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hrpE基因在水稻条斑病菌Hrp pilus形成和致病性中起重要作用 被引量:5
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作者 王寅鹏 邹丽芳 +1 位作者 周丹 陈功友 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期392-398,共7页
水稻条斑病菌(Xanthomonas oryzaepv.oryzicola,Xooc)的hrp(hypersensitive response and pathogenicity)基因簇编码形成Ⅲ型分泌系统(T3SS),将致病性的效应分子通过HrpF转位装置注入水稻细胞中,从而导致水稻产生抗(感)病性,但Xooc的Hrp... 水稻条斑病菌(Xanthomonas oryzaepv.oryzicola,Xooc)的hrp(hypersensitive response and pathogenicity)基因簇编码形成Ⅲ型分泌系统(T3SS),将致病性的效应分子通过HrpF转位装置注入水稻细胞中,从而导致水稻产生抗(感)病性,但Xooc的HrpE是否形成Hrp pilus还不清楚。本研究对Xooc的hrpE基因进行突变,发现hrpE突变体在水稻上丧失致病性和在烟草上丧失激发HR的能力。与水稻互作结果显示,hrpE突变体不能够与水稻细胞互作,其在水稻组织中的生长能力显著下降。电镜结果显示,hrpE突变体不能够形成Hrp pilus,从而导致水稻条斑病菌丧失在水稻上的致病性。功能互补结果显示,完整的hrpE基因可以恢复hrpE突变体在烟草上激发HR反应的能力、在水稻上的致病性以及在水稻薄壁细胞间形成Hrp pilus的能力,表明hrpE基因形成Hrp pilus是水稻条斑病菌分泌致病性效应分子的重要条件。 展开更多
关键词 水稻条斑病菌 hrpE HRP piluS 致病性 过敏反应
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Immunogenicity of Rcombinant Type 1 Pilus Oil-emulsified Vaccine of Avian Escherichia coli in Chickens
2
作者 GAN Li-ming JIANG Jia-jin +3 位作者 ZHANG Miao ZHANG Zhi-cheng CHEN Zhong-ming DAI Ding-zhen 《Animal Husbandry and Feed Science》 CAS 2012年第1期36-37,48,共3页
[ Objective] To prepare recombinant type 1 pilus vaccine of avian Escherichia coil and to detect its immunogenicity in chickens. [Meth- od] The type 1 pilus was respectively isolated from the recombinant bacteria CZYR... [ Objective] To prepare recombinant type 1 pilus vaccine of avian Escherichia coil and to detect its immunogenicity in chickens. [Meth- od] The type 1 pilus was respectively isolated from the recombinant bacteria CZYR10 strain and wild avian Eschedchia co/i YR( O18 ) strain and used to prepare oil-emulsified vaccine. The immunogenicity of the developed vaccine was detected in chickens using the challenge test. [ Result] The recombinant type 1 pilus protein had immunoprotective efficacy. The recombinant type 1 pilus protein had weaker protective efficacy than the isolated type 1 pilus protein, but the difference was not significant. [ Conclusion] The study provides a reference for immunization and control of chicken colibacillosis. 展开更多
关键词 Avian Escherichia coil Recombinant type 1 pilus IMMUNOGENICITY
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The role of PilU in the surface behaviors of Pseudomonas aeruginosa
3
