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弓形虫pcDNA3-ROP1 DNA疫苗免疫小鼠诱导体液免疫应答及保护性的初步观察 被引量：6
1
作者 李薇 刘波 丑莉莉 《北华大学学报（自然科学版）》 CAS 2008年第3期239-240,共2页
目的观察弓形虫pcDNA3-ROP1DNA疫苗免疫BALB／C小鼠诱导其体内产生的体液免疫应答及抗虫感染的免疫保护作用．方法重组质粒用生理盐水稀释后，肌注免疫BALB／C小鼠．分别于免疫后5周和10周用ELISA法测定IgG抗体滴度；免疫鼠腹腔注射弓... 目的观察弓形虫pcDNA3-ROP1DNA疫苗免疫BALB／C小鼠诱导其体内产生的体液免疫应答及抗虫感染的免疫保护作用．方法重组质粒用生理盐水稀释后，肌注免疫BALB／C小鼠．分别于免疫后5周和10周用ELISA法测定IgG抗体滴度；免疫鼠腹腔注射弓形虫速殖子攻击感染．结果经两次检测，均可测到特异性IgG抗体，且抗体的滴度随免疫时间的延长而增高；弓形虫速殖子腹腔攻击感染免疫组小鼠的平均存活时间较对照组延长，统计学有显著性差异（P〈0．01）．结论弓形虫pcDNA3-ROP1质粒DNA疫苗能诱导BALB／C小鼠产生特异性体液免疫应答及部分抗虫免疫保护作用． 展开更多
关键词 弓形虫 pcdna3-rop1 DNA疫苗 体液免疫
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弓形虫ROP1基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究Ⅰ.pcDNA3-ROP1真核表达重组质粒的构建 被引量：14
2
作者 郭虹 陈观今 +2 位作者 周永安 郑焕钦 刘彦文 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1999年第1期3-5,共3页
目的构建弓形虫ＺＳ２株ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１真核表达重组质粒，为进一步表达及ＤＮＡ免疫做准备。方法用ＰＣＲ技术从弓形虫ＺＳ２分离株的基因组ＤＮＡ中扩增编码棒状体蛋白１（ＲＯＰ１）的基因片段，重组入ｐＵＣ１８克隆载体。... 目的构建弓形虫ＺＳ２株ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１真核表达重组质粒，为进一步表达及ＤＮＡ免疫做准备。方法用ＰＣＲ技术从弓形虫ＺＳ２分离株的基因组ＤＮＡ中扩增编码棒状体蛋白１（ＲＯＰ１）的基因片段，重组入ｐＵＣ１８克隆载体。将ｐＵＣ１８－ＲＯＰ１中的ＲＯＰ１外源基因片段经酶切、连接等反应，亚克隆入ｐｃＤＮＡ３真核表达载体，再经含氨苄ＬＢ培养基筛选，酶切、ＰＣＲ鉴定。结果从ＺＳ２株基因组ＤＮＡ中扩增出特异的ＲＯＰ１基因片段，克隆成功ｐＵＣ１８－ＲＯＰ１；经亚克隆，筛选鉴定获得了ｐｃＤＮＡ－ＲＯＰ１重组质粒。结论构建成功弓形虫ｐＵＣ１８－ＲＯＰ１重组质粒，亚克隆成功ｐｃＤＮＡ－ＲＯＰ１重组质粒。 展开更多
关键词 克隆 重组质粒 弓形体病 ROP1基因 DNA免疫
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人可溶性白介素-1受体真核表达载体pcDNA3/sIL-1R的构建 被引量：4
3
作者 李鹏 徐艳 +2 位作者 张蕴惠 章锦才 王大章 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期140-143,共4页
