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实时荧光定量PCR检测HBV阳性孕妇胎盘组织TLR3的表达 被引量:2
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作者 车晓文 王素萍 +1 位作者 李淑珍 宋秀霞 《现代预防医学》 CAS 北大核心 2008年第9期1686-1687,共2页
[目的]了解toll样受体3(TLR3)与孕妇乙肝病毒(HBV)感染的关系。[方法]提取组织总RNA,逆转录成mRNA,采用qRTPCR(real-timequantitative,RT-PCR实时荧光定量逆转录-多聚酶链反应相对定量的方法)分别检测正常孕妇和HBsAg阳性孕妇胎盘组织中... [目的]了解toll样受体3(TLR3)与孕妇乙肝病毒(HBV)感染的关系。[方法]提取组织总RNA,逆转录成mRNA,采用qRTPCR(real-timequantitative,RT-PCR实时荧光定量逆转录-多聚酶链反应相对定量的方法)分别检测正常孕妇和HBsAg阳性孕妇胎盘组织中TLR3mRNA,从基因水平比较TLR3在两组表达的差异。[结果]实时荧光定量PCR技术结果显示,病例组TLR3mRNA的含量低于对照组。,病例组Ct比值(TLR3/β-actin)为1.7029±0.20306,对照组为1.3882±0.19125,两组比较差异有统计学意义(t=-4.698,P=0.000﹤0.05)。[结论]胎盘组织中TLR3表达与孕妇HBV感染有一定关系。TLR3高表达可能是孕妇HBV感染的保护因素。 展开更多
关键词 TLR3 HBV 胎盘 qrtpcr
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小菜蛾气味结合蛋白OBP2基因的克隆、表达谱及其结合特性分析 被引量:9
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作者 程小娟 蔡立君 +3 位作者 郑丽双 覃江梅 黄宇萍 尤民生 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期365-376,共12页
【目的】气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)在昆虫寄主定位、产卵地选择等行为中发挥重要作用,克隆与鉴定小菜蛾Plutella xylostella OBP基因、明确其与配体化合物的结合特性有助于阐明小菜蛾嗅觉识别的分子机制。【方法】利... 【目的】气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)在昆虫寄主定位、产卵地选择等行为中发挥重要作用,克隆与鉴定小菜蛾Plutella xylostella OBP基因、明确其与配体化合物的结合特性有助于阐明小菜蛾嗅觉识别的分子机制。【方法】利用PCR技术克隆小菜蛾OBP2,对获得的编码序列全长进行信号肽及跨膜区域预测,用DNAMAN与其他昆虫的OBP2进行多序列比对,采用MEGA5.0邻接法(neighbor-joining method,NJ)构建进化树。通过实时定量PCR(qRT-PCR)分析Pxyl OBP2在小菜蛾不同发育阶段和不同组织中的表达模式。构建原核表达载体p ET28aPxyl OBP2,进行原核表达及蛋白纯化。利用荧光竞争结合实验对Pxyl OBP2蛋白与39种配基化合物的结合特性进行分析。【结果】成功获得小菜蛾OBP2基因Pxyl OBP2(Gen Bank登录号:KT070562)的编码序列全长,其完整开放阅读框大小为546 bp,编码182个氨基酸,具有气味结合蛋白典型的6个保守半胱氨酸结合位点。荧光定量PCR结果表明,发育表达模式显示,Pxyl OBP2在未交配雄性成虫中的表达量均明显高于雌性成虫和已交配雄虫;组织表达模式显示,Pxyl OBP2在足中的表达量高于其他组织。经预测成熟蛋白大小为22.24 k Da,等电点5.69。SDS-PAGE结果显示融合蛋白成功表达。荧光竞争结合实验对3种性信息素和36种植物挥发物结合发现,Pxyl OBP2与性信息素Z-11-16:Ald可以结合,解离常数48.951μmol/L;可以和11种寄主植物挥发物有效结合,其中,与芳樟醇、正壬醇结合能力最强,解离常数分别为4.733和6.861μmol/L。【结论】本研究明确了Pxyl OBP2的核苷酸、氨基酸序列,并根据qRT-PCR和荧光竞争结合实验结果,推断Pxyl OBP2与小菜蛾雄虫寻求配偶有关,且寄主挥发物芳樟醇、正壬醇起协同促进作用。 展开更多
关键词 小菜蛾 气味结合蛋白 气味 基因表达 QRT-PCR 荧光竞争结合
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葡萄不同摘心处理下qRT-PCR内参基因的筛选与验证 被引量:4
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作者 赖呈纯 潘红 +4 位作者 张静 王琦 高慧颖 陈源 黄贤贵 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期890-900,共11页
摘心处理是保证葡萄产量和品质的关键栽培技术之一,选择稳定可靠的内参基因,有利于葡萄摘心响应分子机制相关基因表达的研究。本研究以不同摘心处理的葡萄叶片和茎杆为材料,利用qRT-PCR分析15个候选内参基因Actin、AP-2、Cyclophilin、E... 摘心处理是保证葡萄产量和品质的关键栽培技术之一,选择稳定可靠的内参基因,有利于葡萄摘心响应分子机制相关基因表达的研究。本研究以不同摘心处理的葡萄叶片和茎杆为材料,利用qRT-PCR分析15个候选内参基因Actin、AP-2、Cyclophilin、EF1-α、GAPDH、VAG、SAND、α-Tubulin、β-Tubulin、UBQ-L40、NAD5、ADH2、60SRP、18S rRNA、UBQ等在所供材料中的转录水平,并用RefFinder软件对候选内参基因稳定性进行综合评价。试验结果表明,葡萄叶片为材料的试验体系的最稳定内参基因为SAND和VAG,而葡萄茎杆为材料的试验体系以AP-2和Actin为最稳定的内参基因,且采用双内参基因组合,可以进一步提高试验结果的精确度;通过目的基因VvSS4转录水平数据标准化的验证,所获得的2组内参基因在各自的试验体系中可靠性高,可用于后续相关目的基因定量表达的研究。 展开更多
