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牦牛、犏牛睾丸组织中SYCP3基因mRNA表达水平研究 被引量:31
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作者 屈旭光 李齐发 +4 位作者 刘振山 董丽艳 李新福 郝称莉 谢庄 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期1132-1136,共5页
本文采用RT-PCR和荧光定量PCR对牦牛SYCP3基因的组织表达,以及SYCP3基因在牦牛和犏牛睾丸组织中的表达水平进行分析。结果表明,SYCP3基因在牦牛睾丸组织中特异表达,牦牛与犏牛睾丸组织中SYCP3基因的表达水平差异极显著(P<0.01)。睾... 本文采用RT-PCR和荧光定量PCR对牦牛SYCP3基因的组织表达,以及SYCP3基因在牦牛和犏牛睾丸组织中的表达水平进行分析。结果表明,SYCP3基因在牦牛睾丸组织中特异表达,牦牛与犏牛睾丸组织中SYCP3基因的表达水平差异极显著(P<0.01)。睾丸和附睾组织切片显示,牦牛睾丸组织中可见各级生精细胞,附睾内可见发育良好的精子,而犏牛睾丸组织中无次级精母细胞和更高级生精细胞、附睾内未观测到精子,与人和小鼠SY-CP3基因缺失或表达水平降低出现的表型一致,可以认为SYCP3基因的表达水平可能与犏牛的雄性不育有一定的关系。 展开更多
关键词 SYCP3 犏牛 牦牛 雄性不育 组织表达谱 荧光实时定量PCR 组织切片
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生防菌与茄病镰刀菌在黄瓜根际动态变化 被引量:18
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作者 贺字典 吴素霞 +2 位作者 宋晓飞 谢新宇 李世东 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2016年第3期357-364,共8页
应用荧光定量PCR和稀释分离法检测了枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis和木霉菌Trichoderma spp.与茄病镰刀菌Fusarium solani f.sp.cucurbitae在黄瓜根际动态变化及其对黄瓜根腐病的防治效果。结果表明,施用500×木霉菌肥、100×... 应用荧光定量PCR和稀释分离法检测了枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis和木霉菌Trichoderma spp.与茄病镰刀菌Fusarium solani f.sp.cucurbitae在黄瓜根际动态变化及其对黄瓜根腐病的防治效果。结果表明,施用500×木霉菌肥、100×枯草芽孢杆菌7 d后对黄瓜根腐病的防效分别为100%和92.5%,14和28 d的防效分别为96.71%、86.76%和85.35%、79.24%;100×枯草芽孢杆菌初始拷贝数为130787 copys/μL,7 d内枯草芽孢杆菌拷贝数下降到51161 copys/μL,14和28 d时数量开始上升到295139和680556 copys/μL。木霉菌肥的变化趋势与枯草芽孢杆菌相同;用枯草芽孢杆菌和木霉菌肥防治黄瓜根腐病后,茄病镰刀菌变化趋势一致,初始拷贝数分别为2.61和15.34 copys/μL,7 d内茄病镰刀菌DNA拷贝数增加明显,100×枯草芽孢杆菌和木霉菌DNA拷贝数分别为11.22和20.98 copys/μL,之后茄病镰刀菌数量保持平稳。经过稀释分离法分离2种生防菌和茄病镰刀菌的数量,变化趋势与荧光定量PCR检测趋势相似。因此使生防菌快速定殖是提高其对土传病害防治效果的重要因素之一。 展开更多
关键词 木霉 枯草芽孢杆菌 茄病镰刀菌瓜类专化型 荧光定量PCR 动态变化检测
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survivin在人宫颈癌前病变和宫颈浸润癌组织中的定量分析及其临床价值的评估 被引量:14
3
作者 惠燕 黄利鸣 叶红 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期39-42,共4页
目的检测survivin在人宫颈癌前病变和宫颈浸润癌组织中的表达,探讨其与宫颈癌发生发展的关系,评估其临床应用价值。方法采用免疫组化技术和实时荧光定量PCR技术检测30例宫颈浸润癌、15例癌前病变和10例宫颈炎组织中survivin的表达。结果... 目的检测survivin在人宫颈癌前病变和宫颈浸润癌组织中的表达,探讨其与宫颈癌发生发展的关系,评估其临床应用价值。方法采用免疫组化技术和实时荧光定量PCR技术检测30例宫颈浸润癌、15例癌前病变和10例宫颈炎组织中survivin的表达。结果(1)survivin蛋白和survivin mRNA在宫颈炎组织中仅微量表达,在宫颈癌前病变和宫颈癌组织的表达依次显著增强(P<0.05和P<0.01),survivin mRNA在宫颈癌前病变和浸润癌组织中的表达量分别是宫颈炎组的11.0倍和22.6倍。(2)在宫颈癌前病变、宫颈浸润癌组织中survivin mRNA和蛋白两者的表达量均呈正相关(P=0.02和P=0.01),而在宫颈炎组织中两者无明显相关性。结论survivin与宫颈癌的发生发展密切相关,是一个具有重要临床意义的特异性肿瘤标记物,应用实时荧光定量PCR技术检测survivin可做为宫颈癌早期诊断的可靠方法。 展开更多