作者 Jingchao Zhang Yan Luo +4 位作者 Yiwu Zong Shangping Lu Yi Shi Fan Jin Kun Zhao 《mLife》 2025年第1期83-95,共13页
In Pseudomonas aeruginosa,the dynamic activity of type IV pilus(TFP)is essential for various bacterial behaviors.While PilU isconsidered a homolog of the TFP disassembling motor PilT,its specific roles remain unclear.U... In Pseudomonas aeruginosa,the dynamic activity of type IV pilus(TFP)is essential for various bacterial behaviors.While PilU isconsidered a homolog of the TFP disassembling motor PilT,its specific roles remain unclear.Using pilus visualization andsingle-cell tracking techniques,we characterized TFP dynamics and surface behaviors in wild-type andΔpilU mutants.Wefound thatΔpilU cells displayed increased TFP numbers but reduced cell movement and delayed microcolony formation.Interestingly,beyond affecting the twitching motility,ΔpilU cells formed a thick multilayered colony edge on semi-solid sur-faces,slowing colony expansion.Cell-cell collision responses changed from touch-turn dominance in wild type to touch-upright dominance inΔpilU,affecting colony morphology and expansion.Thesefindings expand our understanding of PilU'sphysiological roles and provide potential targets for developing strategies to control P.aeruginosa biofilm formation andvirulence. 展开更多
关键词 colony expansion pilu Pseudomonas aeruginosa twitching type IV pili
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纹带棒杆菌SpaD多克隆抗体的制备及其对纹带棒杆菌强产膜株生物膜形成能力的抑制作用
4
作者 郭玢欣 温娟 +1 位作者 刘慧 王俊瑞 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第5期1390-1398,共9页
目的:制备纹带棒杆菌(C.striatum)生物膜形成相关蛋白菌毛组装蛋白D(SpaD)多克隆抗体,分析其抑制C.striatum强产膜株生物膜形成的作用和潜在应用价值。方法:选取2011-2021年内蒙古医科大学附属医院住院患者临床标本中分离的117株C.stria... 目的:制备纹带棒杆菌(C.striatum)生物膜形成相关蛋白菌毛组装蛋白D(SpaD)多克隆抗体,分析其抑制C.striatum强产膜株生物膜形成的作用和潜在应用价值。方法:选取2011-2021年内蒙古医科大学附属医院住院患者临床标本中分离的117株C.striatum为研究对象。采用结晶紫染色法检测各菌株生物膜形成能力,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测SpaD编码基因spaD在C.striatum强产膜株中的分布。将C.striatum强产膜株分为对照组和蛋白酶K组,采用结晶染色法检测蛋白酶对C.striatum强产膜株生物膜形成能力的抑制作用。蛋白重组技术构建C.striatum SpaD重组蛋白,实验分为对照组和5及10 mg·L^(-1) SpaD重组蛋白组,采用结晶染色法检测SpaD重组蛋白对C.striatum强产膜株生物膜形成能力的抑制作用。并通过动物免疫获得兔抗SpaD多克隆抗体实验分为对照组和1∶400、1∶200及1∶100 SpaD多克隆抗体组,采用结晶紫染色法检测SpaD多克隆抗体对C.striatum强产膜临床株生物膜形成能力的抑制作用。结果:结晶紫染色法检测,强产膜株、中等产膜株和弱产膜株占比分别为47.9%(56/117)、29.0%(34/117)及23.1%(27/117)。RT-qPCR法,所有强产膜株均携带spaD基因。与对照组比较,5和10 mg·L^(-1) SpaD重组蛋白组13株强产膜菌生物膜形成能力均明显降低(P<0.05)。与对照组比较,1∶100和1∶200倍数稀释SpaD兔多克隆抗体组中分别有61.5%(8/13)及7.7%(1/13)的强产膜菌株生物膜形成能力明显降低(P<0.05)。结论:spaD基因在C.striatum强产膜株中呈高表达状态。SpaD多克隆抗体可明显抑制C.striatum强产膜株生物膜形成,其抑制效应呈浓度依赖性。SpaD可作为防治C.striatum产膜株感染的新靶点。 展开更多
