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一株侵染白星花金龟幼虫的绿僵菌分离鉴定及培养条件初步研究
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作者 刘思雨 陈斌 《植物医学》 2025年第1期64-74,共11页
为弄清从昆明市云南农业大学后山马铃薯田自然罹病的白星花金龟(Potosia brevitarsis Lewi)幼虫虫体上获得的1株绿僵菌(Metarhizium sp.)的分类地位,采用形态学特征和ITS-rDNA序列分析相结合的方法进行种类鉴定。通过测量该菌株在SDAY、... 为弄清从昆明市云南农业大学后山马铃薯田自然罹病的白星花金龟(Potosia brevitarsis Lewi)幼虫虫体上获得的1株绿僵菌(Metarhizium sp.)的分类地位,采用形态学特征和ITS-rDNA序列分析相结合的方法进行种类鉴定。通过测量该菌株在SDAY、PDA两种培养基上的菌落直径和产孢量,初步明确了该菌株的培养条件。鉴定结果表明该病原真菌为罗伯茨绿僵菌(Metarhizium robertsii),编号为Ma20191123菌株。此菌株在(25±1)℃、相对湿度80%、光照16L∶8D的条件下利用SDAY、PDA两种培养基接种后均能正常生长,菌落直径分别为(2.56±0.15)、(2.36±0.17)cm,单位面积产孢量分别为(1.66±0.25)×10^(7)、(1.24±0.47)×10^(7)孢子/cm^(2)。该研究为蛴螬生物防治提供了候选菌种资源。 展开更多
关键词 白星花金龟 罗伯茨绿僵菌 分离鉴定 培养条件
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Mrhox3影响罗伯茨绿僵菌产孢和抗逆能力的研究 被引量:1
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作者 张楠 吴浩 +2 位作者 童友敏 李晓娟 黄勃 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2023年第3期523-532,共10页
罗伯茨绿僵菌作为一种昆虫病原真菌,已在害虫生物防治中得到应用。Homeobox家族基因在真菌无性繁殖过程中具有重要作用,但是其在昆虫病原真菌中的功能尚不清楚。qRT-PCR结果显示homeobox家族基因Mrhox3在产孢阶段和分生孢子阶段高水平... 罗伯茨绿僵菌作为一种昆虫病原真菌,已在害虫生物防治中得到应用。Homeobox家族基因在真菌无性繁殖过程中具有重要作用,但是其在昆虫病原真菌中的功能尚不清楚。qRT-PCR结果显示homeobox家族基因Mrhox3在产孢阶段和分生孢子阶段高水平表达。通过基因敲除与回补研究其功能,结果表明敲除Mrhox3不影响菌株营养生长和致病性,但是显著降低菌株的产孢能力。进一步研究显示敲除Mrhox3显著下调关键调控因子abaA和wetA等多个产孢相关基因的表达水平。敲除Mrhox3促进分生孢子萌发,并显著增强分生孢子对紫外胁迫和热激胁迫的耐受力。本研究将为进一步揭示罗伯茨绿僵菌的产孢机制和分生孢子抗逆机制奠定基础。 展开更多
关键词 罗伯茨绿僵菌 Mrhox3 产孢 逆境胁迫
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罗伯茨虫草及其无性型活性成分分析 被引量:1
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作者 郭瑞 贾学渊 +3 位作者 虞泓 曾文波 陈自宏 杨俊媛 《中国食用菌》 2014年第5期54-57,59,共5页
以10株野生罗伯茨虫草及其无性型罗伯茨被毛孢液体发酵菌丝体为研究对象,采用比色法和高效液相色谱法(HPLC)分别测定其多糖、甘露醇、尿嘧啶、尿苷、鸟苷、腺嘌呤、腺苷及虫草素等活性成分含量,并与西藏那曲野生冬虫夏草作比较。结果表... 以10株野生罗伯茨虫草及其无性型罗伯茨被毛孢液体发酵菌丝体为研究对象,采用比色法和高效液相色谱法(HPLC)分别测定其多糖、甘露醇、尿嘧啶、尿苷、鸟苷、腺嘌呤、腺苷及虫草素等活性成分含量,并与西藏那曲野生冬虫夏草作比较。结果表明,罗伯茨虫草尿嘧啶含量高于冬虫夏草,尿苷、鸟苷、腺嘌呤、腺苷含量与冬虫夏草接近,而多糖和虫草素含量与冬虫夏草差距较大。在10株罗伯茨被毛孢中,菌株HRT06的多糖、尿苷、鸟苷及腺苷含量最高,与其余菌株有显著性差异(p<0.05),且菌株HRT06的腺苷含量为0.140 mg·g-1,达到中国药典冬虫夏草腺苷含量不得少于0.100 mg·g-1的规定,可以筛选作为优良菌株加以利用。本研究测定罗伯茨虫草及其无性型罗伯茨被毛孢活性成分含量,为综合评价罗伯茨虫草应用价值及其开发利用提供科学依据。 展开更多
关键词 罗伯茨虫草 罗伯茨被毛孢 多糖 甘露醇 核苷
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红火蚁病原真菌AUGM47早期发育超微结构研究 被引量:3
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作者 雷妍圆 官昭瑛 Abid Hussin 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2022年第6期1510-1516,共7页