关键词 SURVIVIN 宫颈癌 癌前病变 实时荧光定量PCR 免疫组化
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猪传染性胃肠炎病毒四川株的分离鉴定与一步生长曲线的测定 被引量:5
4
作者 代洪波 陈蕾 +3 位作者 朱玲 周远成 郭万柱 徐志文 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1224-1229,共6页
为研究猪传染性胃肠炎病毒的生长规律,利用PK-15细胞从四川仔猪腹泻样品中分离得到1株病毒,经PCR检测、病毒理化试验与微量中和试验证实,该分离株为猪传染性胃肠炎病毒(TGEV),被命名为SC-T。以SC-T分离株感染PK-15细胞,感染后不同时间... 为研究猪传染性胃肠炎病毒的生长规律,利用PK-15细胞从四川仔猪腹泻样品中分离得到1株病毒,经PCR检测、病毒理化试验与微量中和试验证实,该分离株为猪传染性胃肠炎病毒(TGEV),被命名为SC-T。以SC-T分离株感染PK-15细胞,感染后不同时间分别收集感染细胞与上清,利用TGEV荧光定量检测方法对不同样品中病毒RNA进行定量分析,绘制TGEV一步生长曲线。结果显示,感染后第2~8小时,细胞内病毒RNA含量迅速增长,第8~32小时细胞内病毒RNA含量变化不大,维持在较高水平。细胞外病毒RNA含量呈"S型"曲线增长,感染后第0~6小时为潜伏期,病毒RNA含量维持在较低水平;第6~28小时为突破期,病毒RNA含量呈对数增长;感染后第28~32小时增长速度减缓,维持在较高水平,逐步进入稳定期。结果表明,TGEV感染PK-15细胞,病毒在细胞内增殖到一定数量以后,便逐步向胞外释出。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 分离鉴定 荧光定量PCR 一步生长曲线
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应用TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR结合分离培养监测分析灰仓鼠细菌多样性 被引量:6
5
作者 高正琴 邢进 +3 位作者 冯育芳 关伟鸿 贺争鸣 岳秉飞 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期221-227,共7页
目的:监测分析中国灰仓鼠细菌的多样性,收集更多的质量信息,获得更全面的微生物背景知识,为灰仓鼠的种群建立、生物净化和动物模型的建立提供科学的数据依据。方法:60只成年灰仓鼠来自新疆地区,安乐死后剖解采集标本。应用TaqMan MGB探... 目的:监测分析中国灰仓鼠细菌的多样性,收集更多的质量信息,获得更全面的微生物背景知识,为灰仓鼠的种群建立、生物净化和动物模型的建立提供科学的数据依据。方法:60只成年灰仓鼠来自新疆地区,安乐死后剖解采集标本。应用TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR和常规微生物学方法进行细菌多样性研究。结果:本研究采用常规微生物学方法从灰仓鼠中鉴定出179株细菌,包括大肠埃希菌、鲍氏志贺菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、栖冷克吕沃尔菌、嗜肺巴斯德菌、溶血性巴斯德菌、产气巴斯德菌、铜绿假单胞菌、栖稻假单胞菌、门多萨假单胞菌、粪产碱杆菌、阴道加特纳菌、卡它莫拉菌、莫拉克斯氏菌、CDC group EF-4a、特氏纤维单胞菌、戊糖片球菌、金黄色葡萄球菌、溶血性葡萄球菌、腐生葡萄球菌、模仿葡萄球菌、头状葡萄球菌、孔氏葡萄球菌、木糖葡萄球菌、鸡葡萄球菌、里昂葡萄球菌、山羊葡萄球菌、粘滑罗斯菌、麻疹孪生球菌、肺炎链球菌、咽峡炎链球菌、血链球菌、牛链球菌Ⅰ型、乳房链球菌、少酸链球菌、无乳链球菌、粪肠球菌、黄肠球菌、浅绿气球菌、解酪蛋白巨大球菌、拥挤棒杆菌、人皮肤棒状杆菌、蜂房芽孢杆菌、短芽孢杆菌、环状芽胞杆菌。分离培养鉴定出12个科21个属48个种179株细菌,肠杆菌科是主要优势菌群,葡萄球菌科、肠球菌科、假单胞菌科、巴斯德菌科、链球菌科是次优势菌群。应用TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法从灰仓鼠中检出167份核酸阳性标本,包括支原体、泰泽氏菌、空肠弯曲菌、CAR菌、幽门螺杆菌、肝螺杆菌、嗜肺巴斯德菌。TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR检测结果显示支原体是最主要的优势菌群,泰泽氏菌、空肠弯曲菌、CAR菌、幽门螺杆菌、肝螺杆菌是次优势菌群。结论:TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR结合分离培养能够更有效地监测分析灰仓鼠细菌多样性,获得更多更全面的微生物多样性信息,该信息对灰仓鼠质量控制标准的制定具有重要意义。研究结果为我国灰仓鼠微生物学监测以及质量标准的制定提供了科学依据。 展开更多
关键词 灰仓鼠 细菌多样性 TAQMAN MGB探针 实时荧光定量PCR 常规微生学方法 分离培养 生化鉴定 监测分析
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小麦种子萌发早期淀粉降解关键酶活性及基因表达量研究 被引量:17
6