目的　本研究旨在构建人可溶性白介素_1受体 (sIL_1R)真核表达载体pcDNA3 sIL_1R ,为研究骨关节病的基因治疗奠定实验基础。方法　将人sIL_1R基因的RT_PCR纯化产物及质粒pcDNA3 1(+)DNA经KpnI和XhoI双酶切、胶回收纯化酶切片段后 ,体外... 目的　本研究旨在构建人可溶性白介素_1受体 (sIL_1R)真核表达载体pcDNA3 sIL_1R ,为研究骨关节病的基因治疗奠定实验基础。方法　将人sIL_1R基因的RT_PCR纯化产物及质粒pcDNA3 1(+)DNA经KpnI和XhoI双酶切、胶回收纯化酶切片段后 ,体外连接酶切片段 ,使其定向重组 ,再将重组DNA转化E .coliCompetentCellsJM10 9,经复苏后 ,在含Ampr 的LB固体培养基上筛选出阳性克隆。结果　挑取的LB固体培养基上的 6个单菌落经酶切及测序鉴定 ,证实均为阳性克隆 ,即sIL_1R与pcDNA3 1(+)体外重组成功。结论　采用体外重组技术 ,成功地将人sIL_1RcDNA插入了真核表达载体pcDNA3 1(+) 展开更多
关键词 人可溶性白介素-1受体 真核表达载体 pcdna3 骨关节病 基因治疗
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核酸疫苗pcDNA3-γcC1诱导囊尾蚴细胞凋亡的作用 被引量：7
4
作者 孙树汉 郭瀛军 +1 位作者 陈蕊雯 杨桦 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第11期1090-1091,I002,共3页
目的 :观察核酸疫苗 pc DNA3- γc C1免疫接种后动物宿主体内囊尾蚴的细胞凋亡现象 ,探讨治疗型核酸疫苗的作用机制。 方法 :分离、培养囊尾蚴混合细胞 ,用原位末端标记 (TUNEL)法分别检测免疫接种组、非接种组以及培养诱导对照组细胞... 目的 :观察核酸疫苗 pc DNA3- γc C1免疫接种后动物宿主体内囊尾蚴的细胞凋亡现象 ,探讨治疗型核酸疫苗的作用机制。 方法 :分离、培养囊尾蚴混合细胞 ,用原位末端标记 (TUNEL)法分别检测免疫接种组、非接种组以及培养诱导对照组细胞凋亡情况。结果 :非接种组 ,且未经凋亡诱导的细胞核无凋亡所特有的阳性着色 ;经诱导或免疫接种组的细胞核均表现为极强的凋亡所特有的阳性着色。 结论 :首次观察到核酸疫苗接种后引起寄生生物细胞凋亡的现象 。 展开更多
关键词 核酸疫苗 囊尾蚴 细胞凋亡 pcdna3-γcC1
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弓形虫和乙型肝炎病毒混合核酸疫苗的研究Ⅱ.pcDNA3-HBsAg-GRA1在COS-7细胞中的表达及鉴定 被引量：5
5
作者 王丹静 舒衡平 +3 位作者 秦志强 蔡力汀 吴翔 蒋立平 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第1期49-51,共3页
目的　鉴定pcDNA3 HBsAg GRA1在哺乳动物细胞内是否表达目的蛋白。 方法　提取pcDNA3 HBsAg GRA1质粒 ;体外培养COS 7细胞 ;pcDNA3 HBsAg GRA1经脂质体转染体外培养的COS 7细胞 ;取转染后的细胞培养上清进行SDS PAGE ,Western blot鉴定... 目的　鉴定pcDNA3 HBsAg GRA1在哺乳动物细胞内是否表达目的蛋白。 方法　提取pcDNA3 HBsAg GRA1质粒 ;体外培养COS 7细胞 ;pcDNA3 HBsAg GRA1经脂质体转染体外培养的COS 7细胞 ;取转染后的细胞培养上清进行SDS PAGE ,Western blot鉴定。结果　成功将pcDNA3 HBsAg GRA1转染入COS 7细胞。转染的细胞能高效表达分子为 4 7kD分泌性融合蛋白 (HBsAg GRA1)。HBsAg GRA1能同时被HBsAb阳性人血清及弓形虫免疫兔血清所识别。 结论　pcDNA3 HB sAg GRA1在体外培养的COS 7细胞中高效表达与预期分子量大小相同 ,且具有免疫学活性的融合蛋白。 展开更多
关键词 pcdna3-HBsAg—GRA1 表达 COS-7细胞 弓形虫
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猪囊尾蚴病重组DNA疫苗pcDNA3．1-TSO45W在小鼠体内诱导的体液免疫效应 被引量：3
6
作者 王媛媛 杨小迪 +5 位作者 孙新 陶志勇 常雪莲 王小莉 方强 夏惠 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第3期242-244,248,共4页
