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重组抗LMP1单链抗体/鱼精蛋白截短体融合蛋白的基因构建及表达
被引量：
3
1
作者
黄秀兰
唐旭东
+1 位作者
熊亮
周克元
《广东医学院学报》
2008年第1期1-4,13,共5页
目的体外拼装人抗EB病毒编码的潜伏膜蛋白1单链抗体(LMP1 scFv)/截断的鱼精蛋白截短体(truncatedprotamine,tP)融合基因,将其克隆至原核表达载体pET32a,并在大肠杆菌中诱导表达LMP1 scFv/tP融合蛋白。方法设计融合基因LMP1 scFv/tP,在LM...
目的体外拼装人抗EB病毒编码的潜伏膜蛋白1单链抗体(LMP1 scFv)/截断的鱼精蛋白截短体(truncatedprotamine,tP)融合基因,将其克隆至原核表达载体pET32a,并在大肠杆菌中诱导表达LMP1 scFv/tP融合蛋白。方法设计融合基因LMP1 scFv/tP,在LMP1 scFv/tP的5’和3’端设计EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点;在DNAWORKS程序指导下设计成22个相互互补的寡核苷酸序列,经PCR扩增获得融合基因LMP1 scFv/tP,再将目的基因片段亚克隆至pMD 18-Tsi mple载体中,经过酶切鉴定和测序验证。进一步将目的基因片段克隆至原核表达载体pET32a,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白并经SDS-PAGE和western blot验证。结果各寡核苷酸片段经PCR扩增后可见明确的产物带,将获得的LMP1 scFv/tP融合基因构建至原核表达载体pET32a,经IPTG诱导后成功表达目的蛋白。结论成功获得LMP1 scFv/tp融合基因,并在大肠杆菌中成功诱导表达LMP1 scFv/tP融合蛋白,为该融合蛋白用于LMP1相关肿瘤的基因治疗奠定基础。
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关键词
LMP1
scfv/tp
基因拼装
表达
融合蛋白
暂未订购
抗恶性黑素瘤单链抗体-鱼精蛋白融合蛋白表达载体的构建及评评价
被引量：
2
2
作者
王昊
杨一飞
+5 位作者
王炜
管冰
寻萌
张海
王字玲
赵勇
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第9期1149-1155,共7页
目的构建抗MM单链抗体-鱼精蛋白融合蛋白表达载体,并验证其表达效率及功能。方法通过PCR方法将鱼精蛋白截短片段序列与抗黑色素瘤细胞表面抗原单链抗体基因相连接;采用TaKaRap MD19-T载体试剂盒将PCR后获得的融合蛋白扩增产物进行T载体...
目的构建抗MM单链抗体-鱼精蛋白融合蛋白表达载体,并验证其表达效率及功能。方法通过PCR方法将鱼精蛋白截短片段序列与抗黑色素瘤细胞表面抗原单链抗体基因相连接;采用TaKaRap MD19-T载体试剂盒将PCR后获得的融合蛋白扩增产物进行T载体构建;构建GST融合蛋白表达载体以实现在大肠杆菌中该融合蛋白的可溶性表达,经两步亲和纯化后获得scFv-tP蛋白;采用凝胶阻滞电泳迁移率变动分析EMSA技术检测Anti-MM scFv-tP与siRNA的结合活性;荧光分子标记scFv-tP蛋白后分别采用流式细胞术检测和共聚焦显微镜观察其与Li Br细胞株进行细胞表面抗原结合活性验证;采用不同浓度FITC标记的siRNA与scFv-tP进行混合,分别与LiBr细胞(A)及DU145细胞(B)进行混合孵育,观察肿瘤细胞对携载siRNA的单链抗体的内化活性。结果成功构建抗恶性黑素瘤单链抗体-鱼精蛋白片段融合蛋白(Anti-MM scFv-tP)表达载体;实现在大肠杆菌中该融合蛋白的可溶性表达,可获得较纯的scFv-tP蛋白;Anti-MM scFv-tP蛋白与siRNA有明显的结合与携载能力,可以有效与LiBr细胞表面特异性抗原进行结合,且有较强的内化活性。结论本研究构建的抗MM单链抗体-鱼精蛋白融合蛋白表达载体可稳定表达,Anti-MM scFv-tP蛋白具有siRNA结合携载能力,可靶向识别结合进入LiBr细胞,为后续进一步研究该单链抗体融合蛋白靶向载体携载siRNA在体内外抑制恶性黑色素瘤恶性进展奠定坚实的基础。
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关键词
恶性黑色素瘤
单链抗体
表达载体
Anti-MM-
scfv
-
tp
暂未订购
人源抗EGFR抗体-鱼精蛋白融合蛋白的制备及活性分析
被引量：
1
3
作者
张峰
王小英
+5 位作者
唐奇
刘玉
张慧林
苏亦平
冯振卿
朱进
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第5期651-655,共5页
目的:构建人抗EGFR单链抗体(scFv)/鱼精蛋白截短体(truncated protamine,tP)融合蛋白基因,在大肠杆菌中表达并纯化,分析该融合蛋白的生物学活性。方法:设计引物扩增人抗EGFR单链抗体编码序列,将其克隆于原核表达载体pBAD-A;人工合成tP序...
