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鸡柔嫩艾美耳球虫表面抗原基因sag10在毕赤酵母中的表达及鉴定
被引量：
2
1
作者
韩德强
丁宏标
+2 位作者
乔宇
索勋
郝永清
《寄生虫与医学昆虫学报》
CAS
2006年第4期199-203,共5页
sag基因家族是制备基因工程疫苗重要的候选基因。本研究通过在毕赤酵母Pichiapastoris中表达柔嫩艾美耳球虫Eimeriatenella表面抗原基因sag10,来探讨sag10表达后的生物学活性。本文首先提取柔嫩艾美耳球虫北京株第2代裂殖子总RNA,根据Ge...
sag基因家族是制备基因工程疫苗重要的候选基因。本研究通过在毕赤酵母Pichiapastoris中表达柔嫩艾美耳球虫Eimeriatenella表面抗原基因sag10,来探讨sag10表达后的生物学活性。本文首先提取柔嫩艾美耳球虫北京株第2代裂殖子总RNA,根据GenBank报道序列(AJ586552)设计引物,应用RT-PCR技术扩增得到鸡球虫表面抗原sag10基因。然后将sag10与真核表达载体pPIC9K连接,构建了pDQ052分泌型真核表达质粒,并转化毕赤酵母GS115,利用G418抗性筛选多拷贝重组菌株,进行优化表达。SDS-PAGE和Westernblot检测表达结果,在43kDa处有明显的免疫印迹条带,表明目的蛋白得到表达,而且能被特异性抗体所识别,说明表达的SAG10蛋白具有生物学活性。
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关键词
柔嫩艾美耳球虫
sag10
表达
毕赤酵母
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职称材料
柔嫩艾美耳球虫江苏株SAG10基因的克隆及分析
2
作者
仇保丰
景瑾
+6 位作者
董蓉莲
宋鸿雁
刘春
朱顺星
邵义祥
刘文斌
李建
《江苏农业科学》
北大核心
2017年第3期24-28,共5页
根据Gen Bank中已发表的柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)SAG10基因序列,利用计算机软件设计1对引物,从E.tenella江苏株的第2代裂殖子中成功克隆出SAG10基因。将该基因与Gen Bank中国内外不同E.tenella分离株的SAG10基因进行比对,发现E....
根据Gen Bank中已发表的柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)SAG10基因序列,利用计算机软件设计1对引物,从E.tenella江苏株的第2代裂殖子中成功克隆出SAG10基因。将该基因与Gen Bank中国内外不同E.tenella分离株的SAG10基因进行比对,发现E.tenella江苏株与北京株的SAG10基因同源性最高,高达99%,其后依次为杨凌株、豪顿株。4种不同分离株SAG10基因的ORF之间有11个碱基不同,其中3个为无义突变,8个为有义突变。分析4种分离株SAG10基因推导蛋白质的亲水性、抗原指数、表面可及性发现,国内外不同E.tenella分离株SAG10蛋白的抗原性总体比较接近且很强,但国内不同分离株之间的抗原性更加接近,并优于国外的豪顿株,这可能是由于氨基酸突变引起蛋白质的空间构象和亲水性等发生变化而引起。将上述SAG10基因序列与复顶门原虫的其他相关SAGs基因序列进行遗传进化分析,发现Eimeria属球虫SAGs基因之间相对比较保守,且与犬新孢子虫(Neospora caninum)、N.hughesi、刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)的SAG基因之间同源性较低,与已有观点一致;但神经肉孢子虫(Sarcocystis neurona)的2条SAG1基因序列却与E.tenella的SAG1基因序列表现出更高的同源性,这与其他研究结论不符。
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关键词
柔嫩艾美耳球虫
sag10
基因
克隆
分析
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职称材料
题名