目的观察基于六钩蚴期的猪囊尾蚴病基因疫苗TS045W诱导的小鼠体液免疫应答。方法碱裂解法大量制备重组质粒pcDNA3．1TS045W及对照质粒pcDNA3．1。将45只雌性昆明小鼠（4～6周）随机分为3组，每组15只。A组（生理盐水组）：每只小鼠肌肉... 目的观察基于六钩蚴期的猪囊尾蚴病基因疫苗TS045W诱导的小鼠体液免疫应答。方法碱裂解法大量制备重组质粒pcDNA3．1TS045W及对照质粒pcDNA3．1。将45只雌性昆明小鼠（4～6周）随机分为3组，每组15只。A组（生理盐水组）：每只小鼠肌肉注射生理盐水100ul；B组（空质粒pcDNA3．1对照组）：每只小鼠肌肉注射空质粒l。0扯g；C组（重组质粒pcDNA3．1-TSO45W组）：每只小鼠肌肉注射重组质粒100肛g。分别于免疫后2、4、6、8、10周以ELISA方法检测小鼠血清免疫球蛋白IgG，IgM及IgA含量。结果pcDNA3．1-TSO45—4B免疫组小鼠血清IgG、IgM、IgA均于第4周开始升高，分别为（17．36±1．85）μg／ml、（9．25±1．78）μg／ml和（9．41±0．88）μg／ml，并分别于第8、第6、第8周达到最高，含量分别为（24．26±2．52）μg／ml、（10．69±0．52）μg／ml和（11．22±1．23）μg／ml，与空质粒对照组（B组）和生理盐水对照组（A组）比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论猪囊尾蚴保护性抗原TSO45WDNA疫苗能在小鼠体内诱导体液免疫效应。 展开更多
关键词 猪囊尾蚴 pcdna 3 1-TS045W 疫苗 体液免疫
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堆型艾美耳球虫pcDNA3-3-1E重组表达质粒的免疫保护性 被引量：3
7
作者 赵月兰 王建永 +2 位作者 卢军霞 包永占 秦建华 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1138-1141,共4页
将堆型艾美耳球虫保定株裂殖子3-1E基因,插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组表达质粒pcDNA-3-1E,用碱裂解法大量提取重组表达质粒,纯化后免疫接种1周龄雏鸡。分别设高(100μg)、中(50μg)、低(25μg)3个剂量组,同时设活卵囊接种... 将堆型艾美耳球虫保定株裂殖子3-1E基因,插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组表达质粒pcDNA-3-1E,用碱裂解法大量提取重组表达质粒,纯化后免疫接种1周龄雏鸡。分别设高(100μg)、中(50μg)、低(25μg)3个剂量组,同时设活卵囊接种组、非免疫感染组和健康对照组。在7日龄时首免,14日龄加强免疫,1周后用2.5×105个E.acervulina保定株球虫孢子化卵囊进行攻毒试验。结果显示50μg的剂量可使试验鸡产生较强的抗球虫效果,攻虫鸡的卵囊产量下降67.67%,肠道病变记分降低66.96%,并使鸡的相对增重率达88.36%,ACI值为176.06。 展开更多
关键词 堆型艾美耳球虫 裂殖子 重组表达质粒pcdna3-3-1E 免疫
原文传递
弓形虫和乙型肝炎病毒混合核酸疫苗的研究Ⅰ.pcDNA3-HBsAg-GRA1真核表达质粒的构建及鉴定 被引量：3
8
作者 王丹静 舒衡平 +2 位作者 蔡力汀 吴翔 蒋立平 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第2期122-125,共4页
