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桉树焦枯病菌LysM效应蛋白的鉴定与功能初探
1
作者 叶小真 王利沙 +1 位作者 郭建酉 陈全助 《林业科学研究》 北大核心 2025年第4期13-20,共8页
[目的]桉树焦枯病是桉树人工林主要病害之一。分析桉树焦枯病菌(Calonectria pseudoreteaudii)LysM类效应蛋白的结构与功能,为揭示LysM效应蛋白在焦枯病菌与桉树互作过程中的作用奠定基础。[方法]利用生物信息学方法从全基因组水平分析... [目的]桉树焦枯病是桉树人工林主要病害之一。分析桉树焦枯病菌(Calonectria pseudoreteaudii)LysM类效应蛋白的结构与功能,为揭示LysM效应蛋白在焦枯病菌与桉树互作过程中的作用奠定基础。[方法]利用生物信息学方法从全基因组水平分析鉴定桉树焦枯病菌的LysM类效应蛋白基因数量与结构特征。通过基因克隆与农杆菌介导的烟草瞬时表达初步分析效应蛋白CpLYSM2、CpLYSM3和CpLYSM6的生物学功能。[结果]从桉树焦枯病菌中获得7个LysM基因,多数LysM蛋白为弱酸性稳定蛋白。7个LysM蛋白可分为4类,不同类别蛋白的氨基酸序列和保守结构域存在较大差异,LysM结构域的数量也不尽相同。第一类成员CpLYSM2,含有信号肽和2个LysM结构域,与稻瘟菌Slp1蛋白和番茄叶霉菌Ecp6蛋白聚为一类。第二类成员CpLYSM7,含1个LysM蛋白结构域,且存在Elicitin结构域。以上两类蛋白的保守基序中均不含有半胱氨酸残基。第三类成员CpLYSM1、CpLYSM3和CpLYSM4,均有信号肽,含1~4个LysM蛋白结构域,还分别存在Glyco_18、CBD_Ⅱ、Cutinase功能结构域。第四类成员CpLYSM5和CpLYSM6,只含有LysM结构域,且与木霉Tal6蛋白聚为一类。这两类蛋白的保守基序中均含有3个半胱氨酸残基。另外CpLYSM2、CpLYSM3和CpLYSM6效应蛋白不能诱发烟草叶片的过敏性坏死反应,且CpLYSM2可抑制BAX引起的过敏性坏死反应,而CpLYSM3和CpLYSM6对BAX引起的坏死反应也有一定抑制作用。[结论]桉树焦枯病菌的LysM效应蛋白存在结构和功能多样性。其中CpLYSM2是典型的效应蛋白,可能通过抑制几丁质诱导的植物免疫反应,促进焦枯病菌C.pseudoreteaudii侵染桉树。而CpLYSM3可能通过促进纤维素的降解,引起寄主发病。 展开更多
关键词 桉树焦枯病 Calonectria pseudoreteaudii LysM效应蛋白 过敏性坏死反应
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桉树焦枯病菌原生质体制备条件的优化 被引量：5
2
作者 叶小真 郭文硕 +5 位作者 冯丽贞 金亚杰 杨新新 刘宏毅 连鑫坤 李慧敏 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2016年第2期141-145,共5页
以桉树焦枯病强致病菌株Calonectria pseudoreteaudii YA51为材料,对其原生质体生成条件进行优化.结果表明,收集1 g(湿重)培养24 h的菌丝,以0.8 mol·L^(-1)Na Cl为渗透压稳定剂,置于10 m L含20 mg·m L^(-1)崩溃酶和30 mg·... 以桉树焦枯病强致病菌株Calonectria pseudoreteaudii YA51为材料,对其原生质体生成条件进行优化.结果表明,收集1 g(湿重)培养24 h的菌丝,以0.8 mol·L^(-1)Na Cl为渗透压稳定剂,置于10 m L含20 mg·m L^(-1)崩溃酶和30 mg·m L^(-1)裂解酶的混合酶液中,在30℃、100 r·min^(-1)条件下裂解4 h,原生质体生成量可达3.72×107个·m L^(-1),在SR培养基上的再生率为32.33%. 展开更多
关键词 桉树焦枯病菌 原生质体 生成量 条件优化
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桉树PAL基因克隆及焦枯病菌诱导下的表达分析 被引量：5
3
作者 叶小真 杨婕 +5 位作者 冯丽贞 江仲鹏 陆芝 刘雨菁 李丽红 陈全助 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2019年第6期99-105,共7页
