AllGlo探针Real-time RT-PCR检测发热伴血小板减少综合征病毒 被引量：7

1

作者 李志锋 胡建利 +2 位作者 鲍倡俊 王笑辰 祁贤 《江苏预防医学》 CAS 2016年第5期516-519,共4页

目的建立基于AllGlo探针Real—time RT—PCR技术检测发热伴血小板减少综合征病毒（SFTSV）的方法。方法根据SFTSV基因组S片段的相对保守序列设计引物和AllGlo探针，建立和优化Real—time RT—PCR反应体系，对其敏感性、特异性和稳定性... 目的建立基于AllGlo探针Real—time RT—PCR技术检测发热伴血小板减少综合征病毒（SFTSV）的方法。方法根据SFTSV基因组S片段的相对保守序列设计引物和AllGlo探针，建立和优化Real—time RT—PCR反应体系，对其敏感性、特异性和稳定性进行评价，并检测临床疑似SFTSV病例标本，与普通RT—PCR法、病毒分离法和抗体检测法进行比较。结果 所建立AllGlo探针Real—time RT—PCR法检测SFTSV核酸，标准曲线方程为Y=3．38x＋46．03（Y为ct值，z为核酸拷贝数log值），r2〉O．998，扩增效率为97．6％，Ct值变异系数（CV）均〈1．2％，检测限为1．00×10^3copy／mL。与汉坦病毒、H1N1、H3N2、登革病毒1～4型均无交叉。检测362份疑似病例标本，SFTSV核酸阳性检出率11．9％，高于普通RT-PCR法、病毒分离法和抗体检测法（P值均d0．05）。结论建立的AllGlo探针Real—time RT-PCR法，操作简单、快速，灵敏性、特异性较高，可用于SFTSV核酸检测。 展开更多

关键词 发热伴血小板减少综合征病毒 AllGlo探针 real-timert-pcr 病毒分离 抗体检测 RT-PCR

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荧光定量RT-PCR鉴别IBDV超强毒株与经典疫苗毒株 被引量：4

2

作者 汪振兴 李树清 孙建和 《上海交通大学学报（农业科学版）》 2009年第2期120-124,共5页

鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)超强毒株的出现给该病的防控带来了新的困难,有效鉴别IBDV超强毒株对IBD的防控有着积极意义。根据IBDV VP4基因的保守序列,设计了一对通用引物RPa/RPb,特异性扩增IBDV VP4基因720bp的目的片段。根据超强毒株... 鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)超强毒株的出现给该病的防控带来了新的困难,有效鉴别IBDV超强毒株对IBD的防控有着积极意义。根据IBDV VP4基因的保守序列,设计了一对通用引物RPa/RPb,特异性扩增IBDV VP4基因720bp的目的片段。根据超强毒株和经典毒株VP4基因序列的差异,分别合成了FAM标记的超强毒荧光探针和JOE标记的经典毒荧光探针,建立了实时荧光RT-PCR鉴别IBDV超强毒株与经典疫苗毒株的方法。检测超强毒和经典毒的敏感性分别可达420和320个拷贝数。建立的实时荧光RT-PCR方法敏感性高、特异性强,可用于临床样品中IBDV超强毒和经典毒的鉴别诊断。 展开更多

关键词 鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV) real-timert-pcr 鉴别诊断 荧光探针

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安宫牛黄丸对小鼠肝脏细胞色素P450酶系统亚型RNA表达的影响 被引量：1