作者 刘美 张凤 +2 位作者 杨翠翠 杨文思 孙庆泉 《山东农业科学》 2014年第9期39-45,共7页
为研究小麦种子萌发早期淀粉降解关键酶活性及其基因表达量变化,以山农17为试验材料,测定了不同温度条件下萌发的小麦种子中的淀粉、可溶性糖含量及相关酶(淀粉酶和淀粉磷酸化酶)活性,并采用实时荧光定量PCR技术测定各酶相关基因相对表... 为研究小麦种子萌发早期淀粉降解关键酶活性及其基因表达量变化,以山农17为试验材料,测定了不同温度条件下萌发的小麦种子中的淀粉、可溶性糖含量及相关酶(淀粉酶和淀粉磷酸化酶)活性,并采用实时荧光定量PCR技术测定各酶相关基因相对表达量。结果显示,不同温度条件下萌发的小麦种子,淀粉含量随萌发进程以不同的速率呈下降趋势,可溶性糖含量呈先下降后上升趋势,α-淀粉酶、淀粉磷酸化酶活性和呼吸速率整体呈上升趋势,以上各指标均在露白前后有明显的变化;β-淀粉酶呈现双峰变化趋势,且一直保持较高活性;α-淀粉酶和淀粉磷酸化酶基因的相对表达量均呈上升趋势,且与酶活性呈极显著相关。以上结果表明,在小麦种子萌发早期,温度能强烈影响萌发过程中淀粉降解关键酶基因的表达量;α-淀粉酶和淀粉磷酸化酶在种子置床初期即可被检测到活性,且受其编码基因的调控作用显著,在种子萌发过程中具有重要作用。 展开更多
关键词 淀粉代谢 淀粉酶 淀粉磷酸化酶 荧光定量PCR 基因表达
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乳酸杆菌诱导绵羊瘤胃上皮细胞内SBD-1的表达 被引量:5
7
作者 范燕茹 王佩 +1 位作者 金鑫 杨银凤 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期604-612,共9页
为了解不同乳酸杆菌的刺激对绵羊瘤胃上皮细胞中绵羊β-防御素-1(sheep beta-defensin-1,SBD-1)的可能调节作用,本研究选用了2株具有益生作用的乳酸杆菌,即干酪乳杆菌Zhang(L.casei Zhang)和植物乳杆菌P-8(L.plantarum P-8),首先,运用... 为了解不同乳酸杆菌的刺激对绵羊瘤胃上皮细胞中绵羊β-防御素-1(sheep beta-defensin-1,SBD-1)的可能调节作用,本研究选用了2株具有益生作用的乳酸杆菌,即干酪乳杆菌Zhang(L.casei Zhang)和植物乳杆菌P-8(L.plantarum P-8),首先,运用实时荧光定量PCR技术(RT-q PCR)检测与乳酸杆菌共培养后的绵羊瘤胃上皮细胞中SBD-1mRNA的相对表达量;其次,探讨了2株乳酸杆菌诱导SBD-1 mRNA表达的差异性,选取优势菌株;最后,运用RTq PCR技术和酶联免疫吸附测定(ELISA)的方法,检测优势菌株活菌、灭活菌及其培养上清液对SBD-1基因及蛋白水平表达的影响。结果表明:2株乳酸杆菌均能促进SBD-1 mRNA的相对表达量,乳酸杆菌的浓度为107CFU/m L、刺激细胞8 h时能极显著促进SBD-1 mRNA的相对表达量(P<0.01),而L.plantarum P-8强于L.casei Zhang;进一步的研究表明L.plantarum P-8的灭活菌亦可显著诱导SBD-1的基因及蛋白表达(P<0.05),但弱于活菌。本研究结果表明L.plantarum P-8和L.casei Zhang均可诱导绵羊瘤胃上皮细胞内SBD-1的差异性表达。 展开更多
关键词 β-防御素-1 瘤胃上皮细胞 乳酸杆菌 实时荧光定量PCR 酶联免疫吸附测定
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猕猴桃6个LOX基因家族成员实时定量PCR引物特异性的检测与应用 被引量:5
8
作者 张波 徐昌杰 陈昆松 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期262-267,共6页
从基因家族成员的视角开展基因表达研究是阐明基因功能的重要组成内容,实时定量PCR(QPCR)技术是分析基因表达的有效手段.以猕猴桃脂氧合酶(LOX)基因家族6个成员为对象,分析了引物特异性的检测方法.该方法整合了熔点曲线分析、琼脂糖电... 从基因家族成员的视角开展基因表达研究是阐明基因功能的重要组成内容,实时定量PCR(QPCR)技术是分析基因表达的有效手段.以猕猴桃脂氧合酶(LOX)基因家族6个成员为对象,分析了引物特异性的检测方法.该方法整合了熔点曲线分析、琼脂糖电泳、交叉PCR扩增和PCR产物测序等分析手段,有效消除其它成员的交叉扩增干扰,为利用QPCR检测基因家族成员表达提供了特异、准确与可行的途径. 展开更多
关键词 猕猴桃脂氧合酶基因家族成员 引物 特异性 实时定量PCR
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不结球白菜PR4蛋白基因的克隆与诱导表达分析 被引量:7
9
作者 陈晓峰 侯喜林 刘琳 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期1-6,共6页
从不结球白菜抗病品种‘苏州青’中克隆到一个受SA和病原菌诱导的病程相关蛋白4(PR4)基因,命名为BcPR4(DDBJ登录号:AB325873),该基因核苷酸序列全长593 bp,编码140个氨基酸,与其它植物的PR4蛋白基因具有较高的相似性。系统进化树分析表... 从不结球白菜抗病品种‘苏州青’中克隆到一个受SA和病原菌诱导的病程相关蛋白4(PR4)基因,命名为BcPR4(DDBJ登录号:AB325873),该基因核苷酸序列全长593 bp,编码140个氨基酸,与其它植物的PR4蛋白基因具有较高的相似性。系统进化树分析表明,该基因在不同物种之间具有保守性。基因组DNA杂交表明BcPR4属于多基因家族。实时定量PCR(qPCR)检测表明,SA和Peronospora parasitica均能诱导不结球白菜BcPR4转录表达,BcPR4在不结球白菜叶片中的表达特征说明它可能参与寄主对病原菌的抗性。 展开更多
