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Preparation of anti-canine interleukin-31 receptor alpha polyclonal antibody and evaluation of its therapeutic efect in canine atopic dermatitis
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作者 Qiuhua Li Yanyan Qu +3 位作者 Li Yao Ning Ma Mingxing Ding Yi Ding 《Animal Diseases》 CAS 2024年第3期207-216,共10页
Canine atopic dermatitis(CAD)is a prevalent genetically susceptible infammatory and pruritic allergic skin condition afecting not only the health of dogs but also the quality of life of their owners.Interleukin-31(IL-... Canine atopic dermatitis(CAD)is a prevalent genetically susceptible infammatory and pruritic allergic skin condition afecting not only the health of dogs but also the quality of life of their owners.Interleukin-31(IL-31)and interleukin-31 receptor alpha(IL-31RA)are essential for the development of pruritus in primates and mice.Hence,it is expected that inhibiting IL-31RA will be an efective approach to alleviate pruritus.The purpose of the study was to produce anti-canine IL-31RA polyclonal antibodies(anti-IL-31RA pAbs)and evaluate their efcacy in inhibiting house dust mite(HDM)-evoked pruritic responses.Dogs were immunized with antigens formed by IL-31RA recombinant short peptides coupled to BSA to produce anti-IL-31RA pAbs.The CAD model was developed by using HDM allergen stimulation,and the efects of IL-31RA pAbs on the reduction of pruritus in CAD model dogs were examined.The Canine Atopic Dermatitis Extent and Severity Index(CADESI)-4 and pruritus Visual Analog Scale(pVAS)were utilized to evaluate pruritic responses,and skin tissue samples were collected from the inguinal area for pathological assessment of skin infammatory cell infltration.The results showed that anti-IL-31RA pAbs with high titers(1:128,000)and specifcity were efectively produced.In the CAD model group,the severity of skin damage,pruritus score,infammatory cell infltration and level of infammatory factors were considerably elevated.Anti-IL-31RA pAbs relieved pruritic behavior and dermatitis in dogs compared to placebo-treated dogs.In conclusion,anti-IL-31RA pAbs efectively suppressed CAD in vivo and are anticipated to be an efective novel treatment for pruritic skin disorders such as CAD. 展开更多
关键词 IL-31RA Atopic dermatitis polyclonal antibody CANINE
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黄瓜绿斑驳花叶病毒MP基因的原核表达及抗血清制备
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作者 任春梅 程兆榜 +4 位作者 杨柳 李硕 王海涛 陆芳 季英华 《热带作物学报》 北大核心 2025年第9期2181-2189,共9页
黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)是危害瓜类作物的重要植物病毒之一,其运动蛋白(movement protein,MP)在病毒传播和致病过程中起关键作用。本研究通过RT-PCR克隆CGMMV的MP基因,构建原核表达载体pET-32a-... 黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)是危害瓜类作物的重要植物病毒之一,其运动蛋白(movement protein,MP)在病毒传播和致病过程中起关键作用。本研究通过RT-PCR克隆CGMMV的MP基因,构建原核表达载体pET-32a-MP,并在大肠杆菌BL21(DE3)中成功诱导表达分子量约48 kDa的重组MP融合蛋白。利用镍柱亲和层析纯化获得高纯度蛋白(纯度≥80%),以此免疫新西南大白兔制备多克隆抗体。Western blot和ELISA分析表明,抗血清效价达409600,且能特异性识别CGMMV侵染叶片中的MP蛋白,与烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)等其他病毒无交叉反应。本研究实现了CGMMV MP蛋白的原核高效表达与特异性抗体制备,为病毒快速检测、免疫组织化学及蛋白功能研究提供重要工具,对保障瓜类作物安全生产具有重要意义。 展开更多
关键词 黄瓜绿斑驳花叶病毒 运动蛋白 原核表达 抗血清
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玉米黄花叶病毒CP基因的原核表达及抗血清制备
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作者 史亚娟 谢莉娜 +7 位作者 孙书豪 崔荧钧 李好海 周涛 陈琳琳 施艳 杨雪 李洪连 《植物病理学报》 北大核心 2025年第2期360-364,共5页
0引言玉米黄花叶病毒(maize yellow mosaic virus,MaYMV)是马铃薯卷叶病毒属(Polerovirus)的新成员^([1])。MaYMV基因组全长5642nt,为正义单链RNA,包含7个开放阅读框(ORF),其中ORF3编码一个23.6kDa的蛋白,为MaYMV外壳蛋白(coat protein,... 0引言玉米黄花叶病毒(maize yellow mosaic virus,MaYMV)是马铃薯卷叶病毒属(Polerovirus)的新成员^([1])。MaYMV基因组全长5642nt,为正义单链RNA,包含7个开放阅读框(ORF),其中ORF3编码一个23.6kDa的蛋白,为MaYMV外壳蛋白(coat protein,CP)。2016年,我国首次报道了MaYMV病毒为害玉米造成黄花叶症状^([2]),随后在国外多地也报道了该病毒的危害. 展开更多
关键词 外壳蛋白 CP基因 玉米黄花叶病毒 MaYMV
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激活标志物CD69蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备
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作者 徐娜 张芷盈 +4 位作者 杜星南 于黛辉 郑海学 陈霞 伍国强 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第9期1241-1247,共7页
为了评估原核表达的猪源CD69蛋白的免疫原性及其潜在的应用价值,以pET-32a(+)为原核表达载体,猪源CD69基因为目的基因,构建重组质粒pET-32a-CD69,针对大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达;通过变性、复性等方法成功纯化蛋白后,将... 为了评估原核表达的猪源CD69蛋白的免疫原性及其潜在的应用价值,以pET-32a(+)为原核表达载体,猪源CD69基因为目的基因,构建重组质粒pET-32a-CD69,针对大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达;通过变性、复性等方法成功纯化蛋白后,将纯化的CD69蛋白与佐剂按1∶1的比例混合,多次免疫雄性BALB/c小鼠制备多克隆抗体,并用免疫印迹试验(Western-blot)与酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)进行鉴定。结果表明,重组的CD69以包涵体形式表达,分子质量约为35 k Da;通过ELISA测定鼠源多克隆抗体效价,结果显示效价达到1∶64 000以上;Western-blot结果表明,该多克隆抗体表现出良好的反应性和特异性。激活标志物CD69蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备,为今后我国猪产业的发展与猪相关疾病检测提供了帮助。 展开更多
关键词 CD69基因 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体
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葱潜隐病毒吉林分离物的鉴定及ELISA检测方法的建立
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作者 张春雨 王晨 +3 位作者 刘建青 李小宇 宋景荣 王永志 《植物保护》 北大核心 2025年第6期239-244,共6页