3

作者 徐亚沙 陆远富 +1 位作者 刘杰 吴芹 《合肥医学院学报》 2010年第6期531-534,共4页

目的探索安宫牛黄丸对小鼠肝脏细胞色素P450酶系亚型mRNA表达的影响。方法 将健康雄性小鼠随机分为3组:空白对照组、安宫牛黄丸低剂量组(1.5 g/kg)、安宫牛黄丸高剂量组(3.0 g/kg),灌胃给药8d,每天1次,末次给药后1h断头取肝脏。提取、... 目的探索安宫牛黄丸对小鼠肝脏细胞色素P450酶系亚型mRNA表达的影响。方法 将健康雄性小鼠随机分为3组:空白对照组、安宫牛黄丸低剂量组(1.5 g/kg)、安宫牛黄丸高剂量组(3.0 g/kg),灌胃给药8d,每天1次,末次给药后1h断头取肝脏。提取、纯化总RNA,采用real-timeRT-PCR方法测定肝脏细胞色素P450酶系部分亚型mRNA的表达。结果安宫牛黄丸高剂量增加Cyp1a1 mRNA的表达;低、高剂量均明显增加Cyp2a4、Cyp3a11、Cyp4a10 mRNA的表达;Cyp7b1 mRNA的表达随给药剂量的增加而减少;而对Cyp2e1、Cyp2j5 mRNA的表达几乎没有影响。结论安宫牛黄丸可诱导小鼠肝脏Cyp1a1、Cyp2a4、Cyp3a11、Cyp4a10 mRNA的表达;抑制Cyp7b1mRNA的表达;但对Cyp2e1、Cyp2j5的表达几乎无影响。 展开更多

关键词 安宫牛黄丸 细胞色素P450 real-timert-pcr 小鼠

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新疆伊犁地区马的西尼罗病毒感染情况调查

4

作者 翟红 谢鹏 +8 位作者 曾志磊 刘妍汐 徐鸣明 余建萍 张英英 陈晓 展群岭 朱丹 彭丹 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第z1期10-13,共4页

目的:探讨西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)在新疆伊犁地区马群中的流行状况。方法:采用一步法实时定量逆转录聚合酶链反应(Real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction,Real-time RT-PCR)检测120份伊犁地区马的外周血... 目的:探讨西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)在新疆伊犁地区马群中的流行状况。方法:采用一步法实时定量逆转录聚合酶链反应(Real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction,Real-time RT-PCR)检测120份伊犁地区马的外周血液单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中WNV包膜蛋白(E)基因片段,并对可能的阳性产物进行基因序列测定、同源性和氨基酸顺序分析。结果:所检测的120份血液标本中未发现WNVE基因阳性片断。结论:目前没有证据表明我国新疆伊犁地区的马群中存在西尼罗病毒感染。 展开更多

关键词 西尼罗病毒 real-timert-pcr 一步法 TAQMAN探针

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辛伐他汀体内给药对大鼠骨量和骨髓基质干细胞增殖分化的影响

5

作者 梁春雨 田发明 +2 位作者 张辉 张柳 张英泽 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2011年第32期5913-5917,共5页

背景:辛伐他汀对正常大鼠骨代谢及骨髓基质干细胞增殖分化影响的报道目前不多。目的:观察辛伐他汀体内给药对大鼠骨量和骨髓基质干细胞增殖、分化的影响,及其在此过程中Smad1,2,7mRNA表达水平的变化。方法:16只6周龄雌性SD大鼠按体质量... 背景:辛伐他汀对正常大鼠骨代谢及骨髓基质干细胞增殖分化影响的报道目前不多。目的:观察辛伐他汀体内给药对大鼠骨量和骨髓基质干细胞增殖、分化的影响,及其在此过程中Smad1,2,7mRNA表达水平的变化。方法:16只6周龄雌性SD大鼠按体质量随机均分成2组,对照组每天灌胃蒸馏水,实验组灌胃辛伐他汀20mg/(kgd),持续9周。于最后一次灌胃的第2天取左侧股骨行骨密度和骨组织形态计量学测定;取右侧股骨和胫骨骨髓基质细胞向成骨方向诱导培养,并采用CCK-8法检测定向成骨分化中的骨髓基质干细胞的增殖能力;细胞培养第16,28天检测碱性磷酸酶比活性、碱性磷酸酶染色阳性细胞比;细胞培养第21天,提取总RNA,采用Real-timeRT-PCR检测Smad1,2,的mRNA表达。结果与结论:辛伐他汀体内给药干预9周后,大鼠骨量和骨密度无显著变化,体外培养骨髓基质干细胞所有检测基因mRNA水平、细胞增殖能力、细胞外基质矿化能力、碱性磷酸酶比活性、碱性磷酸酶染色阳性细胞比两组间差异均无显著性意义(P>0.05)。结果显示20mg/(kgd)辛伐他汀体内给药9周对大鼠骨量及骨髓基质干细胞的增殖和分化及Smad1,2,7的表达无显著作用。 展开更多