关键词 纹带棒杆菌 生物膜 纹带棒杆菌毒力 菌毛组装蛋白D 多克隆抗体
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产肠毒素性大肠杆菌致病因子F_(41)、K_(99)菌毛基因的克隆与表达 被引量:7
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作者 闻晓波 崔玉东 +3 位作者 冉旭华 朱战波 朴范泽 潘兴广 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期797-800,共4页
目的为了分析原核表达的ETECF41和K99菌毛亚单位的抗原性和作为基因工程亚单位疫苗的可能性。方法针对黏附素F41和K99的编码序列,设计两对特异性引物,扩增F41和K99菌毛蛋白的编码基因,经序列测定后,克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,转化... 目的为了分析原核表达的ETECF41和K99菌毛亚单位的抗原性和作为基因工程亚单位疫苗的可能性。方法针对黏附素F41和K99的编码序列,设计两对特异性引物,扩增F41和K99菌毛蛋白的编码基因,经序列测定后,克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,转化E.coliBL21(DE3),筛选到可以表达F41和K99菌毛亚单位的菌株。经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE和Western blot试验分析原核表达的F41和K99重组蛋白的抗原性。结果表达的F41和K99菌毛亚单位蛋白可以与抗F41和K99菌毛蛋白的单因子血清反应。结论原核表达的F41和K99重组蛋白具有良好的抗原性。 展开更多
关键词 产肠毒素性大肠杆菌 F41菌毛 K99菌毛 原核表达
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中国罗非鱼主养区无乳链球菌流行菌株的菌毛岛屿及其血清型分型 被引量:9
6
作者 袁伟 张德锋 +3 位作者 可小丽 刘志刚 高风英 卢迈新 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期490-494,共5页
为了解近年来中国罗非鱼主养区无乳链球菌流行特征,本研究通过PCR扩增和测序等方法对2007年~2016年分离纯化得到的263株罗非鱼无乳链球菌进行菌毛岛屿和血清型分型分析。菌毛岛屿分型结果显示:263株罗非鱼无乳链球菌可分为两种菌毛岛屿... 为了解近年来中国罗非鱼主养区无乳链球菌流行特征,本研究通过PCR扩增和测序等方法对2007年~2016年分离纯化得到的263株罗非鱼无乳链球菌进行菌毛岛屿和血清型分型分析。菌毛岛屿分型结果显示:263株罗非鱼无乳链球菌可分为两种菌毛岛屿类型:PI-2b型(40株)和PI-1+PI-2b型(218株),其中PI-1+PI-2b型无乳链球菌是主要的流行菌株,占总数的82.9%。其余5株无乳链球菌的菌毛岛屿基因缺失,不含菌毛岛屿。分子血清型分析结果显示,所有的无乳链球菌分为两种血清型:Ia型258株(98.1%)和Ib型5株(1.9%)。所有Ib型无乳链球菌的菌毛岛屿均有缺失,仅含有2b-AP1基因。进一步分析表明,Ia-(PI-2b)型无乳链球菌是2011年之前主要的流行株型,而Ia-(PI-1+PI-2b)型无乳链球菌为近6年来广泛流行的株型。Ia型是我国罗非鱼无乳链球菌最流行的分子血清型,同时PI-2b是最重要的菌毛岛屿(98.1%)。本研究为罗非鱼无乳链球菌的流行病学和疾病防控提供调查依据。 展开更多
关键词 罗非鱼 无乳链球菌 菌毛岛屿 分子血清型
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牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿辅助蛋白AP1基因的克隆及其表达产物的抗原性鉴定 被引量:11
7
作者 锡林高娃 吴金花 +4 位作者 布日额 刘洋 王学理 刘燕 郭闯 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2013年第6期481-484,488,共5页