葱潜隐病毒(shallot latent virus,SLV)是影响葱、蒜产量和品质的主要病毒之一,本研究从吉林省珠葱中分离并鉴定了3株SLV,分离物衣壳蛋白(coat protein,CP)的基因序列与已报道的SLV分离物的相似性为78.84%~83.24%;通过原核表达并纯化病... 葱潜隐病毒(shallot latent virus,SLV)是影响葱、蒜产量和品质的主要病毒之一,本研究从吉林省珠葱中分离并鉴定了3株SLV,分离物衣壳蛋白(coat protein,CP)的基因序列与已报道的SLV分离物的相似性为78.84%~83.24%;通过原核表达并纯化病毒CP蛋白,免疫小鼠,制备了多抗血清,效价达256000倍;以纯化的多抗血清为基础建立了SLV的间接ELISA检测方法,优化了反应条件:确定待测样品包被条件为4℃过夜,封闭条件为5%脱脂奶37℃60 min,检测抗体工作浓度125 ng/mL 37℃孵育1 h,酶标抗体工作浓度500 ng/mL 37℃孵育1 h。该方法能够特异性识别感染SLV的珠葱叶片,不识别其他常见珠葱病毒,与RT-PCR方法比较,符合率94%,具有良好的稳定性和准确性。 展开更多
关键词 葱潜隐病毒 珠葱 多克隆抗体 间接ELISA
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番茄环纹斑点病毒RdRP蛋白多抗制备
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作者 张春雨 刘悦 +3 位作者 张博轩 李小宇 宋景荣 王永志 《中国蔬菜》 北大核心 2025年第6期157-161,共5页
番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot virus,TZSV)的依赖RNA的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRP)是病毒复制和转录的核心酶。本研究通过原核表达RdRP的部分片段并制备多克隆抗体,旨在为TZSV的检测和诊断提供关键材料,并为... 番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot virus,TZSV)的依赖RNA的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRP)是病毒复制和转录的核心酶。本研究通过原核表达RdRP的部分片段并制备多克隆抗体,旨在为TZSV的检测和诊断提供关键材料,并为后续研究RdRP在病毒基因表达调控以及病毒与宿主互作等方面的作用奠定基础。结果表明:从TZSV染病番茄中扩增出大小为903 bp的TZSV RdRP-a片段,原核表达获得大小为36 kDa的重组蛋白;蛋白纯化后免疫小鼠,制备多克隆抗体,获得的多抗血清效价可达到1∶128000;经Western blot鉴定,所制备的多克隆抗体能够特异性识别TZSV-RdRP重组蛋白和天然TZSV。 展开更多
关键词 番茄环纹斑点病毒 RDRP 原核表达 多克隆抗体
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抗营养因子大豆凝集素夹心ELISA检测方法的建立
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作者 胡骁飞 杨继飞 +3 位作者 邢云瑞 庞杏豪 孙亚宁 魏凤仙 《西北农业学报》 北大核心 2025年第1期133-139,共7页
为建立灵敏、特异的大豆凝集素(soybean agglutinin,SBA)酶联免疫吸附(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测方法。试验以SBA鼠源单克隆抗体为捕获抗体,SBA兔源多克隆抗血清为检测抗体,羊抗兔酶标抗体为二抗,通过对抗体的工... 为建立灵敏、特异的大豆凝集素(soybean agglutinin,SBA)酶联免疫吸附(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测方法。试验以SBA鼠源单克隆抗体为捕获抗体,SBA兔源多克隆抗血清为检测抗体,羊抗兔酶标抗体为二抗,通过对抗体的工作浓度及反应时间优化,建立SBA的双抗体夹心ELISA检测方法,并用建立的方法检测大豆、大豆粕、膨化大豆粕及酶解大豆粕中SBA含量。结果表明:建立SBA双抗夹心ELISA检测方法的检测范围为39.06~1250 ng/mL,检出限为3.00 ng/mL,样品添加回收率为77.96%~116.15%,变异系数为6.11%~18.34%,与大豆中胰蛋白酶抑制因子BBI、KTI,大豆球蛋白glycinin及大豆伴球蛋白-conglycinin等其他抗营养因子均无交叉反应。大豆中SBA含量显著高于大豆粕、膨化大豆粕及酶解大豆粕(P<0.05);大豆粕中SBA含量显著高于膨化大豆粕及酶解大豆粕(P<0.05);膨化大豆粕显著高于酶解大豆粕中SBA含量(P<0.05)。综上,本研究建立了灵敏度高、特异性好的SBA双抗夹心ELISA检测方法,该方法可用于饲料中大豆凝集素的监控检测。 展开更多
关键词 大豆凝集素 抗营养因子 多克隆抗体 单克隆抗体 夹心ELISA
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莱茵衣藻ChR2多克隆抗体的制备
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作者 张媛媛 刘雁霞 樊振川 《食品与生物技术学报》 北大核心 2025年第2期63-70,共8页
