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m^(6)A去甲基化酶FTO调控BCL2 mRNA稳定性与翻译效率促进血小板前体形成 被引量：1
1
作者 夏文军 卢尧 +2 位作者 吴煌 文爱清 陈卫 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第6期519-530,共12页
目的探究下调m^(6)A去甲基化酶脂肪质量和肥胖相关基因(fat mass and obesityassociated protein,FTO)对MEG-01巨核细胞系血小板前体形成的影响及其机制。方法①分别用1 nmol/L佛波迷酯(phorbol myristate acetate,PMA)组(诱导组)和DMSO... 目的探究下调m^(6)A去甲基化酶脂肪质量和肥胖相关基因(fat mass and obesityassociated protein,FTO)对MEG-01巨核细胞系血小板前体形成的影响及其机制。方法①分别用1 nmol/L佛波迷酯(phorbol myristate acetate,PMA)组(诱导组)和DMSO组(对照组)处理MEG-01细胞72 h,通过Western blot和RT-qPCR检测FTO蛋白和mRNA表达变化情况。②用靶向FTO的病毒液(sh-FTO)和阴性对照病毒液(sh-NC)感染MEG-01细胞,用1 nmol/L PMA诱导sh-NC组和sh-FTO组MEG-01细胞72 h后,Western blot和RT-qPCR检测FTO蛋白和mRNA表达变化情况。碘化丙啶(propidium lodrde,PI)DNA染色检测细胞周期、CCK-8检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI双染、TUNEL染色检测细胞凋亡情况,Western blot检测cleaved Caspase-3蛋白表达量,CD41/CD61染色检测巨核细胞成熟情况,明场观察和CD61免疫荧光检测血小板前体形成情况,RT-qPCR检测细胞凋亡相关分子(Caspase-3、BAD、BAK1、BCL2、MCL1)表达量,Western blot检测进一步验证BCL2蛋白变化情况,基因表达综合数据库(gene expression omnibus,GEO)中筛选出数据集;使用加州大学圣克鲁兹分校基因组浏览器(University of California,Santa Cruz genome browser,UCSC)分析比对BCL2 mRNA上的甲基化测序峰;m^(6)A甲基化RNA免疫共沉淀(m^(6)A RNA immunoprecipitation,m^(6)A-RIP)验证MEG-01巨核细胞BCL2 mRNA m^(6)A甲基化富集水平,检测sh-NC组和sh-FTO组BCL2 mRNA m^(6)A甲基化富集水平变化,以mRNA半衰期实验和多聚核糖体分离实验检测BCL2 mRNA翻译效率。结果①与DMSO组相比,PMA组FTO蛋白(P<0.05)和mRNA(P<0.01)表达水平升高;②与sh-NC组相比,sh-FTO组FTO mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01),细胞周期发生G1/S期阻滞[(60.80±1.29)%vs(72.13±1.18)%,P<0.01],细胞活力明显降低[(1.17±0.03)%vs(0.69±0.05)%,P<0.05],Annexin V-FITC/PI阳性细胞占比升高[(12.87±0.83)%vs(17.45±1.58)%,P<0.01],TUNEL阳性细胞占比显著升高[(1.03±0.27)%vs(17.49±9.91)%,P<0.01],cleaved Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01),CD41+CD61+阳性率明显降低[(51.63±1.13)%vs(34.08±0.53)%,P<0.01],具有伪足的巨核细胞比率明显降低[(26.49±6.73)%vs(13.31±5.97)%,P<0.01]。③与sh-NC相比,sh-FTO组细胞抗凋亡分子BCL2蛋白和mRNA表达水平显著降低(P<0.01),UCSC GEO测序显示BCL2 mRNA上有m^(6)A甲基化修饰位点,并经m^(6)ARIP实验在MEG-01巨核细胞验证:与GAPDH mRNA相比,BCL2 mRNA有明显的m^(6)A富集信号(P<0.01);与sh-NC相比,BCL2 mRNA上的m^(6)A甲基化修饰明显升高(P<0.01);BCL2 mRNA的稳定性显著降低,翻译效率显著降低(P<0.01)。结论m^(6)A去甲基化酶FTO调控BCL2 mRNA稳定性与翻译效率,促进血小板前体形成。 展开更多
关键词 脂肪质量和肥胖相关基因 血小板前体 m^(6)A甲基化修饰 B淋巴细胞瘤-2基因
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儿童免疫性血小板减少症中自噬上调抑制前血小板形成 被引量：2
2
作者 王琦 李阳 +4 位作者 丰涛 冯笑 季正华 计雪强 邵雪君 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期1577-1581,共5页
