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PhoQ基因重组鼠伤寒沙门氏菌株的构建及毒力研究
1
作者 刘胜贵 胡兴 +1 位作者 刘卫今 刘良科 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期32-36,共5页
应用PCR技术从鼠伤寒沙门氏菌基因组DNA中克隆phoQ基因片段,构建原核表达pUC18重组质粒,测定序列(GenBank登录号为DQ787014),并转入鼠伤寒沙门氏菌,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,进行高效表达。对重组菌株、野生菌株进行毒力检测对... 应用PCR技术从鼠伤寒沙门氏菌基因组DNA中克隆phoQ基因片段,构建原核表达pUC18重组质粒,测定序列(GenBank登录号为DQ787014),并转入鼠伤寒沙门氏菌,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,进行高效表达。对重组菌株、野生菌株进行毒力检测对比实验,通过口腔注入45日龄健康无菌KM小鼠,测定其半数致死量(LD50)。结果发现:重组菌株与野生菌株的毒力存在显著差异,其半致死量分别为3.981×107cfu/mland5.012×102cfu/ml,PhoQ基因重组菌株的毒力远远低于非重组菌株。说明phoQ基因是调节鼠伤寒沙门氏菌致病机制中一个重要的调节因子。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门氏茵 phoq基因 重组菌株 毒力
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CpxR对鼠伤寒沙门菌的黏菌素耐药相关基因pmrB和phoQ调控作用的研究 被引量：3
2
作者 翟亚军 梁军 +5 位作者 魏单单 孙华润 潘玉善 吴华 刘建华 胡功政 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1284-1291,共8页
为了探索 cpxR 对鼠伤寒沙门菌的黏菌素耐药相关基因 pmrB 和 phoQ 的调控作用,用overlapping PCR扩增得到 cpxR 、 pmrB 和 cpxR 、 phoQ 共表达基因 cpxR - pmrB 、 cpxR - phoQ ,用2倍微量肉汤稀释法对构建的 pmrB 、 phoQ 单基因过... 为了探索 cpxR 对鼠伤寒沙门菌的黏菌素耐药相关基因 pmrB 和 phoQ 的调控作用,用overlapping PCR扩增得到 cpxR 、 pmrB 和 cpxR 、 phoQ 共表达基因 cpxR - pmrB 、 cpxR - phoQ ,用2倍微量肉汤稀释法对构建的 pmrB 、 phoQ 单基因过表达菌株JSΔ acrB Δ cpxR :: kan /p pmrB (JSΔΔ/p B )、JSΔ acrB Δ cpxR :: kan /p phoQ (JSΔΔ/p Q )和 cpxR - pmrB 、 cpxR - phoQ 共表达菌株JSΔ acrB Δ cpxR :: kan /p cpxR - pmrB (JSΔΔ/p RB )、JSΔ acrB Δ cpxR :: kan /p cpxR - phoQ (JSΔΔ/p RQ )进行黏菌素最小抑菌浓度(MICs)的测定,同时以各菌株在LB中的OD 600 nm 值绘制生长曲线,以各菌株在不同浓度的黏菌素中的存活率绘制杀菌曲线。结果:成功构建的鼠伤寒沙门菌 pmrB 、 phoQ 的单基因过表达菌株JSΔΔ/p B 、JSΔΔ/p Q 和 cpxR - pmrB 、 cpxR - phoQ 共表达菌株JSΔΔ/p RB 、JSΔΔ/p RQ 的MIC结果显示,JSΔ acrB Δ cpxR :: kan /p cpxR (JSΔΔ/p R )的MIC值较JS下降93.75%,与本实验室前期研究结果一致。JSΔΔ/p B 、JSΔΔ/p Q 的MIC值较JS均上升3倍,而JSΔΔ/p RB 、JSΔΔ/p RQ 的MIC值较JS分别降低50%和75%。