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根癌农杆菌感受态细胞的制备以及质粒ProkⅡ对其转化的研究 被引量:13
1
作者 朱锦辉 权军利 +5 位作者 何玉科 陈耀锋 郭东伟 李春莲 曹团武 曹新有 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2006年第7期91-95,共5页
研究了根癌农杆菌LBA4404和C48C1生长的培养基类型、菌株生长状态、转化溶液、质粒与感受态细胞共放置时间、质粒加入量、液氮速冻时间及热激条件对质粒ProkⅡ转化的影响。结果表明,以70mmo/LCaCl2作为转化溶液,YEB培养基制备的、OD... 研究了根癌农杆菌LBA4404和C48C1生长的培养基类型、菌株生长状态、转化溶液、质粒与感受态细胞共放置时间、质粒加入量、液氮速冻时间及热激条件对质粒ProkⅡ转化的影响。结果表明,以70mmo/LCaCl2作为转化溶液,YEB培养基制备的、OD600为0.5的LBA4404感受态细胞与10ng质粒DNA,于0℃共放置30min,液氮速冻5min,37℃热激5min时转化率最高,达1.40×10^5μg^-1;以70mmo/LCaCl2作为转化溶液,YEB培养基制备的、OD600s为0.5~0.6的C58C1感受态细胞与20ng质粒DNA,于0℃共放置10min,液氮速冻1min,37℃热激1min时转化率最高,达1.33×10^5μg^-1。 展开更多
关键词 根癌农杆菌 感受态细胞 质粒prok 转化率
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PROK 1及其受体PROKR 1在子宫内膜异位症中的表达和临床意义 被引量:1
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作者 吴亚红 吴献青 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期621-627,共7页
目的:探讨前动力蛋白-1(prokineticin 1,PROK 1)及其受体(prokineticin-receptor 1,PROKR 1)在子宫内膜异位症中的表达水平及意义.方法:采用定量PCR(quantitative PCR,qPCR)和蛋白质印迹法检测PROK 1和PROKR 1在18例正常对照组和22例子... 目的:探讨前动力蛋白-1(prokineticin 1,PROK 1)及其受体(prokineticin-receptor 1,PROKR 1)在子宫内膜异位症中的表达水平及意义.方法:采用定量PCR(quantitative PCR,qPCR)和蛋白质印迹法检测PROK 1和PROKR 1在18例正常对照组和22例子宫内膜异位症患者在位内膜及异位内膜中的表达水平;将6例正常对照组子宫内膜间质细胞分离、培养,给予雌二醇(estradiol,E2)及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)干预后,采用qPCR检测PROK 1 mRNA的表达水平.结果:PROK 1和PROKR 1 mRNA在子宫内膜异位症患者的异位内膜和在位内膜以及正常对照组子宫内膜中均有表达,表达最高的为异位内膜组,表达最低的为正常内膜组(P<0.05);PROK 1和PROKR 1蛋白在子宫内膜异位症患者的异位内膜和在位内膜以及正常对照组的子宫内膜中均有表达,在异位内膜中表达最高,在正常内膜中表达最低(均P<0.05);在正常子宫内膜组及子宫内膜异位症组中PROK 1的蛋白表达水平均为分泌期高于增生期(均P<0.05);E2对子宫内膜间质细胞PROK 1 mRNA的表达无明显影响,TNF-α能上调子宫内膜间质细胞PROK 1 mRNA的表达.结论:PROK 1及其受体参与了子宫内膜异位症的发生并对其发展有促进作用,TNF-α可能上调PROK 1的表达从而促进血管生成. 展开更多
关键词 子宫内膜异位症 prok 1 prokR 1 雌二醇 肿瘤坏死因子-Α
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靶向干扰PROK1基因对结直肠癌细胞HT29增殖和迁移的影响 被引量:2
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作者 史剑飞 邓红玉 +1 位作者 冯赫宇 王晓春 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期1294-1300,共7页
为研究前动力蛋白1(PROK1)对结直肠癌细胞增殖与迁移的作用机制,设计合成3条针对PROK1基因的靶向干扰序列,采用荧光显微镜观察干扰片段的转染情况,实时荧光定量PCR分析靶向干扰PROK1基因后PROK1 mRNA下调的表达水平,采用MTT、平板克隆... 为研究前动力蛋白1(PROK1)对结直肠癌细胞增殖与迁移的作用机制,设计合成3条针对PROK1基因的靶向干扰序列,采用荧光显微镜观察干扰片段的转染情况,实时荧光定量PCR分析靶向干扰PROK1基因后PROK1 mRNA下调的表达水平,采用MTT、平板克隆形成试验、transwell迁移实验检测敲除PROK1后对HT29细胞增殖和迁移的影响。结果显示:荧光标记的Cy3-siRNA成功转染到HT29细胞中;3条靶向PROK1基因siRNA-62、siRNA-341、siRNA-1121转染HT29细胞48 h后,沉默效率分别为35%、70%、50%;与阴性对照组相比,siRNA-341组细胞增殖明显被抑制,24 h抑制最显著(p<0.01);siRNA-341组的细胞克隆形成率(19.3±1.989 9)与空脂质体对照组(30.3±3.780 6)和阴性对照组(32.3±2.404 1)相比显著减少(p<0.05);siRNA-341组通过小室迁移的细胞数(76±9.539 3)与空脂质体对照组(212±2.645 7)和阴性对照组(193±7.539 8)相比明显减少(p<0.01)。本研究发现PROK1基因促进结直肠癌细胞的增殖和转移,PROK1基因有望成为治疗结直肠癌潜在的靶位点。 展开更多
