利用菌落褶皱和结晶紫染色实验比较aphA突变株(ΔaphA)和野生株(WT)的表型差异;进而利用色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)的方法分别检测ΔaphA和WT...
【目的】综合运用表型和分子生化实验研究AphA蛋白对副溶血弧菌生物膜形成的调节机制。【方法】利用菌落褶皱和结晶紫染色实验比较aphA突变株(ΔaphA)和野生株(WT)的表型差异;进而利用色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)的方法分别检测ΔaphA和WT中c-di-GMP分子含量;提取ΔaphA和WT的总RNA,采用实时定量RT-PCR的方法研究AphA对scrABC和scrG的调控关系;分别构建克隆有scrABC和scrG上游启动子区的LacZ重组质粒,并将重组质粒转入ΔaphA和WT中,通过测定并比较两株菌中β-半乳糖苷酶活性差异来进一步研究AphA对scrABC和scrG的调控关系;PCR扩增scrABC和scrG的整个启动子区DNA序列,并纯化His-AphA蛋白,通过凝胶阻滞实验(EMSA)验证AphA对靶基因启动子区是否具有直接的相互作用。【结果】表型结果显示AphA能促进c-di-GMP的合成和生物膜形成;实时定量RT-PCR和LacZ结果表明AphA能抑制scrABC和scrG的转录表达;EMSA结果证明AphA不能结合到scrABC和scrG的启动子区DNA上。【结论】AphA间接抑制scrABC和scrG的表达是其促进副溶血弧菌c-di-GMP合成及生物膜形成的机制之一。
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关键词
副溶血弧菌
生物膜形成
c—di—GMP
AphA
scrabc
scrG
原文传递
题名
AphA蛋白促进副溶血弧菌c-di-GMP合成和生物膜形成
被引量:
4
1
作者
黄倩
张义全
胡小许
王丽
杨瑞馥
钟青萍
周冬生
黎晓敏
机构
西南大学动物科技学院
军事医学科学院微生物流行病研究所 病原微生物生物安全国家重点实验室
华南农业大学食品学院
出处
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第5期525-531,共7页
基金
国家自然科学基金项目(31170127)~~
文摘
【目的】综合运用表型和分子生化实验研究AphA蛋白对副溶血弧菌生物膜形成的调节机制。【方法】利用菌落褶皱和结晶紫染色实验比较aphA突变株(ΔaphA)和野生株(WT)的表型差异;进而利用色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)的方法分别检测ΔaphA和WT中c-di-GMP分子含量;提取ΔaphA和WT的总RNA,采用实时定量RT-PCR的方法研究AphA对scrABC和scrG的调控关系;分别构建克隆有scrABC和scrG上游启动子区的LacZ重组质粒,并将重组质粒转入ΔaphA和WT中,通过测定并比较两株菌中β-半乳糖苷酶活性差异来进一步研究AphA对scrABC和scrG的调控关系;PCR扩增scrABC和scrG的整个启动子区DNA序列,并纯化His-AphA蛋白,通过凝胶阻滞实验(EMSA)验证AphA对靶基因启动子区是否具有直接的相互作用。【结果】表型结果显示AphA能促进c-di-GMP的合成和生物膜形成;实时定量RT-PCR和LacZ结果表明AphA能抑制scrABC和scrG的转录表达;EMSA结果证明AphA不能结合到scrABC和scrG的启动子区DNA上。【结论】AphA间接抑制scrABC和scrG的表达是其促进副溶血弧菌c-di-GMP合成及生物膜形成的机制之一。
关键词
副溶血弧菌
生物膜形成
c—di—GMP
AphA
scrabc
scrG
Keywords
Vibrio parahaemolyticus, biofilm formation, c-di-GMP, AphA,
scrabc
, scrG
分类号
Q933 [生物学—微生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
AphA蛋白促进副溶血弧菌c-di-GMP合成和生物膜形成
黄倩
张义全
胡小许
王丽
杨瑞馥
钟青萍
周冬生
黎晓敏
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
4
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