关键词 辛伐他汀 骨组织形态计量学 骨密度 骨髓基质干细胞 real-timert-pcr

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棉花4个GL2同源基因的序列比较及表达分析 被引量：3

6

作者 杨霞 侯磊 +3 位作者 肖月华 李德谋 张国芳 裴炎 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期1086-1091,共6页

拟南芥GLABRA2(AtGL2)在决定拟南芥叶毛和根毛细胞的分化中起重要作用。通过同源序列查询从棉花的EST库中找到4个与AtGL2高度同源的全长编码序列(GhHOX1、GhHOX2、GhHOX3和GhHOX4)。序列分析表明4个棉花HOX基因与AtGL2基因Homeobox结构... 拟南芥GLABRA2(AtGL2)在决定拟南芥叶毛和根毛细胞的分化中起重要作用。通过同源序列查询从棉花的EST库中找到4个与AtGL2高度同源的全长编码序列(GhHOX1、GhHOX2、GhHOX3和GhHOX4)。序列分析表明4个棉花HOX基因与AtGL2基因Homeobox结构域相同氨基酸分别达到95%、71%、72%和63%。实时RT-PCR分析结果显示,GhHOX1、GhHOX3和GhHOX4均在伸长期的纤维中优势表达;而GhHOX3在开花当天野生型胚珠中的表达量明显高于无绒无絮突变体。说明棉花GL2同源基因在棉花纤维的起始和伸长中具有重要的调控作用。 展开更多

关键词 棉花 GL2同源基因 real-timert-pcr

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H1N1猪流感病毒感染猪血管内皮细胞后内参基因的筛选 被引量：4

7

作者 朱鑫 吴巧 +2 位作者 冯晓辉 汤承 岳华 《西南民族大学学报（自然科学版）》 CAS 2014年第4期489-494,共6页

旨在评价H1N1猪流感病毒感染猪血管内皮细胞(PUVEC)后,肽基脯氨酰异构酶A(Ppia)、β-肌动蛋白(Actb)、核糖体蛋白L4(Rpl4)、酪氨酸3/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白(Ywhaz)和甘油醛-3-磷酸脱氢酶(Gapdh)等5个内参基因的稳定性.采用Real-time ... 旨在评价H1N1猪流感病毒感染猪血管内皮细胞(PUVEC)后,肽基脯氨酰异构酶A(Ppia)、β-肌动蛋白(Actb)、核糖体蛋白L4(Rpl4)、酪氨酸3/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白(Ywhaz)和甘油醛-3-磷酸脱氢酶(Gapdh)等5个内参基因的稳定性.采用Real-time RT-PCR方法测定H1N1 SIV感染PUVEC后3、6、9、12、15、18、24和30h时5个内参基因mRNA的表达水平,未感染PUVEC为对照,采用2-△Ct值对内参基因进行相对定量,应用Genorm软件对其稳定性进行评价.结果表明,5个内参基因的稳定性由高到低分别为Ppia和Rpl4、Ywhaz、Actb、Gapdh,其中Ppia和Rp14稳定性相同.据此可知,Ppia和Rpl4在所选的5个内参基因中是研究H1N1 SIV与机体互作理想的2个内参基因. 展开更多

关键词 H1N1猪流感病毒 内参基因 real-timert-pcr

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定量分析诱导山羊体细胞重编程过程中端粒酶的表达变化 被引量：2

8

作者 张淑金 孟书燕 +2 位作者 雷蕾 程祥 王华岩 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1660-1667,共8页