鸡柔嫩艾美耳球虫表面抗原基因sag10在毕赤酵母中的表达及鉴定
被引量：
2
1
作者
韩德强
丁宏标
乔宇
索勋
郝永清
机构
中国农业科学院饲料研究所
中国农业大学动物医学院
内蒙古农业大学动物科学与医学学院
出处
《寄生虫与医学昆虫学报》
CAS
2006年第4期199-203,共5页
基金
国家"863"计划课题(2003AA241160)
中国-丹麦政府间国际合作项目
文摘
sag基因家族是制备基因工程疫苗重要的候选基因。本研究通过在毕赤酵母Pichiapastoris中表达柔嫩艾美耳球虫Eimeriatenella表面抗原基因sag10,来探讨sag10表达后的生物学活性。本文首先提取柔嫩艾美耳球虫北京株第2代裂殖子总RNA,根据GenBank报道序列(AJ586552)设计引物,应用RT-PCR技术扩增得到鸡球虫表面抗原sag10基因。然后将sag10与真核表达载体pPIC9K连接,构建了pDQ052分泌型真核表达质粒,并转化毕赤酵母GS115,利用G418抗性筛选多拷贝重组菌株,进行优化表达。SDS-PAGE和Westernblot检测表达结果,在43kDa处有明显的免疫印迹条带,表明目的蛋白得到表达,而且能被特异性抗体所识别,说明表达的SAG10蛋白具有生物学活性。
关键词
柔嫩艾美耳球虫
sag10
表达
毕赤酵母
Keywords
Eimeria tenella
sag10
Expression
Pichia pastoris
分类号
S852.7 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
柔嫩艾美耳球虫江苏株SAG10基因的克隆及分析
2
作者
仇保丰
景瑾
董蓉莲
宋鸿雁
刘春
朱顺星
邵义祥
刘文斌
李建
机构
南通出入境检验检疫局
南通大学实验动物中心
江苏省疾病预防控制中心
出处
《江苏农业科学》
北大核心
2017年第3期24-28,共5页
基金
国家自然科学基金(编号:31301926)
江苏省自然科学基金(编号:BK20130388)
文摘
根据Gen Bank中已发表的柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)SAG10基因序列,利用计算机软件设计1对引物,从E.tenella江苏株的第2代裂殖子中成功克隆出SAG10基因。将该基因与Gen Bank中国内外不同E.tenella分离株的SAG10基因进行比对,发现E.tenella江苏株与北京株的SAG10基因同源性最高,高达99%,其后依次为杨凌株、豪顿株。4种不同分离株SAG10基因的ORF之间有11个碱基不同,其中3个为无义突变,8个为有义突变。分析4种分离株SAG10基因推导蛋白质的亲水性、抗原指数、表面可及性发现,国内外不同E.tenella分离株SAG10蛋白的抗原性总体比较接近且很强,但国内不同分离株之间的抗原性更加接近,并优于国外的豪顿株,这可能是由于氨基酸突变引起蛋白质的空间构象和亲水性等发生变化而引起。将上述SAG10基因序列与复顶门原虫的其他相关SAGs基因序列进行遗传进化分析,发现Eimeria属球虫SAGs基因之间相对比较保守,且与犬新孢子虫(Neospora caninum)、N.hughesi、刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)的SAG基因之间同源性较低,与已有观点一致;但神经肉孢子虫(Sarcocystis neurona)的2条SAG1基因序列却与E.tenella的SAG1基因序列表现出更高的同源性,这与其他研究结论不符。
关键词
柔嫩艾美耳球虫
sag10
基因
克隆
分析
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
鸡柔嫩艾美耳球虫表面抗原基因sag10在毕赤酵母中的表达及鉴定
韩德强
丁宏标
乔宇
索勋
郝永清
《寄生虫与医学昆虫学报》
CAS
2006
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
柔嫩艾美耳球虫江苏株SAG10基因的克隆及分析
仇保丰
景瑾
董蓉莲
宋鸿雁
刘春
朱顺星
邵义祥
刘文斌
李建
《江苏农业科学》
北大核心
2017
0
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