生长曲线结果显示JSΔΔ/p R 的生长活性最低,JSΔΔ/p B 、JSΔΔ/p Q 、JSΔΔ/p RB 和JSΔΔ/p RQ 的生长活性均低于JSΔ acrB Δ cpxR :: kan /pHisA(JSΔΔ/pHisA)。黏菌素的杀菌曲线结果显示JSΔΔ/p B 和JSΔΔ/p Q 在不同浓度的黏菌素中的存活率显著高于黏菌素较敏感的JSΔΔ/p RB 和JSΔΔ/p RQ 。上述结果表明:CpxR能够通过PmrB和PhoQ调控鼠伤寒沙门菌对黏菌素的敏感性。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门菌 黏菌素 cpxR pmrB phoq 调控作用
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沙门菌PhoP-PhoQ双组分信号转导系统 被引量：4
3
作者 陈嘉瑜 蔡霞 瞿涤 《微生物与感染》 2010年第4期239-242,共4页
PhoP-PhoQ是调控沙门菌毒力的重要双组分信号转导系统,由组氨酸蛋白激酶PhoQ和反应调节蛋白PhoP组成。PhoP-PhoQ可调节沙门菌对Mg2+及其他周质环境的适应性,并调控沙门菌感染中毒力基因的转录和表达。PhoP-PhoQ调控的毒力基因参与沙门... PhoP-PhoQ是调控沙门菌毒力的重要双组分信号转导系统,由组氨酸蛋白激酶PhoQ和反应调节蛋白PhoP组成。PhoP-PhoQ可调节沙门菌对Mg2+及其他周质环境的适应性,并调控沙门菌感染中毒力基因的转录和表达。PhoP-PhoQ调控的毒力基因参与沙门菌对上皮细胞的侵袭、胞内生存、对抗菌肽的抵抗反应、脂质A的修饰、Ⅲ型分泌系统效应蛋白的分泌等环节。PhoP-PhoQ还可与其他双组分信号转导系统或调节子合作,调控沙门菌的毒力。因此,PhoP-PhoQ双组分信号转导系统在沙门菌的毒力调控中发挥重要作用。 展开更多
关键词 PHOP-phoq 镁离子 双组分信号转导系统
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二元调控系统PhoP-PhoQ在细菌中的调控作用 被引量：2
4
作者 秦珑 杨瑞馥 《生物技术通讯》 CAS 2006年第3期402-404,共3页
PhoP-PhoQ是一种二元调控系统,它调控着细菌的毒力,参与细菌对Mg2+限制性生长环境的适应,而且还调节几种革兰阴性细菌的许多细胞活性。本文对PhoP-PhoQ感知Mg2+浓度的变化、与靶基因的启动子区结合引起靶基因的上调和下调,尤其是对脂质... PhoP-PhoQ是一种二元调控系统,它调控着细菌的毒力,参与细菌对Mg2+限制性生长环境的适应,而且还调节几种革兰阴性细菌的许多细胞活性。本文对PhoP-PhoQ感知Mg2+浓度的变化、与靶基因的启动子区结合引起靶基因的上调和下调,尤其是对脂质A的结构修饰和细菌毒力的调控作用作一介绍。 展开更多
关键词 PhoP-phoq二元调控系统 转录调控 MG^2+ 脂质A 毒力
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Phoq介导甘蔗白条黄单胞菌致病力的机制初探
5
作者 陈文浛 李美霖 +4 位作者 吴登 杜金霞 熊丽娅 胡琴 张木清 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期985-994,共10页
甘蔗白条病是一种由白条黄单胞菌(Xanthomonas albilineans,Xa)引起的细菌性病害,明确Xa的致病机理对甘蔗白条病的防治具有重要意义。在以往的研究中,双组分系统中跨膜的组氨酸蛋白激酶Phoq通过感受外界信号,激活胞内激酶活性,进而调节... 甘蔗白条病是一种由白条黄单胞菌(Xanthomonas albilineans,Xa)引起的细菌性病害,明确Xa的致病机理对甘蔗白条病的防治具有重要意义。在以往的研究中,双组分系统中跨膜的组氨酸蛋白激酶Phoq通过感受外界信号,激活胞内激酶活性,进而调节下游基因的转录水平,是黄单胞菌中重要的信号传递因子。