目的克隆与高效表达无乳链球菌细胞表面菌毛岛屿辅助蛋白AP1基因编码蛋白抗原优势区,并进行抗原性分析及鉴定。方法根据GenBank上公布的牛乳腺炎无乳链球菌辅助蛋白AP1(EU929387.1)基因序列,利用生物信息学学软件Primer5.0和DNA MAN,根... 目的克隆与高效表达无乳链球菌细胞表面菌毛岛屿辅助蛋白AP1基因编码蛋白抗原优势区,并进行抗原性分析及鉴定。方法根据GenBank上公布的牛乳腺炎无乳链球菌辅助蛋白AP1(EU929387.1)基因序列,利用生物信息学学软件Primer5.0和DNA MAN,根据其辅助蛋白保守序列设计、合成1对克隆引物,以分离于内蒙古东部地区乳源性无乳链球菌临床菌株总DNA为模板,PCR扩增辅助蛋白AP1基因序列,经克隆与测序后构建重组表达载体AP1-pET30,转化大肠埃希菌BL21,并进行高效表达,目的蛋白经亲和层析纯化后进行Western blot鉴定。结果克隆的抗原表位序列片段大小为714bp,编码238氨基酸残基,与GenBank公布的AP1(EU929387.1)基因序列相似性为99.72%,氨基酸残基相似性为99.58%。构建的重组表达载体经诱导表达可溶性蛋白,纯化后重组蛋白的纯度>95%,Western blot分析重组蛋白能被牛源无乳链球菌阳性血清识别。结论成功构建了pET-30a-AP1重组表达载体,该载体能可溶性表达重组蛋白,表达产物具有良好抗原反应性,为进一步研究辅助蛋白AP1的结构、功能以及抗原表位的鉴定奠定了实验基础。 展开更多
关键词 菌毛岛屿 AP1基因 克隆 抗原性
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鲍氏不动杆菌生物膜形成及相关基因研究 被引量:10
8
作者 魏星 沈定霞 +1 位作者 罗燕萍 曹敬荣 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第18期2735-2738,共4页
目的检测鲍氏不动杆菌生物膜形成以及与生物膜相关的菌毛合成系统6个基因,研究二者之间的关系。方法收集医院分离到的鲍氏不动杆菌98株,经过L-B肉汤培养基培养后,使用结晶紫染色法,观察生物膜的形成情况;使用扫描电镜观察生物膜的超微结... 目的检测鲍氏不动杆菌生物膜形成以及与生物膜相关的菌毛合成系统6个基因,研究二者之间的关系。方法收集医院分离到的鲍氏不动杆菌98株,经过L-B肉汤培养基培养后,使用结晶紫染色法,观察生物膜的形成情况;使用扫描电镜观察生物膜的超微结构;使用PCR方法检测各株鲍氏不动杆菌DNA中是否含有菌毛合成系统的6个基因。结果 98株鲍氏不动杆菌有47株能在体外培养中形成生物膜,这些菌株都含有菌毛装配系统的6个基因,体外试验不能形成生物膜的有51株,其中的43株的菌毛合成系统的一个或数个基因的缺失。结论菌毛合成系统的全部6个基因的存在对鲍氏不动杆菌生物膜的形成有着重要作用。 展开更多
关键词 鲍氏不动杆菌 生物膜 菌毛
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奶牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a骨架蛋白BP基因的克隆及其抗原性预测 被引量:7
9
作者 白文丽 王金良 +6 位作者 锡林高娃 吴金花 董林 孙立杰 王华 朝洛蒙 布日额 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第4期294-297,共4页
目的克隆奶牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿BP基因片段并进行序列分析。方法根据GenBank已公布牛源无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a的BP基因序列,采用Primer 5.0软件设计1对特异性引物,以内蒙古通辽地区分离的乳源性无乳链球菌临床菌株总DNA为模板... 目的克隆奶牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿BP基因片段并进行序列分析。方法根据GenBank已公布牛源无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a的BP基因序列,采用Primer 5.0软件设计1对特异性引物,以内蒙古通辽地区分离的乳源性无乳链球菌临床菌株总DNA为模板PCR扩增BP基因片段,并进行生物信息学分析。结果克隆的BP基因序列大小为609bp,编码203个氨基酸残基,其基因序列与GenBank上公布的牛源无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a的BP基因(EU930008)相似性为100%。菌毛岛屿骨架蛋白BP二级结构的α螺旋在N端分布较多;β折叠较丰富,且分布于C端较多;无规则卷曲分布较均匀。菌毛岛屿骨架蛋白BP的亲水区分布较广,遍布于整个多肽区,属于亲水性蛋白。BP蛋白分子表面可及性较高,区域占比达57.0%,且抗原性较好。结论奶牛乳腺炎无乳链球菌菌毛骨架蛋白BP基因具有高度保守性,其编码蛋白具有良好的抗原性,可作为防治无乳链球菌性乳腺炎的候选抗原序列。 展开更多
关键词 无乳链球菌 菌毛岛屿 BP基因 克隆 序列分析
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牛乳腺炎无乳链球菌PI-2a菌毛岛辅助蛋白AP1、BP主要抗原域串联表达及其免疫活性鉴定 被引量:8
10
作者 布日额 王金良 +5 位作者 吴金花 锡林高娃 陈金龙 孙立杰 王华 朝洛蒙 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第7期609-613,618,共6页