目的　构建 pcDNA3-HBsAg -GRA1真核表达质粒 ,为提高弓形虫DNA疫苗保护性做出新的探索 ,并期望“一 / +-苗两用”。方法　采用PCR分别扩增HBsAg、GRA1;经BclⅠ、EcoRⅠ双酶切HBsAg ;EcoRⅠ、XhoⅠ双酶切GRA1;BamHⅠ、XhoⅠ双酶切载体 p... 目的　构建 pcDNA3-HBsAg -GRA1真核表达质粒 ,为提高弓形虫DNA疫苗保护性做出新的探索 ,并期望“一 / +-苗两用”。方法　采用PCR分别扩增HBsAg、GRA1;经BclⅠ、EcoRⅠ双酶切HBsAg ;EcoRⅠ、XhoⅠ双酶切GRA1;BamHⅠ、XhoⅠ双酶切载体 pcDNA3 0 ;HBsAg、GRA1、pcDNA3 0双酶切纯化产物与T4DNA连接酶在 2 2℃连接过夜 ,用双酶切及双脱氧末端终止法测序鉴定重组质粒。结果　成功构建pcDNA3-HBsAg -GRA1真核表达质粒。结论　为进一步研究 pcD NA3-HBsAg -GRA1诱导的保护性免疫奠定了基础。 展开更多
关键词 弓形虫 乙型肝炎病毒 混合核酸疫苗 I.pcdna3-HBsAg—GRA1 真核表达质粒 构建 鉴定
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猪囊尾蚴病重组DNA疫苗pcDNA3.1-TSO45-4B在小鼠体内的表达及诱导的细胞免疫效应 被引量：2
9
作者 王媛媛 孙新 +6 位作者 方强 胡守锋 杨小迪 张莺莺 陈兴智 王雪梅 夏惠 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2007年第4期262-265,共4页
目的观察基于六钩蚴期的猪囊尾蚴病基因疫苗pcDNA3.1-TSO45-4B在小鼠体内的表达及诱导的小鼠细胞免疫应答。方法将真核重组表达质粒pcDNA3.1-TSO45-4B肌注小鼠,RT-PCR方法扩增出目的条带;ELISA方法检测小鼠血清细胞因子IL-2、IL-4及IFN... 目的观察基于六钩蚴期的猪囊尾蚴病基因疫苗pcDNA3.1-TSO45-4B在小鼠体内的表达及诱导的小鼠细胞免疫应答。方法将真核重组表达质粒pcDNA3.1-TSO45-4B肌注小鼠,RT-PCR方法扩增出目的条带;ELISA方法检测小鼠血清细胞因子IL-2、IL-4及IFN-γ含量。结果RT-PCR产物为单一条带,大小为456bp,与TSO45-4B大小一致。免疫小鼠第2周细胞因子含量达到较高水平,第4周达到最高水平,第8周开始下降。结论基于猪囊尾蚴保护性抗原TSO45-4B的DNA疫苗能在小鼠体内表达并有效诱导细胞免疫效应。 展开更多
关键词 猪囊尾蚴 pcdna 3 1-TSO45—4B 疫苗 RT—PCR 细胞免疫
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重组质粒pcDNA3.1/SurP/Trail联合吉西他滨诱导胰腺癌细胞凋亡的实验研究 被引量：2
10
作者 陈培生 邓三花 +3 位作者 王伟飞 何锋坚 何琼 岳辉 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2015年第1期72-74,共3页
目的研究重组质粒pc DNA3.1/Sur P/Trail联合吉西他滨诱导胰腺癌细胞凋亡的能力。方法将人胰腺癌细胞株SW1990分为4组,第1组转染重组质粒联合吉西他滨(联合组),第2组单纯转染重组质粒(重组质粒组),第3组单纯加入吉西他滨(吉西他滨组),第... 目的研究重组质粒pc DNA3.1/Sur P/Trail联合吉西他滨诱导胰腺癌细胞凋亡的能力。方法将人胰腺癌细胞株SW1990分为4组,第1组转染重组质粒联合吉西他滨(联合组),第2组单纯转染重组质粒(重组质粒组),第3组单纯加入吉西他滨(吉西他滨组),第4组未加任何处理(空白对照组)。通过Western blotting检测各组细胞中Trail蛋白表达的情况,并用流式细胞仪检测SW1990胰腺癌细胞凋亡率。结果 (1)重组质粒组、联合组均有Trail蛋白表达,吉西他滨组、空白对照组则无Trail蛋白表达;(2)联合组SW1990细胞凋亡率显著高于其他各组(P<0.05);重组质粒组和吉西他滨组SW1990细胞凋亡率显著高于空白对照组(P<0.05);重组质粒组与吉西他滨组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论重组质粒pc DNA3.1/Sur P/Trail与吉西他滨联可显著提高SW1990胰腺癌细胞的凋亡率。 展开更多