【目的】制备一支莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii,C.reinhardtii)光敏通道蛋白2(ChR2)多克隆抗体,研究ChR2在鞭毛内通过感应光信号来影响细胞趋光性的应答机制。【方法】将构建的表达载体pET-28a(+)-chr2转化至大肠杆菌(Escherichi... 【目的】制备一支莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii,C.reinhardtii)光敏通道蛋白2(ChR2)多克隆抗体,研究ChR2在鞭毛内通过感应光信号来影响细胞趋光性的应答机制。【方法】将构建的表达载体pET-28a(+)-chr2转化至大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达6×His-ChR2融合蛋白,用镍柱对其进行亲和纯化。以此融合蛋白作为抗原进行动物免疫,产生相应抗体,再采用Protien A处理抗血清,使得抗体富集,获得纯度较高的莱茵衣藻ChR2多克隆抗体。通过免疫印迹检测莱茵衣藻ChR2多克隆抗体的特异性,并通过免疫荧光试验来确定ChR2在鞭毛中的位置。【结果】6×His-ChR2融合蛋白纯化结果表明其纯度>85%;间接ELISA法检测莱茵衣藻ChR2多克隆抗体的效价为1∶25600;在野生型莱茵衣藻CC-125细胞的全蛋白质提取物中出现了目的条带(相对分子质量93000),而在突变型莱茵衣藻CC-5499(chr1和chr2双基因敲除的突变体)细胞的全蛋白质提取物中未出现目的条带,说明所得到的莱茵衣藻ChR2多克隆抗体特异性较高;ChR2定位于莱茵衣藻细胞的眼点和鞭毛。【结论】该研究为后续探索ChR2在鞭毛内通过感应光信号影响细胞趋光性的机制奠定了基础。 展开更多
关键词 莱茵衣藻 ChR2 原核表达 多克隆抗体
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PRRSV Nsp2合成肽多克隆抗体的制备及应用
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作者 张彦兵 解艺璇 +10 位作者 李慧 肖长广 葛菲菲 刘珂 魏建超 李宗杰 邵东华 李蓓蓓 马志永 孙延鸣 邱亚峰 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第5期158-164,共7页
本研究旨在利用PRRSV Nsp2合成肽进行多克隆抗体的制备,并分析了该抗体的特性。应用生物信息学技术预测获得PRRSV非结构蛋白Nsp2的抗原肽序列,并通过化学合成的方法获得抗原肽,将其与KLH载体蛋白进行偶联;随后,将偶联好的抗原肽与弗氏... 本研究旨在利用PRRSV Nsp2合成肽进行多克隆抗体的制备,并分析了该抗体的特性。应用生物信息学技术预测获得PRRSV非结构蛋白Nsp2的抗原肽序列,并通过化学合成的方法获得抗原肽,将其与KLH载体蛋白进行偶联;随后,将偶联好的抗原肽与弗氏佐剂混合,通过对新西兰大白兔进行免疫获得的血清即为针对Nsp2的多克隆抗体;最后,利用ELISA、Western blot及IFA对多克隆抗体的特性进行分析。研究结果显示:ELISA检测该多克隆抗体的效价超过10^(5);Western blot检测可以特异性检测到细胞过表达和不同毒株病毒感染的Nsp2蛋白;IFA检测分析得出,该多克隆抗体可有效地区分病毒感染和未感染的样品。此外,PRRSV Nsp2合成肽多克隆抗体还可以应用于不同毒株PRRSV感染样品的检测,这为进一步研究PRRSV Nsp2的功能提供了一个有效的工具。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 合成肽 多克隆抗体 非结构蛋白2
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乙脑病毒包膜蛋白和非结构蛋白1抗血清制备及免疫保护作用研究
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作者 冯亚岚 杨俊杰 +3 位作者 夏榕 唐丽萍 黄荣 杨健 《热带医学杂志》 2025年第3期351-355,361,共6页
目的探索乙脑病毒(JEV)重组包膜蛋白(E)和重组非结构蛋白1(NS1)的免疫原性和免疫反应性,为基因工程亚单位疫苗的研究提供实验基础。方法以JEV全长cDNA质粒pACNR-JEV为模板,采用PCR技术和分子克隆技术分别构建E和NS1原核表达质粒pET32a-E... 目的探索乙脑病毒(JEV)重组包膜蛋白(E)和重组非结构蛋白1(NS1)的免疫原性和免疫反应性,为基因工程亚单位疫苗的研究提供实验基础。方法以JEV全长cDNA质粒pACNR-JEV为模板,采用PCR技术和分子克隆技术分别构建E和NS1原核表达质粒pET32a-E和pET32a-NS1。用异丙基硫代半乳糖苷诱导融合蛋白的表达,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析其表达形式。用蛋白过镍柱亲和层析方法纯化融合蛋白。用该纯化蛋白作为抗原辅以佐剂免疫小鼠,3次免疫后,行小鼠眼内眦采血收集抗血清,用50%蚀斑减少中和实验(PRNT_(50))检测抗血清的中和能力。用融合蛋白腹腔免疫小鼠2次,再用乙脑野毒株(SA14)腹腔攻击,评价其对小鼠的免疫保护作用。结果阳性克隆经酶切、测序鉴定表明已成功构建pET32a-E和pET32a-NS1原核表达系统,并用SDS-PAGE检测到融合蛋白以包涵体形式成功表达,其纯度分别达85%和90%。融合蛋白免疫小鼠后可产生中和抗体,其PRNT_(50)分别为1∶14和1∶32。E和NS1融合蛋白免疫小鼠后对其保护率分别为50%和60%。结论成功构建含JEV E和NS1基因的原核表达质粒,并以包涵体形式表达。E和NS1融合蛋白具有较好的免疫原性,可部分保护小鼠免受SA14的攻击。 展开更多