[目的]克隆桉树苯丙氨酸解氨酶基因(PAL),分析其序列特征及在焦枯病菌诱导下的表达特征,为探究桉树抗焦枯病机理提供理论支撑。[方法]通过SOE-PCR技术从尾细桉M1中克隆PAL基因,利用real-time PCR分析其在焦枯病菌诱导下的表达特性。[结... [目的]克隆桉树苯丙氨酸解氨酶基因(PAL),分析其序列特征及在焦枯病菌诱导下的表达特征,为探究桉树抗焦枯病机理提供理论支撑。[方法]通过SOE-PCR技术从尾细桉M1中克隆PAL基因,利用real-time PCR分析其在焦枯病菌诱导下的表达特性。[结果]克隆得到尾细桉M1 PAL基因,其ORF序列长2142 bp,编码713个氨基酸,与其他已发表的桉树PAL相似性均在99%以上。序列分析发现,其编码蛋白是一类稳定的亲水性蛋白,含有丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸3个磷酸化位点,二级结构以α-螺旋和β-折叠为主,具有典型的苯丙氨酸和组氨酸解氨酶保守结构域。进一步分析桉树不同品系PAL基因的表达趋势,结果发现,不同品系PAL基因在焦枯病菌诱导下均表现为明显的上调表达,且抗性越强,PAL基因越早上调,上调表达量越大。[结论]从尾细桉M1中克隆得到的PAL基因具有典型的PAL家族成员特征,推测该基因可能通过参与酚类防御性物质或者信号分子SA等物质的合成,进而在桉树抵抗焦枯病菌侵染的过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 桉树 苯丙氨酸解氨酶 重叠延伸PCR 生物信息学 焦枯病菌
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EuPOD基因克隆与焦枯病菌胁迫表达分析 被引量：3
4
作者 冯丽贞 杨婕 +2 位作者 叶小真 陈慧洁 李慧敏 《森林与环境学报》 CSCD 北大核心 2016年第4期392-396,共5页
植物过氧化物酶是植物体内活性氧清除过程中的关键酶之一,在植物的抗逆性中发挥着重要作用。以对焦枯病菌高抗品系尾细桉为材料,克隆得到一个POD基因序列,并命名为Eu POD,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检验该基因在尾细桉叶... 植物过氧化物酶是植物体内活性氧清除过程中的关键酶之一,在植物的抗逆性中发挥着重要作用。以对焦枯病菌高抗品系尾细桉为材料,克隆得到一个POD基因序列,并命名为Eu POD,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检验该基因在尾细桉叶片中的表达。结果表明该基因cDNA长999 bp,其编码蛋白由332个氨基酸组成;基于氨基酸序列的系统进化树分析表明,EuPOD在进化上与蓖麻、可可、苹果的同源基因亲缘关系较近,相似性达到了75%,与拟南芥的相似性达到65%,与水稻的相似性较低,只有48%。Eu POD在桉树焦枯病菌侵染后不同时间所受诱导表达量不同,在12 h的表达量达到高峰。 展开更多
关键词 尾细桉 焦枯病菌 过氧化物酶 克隆 基因表达
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桉树焦枯病菌产毒条件优化及毒素专化性测定 被引量：2
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作者 黄秀萍 叶小真 +2 位作者 陈全助 刘金燕 鲁国东 《森林与环境学报》 CSCD 北大核心 2021年第1期82-87,共6页
桉树焦枯病菌是桉树焦枯病的致病菌,为明确该菌的致病因子及致病机制,对YA5j2菌株的最佳产毒条件及毒素专化性进行了研究,采用离体叶片针刺法对致病菌毒素进行生物活性测定。结果表明,桉树焦枯病菌产生的毒素对桉树叶片有毒性,叶片病斑... 桉树焦枯病菌是桉树焦枯病的致病菌,为明确该菌的致病因子及致病机制,对YA5j2菌株的最佳产毒条件及毒素专化性进行了研究,采用离体叶片针刺法对致病菌毒素进行生物活性测定。结果表明,桉树焦枯病菌产生的毒素对桉树叶片有毒性,叶片病斑面积与粗毒素的浓度成正相关关系。YA5j2菌株的最佳产毒条件:培养基为改良Fries′培养基,培养温度为28℃,pH值为5,并在黑暗条件下连续振荡培养15~20 d,转速为150 r·min-1。专化性测定结果表现出多样性,显示该粗毒素属于非寄主专化性毒素,可以用来区分植物抗病性的强度。21种供试植物经粗毒素处理后,小叶榕、白兰、樟树、桂花等植物对毒素的病理反应最强,将来可作为快速评价毒素的生测材料。 展开更多