关键词 prok1 RNA干扰 结直肠癌 细胞增殖 迁移
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新生血管内皮生长因子EG-VEGF/PROK1在肿瘤中的研究进展 被引量:17
4
作者 史剑飞 卢北玲 +3 位作者 黄博 毛瑞 唐建勇 祝撷英 《现代肿瘤医学》 CAS 2018年第22期3682-3686,共5页
内分泌腺性血管内皮生长因子(endocrine gland vascular endothelial growth factor,EG-VEGF)是一种新发现的可以特异性促进产类固醇激素的靶器官(肾上腺、睾丸、卵巢、胎盘等)血管内皮细胞生长的细胞因子,并由此而得名。最初发现它具... 内分泌腺性血管内皮生长因子(endocrine gland vascular endothelial growth factor,EG-VEGF)是一种新发现的可以特异性促进产类固醇激素的靶器官(肾上腺、睾丸、卵巢、胎盘等)血管内皮细胞生长的细胞因子,并由此而得名。最初发现它具有收缩胃肠平滑肌促进胃肠动力的作用,因而也叫做前动力蛋白1(prokineticin-1,PROK1)。越来越多的研究证实EG-VEGF/PROK1在人类恶性肿瘤中扮演着非常重要的角色。本文针对EG-VEGF/PROK1在肿瘤中的最新研究进展作一综述,为今后深入研究EG-VEGF/PROK1提供新视角和切入点。 展开更多
关键词 EG-VEGF prok1 血管生长 恶性肿瘤
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Kallmann综合征新进展 被引量:2
5
作者 蔡大勇 邵加庆 《医学研究生学报》 CAS 2010年第12期1306-1308,共3页
Kallmann综合征(Kallmann syndrome,KS)是一种少见的遗传疾病,其临床表现以性腺功能减退为主要特征,同时伴有嗅觉丧失或减退。目前已发现3种遗传方式和5个致病相关基因。文中就Kallmann综合征的诊治和遗传学研究进展作一综述。
关键词 KALLMANN综合征 FGF8基因 prok2基因 prokR2基因
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Kallmann综合征分子遗传学研究进展 被引量:5
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作者 付超 冯征 刘睿智 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期361-365,共5页
Kallmann综合征(KS)是一种临床和遗传异质性疾病,呈家族性或散发性发病。Ks是由胚胎时期嗅球、嗅束的异常发育致使GnRH-1神经细胞不能完成从鼻基板迁移至下丘脑这一过程所引起。GnRH分泌不足导致低促性腺激素性腺功能减退,嗅球、嗅... Kallmann综合征(KS)是一种临床和遗传异质性疾病,呈家族性或散发性发病。Ks是由胚胎时期嗅球、嗅束的异常发育致使GnRH-1神经细胞不能完成从鼻基板迁移至下丘脑这一过程所引起。GnRH分泌不足导致低促性腺激素性腺功能减退,嗅球、嗅束的异常发育或缺如引起嗅觉丧失。除上述典型症状外,KS患者还可以表现出一些非生殖和非嗅觉表型。KS分子遗传学机制十分复杂,目前只有6个KS致病基因被鉴定。KAL1基因与KS的X连锁隐性遗传模式相关。成纤维细胞生长因子受体1基因(FGFR1/KAL2)和成纤维细胞生长因子8基因(FGFS/KAL6)与常染色体显性遗传模式有关。但是这6个基因的突变只能解释25%~30%的KS病例,提示还有其他KS致病基因有待发现。本文就KS致病基因的研究进展、临床诊断和治疗作一综述。 展开更多
关键词 KALLMANN综合征 GnRH-1 KAL1基因 FGFR1/KAL2基因 prokR2/KAL3基因 prok2/KAL4基因 CHDT/KAL5基因 FGFS/KAL6基因
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黄瓜T-DNA插入突变体库的构建 被引量:3
7
作者 李蕾 李季 +4 位作者 孟永娇 张璐 娄群峰 钱春桃 陈劲枫 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期40-47,共8页