动物体细胞重编程为诱导多能干细胞(iPS)是目前干细胞生物学研究的热点。文中重点对山羊体细胞重编程过程中端粒酶(TERT)基因的相对表达量进行了检测,探讨了山羊重编程细胞的形成与端粒酶基因表达的关系。从关中奶山羊胎儿皮肤分离得到... 动物体细胞重编程为诱导多能干细胞(iPS)是目前干细胞生物学研究的热点。文中重点对山羊体细胞重编程过程中端粒酶(TERT)基因的相对表达量进行了检测,探讨了山羊重编程细胞的形成与端粒酶基因表达的关系。从关中奶山羊胎儿皮肤分离得到的胎儿成纤维细胞(GEF),其增殖能力较强,核型正常(60条XY),通过转录因子在体外诱导得到山羊重编程细胞。利用Real-timeRT-PCR方法首先对关中奶山羊胎儿各种组织的TERT表达进行了检测,结果表明睾丸组织中TERT的表达显著高于上皮组织(P<0.01),在山羊胎儿的其他组织中TERT也有不同程度的表达。对原代重编程细胞和4株不完全重编程细胞株的TERT表达检测结果发现,碱性磷酸酶(AP)阳性的重编程细胞端粒酶表达量要显著高于AP阴性的重编程细胞(P<0.01)。这一结果揭示,激活端粒酶活性并使其保持较高的表达水平对体细胞的重编程至关重要。 展开更多

关键词 端粒酶 细胞重编程 real-timert-pcr 关中奶山羊

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2009年崇左市流感实验室检测结果分析

9

作者 黄涛 《华南预防医学》 2011年第1期47-48,51,共3页

目的对崇左市2009年流感实验室检测结果进行分析,了解2009年崇左市流感病原学特征,为流感的实验室诊断提供参考。方法收集2009年9—12月崇左市国家流感监测哨点医院及各地送检的流感样病例咽拭子标本561份,应用Real-time RT-PCR技术检... 目的对崇左市2009年流感实验室检测结果进行分析,了解2009年崇左市流感病原学特征,为流感的实验室诊断提供参考。方法收集2009年9—12月崇左市国家流感监测哨点医院及各地送检的流感样病例咽拭子标本561份,应用Real-time RT-PCR技术检测样本中的A M、B NS、H1HA、H3HA、SWH1 NP、SWH1 HA基因。结果 561份标本中,检测到乙型流感病毒核酸阳性27份,季节性流感病毒H1亚型核酸阳性5份,季节性流感病毒H3亚型阳性36份,甲型H1N1病毒特异性基因片段阳性169份,季节性H1和季节性H3流感病毒核酸同时阳性1份。甲型H1N1的检出率较高为30.12%(169/561),乙型流感病毒核酸阳性率为4.81%(27/561),季节性H1流感病毒阳性率为0.89%(5/561),季节性H3流感病毒阳性率为6.42%(36/561),季节性H1和季节性H3流感病毒核酸同时阳性率为0.18%(1/561)。结论甲型H1N1是2009年崇左市流感的主要毒株类型。 展开更多

关键词 正粘病毒科 real-timert-pcr

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钙离子处理对成肌细胞μ-calpain mRNA和蛋白表达的影响 被引量：5

10

作者 朱燕 罗欣 周光宏 《山东农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2006年第4期561-567,572,共8页

本试验利用实时定量RT-PCR、酪蛋白底物酶原分析和SDS-PAGE等方法研究不同浓度钙离子对分化的大鼠L6成肌细胞中μ-calpain mRNA蛋白水平表达以及对L6细胞内蛋白的降解程度的影响。研究表明:钙离子处理可以诱导L6进一步分化为肌管,高浓... 本试验利用实时定量RT-PCR、酪蛋白底物酶原分析和SDS-PAGE等方法研究不同浓度钙离子对分化的大鼠L6成肌细胞中μ-calpain mRNA蛋白水平表达以及对L6细胞内蛋白的降解程度的影响。研究表明:钙离子处理可以诱导L6进一步分化为肌管,高浓度钙离子(>1000μM)还导致L6死亡率增大;钙离子诱导μ-calpain mRNA和蛋白水平表达增加。钙离子浓度为1000μM时,μ-capain mRNA的表达量为对照组的3倍多,但是当钙离子浓度升至1500μM时表达量却降低。50-100μM钙离子可以使μ-calpain酶活增加两倍,而500-1500μM钙离子增加酶活5-7倍;高浓度钙离子由于提高了μ-capaln的活性,细胞内蛋白的降解代谢增强,在SDS-PAGE凝胶电泳中发现细胞上清液中有明显的蛋白条带出现。 展开更多