关键词 不结球白菜 PR4 实时定量PCR(qPCR) 系统获得抗性(SAR) RACE
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厌氧氨氧化启动过程Anammox菌富集规律和差异分析 被引量:4
10
作者 陈重军 朱为静 +1 位作者 黄孝肖 吴伟祥 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期891-900,共10页
为明确厌氧氨氧化反应器启动过程中Anammox菌的富集规律,采用荧光原位杂交(FISH)和实时荧光定量PCR(q-PCR)分析技术,对未添加填料、添加多面空心球以及添加竹炭的3个UASB反应器厌氧氨氧化启动过程中Anammox菌的增长规律进行分析。研究表... 为明确厌氧氨氧化反应器启动过程中Anammox菌的富集规律,采用荧光原位杂交(FISH)和实时荧光定量PCR(q-PCR)分析技术,对未添加填料、添加多面空心球以及添加竹炭的3个UASB反应器厌氧氨氧化启动过程中Anammox菌的增长规律进行分析。研究表明,Anammox菌的相对数量和绝对数量均随着启动时间呈逐渐递增趋势,在稳定运行阶段的第123天,无填料、多面空心球和竹炭反应器中Anammox菌分别占总细菌的23.3%、32.6%和43.7%,单位VSS污泥中Anammox菌16S rRNA基因拷贝数分别为(25.64±2.76)×107、(47.12±2.76)×107和(577.99±27.25)×107拷贝数g–1 VSS。竹炭反应器中Anammox菌最大生长率和最短倍增时间分别为0.064 d?1和10.8 d,最大生长率分别是无填料和多面空心球反应器的1.78倍和1.88倍。因此,填料添加特别是竹炭的添加可极大地促进Anammox菌的选择性生长和繁殖。FISH和q-PCR分析技术均适用于Anammox菌的富集规律研究,但因其检测目标存在差异,造成两者表征结果有所不同。 展开更多
关键词 填料 厌氧氨氧化 厌氧氨氧化菌 荧光原位杂交 实时荧光定量PCR
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NFBD1在鼻咽癌组织中的表达及临床意义 被引量:3
11
作者 邱志利 曾泉 +1 位作者 刘学良 胡国华 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期126-130,共5页
目的:研究NFBD1在鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)组织中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组化检测40例NPC组织及20例慢性鼻咽炎组织中NFBD1蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测34例NPC组织和23例慢性鼻咽炎组织中NFBD1 mRNA的表达... 目的:研究NFBD1在鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)组织中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组化检测40例NPC组织及20例慢性鼻咽炎组织中NFBD1蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测34例NPC组织和23例慢性鼻咽炎组织中NFBD1 mRNA的表达并分析其与患者性别、年龄、颈淋巴结转移和临床分期的相关性。结果:NPC组织中NFBD1在蛋白水平(χ2=9.600,P=0.002)和mRNA水平(t=3.206,P=0.002)表达均高于慢性鼻咽炎组织,NFBD1在mRNA水平的表达高低与患者的性别(t=0.937,P=0.356)、年龄(t=0.382,P=0.698)及是否伴有临床颈淋巴结转移(t=1.037,P=0.322)、临床分期(t=0.293,P=0.771)均没有相关性。结论:NFBD1可能参与了NPC的发生,但其与NPC的侵袭转移没有明显联系。 展开更多
关键词 NFBD1 鼻咽癌 免疫组织化学 实时荧光定量PCR
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MiR-100对肝癌细胞有丝分裂阻滞及Polo样激酶1蛋白表达的作用 被引量:3
12
作者 范秉琳 嵇晓辉 朱武凌 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期70-73,共4页