关键词 乙脑病毒 融合蛋白 抗血清 免疫保护
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高邮鸭整合素α8亚基蛋白多克隆抗体制备及应用
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作者 王利刚 杜菁 +5 位作者 吴婕 田维婷 朱睿 杨子恒 贲诗琦 张蕾 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第10期101-108,共8页
旨在制备针对高邮鸭整合素α8亚基(ITGA8)蛋白的多克隆抗体,以研究其在卵巢发育过程中的作用机制。通过生物信息学分析,筛选ITGA8的高免疫原区域,克隆高邮鸭ITGA8基因,并在原核表达系统中成功表达与纯化ITGA8蛋白免疫原。利用该免疫原... 旨在制备针对高邮鸭整合素α8亚基(ITGA8)蛋白的多克隆抗体,以研究其在卵巢发育过程中的作用机制。通过生物信息学分析,筛选ITGA8的高免疫原区域,克隆高邮鸭ITGA8基因,并在原核表达系统中成功表达与纯化ITGA8蛋白免疫原。利用该免疫原免疫新西兰白兔,制备出效价达1∶102 400的多克隆抗体。Western blot和间接免疫荧光试验结果验证了该抗体的高特异性。综上,本试验制备的ITGA8多克隆抗体具有良好的特异性和应用潜力,为深入探讨ITGA8在高邮鸭卵巢发育中的作用机制提供了重要的试验工具。 展开更多
关键词 高邮鸭 整合素α8亚基蛋白 多克隆抗体
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猪圆环病毒4型Cap蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
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作者 文英会 崔鸿博 +5 位作者 陈曦艋 陈红英 李金磊 赵丽 刘占通 闫志浩 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第10期4904-4911,共8页
【目的】通过原核表达系统表达猪圆环病毒4型(Porcine circovirus type 4,PCV4)衣壳蛋白(Cap),并制备其多克隆抗体,为PCV4的防控提供技术支撑。【方法】基于PCV4开放阅读框2(ORF2)基因的免疫原区域设计1对特异性引物,通过PCR扩增获得PCV... 【目的】通过原核表达系统表达猪圆环病毒4型(Porcine circovirus type 4,PCV4)衣壳蛋白(Cap),并制备其多克隆抗体,为PCV4的防控提供技术支撑。【方法】基于PCV4开放阅读框2(ORF2)基因的免疫原区域设计1对特异性引物,通过PCR扩增获得PCV4 ORF2基因序列,并将其连接至pET-28a(+)载体,构建重组表达质粒pET-28a-ORF2;将经PCR和测序鉴定正确的重组质粒pET-28a-ORF2转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经1 mmol/L IPTG诱导表达重组Cap蛋白,利用SDS-PAGE分析诱导的重组蛋白产物。利用尿素纯化重组Cap蛋白并通过Western blotting鉴定;将纯化的重组Cap蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体并进行Western blotting鉴定,应用间接ELISA法检测兔血清抗体效价。【结果】PCR扩增出大小为414 bp的PCV4 ORF 2基因片段,成功构建重组表达质粒pET-28a-ORF2。SDS-PAGE分析结果显示,诱导表达的重组Cap蛋白大小为16 ku;Western blotting结果表明制备的兔源多克隆抗体具有良好的免疫原性。间接ELISA检测显示,制备的兔血清抗体效价达1∶12800。【结论】本研究利用原核表达系统成功表达了PCV4 Cap蛋白并制备了多克隆抗体,试验结果为PCV4 Cap蛋白的深入研究以及后续开发PCV4基因工程亚单位疫苗、血清学诊断试剂等提供了物质基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒4型(PCV4) CAP蛋白 原核表达 多克隆抗体
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腐食酪螨双抗体夹心ELISA检测方法的建立及初步应用
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作者 李辉平 孙佳琪 +7 位作者 牛梦娜 袁连焰 徐平 林金盛 侯立娟 蒋宁 马林 曲绍轩 《湖北民族大学学报(自然科学版)》 2025年第4期470-475,503,共7页