在前期筛选已获得对红火蚁Solenopsis invicta Buren高效致病真菌罗伯茨绿僵菌Metarhizium robertsii AUGM47的基础上,为进一步明确病原真菌对寄主昆虫的侵染机制。本试验在室内条件下,以红火蚁工蚁为侵染对象,利用荧光显微镜和透射电... 在前期筛选已获得对红火蚁Solenopsis invicta Buren高效致病真菌罗伯茨绿僵菌Metarhizium robertsii AUGM47的基础上,为进一步明确病原真菌对寄主昆虫的侵染机制。本试验在室内条件下,以红火蚁工蚁为侵染对象,利用荧光显微镜和透射电镜观察了罗伯茨绿僵菌AUGM47侵染单元分生孢子在体表附着萌发、穿透和体内增殖的早期发育过程。结果表明,菌株AUGM47分生孢子在红火蚁体表可萌发并形成附着胞侵入,接种后12 h观察到萌发,在36 h内普遍出现穿透结构穿透体壁。接种后48 h为菌体在血腔内的增殖阶段。菌丝体在穿透表皮和体腔内增殖过程中伴随着机械压力和酶的活动。接种后96 h,观察到自噬现象,菌体通过自噬降解并回收细胞器,为从体内穿出的晚期发育过程提供物质基础。本研究对罗伯茨绿僵菌AUGM47分生孢子在红火蚁体外至体内的发育进程研究证实了菌株的高致病性,为红火蚁生防真菌菌种改良和后续开发利用奠定理论基础。 展开更多
关键词 红火蚁 病原真菌 罗伯茨绿僵菌 早期发育 分生孢子
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罗伯茨绿僵菌中嘧啶前体合成酶基因MrThi12的功能研究
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作者 汪滢 王荣 +3 位作者 高强 程向阳 茅文俊 鲍大鹏 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期63-67,共5页
通过同源基因比对,在罗伯茨绿僵菌中找到了单拷贝的嘧啶前体合成酶基因MAA_02402,命名为Mr Thi12。该基因Mr Thi12全长1 234bp,c DNA序列全长1 029bp,编码342个氨基酸。构建同源重组载体,利用农杆菌介导的方法进行基因敲除。突变菌株在... 通过同源基因比对,在罗伯茨绿僵菌中找到了单拷贝的嘧啶前体合成酶基因MAA_02402,命名为Mr Thi12。该基因Mr Thi12全长1 234bp,c DNA序列全长1 029bp,编码342个氨基酸。构建同源重组载体,利用农杆菌介导的方法进行基因敲除。突变菌株在维生素B1缺乏的培养基上,生长很慢,菌丝形态异常,多分叉,完全不能产生气生菌丝和分生孢子。但是一旦有外源维生素B1时,生长状态能完全恢复,对家蚕的致死能力没有变化。 展开更多
关键词 罗伯茨绿僵菌 MrThi12基因功能 基因敲除 维生素B1
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绿僵菌破坏素合成缺失株中分离鉴定pseurotin A 被引量:2
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作者 易文娟 陈波 +2 位作者 殷颖 宋红生 王成树 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1082-1089,共8页
真菌次级代谢产物是医药活性成分的重要来源之一。就真菌基因组编码的次级代谢基因簇数量而言,由于普遍存在的基因沉默现象,常规培养中能够分离鉴定的化合物种类一般很有限。广谱杀虫的罗伯茨绿僵菌在液体培养基中的主要代谢产物为非核... 真菌次级代谢产物是医药活性成分的重要来源之一。就真菌基因组编码的次级代谢基因簇数量而言,由于普遍存在的基因沉默现象,常规培养中能够分离鉴定的化合物种类一般很有限。广谱杀虫的罗伯茨绿僵菌在液体培养基中的主要代谢产物为非核糖体环肽类的破坏素,本研究在对破坏素合成缺失突变株ΔdtxS1进行液体培养时获得了新的产物峰,对其中一个产物峰进行分离、纯化及结构鉴定,确定该化合物为螺环类的pseurotin A。结合在烟曲霉菌中解析的pseurotin A合成途径,推测获得了罗伯茨绿僵菌中的潜在合成基因簇,并推测了pseurotin A在绿僵菌中的合成途径。本研究首次在绿僵菌中鉴定获得pseurotin A,并揭示了在真菌中通过对主要次级代谢产物缺失的方法可以鉴定获得新型的化合物。 展开更多
关键词 罗伯茨绿僵菌 破坏素 pseurotin A 合成途径
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转录组分析罗伯茨绿僵菌精胺合成酶MrSPS介导真菌血腔定殖功能 被引量:1
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作者 李心怡 王凯 +3 位作者 陈浩然 万荣杰 黄勃 王玉龙 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期4118-4133,共16页