目的探讨microRNA-100(miR-100)对肝癌细胞有丝分裂阻滞及Polo样激酶1(PLK1)表达的作用。方法采用实时定量PCR和免疫荧光方法检测miR-100和PLK1在人肝癌细胞HepG2中的表达。利用Oligofectamine脂质体介导将Cy3荧光标记的miR-100模拟物... 目的探讨microRNA-100(miR-100)对肝癌细胞有丝分裂阻滞及Polo样激酶1(PLK1)表达的作用。方法采用实时定量PCR和免疫荧光方法检测miR-100和PLK1在人肝癌细胞HepG2中的表达。利用Oligofectamine脂质体介导将Cy3荧光标记的miR-100模拟物瞬时转染HepG2细胞,分析细胞有丝分裂和PLK1蛋白表达情况。结果肝癌细胞HepG2的miR-100表达量低于正常肝细胞,而PLK1 mRNA和蛋白表达却异常升高。在miR-100模拟物转染后48h,实验组细胞有丝分裂指数显著小于对照细胞,经Western blotting分析显示,实验组细胞PLK1蛋白表达水平较对照组细胞均显著减低。同时免疫细胞化学检测发现,在有丝分裂中晚期和末期位于细胞核内的PLK1蛋白基本消失。结论 miR-100具有抑制PLK1蛋白表达的作用,可引起肝癌细胞有丝分裂阻滞。 展开更多
关键词 肝癌 有丝分裂 microRNA-100 POLO样激酶1 实时定量PCR 免疫印迹法 免疫荧光
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改性魔芋葡甘露聚糖对齐口裂腹鱼脂质代谢及相关基因表达的影响 被引量:1
13
作者 吕珍珍 邬应龙 +5 位作者 何梅 严秋萍 陈明睿 冯莉梅 赵嘉琪 王冰莹 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期758-763,共6页
对比了两种改性魔芋葡甘露聚糖对齐口裂腹鱼生长性能、肝脏基础成分、血清生化指标及肝脏相关基因表达的影响,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)对齐口裂腹鱼血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、总胆固醇(T-CHO)... 对比了两种改性魔芋葡甘露聚糖对齐口裂腹鱼生长性能、肝脏基础成分、血清生化指标及肝脏相关基因表达的影响,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)对齐口裂腹鱼血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、总胆固醇(T-CHO)及甘油三酯(TG)进行分析,利用实时荧光定量PCR技术对鱼类脂肪合成和沉积过程的关键基因肝脏脂蛋白酯酶(lpl)、肝酯酶(hl)、脂肪合成酶(fas)相对表达量进行定量分析。结果表明:改性魔芋葡甘露聚糖种类、添加剂量以及两者交互水平对齐口裂腹鱼生长均无显著影响。在魔芋葡甘露聚糖硫酸酯(OKGMS)改性条件下,随着添加剂量的增加肝脏脂肪、血清LDL-C、T-CHO、TG含量显著降低,当添加质量分数1.6%OKGMS达到最低;在酸解魔芋葡甘露聚糖改性条件下(AOKGM),随着添加剂量的增加血清LDL-C、T-CHO、TG质量分数呈先降低后增加趋势,当添加质量分数0.8%AOKGM达到最低,均与对照组达到显著差异。与基础组相比,添加质量分数1.6%OKGMS、0.8%AOKGM血清HDL-C显著增加,肝脏lpl m RNA表达量分别增加7.7和2.7倍。 展开更多
关键词 改性魔芋葡甘露聚糖 齐口裂腹鱼 ELISA 荧光定量PCR 脂质代谢
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Transcriptome of intraperitoneal organs of starry flounder Platichthys stellatus challenged by Edwardsiella ictaluri JCM1680 被引量:2
14
作者 仝颜丽 孙修勤 +5 位作者 王波 王玲 李妍 田金虎 郑凤荣 郑明刚 《Chinese Journal of Oceanology and Limnology》 SCIE CAS CSCD 2015年第1期20-27,共8页
Platichthys stellatus is an economically important marine bony fish species that is cultured in China on a large scale.However,very little is known about its immune-related genes.In this study,the transcriptome of the... Platichthys stellatus is an economically important marine bony fish species that is cultured in China on a large scale.However,very little is known about its immune-related genes.In this study,the transcriptome of the immune organs ofP.stellatus that were intraperitoneally challenged with the pathogen Edwardsiella ictaluri JCM1680 is analyzed.Total RNA from four tissues(spleen,kidney,liver,and intestine) was mixed equally and then sequenced on an Illumina HiSeq 2000 platform.Overall,28 465 813 quality