为筛选出青鲫不同组织中的最适内参基因,本研究利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)技术检测β肌动蛋白(β-actin)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、18S核糖体RNA(18S r RNA)和核糖体蛋白L13(...为筛选出青鲫不同组织中的最适内参基因,本研究利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)技术检测β肌动蛋白(β-actin)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、18S核糖体RNA(18S r RNA)和核糖体蛋白L13(RPL13)4个候选内参基因在青鲫脑、鳃、性腺、肾脏、肝脏、肌肉和脾脏7个组织中的表达情况,并利用ge Norm、NormFinder和BestKeeper等程序分析候选基因的表达稳定性。结果显示,4个内参基因在各组织的Ct值高低顺序依次为:β-actin>GAPDH>18S r RNA>RPL13;4个内参基因在不同组织的稳定性有所不同,综合评价分析显示其稳定性排序为RPL13>18S r RNA>β-actin>GAPDH,RPL13适合作为青鲫不同组织qRT-PCR分析的内参基因。本研究结果可为后续青鲫功能基因表达特征的研究提供技术支撑。展开更多
研究了7个候选内参基因(α-tubulin、β-tubulin、Actin、Ubiquitin、18 S rRNA、EF-1α和GAPDH),在3株成囊能力不同的球形棕囊藻(成囊株系PG-1和PG-2以及不成囊的单细胞株系PG-3)不同生长阶段下的表达稳定性。结果表明:PG-1的最佳内参...研究了7个候选内参基因(α-tubulin、β-tubulin、Actin、Ubiquitin、18 S rRNA、EF-1α和GAPDH),在3株成囊能力不同的球形棕囊藻(成囊株系PG-1和PG-2以及不成囊的单细胞株系PG-3)不同生长阶段下的表达稳定性。结果表明:PG-1的最佳内参基因组合为Ubiquitin、β-tubulin和18 S rRNA;PG-2的最佳内参基因组合为α-tubulin、18 S rRNA、β-tubulin和EF-1α,可见在成囊株系中表达较为稳定的内参基因为β-tubulin和18 S rRNA;在单细胞株系PG-3中表达最稳定的内参基因为Ubiquitin和α-tubulin;对3个株系球形棕囊藻的基因表达差异进行标准化分析可使用EF-1α、Ubiquitin和18 S rRNA为内参基因组合。所得结论为更准确地研究不同株系球形棕囊藻在不同生长时期的基因表达、验证成囊的关键基因奠定基础。展开更多
根据高效培养鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)时对病毒滴度检测的需要,本文针对IBDV VP4基因的保守序列设计并合成了一对引物,以所构建的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测IBDV核酸载量的SYBR Green I荧光定量实时RT-PCR(qRT-PCR)方法,结果表...根据高效培养鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)时对病毒滴度检测的需要,本文针对IBDV VP4基因的保守序列设计并合成了一对引物,以所构建的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测IBDV核酸载量的SYBR Green I荧光定量实时RT-PCR(qRT-PCR)方法,结果表明,其Ct值与标准品模板在4.03×101～109拷贝/μL范围内呈良好的线性关系,对IBDV核酸的最低检出量为40拷贝/μL,灵敏度是常规RT-PCR检测方法的1 000倍;该方法不与其它禽源病毒发生交叉反应,批内变异系数小于0.5%。应用本方法对DF-1细胞中IBDV的增殖滴度进行了测定,并与经典的TCID50测定方法进行了比较。结果显示两种方法测定的IBDV在微载体悬浮培养和方瓶静态培养条件下DF-1细胞上的增殖曲线都具有一定的平行关系,且qRT-PCR方法比TCID50方法更加快速和敏感,更适合于对IBDV增殖滴度的实时快速测定。展开更多
文摘为筛选出青鲫不同组织中的最适内参基因,本研究利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)技术检测β肌动蛋白(β-actin)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、18S核糖体RNA(18S r RNA)和核糖体蛋白L13(RPL13)4个候选内参基因在青鲫脑、鳃、性腺、肾脏、肝脏、肌肉和脾脏7个组织中的表达情况,并利用ge Norm、NormFinder和BestKeeper等程序分析候选基因的表达稳定性。结果显示,4个内参基因在各组织的Ct值高低顺序依次为:β-actin>GAPDH>18S r RNA>RPL13;4个内参基因在不同组织的稳定性有所不同,综合评价分析显示其稳定性排序为RPL13>18S r RNA>β-actin>GAPDH,RPL13适合作为青鲫不同组织qRT-PCR分析的内参基因。本研究结果可为后续青鲫功能基因表达特征的研究提供技术支撑。
文摘研究了7个候选内参基因(α-tubulin、β-tubulin、Actin、Ubiquitin、18 S rRNA、EF-1α和GAPDH),在3株成囊能力不同的球形棕囊藻(成囊株系PG-1和PG-2以及不成囊的单细胞株系PG-3)不同生长阶段下的表达稳定性。结果表明:PG-1的最佳内参基因组合为Ubiquitin、β-tubulin和18 S rRNA;PG-2的最佳内参基因组合为α-tubulin、18 S rRNA、β-tubulin和EF-1α,可见在成囊株系中表达较为稳定的内参基因为β-tubulin和18 S rRNA;在单细胞株系PG-3中表达最稳定的内参基因为Ubiquitin和α-tubulin;对3个株系球形棕囊藻的基因表达差异进行标准化分析可使用EF-1α、Ubiquitin和18 S rRNA为内参基因组合。所得结论为更准确地研究不同株系球形棕囊藻在不同生长时期的基因表达、验证成囊的关键基因奠定基础。
文摘根据高效培养鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)时对病毒滴度检测的需要,本文针对IBDV VP4基因的保守序列设计并合成了一对引物,以所构建的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测IBDV核酸载量的SYBR Green I荧光定量实时RT-PCR(qRT-PCR)方法,结果表明,其Ct值与标准品模板在4.03×101～109拷贝/μL范围内呈良好的线性关系,对IBDV核酸的最低检出量为40拷贝/μL,灵敏度是常规RT-PCR检测方法的1 000倍;该方法不与其它禽源病毒发生交叉反应,批内变异系数小于0.5%。应用本方法对DF-1细胞中IBDV的增殖滴度进行了测定,并与经典的TCID50测定方法进行了比较。结果显示两种方法测定的IBDV在微载体悬浮培养和方瓶静态培养条件下DF-1细胞上的增殖曲线都具有一定的平行关系,且qRT-PCR方法比TCID50方法更加快速和敏感,更适合于对IBDV增殖滴度的实时快速测定。