关键词 葡萄 摘心 实时荧光定量PCR(qRT-PCR) 内参基因 表达稳定性
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低温胁迫下油棕WRKY转录因子基因的表达特性分析 被引量:13
4
作者 周丽霞 曹红星 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期1490-1497,共8页
【目的】研究低温胁迫下WRKY转录因子基因表达特性,并分析其与油棕抗寒性的相关性,为阐明WRKY转录因子在油棕生长和低温响应机制中的功能和作用提供理论参考。【方法】以油棕品种XJS30和SJ64为材料,对其进行低温驯化处理(0 h、1 d和7 d... 【目的】研究低温胁迫下WRKY转录因子基因表达特性,并分析其与油棕抗寒性的相关性,为阐明WRKY转录因子在油棕生长和低温响应机制中的功能和作用提供理论参考。【方法】以油棕品种XJS30和SJ64为材料,对其进行低温驯化处理(0 h、1 d和7 d)及冷处理(10℃4 h、8℃4 h、6℃4 h、4℃4 h和2℃4 h),利用实时荧光定量PCR(qPCR)检测不同处理时间的WRKY1、WRKY7、WRKY22、WRKY40和WRKY55基因表达特性,并分析其与油棕抗寒性的相关性。【结果】WRKY1和WRKY7基因在低温驯化结束时的表达量较冷处理结束时高,说明其在低温驯化过程中对XJS30的抗寒性构成发挥调控作用。WRKY22、WRKY40和WRKY55基因均在XJS30冷处理中表达量最高,说明其在冷处理过程中对XJS30的抗寒性发挥调控作用。WRKY1基因在低温驯化结束时的表达量较冷处理结束时低,说明其在冷处理过程中对SJ64的抗寒性发挥调控作用。WRKY7基因在低温驯化结束时的相对表达量较冷处理结束时高,说明其在低温驯化过程中对SJ64的抗寒性构成发挥调控作用。【结论】油棕的WRKY1、WRKY7、WRKY22、WRKY40和WRKY55基因均属于低温应激反应型基因。 展开更多
关键词 油棕 WRKY转录因子 低温胁迫 实时荧光定量PCR(qPCR) 表达特性
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HIF-2α、VEGF在子宫颈鳞癌组织中的表达及其临床意义 被引量:5
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作者 张丽霞 胡有长 +5 位作者 施桥发 王美珍 曾文兴 江丽霞 王福财 刘玉琳 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2014年第4期313-319,共7页
目的检测宫颈鳞癌组织及正常宫颈组织中HIF-2α、VEGF基因与蛋白的表达情况,探讨其在子宫颈鳞癌的临床意义。方法随机选取64例子宫颈鳞癌组织和22例正常宫颈组织,收集年龄、FIGO分期和淋巴结转移等临床相关指标,采用实时荧光定量PCR法... 目的检测宫颈鳞癌组织及正常宫颈组织中HIF-2α、VEGF基因与蛋白的表达情况,探讨其在子宫颈鳞癌的临床意义。方法随机选取64例子宫颈鳞癌组织和22例正常宫颈组织,收集年龄、FIGO分期和淋巴结转移等临床相关指标,采用实时荧光定量PCR法及免疫组织化学法(Elivision法)检测各组织中HIF-2α、VEGF的表达。结果实时荧光定量PCR分析结果表明HIF-2α、VEGF mRNA表达较正常宫颈组织显著增加,差异有统计学意义(P<0.05),且二者mRNA水平呈正相关(r=0.778,P<0.001)。免疫组织化学法结果表明HIF-2α、VEGF蛋白在宫颈组织中的阳性表达率分别为宫颈鳞癌组93.8%、正常宫颈组18.2%,两组比较差异有统计学意义,且HIF-2α与VEGF呈显著相关(r=0.514,P<0.05)。HIF-2α、VEGF的mRNA表达均与年龄无关,但与FIGO分期、淋巴结转移关系密切(P<0.05),FIGO分期高、有淋巴结转移的子宫颈癌组织HIF-2α、VEGFmRNA表达水平均相应对照组升高。结论与正常宫颈组织相比,HIF-2α、VEGF mRNA和蛋白在宫颈鳞癌中均呈高表达。 展开更多
关键词 宫颈鳞癌 缺氧诱导因子-2Α 血管内皮生长因子 实时荧光定量PCR 免疫组织化学
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Transcriptomic insights into growth promotion effect of Trichoderma afroharzianum TM2-4 microbial agent on tomato plants 被引量:5
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作者 ZHAO Juan LIU Ting +5 位作者 LIU Wei-cheng ZHANG Dian-peng DONG Dan WU Hui-ling ZHANG Tao-tao LIU De-wen 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2021年第5期1266-1276,共11页
Plant growth promoting fungi are receiving increased attention as valuable beneficial microorganisms in crop cultivation due to their capacity to produce bioactive substances,promote plant growth and enhance immune de... Plant growth promoting fungi are receiving increased attention as valuable beneficial microorganisms in crop cultivation due to their capacity to produce bioactive substances,promote plant growth and enhance immune