关键词 基因治疗 pcdna3. 1/SurP/Trail 吉西他滨 凋亡
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脂质体载体pcDNA3-TGF-β1基因治疗延长同种心脏移植物存活的研究 被引量：1
11
作者 赵波 刘云 +1 位作者 宫念樵 叶启发 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第24期3721-3723,3726,共4页
目的观察脂质体载体pcDNA3-TGF-β1基因治疗对同种心脏移植物存活的影响。方法大量扩增pcDNA3-TGF-β1,制备脂质体-靶基因混合物及杂交探针,建立同种心脏移植模型,行脂质体载体pcD-NA3-TGF-β1基因转染,观察移植后5d心肌细胞中TGF-β1m... 目的观察脂质体载体pcDNA3-TGF-β1基因治疗对同种心脏移植物存活的影响。方法大量扩增pcDNA3-TGF-β1,制备脂质体-靶基因混合物及杂交探针,建立同种心脏移植模型,行脂质体载体pcD-NA3-TGF-β1基因转染,观察移植后5d心肌细胞中TGF-β1mRNA表达状况和移植心脏病理改变,观察受体存活情况。结果移植后5d脂质体载体pcDNA3-TGF-β1基因治疗组心肌细胞中TGF-β1mRNA原位杂交阳性表达率为11%,移植心脏排斥反应病理改变明显延缓,同种心脏移植物存活明显延长,但未诱导出长期存活。结论脂质体载体pcDNA3-TGF-β1基因治疗延长了同种心脏移植物的存活。 展开更多
关键词 基因治疗 脂质体 pcdna3-TGF—β 1 心脏移植
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弓形虫真核表达质粒pcDNA3/GRA1的构建及序列测定 被引量：1
12
作者 蔡力汀 舒衡平 +2 位作者 蒋立平 吴翔 王丹静 《湖南医科大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第3期221-223,共3页
目的 :构建弓形虫致密颗粒抗原 1 (GRA1 )真核表达质粒 ,为进一步开展DNA疫苗的保护性研究打下基础。方法 :采用PCR扩增出编码GRA1目的基因 ,用EcoRⅠ /XhoⅠ分别对扩增产物和真核表达质粒pcDNA3进行双酶切 ,将GRA1定向克隆到pcDNA3Eco... 目的 :构建弓形虫致密颗粒抗原 1 (GRA1 )真核表达质粒 ,为进一步开展DNA疫苗的保护性研究打下基础。方法 :采用PCR扩增出编码GRA1目的基因 ,用EcoRⅠ /XhoⅠ分别对扩增产物和真核表达质粒pcDNA3进行双酶切 ,将GRA1定向克隆到pcDNA3EcoRⅠ /XhoⅠ位点 ;对重组质粒进行PCR ,双酶切初步鉴定后做序列测定。结果 :特异扩增出预计的GRA1片段 ,大小为 5 73bp ;扩增产物双酶切后成功连接到pcDNA3中 ,经PCR ,双酶切及序列测定结果表明重组质粒中含有GRA1读框。结论 :成功构建弓形虫GRA1真核表达质粒。 展开更多
关键词 弓形虫 真核表达 质粒 pcdna3/GRA1 构建 序列测定
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pcDNA3.1(+)-SAA真核表达载体构建、转染及其对人鼻咽癌细胞CNE-2增殖的影响 被引量：1
13
作者 江青山 肖桃源 +1 位作者 邓文蓉 沈宝茗 《山东医药》 CAS 2013年第47期8-10,共3页
目的构建pcDNA3.1(+)-血清淀粉样蛋白A(SAA)真核表达载体,观察其在人鼻咽癌细胞CNE-2中的表达及对CNE-2增殖的影响。方法以CNE-2细胞的cDNA为模板,通过PCR扩增得到SAA片段,经酶切、纯化后与pcDNA3.1(+)连接;重组质粒经酶切分析及测序鉴... 目的构建pcDNA3.1(+)-血清淀粉样蛋白A(SAA)真核表达载体,观察其在人鼻咽癌细胞CNE-2中的表达及对CNE-2增殖的影响。