为开发腐食酪螨(Tyrophagus putrescentiae)酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测技术,以螨虫总蛋白免疫新西兰白兔,制备多克隆抗体;同时以螨虫变应原Tyr p10蛋白免疫BALB/c小鼠,制备了单克隆抗体。以多抗为包被... 为开发腐食酪螨(Tyrophagus putrescentiae)酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测技术,以螨虫总蛋白免疫新西兰白兔,制备多克隆抗体;同时以螨虫变应原Tyr p10蛋白免疫BALB/c小鼠,制备了单克隆抗体。以多抗为包被抗体,单抗为酶标抗体,建立双抗体夹心法ELISA检测技术,并对其在糙皮侧耳培养料及菌丝中的检测灵敏度和可靠性进行了验证。结果显示,兔源螨虫多抗纯度达到85%以上,质量浓度为1.70 mg/mL,效价在870.4×10^(3)倍左右;从38株杂交瘤细胞株筛选到1株细胞株(AntiTput-10),抗体纯化达到90%以上,质量浓度为3.1 mg/mL,亲和常数为2.71×10^(10)。经棋盘滴定法确定包被抗体质量浓度为100μg/mL、酶标抗体稀释度为1∶2000。所建立的ELISA检测方法可从食用菌培养料中检测出腐食酪螨4头/g,具有较高的灵敏度。该方法能应用于不同场景的螨虫检测。 展开更多
关键词 腐食酪螨 ELISA 多克隆抗体 单克隆抗体 Tyr p10蛋白
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人乳头瘤病毒16和18型的E6和E7蛋白多克隆抗体制备及鉴定
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作者 周艳 张婷 +1 位作者 王志荣 许雪梅 《神经药理学报》 2025年第1期1-6,13,共7页
目的:预测人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16型和18型的E6及E7蛋白的B细胞线性表位,制备兔抗HPV16和HPV18的E6和E7的多克隆抗体。方法:利用生物信息学软件分析HPV16和HPV18的E6和E7蛋白的氨基酸序列,预测B细胞线性表位,设计并... 目的:预测人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16型和18型的E6及E7蛋白的B细胞线性表位,制备兔抗HPV16和HPV18的E6和E7的多克隆抗体。方法:利用生物信息学软件分析HPV16和HPV18的E6和E7蛋白的氨基酸序列,预测B细胞线性表位,设计并人工合成HPV16 E6、HPV16 E7、HPV18 E6及HPV18 E7多肽,将合成肽分别与血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)偶联,免疫新西兰大白兔,制备HPV16和HPV18的E6和E7多克隆抗体。以原核系统表达的重组蛋白Flic-HPV16 E6 E7、Flic-HPV18 E6 E7为检测抗原,采用间接ELISA法和Western blot法检测多克隆抗体的效价和特异性。结果:ELISA法检测所制备的HPV16 E6、HPV16 E7和HPV18 E7多克隆抗体的效价可达1:2.56×10^(5),HPV18 E6多克隆抗体效价可达1:1.28×10^(5)。Western blot结果显示,所制备的抗体均能与相应的重组蛋白Flic-HPV16 E6E7和Flic-HPV18 E6 E7特异性结合。结论:采用人工合成肽作为免疫原成功制备了高效价、特异性好的兔抗HPV16和HPV18的E6和E7蛋白多克隆抗体,为后续进行HPV感染检测、疫苗研发等实验研究创造了条件。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 多克隆抗体 E6蛋白 E7蛋白
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基于层析技术探究金环蛇蛇毒多克隆抗体F(ab′)_(2)的制备工艺
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作者 李爽 王炜杰 +6 位作者 赵伟睿 胡升 王磊 范泉水 吕常江 黄俊 梅乐和 《浙江理工大学学报(自然科学版)》 2025年第2期276-282,共7页
为制备高纯度马源金环蛇毒多克隆抗体F(ab′)_(2),以金环蛇毒高免马血浆为原料,采用Protein G亲和层析捕获马血浆中的IgG,经胃蛋白酶酶解后制得F(ab′)_(2),分别通过亲和层析、凝胶过滤层析和混合模式层析对F(ab′)_(2)进行精制纯化,并... 为制备高纯度马源金环蛇毒多克隆抗体F(ab′)_(2),以金环蛇毒高免马血浆为原料,采用Protein G亲和层析捕获马血浆中的IgG,经胃蛋白酶酶解后制得F(ab′)_(2),分别通过亲和层析、凝胶过滤层析和混合模式层析对F(ab′)_(2)进行精制纯化,并以间接ELISA法测定F(ab′)_(2)对金环蛇毒的中和活性。结果表明:Protein G亲和层析捕获的IgG纯度为83.6%,较传统的盐析纯化法有明显提高;在3种层析精制方法中,通过凝胶过滤层析精制的F(ab′)_(2)纯度最高,为89.3%,远高于《中华人民共和国药典》标准(60%以上),且收率为56.0%;间接ELISA法测定结果显示,F(ab′)_(2)的效价高于1∶4096。该研究为马源抗毒素多克隆抗体F(ab′)_(2)的工业化制备提供了工艺参考。 展开更多
关键词 金环蛇 多克隆抗体 胃蛋白酶 F(ab′)_(2)片段 层析纯化
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青鳉eef1a1l3基因的表达特征及抗体制备
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作者 黄岩 林淑婷 +2 位作者 邓菊 梁晶婕 陈天圣 《淡水渔业》 北大核心 2025年第1期60-68,共9页