本研究收集了包括Xa在内的能引发植物病害的8种黄单胞菌的Phoq蛋白序列。经过系统发育分析、蛋白质保守基序预测等,发现这8种黄单胞菌中的Phoq蛋白质结构保守,且具有相似的理化性质。进一步采用同源重组双交换的方法对Xa-JG43菌株中的phoq基因进行敲除,发现Xa-phoq敲除突变体的游动性和致病性相比野生型菌株明显减弱,但涌动性和抗胁迫能力不变,而Xa-phoq基因回补菌株的这些性状又恢复至野生型水平,表明Xa-phoq基因是菌体维持运动性和致病性所必需的。研究结果为进一步确定Xa的致病机理奠定了基础。 展开更多
关键词 甘蔗白条病 白条黄单胞菌 phoq基因 运动能力 致病性
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铜绿假单胞菌phoQ基因敲除对氨基糖苷类抗生素耐药性的影响 被引量：2
6
作者 汪浙炯 夏肖萍 +2 位作者 楼宏强 孙爱华 严杰 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期801-806,共6页
目的分析氨基糖苷类抗生素敏感或耐药铜绿假单胞菌菌株二元信号系统PhoQ/PhoP编码基因序列并确定该系统与耐药性关系。方法采用PCR获得铜绿假单胞菌菌株全长phoQ和phoP基因片段，T—A克隆后测序。构建phoQ和phoP基因原核表达系统，Ni-NT... 目的分析氨基糖苷类抗生素敏感或耐药铜绿假单胞菌菌株二元信号系统PhoQ/PhoP编码基因序列并确定该系统与耐药性关系。方法采用PCR获得铜绿假单胞菌菌株全长phoQ和phoP基因片段，T—A克隆后测序。构建phoQ和phoP基因原核表达系统，Ni-NTA亲和层析法提纯目的重组表达产物rPhoQ和rPhoP，皮内注射免疫法制备兔抗血清，免疫双扩散法测定抗血清效价。采用Red重组系统敲除氨基糖苷类抗生素耐药铜绿假单胞菌菌株phoQ基因，采用PCR、测序和Westernblot对phoQ。突变株进行鉴定。采用试管稀释法测定各铜绿假单胞菌野生株和突变株对4种氨基糖苷类抗，丰素的最低抑菌浓度（MIC）。结果与GenBank中相关序列比较，所克隆的phoP和phoQ基因核苷酸和氨基酸相似性分别为98．7％一99．6％和98．7～100％、98．4％～99．8％和99．1％～100％。采用pET-42a和E．coliB121DE3系统成功地表达了rPhoQ和rPhoP。rPhoQ和rPhoP兔抗血清免疫双扩效价分别为1：4和1：8抗血清。经PCR、测序和Westernblot鉴定，两株phoQ^-突变株phoQ基因及产物均缺失。上述phoQ^-突变株对4种氨基糖苷类抗生素的MIC值分别为其野生株的1／512～1／2048。结论PhoQ／PhoP是序列保守的铜绿假单胞菌二元信号转导系统，该系统介导细菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 phoq/phoP基因 基因敲除 氨基糖苷类抗生素
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二元调控系统在铜绿假单胞菌耐药机制中的作用 被引量：2
7
作者 林小静 张瑞凌 刘书花 《中国实验方剂学杂志》 CAS 北大核心 2011年第1期205-208,共4页
铜绿假单胞菌是革兰阴性条件性人类致病菌,在环境中广泛存在,并且能引起严重的医院内感染。二元调控系统能够感受多种环境刺激并且做出恰当而快速的适应性生理反应,二元调控系统也参与了细菌的抗生素耐药性形成机制。主要的二元调控系... 铜绿假单胞菌是革兰阴性条件性人类致病菌,在环境中广泛存在,并且能引起严重的医院内感染。二元调控系统能够感受多种环境刺激并且做出恰当而快速的适应性生理反应,二元调控系统也参与了细菌的抗生素耐药性形成机制。主要的二元调控系统包括PhoP-PhoQ,PmrA-PmrB,CzcR-CzcS,CopR-CopS,GacA-GacS,RetS,LadS等,本文总结了目前已经发现的二元调控系统调节铜绿假单胞菌抗生素耐药性的机制,为解决抗生素耐药问题提供了新的治疗靶点。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 二元调控系统 耐药性 PhoP—phoq