目的:研究儿童免疫性血小板减少症(ITP)中巨核细胞自噬水平上调对前血小板生成的影响。方法:通过吉姆萨染色和免疫荧光染色法分别观察巨核细胞形态及前血小板的生成,Western blot法检测细胞骨架蛋白和自噬相关蛋白的表达,自噬调节药物(... 目的:研究儿童免疫性血小板减少症(ITP)中巨核细胞自噬水平上调对前血小板生成的影响。方法:通过吉姆萨染色和免疫荧光染色法分别观察巨核细胞形态及前血小板的生成,Western blot法检测细胞骨架蛋白和自噬相关蛋白的表达,自噬调节药物(自噬诱导剂Rap,自噬抑制剂3-MA)调控小鼠巨核细胞的自噬。结果:ITP患儿巨核细胞内存在空泡状结构,自噬相关蛋白LC3-II/I和复合物Atg12-Atg5的表达量均显著高于对照组(LC3-II/I:ITP 1.32±0.18 vs Ctrl 0.49±0.16,P<0.05;Atg12-Atg5:ITP 0.69±0.17 vs Ctrl 0.12±0.08,P<0.05);免疫荧光染色显示,ITP患儿巨核细胞细胞微丝排布异常,同时肌球蛋白磷酸化显著增强((ITP 0.74±0.09;Ctrl 0.05±0.02,P<0.05);自噬诱导剂和抑制剂能调控小鼠巨核细胞生成前血小板并改变细胞周期蛋白的表达,Cyclin D1(Veh 1.08±0.12;Rap 0.46±0.04;Rap+3-MA 0.70±0.03),Cyclin D2(Veh 0.47±0.04;Rap 0.27±0.04;Rap+3-MA 0.41±0.03),P21(Veh 0.15±0.01;Rap 0.04±0.01;Rap+3-MA 0.05±0.01)。结论:ITP患儿巨核细胞自噬上调是前血小板形成障碍的关键因素。 展开更多
关键词 儿童免疫性血小板减少症 巨核细胞 前血小板 自噬
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血小板生成研究进展 被引量：6
3
作者 黄柏铭 刘翠翠 +2 位作者 赵晶晶 王洪涛 周家喜 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2022年第1期51-58,共8页
血小板生成,即血小板颗粒由巨核细胞释放,进而在外周血逐步成熟的过程。随着解析血小板功能多样性以及高效再生策略的需求,对于血小板生成过程的全面认知显得尤为重要。然而,以往研究大多聚焦在造血干祖细胞和巨核细胞分化阶段,对于后... 血小板生成,即血小板颗粒由巨核细胞释放,进而在外周血逐步成熟的过程。随着解析血小板功能多样性以及高效再生策略的需求,对于血小板生成过程的全面认知显得尤为重要。然而,以往研究大多聚焦在造血干祖细胞和巨核细胞分化阶段,对于后期血小板生成过程的了解相对较少。该文对血小板生成过程中血小板形态、分子特征、功能的动态变化以及调控机制等进行了系统梳理,以期为理解血小板功能多样性、转录组异质性以及体外再生策略等方面提供新的思路。 展开更多
关键词 血小板生成 前血小板 血小板前体 网织血小板
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THBS-1、PPBP联合CTP对缺血性脑卒中的诊断价值分析 被引量：1
4
作者 路康 吴文锋 +1 位作者 许倩 常兴芳 《国际检验医学杂志》 CAS 2023年第4期412-415,420,共5页
目的探讨血小板反应蛋白1(THBS-1)、前血小板碱性蛋白(PPBP)联合CT灌注成像(CTP)对缺血性脑卒中的诊断价值。方法将2020年1月至2021年1月该院收治的缺血性脑卒中患者136例纳入研究作为研究组,另选取同期于该院进行体检的健康志愿者100... 目的探讨血小板反应蛋白1(THBS-1)、前血小板碱性蛋白(PPBP)联合CT灌注成像(CTP)对缺血性脑卒中的诊断价值。方法将2020年1月至2021年1月该院收治的缺血性脑卒中患者136例纳入研究作为研究组,另选取同期于该院进行体检的健康志愿者100例作为对照组。利用蛋白免疫印迹方法检测THBS-1和PPBP蛋白表达水平。研究组进行CTP检查,通过软件分析获得平均通过时间(MTT)、达峰时间(TTP)、脑血容量(CBV)、脑血流(CBF)数据。利用Pearson进行相关性分析,受试者工作特征曲线分析THBS-1、PPBP和CTP分析数据及对缺血性脑卒中的诊断价值。结果研究组THBS-1、PPBP、MTT、TTP高于或多于对照组,CBV、CBF少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。THBS-1、PPBP及MTT、TTP随缺血性脑卒中严重程度增加而升高或增加,差异有统计学意义(P<0.05)。CBV、CBF随缺血性脑卒中严重程度增加而减少,差异有统计学意义(P<0.05)。MTT、TTP与THBS-1、PPB呈正相关,CBV、CBF与CBV、CBF呈负相关(P<0.05)。与THBS-1、PPBP、MTT、TTP、CBV、CBF单项诊断相比,6项联合对缺血性脑卒中的诊断价值较高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论缺血性脑卒中患者THBS-1、PPBP、MTT、TTP升高或增加,CBV、CBF减少,而且与缺血性脑卒中病情严重程度具有相关性,THBS-1、PPBP联合CTP检测对缺血性脑卒中的诊断价值较高。 展开更多
关键词 血小板反应蛋白1 前血小板碱性蛋白 CT灌注成像 缺血性脑卒中
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