青鳉(Oryzias latipes)是研究性别分化和生殖调控的重要模式鱼类,前期通过青鳉性腺转录组发现eef1a1l3 mRNA在卵巢中高表达,而在精巢几乎不表达,推测其参与性别分化和卵巢发育的调控。生物信息学分析显示,Eef1a1l3蛋白在硬骨鱼类中非常... 青鳉(Oryzias latipes)是研究性别分化和生殖调控的重要模式鱼类,前期通过青鳉性腺转录组发现eef1a1l3 mRNA在卵巢中高表达,而在精巢几乎不表达,推测其参与性别分化和卵巢发育的调控。生物信息学分析显示,Eef1a1l3蛋白在硬骨鱼类中非常保守。为探究eef1a1l3基因的功能,通过半定量PCR(SqRT-PCR)绘制了eef1a1l3基因在不同组织和早期不同发育时期的表达谱。通过抗原选取、原核表达、蛋白纯化以及动物免疫实验获取Eef1a1l3多克隆抗体,并对该抗体进行了特异性的检测以及效价的鉴定。结果显示,eef1a1l3 mRNA在成体组织中仅在卵巢特异表达,在早期胚胎发育阶段呈现母源性表达。制备的Eef1a1l3多克隆抗体与抗原结合的最大稀释倍数为1∶64000,显示出良好的免疫原性,并且Eef1a1l3蛋白在青鳉性腺中的卵巢而非精巢中有表达,这与mRNA表达模式一致。综上,eef1a1l3基因可能是早期胚胎发育和卵巢发育的重要调控因子,并且制备的Eef1a1l3多克隆抗体可以应用于青鳉及其他硬骨鱼类eef1a1l3基因功能的相关研究。 展开更多
关键词 青鳉(Oryzias latipes) eef1a1l3基因 多克隆抗体 表达模式 性别分化
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绵羊Nectin4的原核表达及多克隆抗体的制备
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作者 田启会 柳民意 +5 位作者 姚威 杨雪 尤婷 张红强 任善会 高小龙 《青海大学学报》 2025年第5期68-73,共6页
为制备绵羊Nectin4分子的多克隆抗体,本研究采用PCR技术将绵羊Nectin4基因克隆至pET-28a原核表达载体,随后转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞进行诱导表达,产物纯化后免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,通过间接ELISA法测定多克隆抗体效... 为制备绵羊Nectin4分子的多克隆抗体,本研究采用PCR技术将绵羊Nectin4基因克隆至pET-28a原核表达载体,随后转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞进行诱导表达,产物纯化后免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,通过间接ELISA法测定多克隆抗体效价,并用Western blot和IFA方法对多克隆抗体反应性进行进一步鉴定。结果表明:绵羊Nectin4基因全长1607 bp,最佳诱导表达条件为温度30℃,IPTG浓度0.4 mmol/L,诱导时间14 h,表达的绵羊Nectin4蛋白分子量大小约59.3 kDa,制备的多克隆抗体效价为1∶64000,Western blot和IFA结果显示,制备的多克隆抗体均可特异性识别绵羊Nectin4蛋白。本研究成功表达并纯化了绵羊Nectin4蛋白,且制备的多克隆抗体可特异性识别并结合绵羊Nectin4分子,可为后续深入探究PPRV致病机理提供材料基础。 展开更多
关键词 小反刍兽疫 脊髓灰质炎病毒受体相关分子4(Nectin4) 原核表达 多克隆抗体
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人A组轮状病毒VP6蛋白的原核表达及其小鼠多克隆抗体的制备 被引量:1
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作者 张卫斌 吕长坤 +2 位作者 杨颖 王向鹏 王明永 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第9期910-916,共7页
目的表达和纯化人A组轮状病毒VP6蛋白,制备小鼠抗VP6蛋白多克隆抗体。方法通过RT-PCR方法从人A组轮状病毒感染的粪便标本中扩增VP6基因,构建pET-32a-VP6原核表达质粒并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞;用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖... 目的表达和纯化人A组轮状病毒VP6蛋白,制备小鼠抗VP6蛋白多克隆抗体。方法通过RT-PCR方法从人A组轮状病毒感染的粪便标本中扩增VP6基因,构建pET-32a-VP6原核表达质粒并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞;用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导VP6表达,采用镍柱(Ni-NTA)亲和层析纯化VP6蛋白,用SDS-PAGE和Western blotting鉴定VP6蛋白;将VP6蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,采用间接ELISA检测抗体滴度。结果构建了pET32a-VP6重组表达质粒,VP6蛋白主要以包涵体形式表达。经亲和层析法纯化了VP6蛋白,免疫小鼠后获得了多克隆抗体,抗体效价为1∶32000,抗体可以和VP6蛋白发生特异性反应。结论表达和纯化了人A组轮状病毒的VP6蛋白,制备了小鼠抗VP6蛋白的多克隆抗体,为人A组轮状病毒诊断抗原的制备和血清学检测方法的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 人A组轮状病毒 VP6蛋白 原核表达 多克隆抗体