目的构建无乳链球菌菌毛岛屿辅助蛋白AP1、菌毛骨架蛋白BP主要抗原域串联表达重组载体,对表达产物进行抗原性分析及鉴定。方法利用DNAstar Protean功能筛选AP1和BP主要抗原结构域,引入15位柔性多肽,通过重叠延伸PCR技术串联融合AP1、BP... 目的构建无乳链球菌菌毛岛屿辅助蛋白AP1、菌毛骨架蛋白BP主要抗原域串联表达重组载体,对表达产物进行抗原性分析及鉴定。方法利用DNAstar Protean功能筛选AP1和BP主要抗原结构域,引入15位柔性多肽,通过重叠延伸PCR技术串联融合AP1、BP主要抗原决定簇基因区,PCR扩增串联体基因片段,克隆至pET-30a(+)载体后转化BL21(DE3)细胞,表达的目的蛋白经亲和层析纯化后进行Western blot鉴定。结果 PCR扩增出321bp的AP1和660bp的BP主要抗原域,经重叠延伸PCR获得966bp的AP1、BP串联体基因片段,DNA测序表明无碱基缺失、突变和移码。构建的重组表达载体经IPTG诱导能可溶性表达分子质量约45ku的目的蛋白,纯化后重组蛋白的纯度≥95%,Western blot分析表明,重组融合蛋白能被兔源抗无乳链球菌阳性血清识别。结论重叠延伸PCR获得AP1、BP主要抗原域串联体,构建的pET-30a(+)/AP1+BP重组表达载体能以包涵体形式表达目的蛋白,表达产物具有良好的反应原性,为研究基于AP1、BP蛋白的致病机制及其免疫活性奠定了实验基础。 展开更多
关键词 无乳链球菌 菌毛岛屿 AP1、BP 串联表达
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奶牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a骨架蛋白BP基因的克隆及其序列分析 被引量:6
11
作者 白文丽 吴金花 +2 位作者 锡林高娃 布日额 王华 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第6期505-508,共4页
目的获得通辽地区奶牛乳腺炎致病菌无乳链球菌相关菌毛岛屿BP基因序列并进行比对分析。方法根据DNAMAN分析基因库中牛源无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a的BP基因序列设计1对特异性引物,以无乳链球菌通辽分离株总DNA为模板,PCR扩增BP基因片段并... 目的获得通辽地区奶牛乳腺炎致病菌无乳链球菌相关菌毛岛屿BP基因序列并进行比对分析。方法根据DNAMAN分析基因库中牛源无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a的BP基因序列设计1对特异性引物,以无乳链球菌通辽分离株总DNA为模板,PCR扩增BP基因片段并进行序列比对分析。结果获得了菌毛岛屿PI-2a的BP基因序列,目的基因为609bp,编码203个氨基酸,其基因序列与GenBank上公布的牛源无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a的BP基因(EU930008)同源性为100%。BP蛋白二级结构的α螺旋在N端分布较多,β折叠较丰富且分布C端较多,无规则卷曲分布较均匀。BP蛋白的亲水区分布较广,遍布于整个蛋白区,属于亲水性蛋白。BP蛋白分子表面可及性较高,区域占比达57.0%,且具有抗原性。结论获得了奶牛乳腺炎无乳链球菌通辽分离株菌毛岛屿PI-2a骨架蛋白BP基因序列,该基因序列具有高度保守性,其编码蛋白具有抗原表位,可作为奶牛无乳链球菌重组基因工程疫苗候选亚单位抗原。 展开更多
关键词 无乳链球菌 菌毛岛屿 BP基因 克隆 序列分析
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ETEC F4-F5融合基因表达及间接ELISA方法建立 被引量:5
12
作者 张强 张雪寒 +1 位作者 何孔旺 王春凤 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1312-1317,共6页
表达产肠毒素性大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)黏附素F4和F5融合蛋白,建立间接ELISA方法,旨在监测猪场ETEC感染以及疫苗免疫情况。根据GenBank中登录F4和F5基因序列,分析保守区,优化密码子,合成F4-F5串联基因,克隆入... 表达产肠毒素性大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)黏附素F4和F5融合蛋白,建立间接ELISA方法,旨在监测猪场ETEC感染以及疫苗免疫情况。根据GenBank中登录F4和F5基因序列,分析保守区,优化密码子,合成F4-F5串联基因,克隆入原核表达载体,表达重组蛋白His-F4-F5。以纯化的His-F4-F5蛋白作为检测抗原,建立检测ETEC抗体的间接EIISA方法。经酶切和DNA序列分析,成功构建重组菌BL21(pCold I-F4-F5),SDS-PAGE和Western blot分析,融合表达F4-F5相对分子质量为29 000,与ETEC高免血清发生特异性反应,条带单一。经优化筛选的间接ELISA最佳反应条件:抗原包被浓度6ng/孔,待检血清稀释比例1∶200,HRP-羊抗猪二抗的工作浓度1∶15 000,5%脱脂奶封闭l h,底物作用时间15min。本研究建立F4-F5间接ELISA方法具有特异性好、敏感性高、重复性好、稳定性强的特点,是猪场ETEC感染和疫苗免疫效果检测的有效工具,进而指导疫苗使用和新型疫苗研发。 展开更多