关键词 桉树焦枯病菌 产毒条件 毒素 专化性
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桉树焦枯病菌CpSit1基因的鉴定与表达 被引量：2
6
作者 刘宏毅 叶小真 +4 位作者 陈慧洁 李慧敏 丁奕 杨泽慧 冯丽贞 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2017年第4期418-422,共5页
利用Blast及TCDB数据库对桉树焦枯病菌(Calonectria pseudoreteaudii)的Cpsit1基因进行鉴定;再利用SMART数据库和Prot Param、TMHMM、PHD、Pro Comp 9.0在线分析工具对Cpsit1基因编码蛋白的理化性质、跨膜螺旋、蛋白质二级结构和亚细胞... 利用Blast及TCDB数据库对桉树焦枯病菌(Calonectria pseudoreteaudii)的Cpsit1基因进行鉴定;再利用SMART数据库和Prot Param、TMHMM、PHD、Pro Comp 9.0在线分析工具对Cpsit1基因编码蛋白的理化性质、跨膜螺旋、蛋白质二级结构和亚细胞定位进行预测分析;最后采用qRT-PCR方法对CpSit1基因在焦枯病菌侵染桉树过程中的表达情况进行分析.结果表明:CpSit1基因长度为1 780 bp,其编码的蛋白序列共有592个氨基酸残基组成,并将其鉴定为铁载体-铁:H+同向转运蛋白.其保守结构域为MFS_1;共含有14个跨膜螺旋;在二级结构中α螺旋占45.10%,延伸链占26.01%,无规则卷曲占28.89%.通过qRT-PCR相对定量的方法分析焦枯病菌侵染桉树24、48和72 h后CpSit1基因的表达情况,结果显示,CpSit1基因在这3个时段均发生上调表达,但24 h的表达量明显大于48和72 h.说明桉树焦枯病菌CpSit1基因在病原菌侵染寄主的过程中通过调控铁载体-铁化合物的转运来完成铁元素的摄入,协助其在寄主中的定植. 展开更多
关键词 桉树 焦枯病 铁载体转运蛋白 生物信息学分析 表达分析
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桉树焦枯病菌MDR基因生物信息学分析及功能解析 被引量：1
7
作者 张清华 陆芝 +4 位作者 张晓阳 刘宏毅 丁奕 叶小真 冯丽贞 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2019年第1期88-96,共9页
通过生物信息软件及qPCR对桉树焦枯病菌MDR蛋白的序列特征、蛋白结构、理化性质及MDR基因在不同条件下的表达情况进行分析.结果表明,MDR转运蛋白均由α-折叠、无规则卷曲、β-转角,所占百分比α-折叠>β-转角>无规则卷曲.三级与... 通过生物信息软件及qPCR对桉树焦枯病菌MDR蛋白的序列特征、蛋白结构、理化性质及MDR基因在不同条件下的表达情况进行分析.结果表明,MDR转运蛋白均由α-折叠、无规则卷曲、β-转角,所占百分比α-折叠>β-转角>无规则卷曲.三级与二级结构预测均显示桉树焦枯病菌MDR具有典型的MDR蛋白结构,说明该蛋白家族的进化比较保守;CpABCB10基因参与调控分生孢子稳定性和萌发,CpABCB4和CpABCB9基因参与调控金属离子的转运,CpABCB7和CpABCB8基因参与调控桉树焦枯病菌的抗药机制.此外,CpABCB7基因还能参与调控桉树焦枯病菌的整个致病过程. 展开更多
关键词 桉树焦枯病菌 MDR基因 生物信息学 表达分析
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5种条件下桉树焦枯病菌MAPK基因的表达 被引量：2
8
作者 杨泽慧 陆芝 +3 位作者 李丽红 江仲鹏 冯锦秀 冯丽贞 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2019年第3期337-343,共7页