关键词 L6成肌细胞 μ-calpain MRNA 实时定量RT-PCR 酪蛋白底物酶原分析

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MiR-3182在鼻咽癌中的表达及其与远处转移和预后关系的研究 被引量：5

11

作者 周敏燕 兰桂平 +1 位作者 司勇峰 莫祥兰 《中国临床新医学》 2016年第5期369-372,共4页

目的探讨MiR-3182在鼻咽癌中的表达及与远处转移的关系。方法用实时荧光定量RTPCR方法检测89例鼻咽未分化非角化性癌(鼻咽癌)组织中MiR-3182的表达情况,分析其表达强度与远处转移和预后的关系。结果鼻咽癌组织表达MiR-3182,其表达强度,... 目的探讨MiR-3182在鼻咽癌中的表达及与远处转移的关系。方法用实时荧光定量RTPCR方法检测89例鼻咽未分化非角化性癌(鼻咽癌)组织中MiR-3182的表达情况,分析其表达强度与远处转移和预后的关系。结果鼻咽癌组织表达MiR-3182,其表达强度,有远处转移者明显高于无转移者(P<0.01),无瘤生存期(DFS)<3年者明显高于DFS≥3年者(P<0.01)。结论 MiR-3182在鼻咽癌远处转移过程中可能起重要作用,并对预后有一定的影响,其相关分子机制有待进一步研究。 展开更多

关键词 鼻咽癌 MiR-3182 荧光定量RT-PCR 远处转移

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基于Taqman探针三重Real-Time RT-PCR检测PEDV、TGEV、PoRV方法的建立与应用 被引量：2

12

作者 李儒曙 苏惠龙 +4 位作者 蒋郁明 邓湘辉 黄铮 赵福振 罗宝正 《广东畜牧兽医科技》 2019年第5期41-44,52,共4页

为研究能够同时检测PEDV、TGEV、PoRV三种猪病毒性腹泻病原的方法,分别设计三套特异性的引物和探针,建立了基于Taqman探针的三重Real-Time RT-PCR检测方法,实验结果表明,该方法特异性好,灵敏度高,检测最低浓度为10 copies/μL数量级.应... 为研究能够同时检测PEDV、TGEV、PoRV三种猪病毒性腹泻病原的方法,分别设计三套特异性的引物和探针,建立了基于Taqman探针的三重Real-Time RT-PCR检测方法,实验结果表明,该方法特异性好,灵敏度高,检测最低浓度为10 copies/μL数量级.应用该方法对广东11个地市的44份猪腹泻样品进行检测,其中PEDV阳性率为100%,TGEV、PoRV阳性率为0,证明PEDV是引起广东地区猪病毒性腹泻的重要病原. 展开更多

关键词 三重real-timert-pcr PEDV TGEV PoRV

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犬瘟热病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用

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作者 余绍华 罗满林 +5 位作者 苏力 蔡勤辉 陈武 陈虹 黄晓卉 苏乔 《广东畜牧兽医科技》 2013年第2期35-39,共5页

根据犬瘟热病毒的核衣壳蛋白(N)基因保守序列,设计特异性引物,建立犬瘟热病毒荧光定量RT-PCR检测方法。试验结果表明,该方法敏感性比普通RT-PCR高出100倍,重复性良好,变异系数在1.01%以下,对犬的常见病原核酸提取物检测均为阴性,证明特... 根据犬瘟热病毒的核衣壳蛋白(N)基因保守序列,设计特异性引物,建立犬瘟热病毒荧光定量RT-PCR检测方法。试验结果表明,该方法敏感性比普通RT-PCR高出100倍,重复性良好,变异系数在1.01%以下,对犬的常见病原核酸提取物检测均为阴性,证明特异性良好。对32份临床样本进行检测,27份为阳性,高于普通RT-PCR方法。试验结果表明该方法可用于犬瘟热感染情况的检测。 展开更多