关键词 产肠毒索性大肠杆菌 F4菌毛 F5菌毛 间接酶联免疫吸附试验
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沙门氏菌毒力相关因子研究进展 被引量:29
13
作者 陈冬平 罗薇 《西南民族大学学报(自然科学版)》 CAS 2012年第5期770-775,共6页
沙门氏菌是一种重要的人畜共患病原菌,对人类健康和畜禽养殖业造成严重危害.沙门氏菌致病性是由于大量毒力相关因子相互作用的结果,这些与沙门氏菌毒力相关的因子主要分布在毒力岛、毒性质粒和菌毛等上.简要概述了沙门氏菌的毒力岛、毒... 沙门氏菌是一种重要的人畜共患病原菌,对人类健康和畜禽养殖业造成严重危害.沙门氏菌致病性是由于大量毒力相关因子相互作用的结果,这些与沙门氏菌毒力相关的因子主要分布在毒力岛、毒性质粒和菌毛等上.简要概述了沙门氏菌的毒力岛、毒性质粒、菌毛及其脂多糖的研究进展. 展开更多
关键词 沙门氏菌 毒力岛 菌毛 毒性质粒 脂多糖
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霍乱弧菌毒素协同调节菌毛基因tcpA的克隆及序列分析 被引量:5
14
作者 王颖芳 谢婧 +2 位作者 段广才 郗园林 范清堂 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2004年第2期97-101,共5页
目的 以新疆分离 0 13 9霍乱弧菌XJ93 0 0 6株的DNA为模板 ,自行设计引物克隆毒素协同调节菌毛亚单位A(tcpA)基因 (包括侧序列 )并构建重组载体。方法 以 0 13 9霍乱弧菌新疆分离株XJ93 0 0 6基因组DNA作为模板 ;根据O1群E1Tor型霍乱... 目的 以新疆分离 0 13 9霍乱弧菌XJ93 0 0 6株的DNA为模板 ,自行设计引物克隆毒素协同调节菌毛亚单位A(tcpA)基因 (包括侧序列 )并构建重组载体。方法 以 0 13 9霍乱弧菌新疆分离株XJ93 0 0 6基因组DNA作为模板 ;根据O1群E1Tor型霍乱弧菌N16961全基因组序列设计tcpAPCR引物 ,高保真酶扩增tcpA片段 :限制性内切酶切PCR产物和pNEB193空质粒 ,T4DNA连接酶连接酶切产物 ,重组质粒转化大肠杆菌TB1工程菌 ,蓝白斑菌落试验筛选阳性克隆 ;提取质粒经酶切鉴定后测序并利用生物信息数据库对该序列进行序列分析 ,比较。结果 DNA限制性内切酶可从重组质粒pNEB193_tcpA的EcoRⅠ和SalⅠ位点之间切出一个10 3 7bp的DNA片段 ,测序结果与O1群E1Tor型霍乱弧菌N16961、O13 9霍乱弧菌标准株M0 45的tcpA同源性均达到 99 9%以上。结论 成功构建O13 9霍乱弧菌新疆分离株XJ93 0 0 6毒素协同调节菌毛亚单位A(tcpA)基因的重组质粒pNEB193_tcpA ;序列分析表明霍乱弧菌毒素协同调节菌毛亚单位A(tcpA)基因在O1群EITor型霍乱弧菌和O13 9霍乱弧菌中是一类高度保守的原核基因 ,可作为霍乱弧菌疫苗的候选基因。另外为研究O13 展开更多
关键词 霍乱弧菌毒素 协同调节菌毛 基因 TCPA 克隆 序列分析
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鸭源致病性大肠杆菌Ⅰ型菌毛pilA基因的原核表达及重组蛋白对强毒攻击的免疫保护作用 被引量:4
15
作者 程安春 于小娜 +4 位作者 汪铭书 朱德康 李玲 孙磊 陈孝跃 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期440-445,共6页
根据GenBank中人源大肠杆菌pilA基因序列,用OLIGO6.0设计PCR引物,从鸭源致病性大肠杆菌GH1.2中扩增到pilA基因并将其克隆至pMD18-T载体,经PCR、酶切和DNA测序鉴定后,将鸭源致病性大肠杆菌pilA基因正向插入原核表达载体pET-32a(+)的BamH... 根据GenBank中人源大肠杆菌pilA基因序列,用OLIGO6.0设计PCR引物,从鸭源致病性大肠杆菌GH1.2中扩增到pilA基因并将其克隆至pMD18-T载体,经PCR、酶切和DNA测序鉴定后,将鸭源致病性大肠杆菌pilA基因正向插入原核表达载体pET-32a(+)的BamHⅠ和HindⅢ位点间,成功构建了重组表达质粒pET-32a-pilA。重组表达质粒pET-32a-pilA转化表达宿主菌BL21(DE3),用IPTG诱导,表达出了大小约为36kD的pilA重组蛋白。表达产物用镍柱亲和层析纯化,与等量弗氏佐剂混合制备pilA重组蛋白疫苗,分别在1日龄、8日龄时两次对雏鸭进行免疫,二免后2周测定鸭血清中的ELISA抗体效价,并以109PFU同源菌株GH1.2攻毒,根据攻毒后鸭的死亡率、E.coli分离率和各组织器官的病变等级来判定pilA重组蛋白的免疫保护效果。结果pilA重组蛋白免疫鸭的血清中ELISA抗体效价为1∶12800,全菌灭活苗免疫组的血清ELISA抗体效价为1∶200;同源菌株攻毒后,pilA重组蛋白免疫保护组鸭的死亡率、E.coli分离率和各组织器官的病变程度均比攻毒对照组下降且差异显著或极显著,与全菌灭活苗免组比较差异不显著。表明pilA重组蛋白对同源菌株GH1.2的感染具有一定的保护效果。 展开更多