【背景】精胺在植物应对逆境胁迫、动物抵抗疲劳和衰老、真菌生长代谢等过程中发挥重要作用,但目前在昆虫病原真菌中的研究未见报道。【目的】在分子水平上探究罗伯茨绿僵菌精胺合成关键酶——精胺合成酶在昆虫血腔定殖中的作用机制。... 【背景】精胺在植物应对逆境胁迫、动物抵抗疲劳和衰老、真菌生长代谢等过程中发挥重要作用,但目前在昆虫病原真菌中的研究未见报道。【目的】在分子水平上探究罗伯茨绿僵菌精胺合成关键酶——精胺合成酶在昆虫血腔定殖中的作用机制。【方法】显微注射法测定Mrsps敲除株ΔMrsps的致病力变化,并观察血腔中ΔMrsps生长状态;收集ΔMrsps和野生型WT注射侵染30 h后的大蜡螟血淋巴进行转录组测序,分别与罗伯茨绿僵菌和大蜡螟参考基因组进行比对分析,并结合定量PCR进行验证。【结果】与WT和回补株ΔMrsps-cp相比较,ΔMrsps致病力显著下降,而且随着注射浓度的降低,ΔMrsps致病力下降越显著。侵染36 h后WT和ΔMrsps孢子都能正常萌发且开始以类酵母状态生长,60 h后,相较于WT,ΔMrsps的生长繁殖数量较少。转录组共检测到3202个罗伯茨绿僵菌基因,其中1769个基因在ΔMrsps中表达上调,922个基因表达下调;差异表达基因涉及碳水化合物代谢、运输、分解代谢、翻译和氨基酸代谢等多条途径;筛选出28个血腔致病相关基因全部在ΔMrsps中表达下调;定量PCR检测发现在整个血腔定殖阶段免疫逃避蛋白Mcl1基因和血腔定殖Colonization of hemocoel 1基因在WT和ΔMrsps-cp中的表达量高于ΔMrsps。共检测到13249个大蜡螟基因,其中4026个差异表达基因;KEGG注释分析显示大量差异表达基因富集到内分泌系统和免疫系统等途径;深入分析发现22个差异表达基因归属于Toll和Imd信号通路,其中18个基因在ΔMrsps侵染的大蜡螟中表达上调,表明ΔMrsps侵染大蜡螟过程中更易引起免疫系统的激活。【结论】揭示了Mrsps在罗伯茨绿僵菌血腔定殖阶段作用的分子机制,为进一步揭示精胺在真菌中的作用机理提供了理论基础。 展开更多
关键词 转录组 罗伯茨绿僵菌 精胺合成酶 血腔定殖
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基于丙酮酸累积的真菌抗逆机制 被引量:2
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作者 张幸 方卫国 《菌物研究》 CAS 2019年第3期167-172,共6页
环境中的真菌经常会遇到多种非生物逆境胁迫,对真菌耐受逆境胁迫的机制已开展大量研究。在多种不同的真菌中发现热胁迫会诱发丙酮酸快速累积。在罗伯茨绿僵菌中,累积的丙酮酸能及时消除热胁迫诱导产生的活性氧自由基(ROS),降低ROS所引... 环境中的真菌经常会遇到多种非生物逆境胁迫,对真菌耐受逆境胁迫的机制已开展大量研究。在多种不同的真菌中发现热胁迫会诱发丙酮酸快速累积。在罗伯茨绿僵菌中,累积的丙酮酸能及时消除热胁迫诱导产生的活性氧自由基(ROS),降低ROS所引起的蛋白质羰基化修饰水平,并抑制线粒体膜电位崩溃,从而提高真菌的耐热能力。高渗、氧化胁迫和紫外线辐射也会诱发丙酮酸累积,并消除产生的ROS,这是丙酮酸累积参与多逆境交叉保护的一个机制。通过基因工程技术改造丙酮酸代谢途径,提高了在最适温度下分生孢子中丙酮酸的含量。遗传改良的孢子中丙酮酸能够快速有效地消除由热处理诱发产生的ROS,降低了ROS对分生孢子的损伤,进而提高了孢子对热胁迫的耐受性,为创建高效的真菌杀虫剂提供了菌株。 展开更多
关键词 逆境胁迫 丙酮酸累积 交叉保护 基因工程 罗伯茨绿僵菌
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Improved packed bed column bioreactor to produce fungal conidia for biological control
9
作者 Fernando Méndez-González Octavio Loera +2 位作者 Gerardo Saucedo-Castañeda Jose Juan Buenrostro-Figueroa Ernesto Favela-Torres 《Systems Microbiology and Biomanufacturing》 2025年第2期783-794,共12页
There is a growing worldwide demand for biopesticides based on fungal conidia produced in solid-state culture bioreactors.Packed bed column bioreactors(PBCBs)have gained prominence due to their high productivity.In tr... There is a growing worldwide demand for biopesticides based on fungal conidia produced in solid-state culture bioreactors.Packed bed column bioreactors(PBCBs)have gained prominence due to their high productivity.In traditional PBCBs,scaling up by increasing the bioreactor diameter is considered an effective strategy.However,this