目的:构建人抗EGFR单链抗体(scFv)/鱼精蛋白截短体(truncated protamine,tP)融合蛋白基因,在大肠杆菌中表达并纯化,分析该融合蛋白的生物学活性。方法:设计引物扩增人抗EGFR单链抗体编码序列,将其克隆于原核表达载体pBAD-A;人工合成tP序列,将其克隆于原核表达载体pBAD-AscFv上,构建成scFv/tP融合基因,在大肠杆菌TOP10F′中诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,用His-trap镍亲和层析柱纯化。ELISA分析scFv/tP融合蛋白抗原亲合活性,凝胶迁移阻滞实验检测scFv/tP融合蛋白与DNA的结合活性。结果:成功构建了人源抗EGFR抗体/tP融合基因,经L-Ara诱导后在大肠杆菌中实现了可溶性表达。表达的scFv/tP融合蛋白保持了与抗原的结合活性,同时具有结合DNA的能力。结论:scFv与tP融合后,同时具有与抗原和DNA结合的活性,该scfv/tP融合蛋白为EGFR表达阳性肿瘤的靶向基因治疗奠定了基础。
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关键词
EGFR
单链抗体:鱼精蛋白
原文传递
题名
重组抗LMP1单链抗体/鱼精蛋白截短体融合蛋白的基因构建及表达
被引量：
3
1
作者
黄秀兰
唐旭东
熊亮
周克元
机构
广东医学院附属医院儿科研究室
广东医学院生物化学与分子生物学研究所
广东医学院赣南医学院预防医学系
出处
《广东医学院学报》
2008年第1期1-4,13,共5页
基金
广东省重点学科资助项目(No.GX9307)
湛江市科技攻关计划项目(No.200402)
文摘
目的体外拼装人抗EB病毒编码的潜伏膜蛋白1单链抗体(LMP1 scFv)/截断的鱼精蛋白截短体(truncatedprotamine,tP)融合基因,将其克隆至原核表达载体pET32a,并在大肠杆菌中诱导表达LMP1 scFv/tP融合蛋白。方法设计融合基因LMP1 scFv/tP,在LMP1 scFv/tP的5’和3’端设计EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点;在DNAWORKS程序指导下设计成22个相互互补的寡核苷酸序列,经PCR扩增获得融合基因LMP1 scFv/tP,再将目的基因片段亚克隆至pMD 18-Tsi mple载体中,经过酶切鉴定和测序验证。进一步将目的基因片段克隆至原核表达载体pET32a,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白并经SDS-PAGE和western blot验证。结果各寡核苷酸片段经PCR扩增后可见明确的产物带,将获得的LMP1 scFv/tP融合基因构建至原核表达载体pET32a,经IPTG诱导后成功表达目的蛋白。结论成功获得LMP1 scFv/tp融合基因,并在大肠杆菌中成功诱导表达LMP1 scFv/tP融合蛋白,为该融合蛋白用于LMP1相关肿瘤的基因治疗奠定基础。
关键词
LMP1
scfv/tp
基因拼装
表达
融合蛋白
Keywords
LMP1
scfv/tp
based gene assembly
express
fusion protein
分类号
R318.34 [医药卫生—生物医学工程]
暂未订购
题名
抗恶性黑素瘤单链抗体-鱼精蛋白融合蛋白表达载体的构建及评评价
被引量：
2
2
作者
王昊
杨一飞
王炜
管冰
寻萌
张海
王字玲
赵勇
机构
西安交通大学第二附属医院皮肤科
河北工程大学附属医院预防保健科
浙江加州国际纳米技术研究院
西安交通大学第一附属医院泌尿外科
西安交通大学基础医学院病原生物学与免疫学系
中国人民解放军第四军医大学实验动物中心
中国军事医学科学院输血研究所
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第9期1149-1155,共7页
基金
国家自然科学基金(30960349)~~
文摘