关键词 鸭大肠杆菌 Ⅰ型菌毛 PILA基因 原核表达 免疫原性
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霍乱弧菌主要毒力和管家基因序列分析 被引量:11
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作者 芮勇宇 许锐恒 +2 位作者 阚飙 高守一 俞守义 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期31-33,共3页
目的分析广东霍乱弧菌(VC)代表菌株主要毒力基因和管家基因序列。方法PCR扩增霍乱弧菌的主要毒力基因(ctxAB和tcpA)和管家基因(dnaE、hlyA、mdh和recA)、基因测序、对序列进行生物信息学分析。结果不同年代分离的2株埃尔托型(EV... 目的分析广东霍乱弧菌(VC)代表菌株主要毒力基因和管家基因序列。方法PCR扩增霍乱弧菌的主要毒力基因(ctxAB和tcpA)和管家基因(dnaE、hlyA、mdh和recA)、基因测序、对序列进行生物信息学分析。结果不同年代分离的2株埃尔托型(EVC)产毒株和1株0139群VC产毒株的主要毒力基因序列与国内外相关报告比较,ctxA基因及推测的氨基酸序列的同源性分别为99.7%~100%和98.8%~100%.ctxB基因及推测的氨基酸序列的同源性分别为98.8%~100%和96.8%~100%,tcpA基因序列与EVC国际标准株N16961 100%同源。3株产毒株的dnaE、hlyA、mdh和recA基因序列同源性分别为99.8%~100%,100%,99.5%~99.8%和100%,氨基酸序列同源性分别为100%.100%,98.5%~99.3%和100%;3株产毒株和O139群VC非产毒株的管家基因序列同源性分别为97.0%~97.2%,91.8%,94.1%~94.4%,96.9%,氨基酸序列同源性分别为100%,94.6%,94.3%~98.5%和99.7%。结论广东省不同年代EVC产毒株和O139群VC产毒株的群体遗传学关系高度密切,而与O139群VC非产毒株较远,O139群VC产毒株可能起源于EVC产毒株。 展开更多
关键词 霍乱弧菌 霍乱肠毒素基因 毒力协同调节菌毛A亚单位基因 管家基因 序列分析
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科尔沁牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿AP2基因部分片段克隆及其抗原性预测 被引量:3
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作者 锡林高娃 杜长智 +4 位作者 吴金花 王华 白文丽 于辰龙 布日额 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期2185-2190,共6页
【目的】克隆分析科尔沁牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿AP2基因片段,为深入研究奶牛乳腺炎无乳链球菌免疫机制及制备新型免疫抗原提供理论依据。【方法】根据Gen Bank已公布牛源无乳链球菌PI-2a菌毛岛屿的AP2基因序列,采用Primer 5.0软件设... 【目的】克隆分析科尔沁牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿AP2基因片段,为深入研究奶牛乳腺炎无乳链球菌免疫机制及制备新型免疫抗原提供理论依据。【方法】根据Gen Bank已公布牛源无乳链球菌PI-2a菌毛岛屿的AP2基因序列,采用Primer 5.0软件设计1对特异性引物,以内蒙古通辽地区乳源性无乳链球菌临床菌株总DNA为模板,扩增AP2基因片段,并分析其编码序列及免疫活性。【结果】科尔沁牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿AP2基因片段大小为699 bp,共编码233个氨基酸残基,其基因序列与Gen Bank已公布牛源无乳链球菌PI-2a菌毛岛屿AP2基因序列(EU930008)的相似性达99.6%,仅有3个碱基出现变异(402C→A、563C→T和467A→T)。菌毛岛屿辅助蛋白AP2二级结构的α螺旋在C端分布较多;β折叠较丰富,且分布均匀;而无规则卷曲分布在两端。菌毛岛屿辅助蛋白AP2的亲水区分布较广,几乎遍布于整个蛋白区,属于亲水性蛋白;其抗原指数较高的区段较丰富,抗原性良好;蛋白质分子表面可及性也较高,其区域占比达54.0%。【结论】科尔沁牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿AP2基因具有高度保守性,其编码蛋白具有良好的抗原性,可作为阻止无乳链球菌感染的候选疫苗靶标抗原。 展开更多
关键词 科尔沁牛 无乳链球菌 菌毛岛屿 AP2基因 克隆 抗原性
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尿路致病性大肠埃希菌Ⅰ型菌毛fimH基因核酸疫苗免疫效果评价 被引量:4
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作者 耿丽 何深一 +2 位作者 张玉梅 李波清 柏雪莲 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2011年第3期170-172,共3页