采用qPCR检测Calonectria pseudoreteaudii YA51的MAPK基因在盐胁迫、氧胁迫、细胞壁干扰物质胁迫、桉树组织诱导以及不同发育时期5种条件下的表达情况.结果表明CpKss1参与致病过程,CpKss1、CpSlt2和CpIme2与菌丝生长发育有关,CpKss1、C... 采用qPCR检测Calonectria pseudoreteaudii YA51的MAPK基因在盐胁迫、氧胁迫、细胞壁干扰物质胁迫、桉树组织诱导以及不同发育时期5种条件下的表达情况.结果表明CpKss1参与致病过程,CpKss1、CpSlt2和CpIme2与菌丝生长发育有关,CpKss1、CpHog1和CpIme2参与病菌高渗胁迫反应,CpSlt2参与调控氧胁迫反应和细胞壁完整性,且4个MAPK基因所介导的级联通路间可能存在既相互独立又相互协作的关系. 展开更多
关键词 桉树焦枯病菌 MAPK qPCR
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桉树焦枯病菌SIT转运蛋白的鉴定与表达
9
作者 刘宏毅 陈慧洁 +3 位作者 李慧敏 叶小真 冯丽贞 郭朦朦 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2018年第11期18-24,共7页
【目的】揭示SIT转运蛋白家族在焦枯病菌铁元素摄入机制,以及铁载体-铁转运蛋白在焦枯病菌侵染桉树过程中所扮演的角色。【方法】采用HMMER软件对焦枯病菌SIT转运蛋白进行鉴定,并用InterPro、TMHMM、TCDB数据库等的在线服务对焦枯病菌SI... 【目的】揭示SIT转运蛋白家族在焦枯病菌铁元素摄入机制,以及铁载体-铁转运蛋白在焦枯病菌侵染桉树过程中所扮演的角色。【方法】采用HMMER软件对焦枯病菌SIT转运蛋白进行鉴定,并用InterPro、TMHMM、TCDB数据库等的在线服务对焦枯病菌SIT转运蛋白的结构域、跨膜螺旋和功能进行预测,用MEGA7.0软件进行多菌种比较分析,最后采用qPCR对焦枯病菌侵染桉树48h时SIT基因的转录表达情况进行验证。【结果】桉树焦枯病菌共含有16个SIT转运蛋白,约占总编码蛋白的0.11%,主要分为铁-铁载体转运蛋白、铁载体-铁:H+同向转运蛋白和铁载体-铁转运蛋白;亚细胞定位预测结果显示,除预测CpSit13转运蛋白位于内质网上外,其余均在细胞膜上。桉树焦枯病菌SIT转运蛋白的序列长度为400～603aa,其结构域均为MFS结构域,跨膜螺旋为10～14个。基因表达谱分析显示,有10个SIT基因上调表达,有2个下调表达,有4个表达不显著。其中CpSit1、CpSit5、CpSit8、CpSit14和CpSit16相对分支中其他基因具有较高的转录量。qPCR验证结果与基因表达谱具有较高的一致性。【结论】CpSit1、CpSit5、CpSit8、CpSit14和CpSit16基因在焦枯病菌侵染桉树过程中具有较为重要的作用。 展开更多
关键词 桉树 焦枯病菌 SIT蛋白 生物信息学 转录表达
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促进桉树焦枯病菌大量产孢的方法 被引量：1
10
作者 郭朦朦 丁奕 +3 位作者 杨泽慧 张清华 冯丽贞 宋漳 《武夷学院学报》 2018年第3期29-33,共5页
为了促进桉树焦枯病菌(Calonectria pseudoreteaudii YA51)在人工培养基上快速、大量的产生分生孢子,本试验在查彼特培养基(Czapek-Dox Medium)的基础上添加桉树叶煎汁、维生素B_1、维生素B_6或南美蟛蜞菊(Wedelia trilobata(L.)Hitchc.... 为了促进桉树焦枯病菌(Calonectria pseudoreteaudii YA51)在人工培养基上快速、大量的产生分生孢子,本试验在查彼特培养基(Czapek-Dox Medium)的基础上添加桉树叶煎汁、维生素B_1、维生素B_6或南美蟛蜞菊(Wedelia trilobata(L.)Hitchc.)煎汁,测定不同处理对Ca.pseudoreteaudii YA51产孢的影响。结果表明:在查彼特培养基中加入桉树叶煎汁和4g/L的维生素B_1,或者在查彼特培养基中加入南美蟛蜞菊煎汁均可促进Ca.pseudoreteaudii YA51大量产孢,产孢量依次为3.23×10~6、1.43×10~6个/mL。查彼特培养基明确的化学成分比不同时间配出的马铃薯葡萄糖琼脂培养基(Potato Dextrose Agar Medium,PDA)更利于Ca.pseudoreteaudii YA51生长,此方法时间短,操作简单,产孢量高,可满足分子生物学试验要求。 展开更多
关键词 桉树焦枯病菌 查彼特培养基 促进产孢 维生素B_1 蟛蜞菊
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