[目的]为了进一步研究黄瓜基因的功能,本文构建了黄瓜T-DNA插入突变体库。[方法]以黄瓜栽培品种‘长春密刺’子叶节为转化外植体,通过农杆菌介导的遗传转化方法,将T-DNA插入突变载体pROK2后转化黄瓜;通过筛选压力梯度试验,确定遗传转化... [目的]为了进一步研究黄瓜基因的功能,本文构建了黄瓜T-DNA插入突变体库。[方法]以黄瓜栽培品种‘长春密刺’子叶节为转化外植体,通过农杆菌介导的遗传转化方法,将T-DNA插入突变载体pROK2后转化黄瓜;通过筛选压力梯度试验,确定遗传转化体系最适合的卡那霉素(Kan)筛选浓度;使用PCR检测和斑点杂交方法鉴定T0和T1代转化植株;以‘长春密刺’植株为对照,统计T1代植株表型。[结果]确定100 mg·L-1为最适合的Kan抗性芽筛选浓度。T0代植株PCR检测结果初步证明,pROK2成功整合到14S1和14S2两个T0代株系基因组中。14S1自交后获得55个T1代单株,对其进行PCR检测,发现其中12个单株均扩增出了35S和NPT-Ⅱ片段。以Dig标记的35S和NPT-Ⅱ为探针,对这12个单株及随机从剩余T1代中选取的11个单株进行斑点杂交检测,得到了2个含有35S和NPT-Ⅱ杂交信号的单株:14S1-27和14S1-34。性状调查统计显示:T1代植株在生长各阶段相对于野生型无明显突变表型。[结论]pROK2重组质粒成功整合到了14S1株系的基因组中。对14S1自交后代的PCR检测和斑点杂交检测结果进一步证明了14S1为转化植株,确定14S1为插入突变体。结合T-DNA插入位点鉴定技术可进一步开展相关基因分离及功能研究工作。 展开更多
关键词 黄瓜 T-DNA 插入突变 转基因 prok2载体
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一种快速构建35S组成型植物双价表达载体的方法 被引量:2
8
作者 刘明坤 刘昌财 +3 位作者 许志茹 魏志刚 阎秀峰 刘关君 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期87-92,共6页
通过对几种常用植物表达载体的35S和Tnos序列进行比对,设计带有酶切位点的引物35S和Tnos,通过PCR克隆了同时带有35S和Tnos序列的目的基因片段,通过定向的酶切、连接获得双价表达载体。此方法简化了植物双价表达载体构建过程,具有明显时... 通过对几种常用植物表达载体的35S和Tnos序列进行比对,设计带有酶切位点的引物35S和Tnos,通过PCR克隆了同时带有35S和Tnos序列的目的基因片段,通过定向的酶切、连接获得双价表达载体。此方法简化了植物双价表达载体构建过程,具有明显时间短、效率高、不需要中间载体、检测简单等特点,而且引物对于多数常用35S组成型植物表达载体是通用的,为快速构建35S组成型植物双价表达载体提供了一种新方法。 展开更多
关键词 35S Tnos prok 双价表达载体
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大白菜遗传转化体系的建立 被引量:1
9
作者 蔺忠龙 李维薇 +1 位作者 白现广 程在全 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2008年第4期449-452,共4页
系统研究了根癌农杆菌LBA4404介导的大白菜遗传转化的若干因素,成功地建立了大白菜快速有效的遗传转化体系,并获得了大白菜抗性植株。实验结果表明,大白菜的不同基因型、苗龄、外植体类型,菌液浓度、浸染时间,共培养和抗生素浓度对转化... 系统研究了根癌农杆菌LBA4404介导的大白菜遗传转化的若干因素,成功地建立了大白菜快速有效的遗传转化体系,并获得了大白菜抗性植株。实验结果表明,大白菜的不同基因型、苗龄、外植体类型,菌液浓度、浸染时间,共培养和抗生素浓度对转化频率均有一定影响,其最高转化频率达4.0%。抗性植株经PCR和Southern blot检测表明,目的基因已整合进大白菜基因组中。 展开更多
关键词 大白菜 根癌农杆菌 转化体系 prok2植物表达载体
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糖基化亚硝基血红蛋白的稳定性及其在猪肉脯中的应用研究 被引量:11
10
作者 李飞 隋新 +1 位作者 刘红娟 郝芮瑶 《农产品加工(下)》 2015年第2期9-14,共6页
糖基化亚硝基血红蛋白作为一种新型的腌制色素,可以有效地替代亚硝酸盐在肉制品中的发色作用,减少亚硝酸盐的使用量。选择不同糖源,利用糖基化亚硝基血红蛋白的最优合成工艺,制备葡萄糖、蔗糖、乳糖、果糖、麦芽糖5种糖基化亚硝基血红蛋... 糖基化亚硝基血红蛋白作为一种新型的腌制色素,可以有效地替代亚硝酸盐在肉制品中的发色作用,减少亚硝酸盐的使用量。选择不同糖源,利用糖基化亚硝基血红蛋白的最优合成工艺,制备葡萄糖、蔗糖、乳糖、果糖、麦芽糖5种糖基化亚硝基血红蛋白,对其在不同条件下的稳定性进行研究,同时将其应用于猪肉脯中。 展开更多
关键词 糖基化亚硝基血红蛋白 猪肉脯 稳定性 应用
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Effect of weak magnetic field on the water-holding properties,texture,and volatile compounds of pork and beef during frozen storage 被引量:4
11
作者 Fan Liu Na Yang +3 位作者 Lingtao Zhang Yamei Jin Zhengyu Jin Xueming Xu 《Food Bioscience》 SCIE 2023年第3期2711-2720,共10页