目的构建抗MM单链抗体-鱼精蛋白融合蛋白表达载体,并验证其表达效率及功能。方法通过PCR方法将鱼精蛋白截短片段序列与抗黑色素瘤细胞表面抗原单链抗体基因相连接;采用TaKaRap MD19-T载体试剂盒将PCR后获得的融合蛋白扩增产物进行T载体构建;构建GST融合蛋白表达载体以实现在大肠杆菌中该融合蛋白的可溶性表达,经两步亲和纯化后获得scFv-tP蛋白;采用凝胶阻滞电泳迁移率变动分析EMSA技术检测Anti-MM scFv-tP与siRNA的结合活性;荧光分子标记scFv-tP蛋白后分别采用流式细胞术检测和共聚焦显微镜观察其与Li Br细胞株进行细胞表面抗原结合活性验证;采用不同浓度FITC标记的siRNA与scFv-tP进行混合,分别与LiBr细胞(A)及DU145细胞(B)进行混合孵育,观察肿瘤细胞对携载siRNA的单链抗体的内化活性。结果成功构建抗恶性黑素瘤单链抗体-鱼精蛋白片段融合蛋白(Anti-MM scFv-tP)表达载体;实现在大肠杆菌中该融合蛋白的可溶性表达,可获得较纯的scFv-tP蛋白;Anti-MM scFv-tP蛋白与siRNA有明显的结合与携载能力,可以有效与LiBr细胞表面特异性抗原进行结合,且有较强的内化活性。结论本研究构建的抗MM单链抗体-鱼精蛋白融合蛋白表达载体可稳定表达,Anti-MM scFv-tP蛋白具有siRNA结合携载能力,可靶向识别结合进入LiBr细胞,为后续进一步研究该单链抗体融合蛋白靶向载体携载siRNA在体内外抑制恶性黑色素瘤恶性进展奠定坚实的基础。
关键词
恶性黑色素瘤
单链抗体
表达载体
Anti-MM-
scfv
-
tp
Keywords
malignant melanoma
single-chain antibody
expression vector
Anti-MM-
scfv
-
tp
分类号
R739.5 [医药卫生—肿瘤]
暂未订购
题名
人源抗EGFR抗体-鱼精蛋白融合蛋白的制备及活性分析
被引量：
1
3
作者
张峰
王小英
唐奇
刘玉
张慧林
苏亦平
冯振卿
朱进
机构
南京医科大学病理学系
南京医科大学附属南京妇幼保健院
南京军区军事医学研究所
出处
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第5期651-655,共5页
基金
江苏省社会发展项目(BS2007019)
南京市科技发展项目(200901083)
文摘
目的:构建人抗EGFR单链抗体(scFv)/鱼精蛋白截短体(truncated protamine,tP)融合蛋白基因,在大肠杆菌中表达并纯化,分析该融合蛋白的生物学活性。方法:设计引物扩增人抗EGFR单链抗体编码序列,将其克隆于原核表达载体pBAD-A;人工合成tP序列,将其克隆于原核表达载体pBAD-AscFv上,构建成scFv/tP融合基因,在大肠杆菌TOP10F′中诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,用His-trap镍亲和层析柱纯化。ELISA分析scFv/tP融合蛋白抗原亲合活性,凝胶迁移阻滞实验检测scFv/tP融合蛋白与DNA的结合活性。结果:成功构建了人源抗EGFR抗体/tP融合基因,经L-Ara诱导后在大肠杆菌中实现了可溶性表达。表达的scFv/tP融合蛋白保持了与抗原的结合活性,同时具有结合DNA的能力。结论:scFv与tP融合后,同时具有与抗原和DNA结合的活性,该scfv/tP融合蛋白为EGFR表达阳性肿瘤的靶向基因治疗奠定了基础。
关键词
EGFR
单链抗体:鱼精蛋白
Keywords
EGFR
single chainFv
scfv/tp
fusion protein
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组抗LMP1单链抗体/鱼精蛋白截短体融合蛋白的基因构建及表达
黄秀兰
唐旭东
熊亮
周克元
《广东医学院学报》
2008
3
暂未订购
2
抗恶性黑素瘤单链抗体-鱼精蛋白融合蛋白表达载体的构建及评评价
王昊
杨一飞
王炜
管冰
寻萌
张海
王字玲
赵勇
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017
2
暂未订购
3
人源抗EGFR抗体-鱼精蛋白融合蛋白的制备及活性分析
张峰
王小英
唐奇
刘玉
张慧林
苏亦平
冯振卿
朱进
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2011
1
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