目的研究尿路致病性大肠埃希菌Ⅰ型菌毛fimH基因核酸疫苗产生的免疫反应及其对小鼠的免疫保护作用,并比较不同免疫途径产生的免疫效果。方法选取BALB/c小鼠40只,随机分为4组(PBS组、空质粒组、pcD-NA3.0-fimH肌肉注射组、pcDNA3.0-fimH... 目的研究尿路致病性大肠埃希菌Ⅰ型菌毛fimH基因核酸疫苗产生的免疫反应及其对小鼠的免疫保护作用,并比较不同免疫途径产生的免疫效果。方法选取BALB/c小鼠40只,随机分为4组(PBS组、空质粒组、pcD-NA3.0-fimH肌肉注射组、pcDNA3.0-fimH滴鼻组),用构建的fimH基因真核表达载体pcDNA3.0重组质粒分别通过肌肉注射和滴鼻(粘膜)免疫BALB/c小鼠,同时分别以载体质粒(pcDNA3.0)和PBS液为空质粒对照和空白对照,经股四头肌注射免疫小鼠,于第3周和第5周加强免疫。每次免疫前及末次免疫后2周采血检测特异IgG抗体。末次免疫后第10 d,以UPEC分离株菌液进行尿道上行攻击,攻击后第5 d进行尿液细菌培养和计数。结果免疫后,肌注组与滴鼻组小鼠血清特异性IgG抗体水平与对照组及空质粒组比较显著升高(P<0.05);UPEC分离株菌液攻击小鼠后,pcDNA3.0-fimH肌注组与滴鼻组小鼠尿液菌落数较对照组及空质粒组显著减少(P<0.05)。结论 pcDNA3.0-fimH基因疫苗可诱导BALB/c小鼠产生特异性体液免疫,对小鼠尿道上行感染具有一定的免疫保护作用,且不同的免疫途径免疫效果亦有不同。 展开更多
关键词 尿路致病性大肠埃希菌 Ⅰ型菌毛 fimH基因 免疫效果
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鸡大肠杆菌Ⅰ型菌毛亚单位苗交叉保护的初步研究 被引量:11
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作者 戴鼎震 郑明球 +2 位作者 恽时锋 蔡宝祥 陈溥言 《畜牧与兽医》 北大核心 1999年第5期1-2,共2页
含Ⅰ型菌毛的3 个不同血清型(O1 、O78 及O88) 的菌株, 大容量培养后提取菌毛制备3 种单价菌毛油乳苗。用1 日龄雏鸡分别免疫3 种单价菌毛油乳剂苗, 每雏免疫量为125 μg , 隔离饲养至2 周龄经气囊攻毒, 并评价... 含Ⅰ型菌毛的3 个不同血清型(O1 、O78 及O88) 的菌株, 大容量培养后提取菌毛制备3 种单价菌毛油乳苗。用1 日龄雏鸡分别免疫3 种单价菌毛油乳剂苗, 每雏免疫量为125 μg , 隔离饲养至2 周龄经气囊攻毒, 并评价疫苗的免疫原性。结果未免疫鸡出现87-5 % ~100 % 的死亡率, 免疫鸡用同源菌株攻毒后死亡率仅12-5 % , 用异源菌株攻毒出现37-5% ~62-5 % 的死亡率。免疫鸡攻毒后未死亡者, 经扑杀观察, 可见在气囊、心包及肝脏的病变非常轻微, 展开更多
关键词 鸡大肠杆菌 Ⅰ型菌毛 亚单位苗 交叉保护
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牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a辅助蛋白AP2基因的克隆及序列分析 被引量:3
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作者 杜长智 吴金花 +4 位作者 锡林高娃 王华 白文丽 于辰龙 布日额 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第8期699-703,共5页
目的克隆牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a辅助蛋白AP2基因,并进行序列分析。方法根据GenBank公布的牛源无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a的AP2基因序列,使用生物信息学软件Primer5.0设计1对特异性引物,以内蒙古东部地区乳源无乳链球菌临床菌株... 目的克隆牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a辅助蛋白AP2基因,并进行序列分析。方法根据GenBank公布的牛源无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a的AP2基因序列,使用生物信息学软件Primer5.0设计1对特异性引物,以内蒙古东部地区乳源无乳链球菌临床菌株总DNA为模板,扩增AP2基因片段。结果扩增的AP2基因经克隆测序,长度为699bp,其序列与GenBank上公布的牛源无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a的AP2基因(EU930008)相似性为99.57%,编码233个氨基酸残基,有2个核苷酸出现突变,但是氨基酸序列没有发生改变,属于无意义突变。结论成功克隆出内蒙古东部地区牛乳腺炎无乳链球菌PI-2a菌毛岛屿AP2基因,为进一步研究AP2基因编码蛋白的抗原性奠定了基础。 展开更多
关键词 菌毛岛屿 AP2基因 克隆 序列分析
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