The weak magnetic field has recently attracted much attention for improving the quality of frozen food due to its mild effectiveness and near-complete transmission through the food matrix.This study aimed to explore t... The weak magnetic field has recently attracted much attention for improving the quality of frozen food due to its mild effectiveness and near-complete transmission through the food matrix.This study aimed to explore the effect of the magnetic field with 1 mT and 50 Hz on the freezing process and storage quality of pork and beef.The results showed that the freezing point of beef stored under the magnetic field was-1.7℃,which was 0.5℃ lower than that of conventional frozen(CF)groups,and the phase transition times of pork and beef were reduced by 55.56%and 50.00%,respectively.The magnetic field maintained higher water-holding capacity and decreased drip loss and cooking loss for both types of meat.Coherently,the evaporation and redistribution of water was inhibited by MF,as indicated by the magnetic resonance imaging results.The magnetic field also effectively moderated the hardening in texture,odor deterioration and color change of frozen pork and beef.Less accumulation of free amino acids suggested the degradation of protein was suppressed under magnetic field.The present study would provide a scientific reference for the application of weak magnetic field in meat preservation. 展开更多
关键词 Magnetic field Frozen prok Frozen beef Water-holding capacity Sensory qualities
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牛副结核分枝杆菌(MAP)MAP3290-1595串联蛋白的原核表达及反应原性检测报告 被引量:1
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作者 张哲 周子恒 +5 位作者 蔡卓轩 张彦红 杨艳 钱天皓 李岩 盛金良 《当代畜牧》 2020年第2期25-29,共5页
原核表达纯化牛副结核分枝杆菌MAP3290-1595蛋白,为检测牛副结核分枝杆菌提供了新的材料。笔者通过基因串联融合MAP3290和MAP1595基因,获得MAP3290-1595基因,并使用DNAMAN软件对MAP3290-1595基因序列进行分析;构建重组质粒pET30aMAP3290... 原核表达纯化牛副结核分枝杆菌MAP3290-1595蛋白,为检测牛副结核分枝杆菌提供了新的材料。笔者通过基因串联融合MAP3290和MAP1595基因,获得MAP3290-1595基因,并使用DNAMAN软件对MAP3290-1595基因序列进行分析;构建重组质粒pET30aMAP3290-1595,将其转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,使用IPTG诱导目的蛋白表达;使用亲和层析法对目的蛋白进行亲和纯化,从而获得MAP3290-1595蛋白;利用Western Blot方法对该蛋白进行质检。成功表达纯化出MAP3290-1595蛋白。该蛋白大小为43 k Da,浓度为0.430 mg/mL,纯度大于90%。本试验成功获得MAP3290-1595蛋白,利用Western Blot和间接ELISA法检测该蛋白的反应原性,与牛副结核阴性血清反应良好,得出该蛋白具有良好的反应原性,为建立牛副结核分支杆菌检测方法提供材料。 展开更多
关键词 牛副结核分枝杆菌 MAP3290-1595蛋白 原核表达
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