defense functions.In this study,a novel Trichoderma isolate,designated as TM2-4,was screened from healthy tomato rhizosphere soil and identified as Trichoderma afroharzianum.Culture filtrate of the isolate TM2-4 displayed obvious bioactive substance production and an evident effect in promoting tomato seed germination,with hypocotyl length,radical length and vigor index increased by 28.7,19.4 and 62.1%,respectively,after a 100-fold dilution treatment.To assess the promotion effect and related mechanism of isolate TM2-4,the plant biological indexes and gene expression profiles of tomato plants treated with or without T.afroharzianum TM2-4 microbial agent were investigated by greenhouse pot experiment and RNA sequencing.The results demonstrated that T.afroharzianum TM2-4 significantly promoted tomato plant growth in terms of plant height,dry weight,number of leaves per plant and root activity,through efficient colonization in the rhizosphere and root system of the plants.Transcriptome analyses identified a total of 984 differentially expressed genes in T.afroharzianum microbial agent inoculated tomato roots,which were mainly engaged in the biological process of phytohormone homeostasis,antioxidant activity,as well as metabolic pathways including phenylpropanoid biosynthesis and glutathione metabolism.These findings provide useful information for understanding the mechanism of isolate TM2-4 for tomato plant growth promotion,which would facilitate further development of T.afroharzianum TM2-4 microbial agent for use in vegetable crop production. 展开更多
关键词 Trichoderma afroharzianum Solanum lycopersicum L. plant growth promotion transcriptome analyses qrtpcr
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基因间长链非编码RNA?524346在肝细胞癌中的?表达及临床意义 被引量:1
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作者 雷光林 杨鹏辉 +3 位作者 程思杰 严锦 张绍庚 王希良 《肝胆胰外科杂志》 CAS 2017年第1期51-56,共6页
目的检测基因间长链非编码RNA 524346(long intergenic non-coding RNA 524346,LincRNA 524346)在肝细胞癌患者组织(癌、癌旁)及细胞系(正常肝细胞系LO2及肝癌细胞系SMMC-7721、HepG2和Huh7)中的表达情况,探讨LincRNA 524346与肝细胞癌... 目的检测基因间长链非编码RNA 524346(long intergenic non-coding RNA 524346,LincRNA 524346)在肝细胞癌患者组织(癌、癌旁)及细胞系(正常肝细胞系LO2及肝癌细胞系SMMC-7721、HepG2和Huh7)中的表达情况,探讨LincRNA 524346与肝细胞癌临床病理特征的关系。方法应用实时荧光定量PCR法(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测LincRNA 524346在61例肝细胞癌患者癌组织、配对癌旁组织以及肝癌细胞系的表达水平,分析其与肝细胞癌患者临床病理特征之间的相关性。用受试者工作曲线(receiver operating characteristics,ROC)评价肝细胞癌组织中LincRNA 524346的表达水平在肝细胞癌早期诊断中的效能。结果 LincRNA 524346在83.6%(51/61)肝细胞癌患者的癌组织中较配对癌旁组织表达下调,差异有统计学意义(P<0.01);LincRNA 524346的表达水平与肝细胞癌患者的病理分期(P=0.021)、肿瘤数目(P=0.013)、是否合并门静脉癌栓(PVTT)(P<0.01)、肝硬化(P=0.005)和微静脉浸润(MVI)(P<0.001)具有显著相关性。结论 LincRNA 524346在肝细胞癌组织中表达降低,其有望作为潜在肝细胞癌早期诊断、转移的分子标志物。 展开更多
关键词 肝细胞 长链非编码RNA 实时荧光定量PCR
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