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题名非洲爪蛙prmt5.L基因的克隆及时空表达谱分析
被引量：2
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作者
曹青
刘浩
沈滟
刘晨
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机构
河南科技大学医学院遗传教研室
南京医科大学医学遗传学系
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出处
《生物技术》
CAS
2020年第1期1-6,共6页
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基金
河南科技大学博士启动基金项目(13480027)
南京医科大学科技发展基金重点项目(“磷酸化Sufu在胚胎发育及肿瘤发生发展中的作用”,2015NJMUZD002)
+2 种基金
江苏省高校自然科学研究面上项目(“磷酸化Sufu在胚胎发育及肿瘤发生发展中的作用”,16KJB180020)
江苏省自然科学基金青年基金项目(“泛素E3连接酶SPOP下调抑癌因子Sufu在肾癌发生发展中的作用和机制”,BK20171053)
国家自然科学基金青年基金项目(“泛素E3连接酶SPOP下调抑癌因子Sufu在肾癌发生发展中的作用和机制”,81702747)。
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文摘
[目的]克隆非洲爪蛙prmt5.L基因并分析其在胚胎发育中的时空表达谱。[方法]收集胚胎,提取总RNA,反转录制备c DNA。设计特异引物,PCR扩增prmt5.L基因的ORF序列,连接到p CS2+载体构建p CS2+prmt5.L重组质粒,连接位点为EcoRⅠ和XhoⅠ。经双酶切和测序验证成功构建p CS2+prmt5.L重组质粒。将p CS2+prmt5.L重组质粒用EcoRⅠ酶切,T7 RNA聚合酶转录获得prmt5.L的反义探针。收集不同时期的爪蛙胚胎,固定并脱水后经原位杂交检测prmt5.L在胚胎发育中的表达情况。通过序列比对和进化树分析PRMT5在进化中的保守性。[结果]成功克隆非洲爪蛙prmt5.L基因,原位杂交检测了prmt5.L在早期胚胎中的时空表达谱。序列比对和进化树发现prmt5.L蛋白在进化中非常保守。[结论]成功构建了p CS2+prmt5.L重组质粒。prmt5.L基因在胚胎发育中呈现动态表达且prmt5.L蛋白在进化中非常保守。
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关键词
prmt5.l
非洲爪蛙
胚胎发育
基因表达
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Keywords
prmt5.l
Xenopus laevis
embryogenesis
gene expression
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分类号
Q132.4
[生物学—普通生物学]
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