approach presents challenges as the bed porosity diminishes,impeding mycelium propagation,gas exchange,and heat removal.Therefore,this study introduces a novel PBCB design to improve the solid matrix structure for conidia production from Trichoderma harzianum and Metarhizium robertsii.The proposed PBCB design incorporates channelled internal cylinders(ChICs)to elevate the ratio between the wall surface(WS)in contact with the substrate and the working volume(Wv).The conidia production obtained in 28 cm diameter PBCB with ChIC versus that reached in conventional 2.5 cm diameter PBCB were compared to evaluate the effectiveness of design for the diameter increase.The results demonstrate that increasing the WS:Wv ratio significantly enhances porosity,facilitating an almost 172-fold increase in the working volume for conidia production from T.harzianum and M.robertsii without compromising microbial growth or conidia volumetric production(>6×10^(8) conidia cm^(−3)).This underscores the effectiveness of adjusting the WS:Wv ratio as a viable strategy for increasing diameter.Incorporating channelled internal cylinders into packed column bed bioreactors enables the expansion of the bioreactor diameter for conidia production from T.harzianum and M.robertsii.This innovative approach should be explored for its potential application in obtaining biomass,enzymes,and metabolites from other microorganisms. 展开更多
关键词 Solid-state culture Trichoderma harzianum Metarhizium robertsii Respirometry analysis Bed porosity
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宽阔水自然保护区的虫草及其相关真菌Ⅰ. 被引量:9
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作者 梁宗琦 刘爱英 +1 位作者 黄建忠 焦彦朝 《真菌学报》 CSCD 北大核心 1996年第4期264-271,共8页
本文报道采自贵州省宽阔水自然保护区的9种虫草,它们是多壳虫草新种(Cordyceps polycarpica Liang & Liu Sp.nov.),鼠尾虫草新种(Cordyceps musicaudata Liang et Liu sp.nov.),针孢虫草(Cordyceps acicularis Rev.ex Berk.),罗伯... 本文报道采自贵州省宽阔水自然保护区的9种虫草,它们是多壳虫草新种(Cordyceps polycarpica Liang & Liu Sp.nov.),鼠尾虫草新种(Cordyceps musicaudata Liang et Liu sp.nov.),针孢虫草(Cordyceps acicularis Rev.ex Berk.),罗伯茨虫草(Cordyceps robertsii(Hook.)Gray),下垂虫草(Cordyceps nutans Pat.),沫蝉虫草(Cordyceps tricentri Yasuda),丝虫草(Cordyceps filiformis Moureau),泽地虫草(Cordyceps paludosa Mains)和球头虫草[Cordyceps sphecocephala(K1.)Sacc.]。 展开更多
关键词 真菌 虫草 新种
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