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猪免疫球蛋白J链表达及抗血清的制备
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作者 颜露玲 付钰广 +3 位作者 唐雨童 李文杰 刘光亮 王衡 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第10期45-52,共8页
旨在制备猪免疫球蛋白J链抗血清,为研究J链的免疫学功能提供材料。运用PCR扩增J链开放阅读框,并将其克隆至原核表达载体pET30a,选择测序成功的pET30a-J重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行蛋白表达验证;将J链与弗氏完全佐... 旨在制备猪免疫球蛋白J链抗血清,为研究J链的免疫学功能提供材料。运用PCR扩增J链开放阅读框,并将其克隆至原核表达载体pET30a,选择测序成功的pET30a-J重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行蛋白表达验证;将J链与弗氏完全佐剂混合后经背部皮下免疫新西兰大白兔制备抗血清;采用ELISA、Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)对获得的抗血清进行功能验证。结果:猪免疫球蛋白J链在大肠杆菌中以包涵体形式表达,经变性复性后通过NI-NTA亲和层析的方法纯化出纯净的目的蛋白;ELISA检测结果显示,四免后兔血清中抗体效价可达1∶6400;Western blot结果显示,获得的抗血清能与原核表达的J链特异性结合;为进一步验证抗血清的反应性,构建了pcDNA3.1-J重组载体,将其转染293T细胞,IFA与Western blot检测结果显示,本研究制备的抗血清能与真核表达的猪免疫球蛋白J链特异性结合,通过ELISA和Western blot检测抗血清与猪乳中J链的反应性,结果显示能与猪乳中的J链反应。综上表明,本研究成功制备出猪免疫球蛋白J链抗血清。 展开更多
关键词 猪免疫球蛋白J链 原核表达 抗血清
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H3N2亚型猪流感病毒HA1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备 被引量:1
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作者 司维 谭茜宇 +3 位作者 徐玲芸 罗廷荣 李晓宁 顾金燕 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第4期1739-1749,共11页
【目的】获得免疫原性良好的H3N2亚型猪流感病毒(Swine influenza virus, SIV)血凝素(haemagglutinin, HA)头部结构域HA1蛋白,并制备特异性多克隆抗体,用于HA1蛋白的鉴定及功能研究。【方法】本研究通过扩增A型SIV(A/swine/Guangdong/04... 【目的】获得免疫原性良好的H3N2亚型猪流感病毒(Swine influenza virus, SIV)血凝素(haemagglutinin, HA)头部结构域HA1蛋白,并制备特异性多克隆抗体,用于HA1蛋白的鉴定及功能研究。【方法】本研究通过扩增A型SIV(A/swine/Guangdong/04/2005(H3N2))毒株的HA1片段,采用同源重组方法构建原核表达载体pET-28a(+)-H3N2-HA1,经PCR和测序鉴定正确后将重组阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞。对HA1蛋白表达条件(诱导温度、诱导时间、IPTG浓度)进行优化,通过镍柱亲和层析法纯化蛋白。将获得的重组蛋白与QuickAntibody-Mouse3W佐剂混合后以肌内注射方式免疫BALB/c小鼠,制备H3N2亚型SIV HA1蛋白多克隆抗体,并通过ELISA、Western blotting和免疫荧光试验(IFA)对多克隆抗体的效价、反应性及特异性进行鉴定。【结果】本研究成功构建原核表达载体pET-28a(+)-H3N2-HA1;H3N2亚型SIV HA1重组蛋白在1 mmol/L IPTG 26℃诱导10 h时表达量最高,且主要以包涵体形式表达,蛋白分子质量大小约为39.5 ku。成功制备5株H3N2亚型SIV HA1蛋白多克隆抗体,效价均为1∶1 638 400。Western blotting和IFA鉴定结果显示,制备的多克隆抗体可特异性识别真核表达的H3N2亚型SIV HA1蛋白,与H1N1亚型SIV、H7N9亚型禽流感病毒(AIV)等其他亚型流感病毒的HA1蛋白均不发生反应,具有良好的反应性及特异性。【结论】本研究成功表达并纯化了免疫原性良好的H3N2亚型SIV HA1蛋白,制备了反应性及特异性良好的鼠源多克隆抗体,为深入研究H3N2亚型SIV HA1蛋白的生物学功能提供了重要工具。 展开更多
关键词 猪流感病毒(SIV) H3N2亚型 HA1蛋白 原核表达 多克隆抗体
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