关键词 犬瘟热病毒 核衣壳蛋白(N)基因 荧光定量RT-PCR

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基于病毒mRNA监测的传染性脾肾坏死病毒灭活快速检验方法建立及其应用 被引量：1

14

作者 张醴溪 杨圆圆 +8 位作者 方伟 付小哲 林强 李趁 刘礼辉 梁红茹 黄志斌 吴志新 李宁求 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1464-1472,共9页

为建立传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)灭活快速检验方法,从ISKNV感染CPB细胞系转录谱筛选并经q RT-PCR验证表达量最高的病毒ORF099基因作为快速检测靶基因。以质粒p MDORF099为标准品,采用q PCR方法绘制了CT值与质粒拷贝数的标准曲线,其线... 为建立传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)灭活快速检验方法,从ISKNV感染CPB细胞系转录谱筛选并经q RT-PCR验证表达量最高的病毒ORF099基因作为快速检测靶基因。以质粒p MDORF099为标准品,采用q PCR方法绘制了CT值与质粒拷贝数的标准曲线,其线性方程为CT=–3.42lgx+39.455,最低检测限为3拷贝/μL,结果显示组间和组内变异系数均小于2%,表明该方法具有较高的灵敏度和较好的重复性。将ISKNV病毒悬液10倍稀释成100~103拷贝/m L,分别取1 m L病毒稀释液接种CPB细胞,在第7、9和11天提取细胞总RNA,经基因组DNA去除试剂盒去除残留DNA后采用qRT-PCR方法检测ORF099基因转录本,结果显示在第7天即可从接种1个拷贝病毒的细胞中检测出ISKNV ORF099转录本。将3个浓度梯度(0.05%、0.1%、0.2%)的甲醛灭活ISKNV制备的模拟样品以及实验室制备的3批次ISKNV细胞灭活疫苗样品接种CPB细胞9 d,采用上述快速检验方法进行检测。0.05%、0.1%甲醛灭活模拟样品可检测到ISKNV ORF099基因转录本,其他样品均未检测到。而细胞盲传实验显示,0.1%终浓度甲醛灭活ISKNV接种细胞盲传3代未出现CPE,鱼体安全实验显示接种鱼体后无临床发病症状和实验鱼死亡,表明本研究建立的病毒灭活快速检验方法比细胞盲传法和鱼体安全实验具有更高的灵敏度,与传统检测方法相比具有灵敏度高、耗时短、检测效率高等优点,对提高ISKNV灭活疫苗生产效率具有重要意义。 展开更多

关键词 传染性脾肾坏死病毒 灭活疫苗 灭活检验 MRNA 荧光定量RT-PCR

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直肠癌组织及外周血中多药耐药基因的表达及其相关性的研究

15

作者 高云升 《中国伤残医学》 2014年第5期41-41,共1页

目的:检测多药耐药相关基因(MDR1)在直肠癌组织及外周血中的表达及其相关性,探讨其临床意义。方法:采用Real-time RT-PCR法检测62例直肠癌患者手术切除组织及外周血的MDR1 mRNA的表达水平。结果:直肠癌组织及外周血的MDR1 mRNA的阳性表... 目的:检测多药耐药相关基因(MDR1)在直肠癌组织及外周血中的表达及其相关性,探讨其临床意义。方法:采用Real-time RT-PCR法检测62例直肠癌患者手术切除组织及外周血的MDR1 mRNA的表达水平。结果:直肠癌组织及外周血的MDR1 mRNA的阳性表达率分别为77.4%(48/62)和69.4%(43/62),两者之间呈显著相关(r=0.686,P<0.01)。肿瘤组织中MDR1 mRNA表达与分化程度有关,外周血中MDR1与肿瘤大小密切相关。结论:在直肠癌患者的肿瘤组织和外周血中均可检测出MDR1 mRNA较高水平的表达,检测外周血中MDR1 mRNA表达能间接反映癌组织对化疗药物的耐受性。 展开更多

关键词 直肠癌 多药耐药 real-timert-pcr MDR1 化疗

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