reads were generated and assembled into 43 061 unigenes.Similarity searches against public protein sequence databases were used to annotate 28 291 unigenes(65.7%of the total),368 of which were associated with immunoregulation,including 188 related to immunity response.Additionally,the transcript levels of immunity response unigenes annotated as related to tumor necrosis factor(TNF),TNF receptor,chemokine,major histocompatibility complex,and interleukin-6 were investigated in the different tissues of normal and infected P.stellatus by real-time quantitative PCR.The results confirmed that the unigenes identified in the transcriptome database were indeed expressed and up-regulated in infected P.stellatus.To our knowledge,this is the first report of the sequencing and analysis of the transcriptome of P.stellatus.These findings provide insights into the transcriptomics and immunogenetics of bony fish. 展开更多
关键词 Platichthys stellatus illumina sequencing TRANSCRIPTOME immunity gene real-time quantitativepcr
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Surveillance of CMV Infection in allo-HSCT Recipients and Guidance on Preemptive Therapy by RQ-PCR 被引量:3
15
作者 LI Yan GAO Li +9 位作者 WANG Li-Li DING Yi XU Yuan-Yuan LI Hong-Hua JING Yu BO Jian HUANG Wen-Rong WANG Quan-Shun GAO Chun-Ji YU Li 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期161-168,共8页
In order to study the epidemiological characteristics of cytomegalovirus(CMV)infection in allogeneichematopoietic stem cell transplantation(allo-HSCT)recipients by means of plasma real time quantitative polymerasechai... In order to study the epidemiological characteristics of cytomegalovirus(CMV)infection in allogeneichematopoietic stem cell transplantation(allo-HSCT)recipients by means of plasma real time quantitative polymerasechain reaction(RQ-PCR),141 adult patients undergoing allo-HSCT between January 2008 and June 2010 were seriallymonitored by RQ-PCR for detecting CMV and guiding the preemptive therapy followed up to 180 days post-HSCT.Theresults showed that the incidence of CMV infection and CMV pneumonia was 81.5%and 2.9%respectively,whichmainly occurred within 2 months post-HSCT.Single-therapy with ganciclovir(GCV)for 63 patients or foscarnet 6patients was performed for preemptive therapy.The total efficacy was 87.8%,and the response patterns were different.CMV infection was more frequent in female patients(P=0.044),and