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基于rocG与aprN基因表达定量分析优化纳豆发酵条件
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作者 范力文 李浩男 +3 位作者 张委勇 何晨光 赵佳欢 王晓萍 《食品与发酵工业》 北大核心 2025年第5期165-171,共7页
纳豆是由纳豆芽孢杆菌发酵而成的保健食品,该研究通过正交试验法优化了纳豆的发酵条件,并采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)方法对发酵过程中纳豆激酶基因aprN与产氨气基... 纳豆是由纳豆芽孢杆菌发酵而成的保健食品,该研究通过正交试验法优化了纳豆的发酵条件,并采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)方法对发酵过程中纳豆激酶基因aprN与产氨气基因rocG的表达进行了定量分析。结果表明,在纳豆发酵过程中,纳豆激酶活性随时间、温度、接种量变化均呈先升高后降低的趋势,受温度影响较大;33℃、发酵24 h及接种量5%的条件下纳豆激酶活性最高,达到2766.403 IU/mL,且该条件下aprN基因表达显著,rocG基因表达不明显。确定33℃、发酵24 h及接种量5%的发酵条件为纳豆生产的优化条件,可以获得高纳豆激酶活性(2766.403 IU/mL)、低氨的纳豆。该研究可为纳豆的品质控制与商业应用提供参考依据。 展开更多
关键词 纳豆 纳豆芽孢杆菌 正交试验 aprN rocg QRT-PCR
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纳豆芽孢杆菌rocG基因和ure基因敲除载体的构建 被引量:1
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作者 黄蓓 吴旭蕾 +1 位作者 钱炳俊 张建华 《上海交通大学学报(农业科学版)》 2013年第5期16-19,共4页
rocG基因和ure基因分别编码纳豆芽孢杆菌中2个与产氨相关的酶——谷氨酸脱氢酶编码和尿素酶。为构建这2个基因的敲除载体,通过PCR分别获得了2个靶基因的上下游旁邻片段和抗性筛选基因nisI。将上游旁邻片段、nisI和下游旁邻片段按次序克... rocG基因和ure基因分别编码纳豆芽孢杆菌中2个与产氨相关的酶——谷氨酸脱氢酶编码和尿素酶。为构建这2个基因的敲除载体,通过PCR分别获得了2个靶基因的上下游旁邻片段和抗性筛选基因nisI。将上游旁邻片段、nisI和下游旁邻片段按次序克隆到革兰氏阳性菌基因组整合质粒pMUTIN4中。限制性内切酶酶切图谱分析及测序结果显示成功构建了纳豆芽孢杆菌rocG基因和ure基因的敲除载体pMUTIN4-rocG::nisI和pMUTIN4-ure::nisI。该质粒的构建,为同源重组获得低产氨纳豆芽孢杆菌工程菌株奠定了基础。 展开更多
关键词 纳豆芽孢杆菌 rocg URE 基因敲除载体
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枯草芽孢杆菌rocG基因插入失活突变株的构建 被引量:1
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作者 倪银芸 宋光艳 +1 位作者 钱炳俊 张建华 《上海交通大学学报(农业科学版)》 2014年第6期32-37,共6页
枯草芽孢杆菌中有2个编码谷氨酸脱氢酶(GDH)的基因:rocG基因和gudB基因。其中Bacillus subtilis 168菌株的rocG基因编码有活性的GDH,而gudB基因编码没有活性的GDH。敲除168菌株的rocG基因后,gudB基因会自发突变为gudB1基因,后者编码有... 枯草芽孢杆菌中有2个编码谷氨酸脱氢酶(GDH)的基因:rocG基因和gudB基因。其中Bacillus subtilis 168菌株的rocG基因编码有活性的GDH,而gudB基因编码没有活性的GDH。敲除168菌株的rocG基因后,gudB基因会自发突变为gudB1基因,后者编码有活性的GDH(gudB1-GDH)。为了研究gudB1-GDH在代谢中的作用及调控机制,构建了pMUTin4-rocG插入突变重组质粒,将其转化至B.subtilis 168,成功获得了1株rocG失活突变株BS-△rocG。对BS-△rocG和野生株的生长情况及GDH酶活进行了比较,发现BS-△rocG生长情况和野生株相当,但其GDH酶活为4.641U/mg蛋白,高于野生株的3.042U/mg蛋白。由此推测BS-△rocG中,gudB可能自发突变为gudB1,从而能够编码有活性的GDH,这一结果为研究枯草芽孢杆菌gudB1-GDH在代谢中的作用及调控机制奠定了基础。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 谷氨酸脱氢酶 rocg gudB
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