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牛肉低温贮藏环境中沙门氏菌诱导耐酸响应的存在程度及其产生机制 被引量：2
8
作者 郎晨晓 张一敏 +6 位作者 朱立贤 梁荣蓉 毛衍伟 杨啸吟 韩广星 罗欣 董鹏程 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第6期68-74,共7页
研究牛肉生产和销售过程中沙门氏菌诱导耐酸响应(acid tolerance response,ATR)的存在程度及其产生机制。探究微酸诱导、双组分基因敲除、低温长期贮藏对沙门氏菌耐酸能力的影响,同时借助λRed同源重组、实时聚合酶链式反应(real-time p... 研究牛肉生产和销售过程中沙门氏菌诱导耐酸响应(acid tolerance response,ATR)的存在程度及其产生机制。探究微酸诱导、双组分基因敲除、低温长期贮藏对沙门氏菌耐酸能力的影响,同时借助λRed同源重组、实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)及氨基酸添加实验探索菌株耐酸性产生的内在机理。结果表明,微酸诱导能够显著增强沙门氏菌的耐酸能力(P<0.05),并且ATR一旦形成,在牛肉低温贮藏(4℃)的过程中至少可以维持7 d,对食品安全有极大危害。牛肉培养基作为微酸的细菌生长介质,在低温下其本身并不能引发沙门氏菌产生ATR,说明低温处理可能是抑制沙门氏菌ATR的重要方法。real-time PCR和氨基酸添加实验表明,沙门氏菌的双组分系统PhoP/PhoQ和PmrA/PmrB均参与酸性环境的感知,并能通过调控精氨酸脱羧和赖氨酸脱羧系统提高菌株的耐酸性,这从氨基酸代谢角度解释了沙门氏菌诱导ATR的产生机制,同时也揭示了食品基质提升微生物耐酸性这一表观现象的内在机理。 展开更多
关键词 牛肉 沙门氏菌 诱导耐酸响应 双组分调控系统 PhoP/phoq PmrA/PmrB 食品安全
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基于RNA-Seq筛选APEC及其PhoP/Q缺失株感染雏鸡肠道免疫相关基因 被引量：3
9
作者 徐柳柳 祁克宗 +3 位作者 涂健 宋祥军 薛媚 王琦 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期159-164,共6页
本研究以禽致病性大肠杆菌(APEC)及其PhoP/Q缺失株感染雏鸡小肠为模型,以分析其免疫相关基因的表达变化为目的,采用转录组测序(RNA-Seq)技术对感染APEC及其PhoP/Q缺失株的雏鸡小肠样本RNA进行测序,分析免疫相关基因的表达变化,结果为野... 本研究以禽致病性大肠杆菌(APEC)及其PhoP/Q缺失株感染雏鸡小肠为模型,以分析其免疫相关基因的表达变化为目的,采用转录组测序(RNA-Seq)技术对感染APEC及其PhoP/Q缺失株的雏鸡小肠样本RNA进行测序,分析免疫相关基因的表达变化,结果为野生株攻毒组与对照组相比、野生株攻毒组与缺失株攻毒组相比、缺失株攻毒组与对照组相比,分别筛选出131、105、172个差异表达基因(fold change≥2, FDR≤0.05),GO功能分类结果显示分别有87、99、159个基因得到注释,这些基因主要富集到氧化还原过程、脂蛋白转运、血管内皮细胞迁移、免疫反应、凋亡过程负调控、肝素结合、铁离子结合、CCR趋化因子受体结合等功能,得出APEC及其PhoP/Q缺失株感染雏鸡后引起机体肠道免疫相关基因变化的结论,根据GO功能注释筛选出PTPRC、LCP1、YFV等免疫相关基因,为深入研究雏鸡肠道免疫提供依据。 展开更多
关键词 禽致病性大肠杆菌 PhoP/phoq二元调控系统 雏鸡小肠 转录组测序 免疫相关基因
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