those with aGVHD(P=0.043),using ATG orbasiliximab in conditioning regimens(P=0.049),as well as earlier in patients using ATG or basiliximab or those withaGVHD(P=0.007;P=0.000).The aGVHD,maximum load,positive times of CMV-DNA detection and therapyduration all correlated with the efficacy(P<0.05).It is concluded that the incidence of CMV infection is still high afterHSCT.Plasma RQ-PCR assay for CMV-DNA shows a strong correlation with the clinical outcome of CMV infection,which is useful and suitable for management of CMV infection in HSCT. 展开更多
关键词 allogeneic hematopoietic stem cell transplantation cytomegalovirus infection real-time quantitativepcr preemptive therapy
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“牛肉”制品中牛肉含量的快速检测 被引量:5
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作者 柳彬 杨金易 +1 位作者 许婉 孙远明 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第24期148-153,共6页
以牛源性DNA为对象,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)-SYBRGreenI技术建立“牛肉丸”制品中牛源性DNA含量的快速定量检测方法,以标准品中牛肉含量的对数值为横坐标,Ct差值为纵坐标,建立标准曲线,通过Ct(SB)-Ct(TM)或Ct... 以牛源性DNA为对象,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)-SYBRGreenI技术建立“牛肉丸”制品中牛源性DNA含量的快速定量检测方法,以标准品中牛肉含量的对数值为横坐标,Ct差值为纵坐标,建立标准曲线,通过Ct(SB)-Ct(TM)或Ct(TB)-Ct(TM)的大小,判定“牛肉丸”中牛肉占“牛肉丸”中总肉量的百分比。结果表明:该法牛肉含量检出限均为0.1%,定量线性范围均为0.1%~90%。 展开更多
关键词 牛肉 鉴伪 荧光定量聚合酶链式反应 SYBR Green I
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E-选择素在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床意义 被引量:4
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作者 李丛丛 杨锡贵 +3 位作者 姜超 魏玲 杨香山 杨麟珂 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1050-1053,共4页
目的探讨食管鳞状细胞癌(简称食管鳞癌)中E-选择素的表达及其临床意义。方法收集手术切除食管鳞癌及癌旁正常组织标本各58例,采用实时荧光定量PCR检测E-选择素(E-selectin)mRNA的表达,采用免疫组织化学PV-9000法检测其蛋白的表达,并分... 目的探讨食管鳞状细胞癌(简称食管鳞癌)中E-选择素的表达及其临床意义。方法收集手术切除食管鳞癌及癌旁正常组织标本各58例,采用实时荧光定量PCR检测E-选择素(E-selectin)mRNA的表达,采用免疫组织化学PV-9000法检测其蛋白的表达,并分析E-选择素表达与临床病理指标的关系。结果 E-选择素mRNA与蛋白在食管鳞癌组织中的表达明显增高,均与食管癌临床分期、淋巴结转移、浸润深度有关(P均<0.05),而与患者性别、年龄、肿瘤部位、病理类型、分化程度、肿瘤大小无显著相关(P均>0.05)。结论 E-选择素mRNA和蛋白在食管鳞癌组织中表达明显增高,与肿瘤的浸润转移密切相关,有望作为判断食管鳞癌疾病进展、预测侵袭转移、评估预后的辅助指标,为食管鳞癌的治疗提供新的生物作用靶点。 展开更多
关键词 E-选择素 食管鳞癌 实时荧光定量PCR 免疫组织化学
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少突胶质细胞谱系基因-髓鞘碱性蛋白在口腔扁平苔藓组织中的表达 被引量:2
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作者 王燃 单婧 +2 位作者 马江敏 周婷君 范媛 《口腔生物医学》 2013年第1期11-14,共4页
目的:探讨少突胶质细胞谱系基因-髓鞘碱性蛋白(genes of the oligodendrocyte lineage-myelin basic protein,Golli-MBP)在口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)组织中的表达及其与OLP发病的关系。方法:采用实时荧光定量PCR的方法,检... 目的:探讨少突胶质细胞谱系基因-髓鞘碱性蛋白(genes of the oligodendrocyte lineage-myelin basic protein,Golli-MBP)在口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)组织中的表达及其与OLP发病的关系。方法:采用实时荧光定量PCR的方法,检测39例OLP患者病损组织和16例健康口腔黏膜组织中Golli-MBP的基因表达水平,采用免疫组化法检测38例OLP及20例正常口腔黏膜组织石蜡标本中Golli-MBP的表达情况。结果:Golli-MBP mRNA在OLP组中的表达显著高于正常对照组(P<0.001)。OLP患者石蜡标本中Golli-MBP的表达水平亦显著高于对照组(P<0.001);固有层淋巴细胞中Golli-MBP的表达高于对照组(P<0.05);上皮细胞中Golli-MBP的表达在OLP患者及对照组间无统计学差异(P>0.05)。结论:Golli-MBP在OLP组织中高表达,可能在OLP的发病机制中起一定作用。 展开更多
关键词 口腔扁平苔藓 少突胶质细胞谱系基因-髓鞘碱性蛋白 实时荧光定量PCR 免疫组织化学
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家蚕生殖细胞相关基因nanos的克隆表达及在胚胎发育中的表达模式
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作者 赵国力 陈克平 +1 位作者 姚勤 郭忠建 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1092-1098,共7页
【目的】探讨nanos基因在家蚕Bombyxmori胚胎发育中的表达模式,为进一步研究该基因在家蚕胚胎发育中的功能奠定基础。【方法】根据本实验室提交到GenBank中家蚕nanos的cDNA序列(登录号EF647589)设计引物,扩增出了一条长684bp的编码片段... 【目的】探讨nanos基因在家蚕Bombyxmori胚胎发育中的表达模式,为进一步研究该基因在家蚕胚胎发育中的功能奠定基础。【方法】根据本实验室提交到GenBank中家蚕nanos的cDNA序列(登录号EF647589)设计引物,扩增出了一条长684bp的编码片段,对该片段进行了克隆和表达,亲和纯化表达的蛋白并免疫新西兰大白兔制备抗体。Western blot检测家蚕早期胚胎nanos的表达情况,荧光定量PCR检测nanos在整个家蚕胚胎发育中的表达情况。【结果】克隆并表达了一条长684bp的编码片段,得到了分子量约33kD的融合蛋白。用制备的抗血清对家蚕早期胚胎蛋白的Western blot检测表明,nanos在此阶段基本是恒定表达。荧光定量PCR结果显示刚产的卵中nanos的表达量最大,第2天开始急剧下降,此后到第10天表达量几乎没有变化。【结论】本实验克隆的nanos是家蚕中的一个同源物,该基因在家蚕胚胎发育中的表达模式与蜜蜂等有很大的不同,反映了昆虫生殖细胞形成机制的多样性。 展开更多
关键词 家蚕 NANOS 胚胎发育 原始生殖细胞 荧光定量PCR Western BLOT
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非小细胞肺癌患者血清游离DNA中COX-2拷贝数检测 被引量:1
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作者 李栋 何建行 +3 位作者 邱源 成向阳 徐鑫 钟南山 《广州医学院学报》 2008年第2期1-4,共4页
COX-2拷贝数,结合其临床病理生理特征统计分析。结果:NSCLC组、良性肺部疾病组和健康组COX-2拷贝数平法:运用实时荧光定量PCR检测60例NSCLC、25例良性肺部疾病患者和25例健康人外周血清游离DNA中的摘要目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患... COX-2拷贝数,结合其临床病理生理特征统计分析。结果:NSCLC组、良性肺部疾病组和健康组COX-2拷贝数平法:运用实时荧光定量PCR检测60例NSCLC、25例良性肺部疾病患者和25例健康人外周血清游离DNA中的摘要目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清游离DNA中COX-2拷贝数的检测及其临床意义。方均值分别为(1.575±0.016)×106copies/mL、(2.875±0.007)×104copies/mL和(4.269±0.004)×103copies/mL。COX-2拷贝数在NSCLC患者中:女性、非吸烟、腺癌和有淋巴结转移患者中明显增多(均P<0.05);与临床分期呈正相关0.946)。结论:COX-2基因拷贝数在NSCLC患者血清中明显增多,可能是诊断NSCLC和监测预后的一种重要肿关系:Ⅲ+Ⅳ期患者高于Ⅱ期,Ⅱ期患者高于Ⅰ期(r=0.323,P=0.012);在年龄比较的差异无统计学意义(P=瘤标志物。 展开更多
关键词 非小细胞肺 COX-2 游离DNA 荧光定量PCR
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