方法以CNE-2细胞的cDNA为模板,通过PCR扩增得到SAA片段,经酶切、纯化后与pcDNA3.1(+)连接;重组质粒经酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染法转染人鼻咽癌细胞CNE-2,用Western blot法检测转染前后该细胞中SAA蛋白的表达,并用MTT法检测转染重组质粒后的细胞增殖情况。结果 pcDNA3.1(+)-SAA经酶切、测序鉴定完全正确,真核表达载体构建成功;转染pcDNA3.1(+)-SAA真核表达载体后CNE-2细胞中SAA蛋白表达水平明显高增高;转染pcDNA3.1(+)-SAA后CNE-2细胞增殖速度加快。结论成功构建pcDNA3.1(+)-SAA真核表达载体,其能稳定表达于人鼻咽癌细胞CNE-2并促进细胞增殖;此为进一步研究SAA的生物学功能及鼻咽癌的新型治疗方法奠定了基础。 展开更多
关键词 pcdna3 1(+)-血清淀粉样蛋白A CNE-2细胞 转染 增殖
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pcDNA3与pIRES1.neo筛选克隆效率的比较 被引量：6
14
作者 谢庆军 王晓彤 陆应麟 《生物技术通讯》 CAS 2002年第2期115-117,共3页
将绿色荧光蛋白(GFP)报告基因分别插入pIRES1.neo与pcDNA3二真核表达载体,构建pGFP-IRES1.neo和pcDNA3-GFP,转染小鼠B16细胞和人HepG2细胞,经G418筛选出抗性克隆,在倒置荧光显微镜下观察,鉴定共表达克隆数;结果在两个细胞系中,pcDNA3-GF... 将绿色荧光蛋白(GFP)报告基因分别插入pIRES1.neo与pcDNA3二真核表达载体,构建pGFP-IRES1.neo和pcDNA3-GFP,转染小鼠B16细胞和人HepG2细胞,经G418筛选出抗性克隆,在倒置荧光显微镜下观察,鉴定共表达克隆数;结果在两个细胞系中,pcDNA3-GFP共表达率分别为0%和4%,而pIRES1.neo-GFP共表达率为75%和100%,差异非常显著;因此在筛选稳定表达目的基因细胞克隆的实验中,pIRES1.neo是一个较理想的载体。 展开更多
关键词 内部核糖体进入位点序列 绿色荧光蛋白 真核表达载体 克隆筛选效率 pcdna3 pIRES1.neo
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堆型艾美耳球虫重组质粒pcDNA3-1E在鸡体组织中的分布 被引量：1
15
作者 张丽娟 王建永 +2 位作者 乔榛 秦建华 赵月兰 《畜牧与兽医》 北大核心 2010年第4期62-64,共3页
为了探索堆型艾美耳球虫重组质粒pcDNA3-1E在雏鸡组织中的分布情况,将重组质粒pcDNA3-1E经肌肉注射免疫雏鸡,分别在免疫后15d、30d和60d剖杀雏鸡并采取各种组织,抽提各组织总基因组DNA进行PCR扩增后经琼脂糖凝胶电泳分析,并观察接种后... 为了探索堆型艾美耳球虫重组质粒pcDNA3-1E在雏鸡组织中的分布情况,将重组质粒pcDNA3-1E经肌肉注射免疫雏鸡,分别在免疫后15d、30d和60d剖杀雏鸡并采取各种组织,抽提各组织总基因组DNA进行PCR扩增后经琼脂糖凝胶电泳分析,并观察接种后雏鸡的临床特征。结果:免疫后15d各组织均可检测到3-1E基因,而免疫后30d和60d,仅在pcDNA3-1E质粒注射部位检测到3-1E基因,其他组织均未检测到3-1E基因;50μg的pcDNA3-1E质粒并未对雏鸡产生不良影响。由此表明堆型艾美耳球虫重组质粒pcDNA3-1E在雏鸡体内至少可存在15d,30d后质粒DNA仅分布于接种部位,并至少可持续60d,而且未发现异常临床表现。 展开更多
关键词 鸡 堆型艾美耳球虫 pcdna3—1E 分布
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弓形体重组质粒pcDNA_3-SAG1免疫小鼠诱导的细胞免疫应答研究 被引量：2
16
作者 周永安 陈观今 +1 位作者 郭虹 吕芳丽 《山西临床医药》 2001年第5期335-338,共4页
目的 :用 pc DNA3- SAG1真核表达质粒直接免疫小鼠 ,观察 DNA免疫所诱导的小鼠细胞免疫应答 ,为研制弓形虫疫苗奠定基础。方法 :大量制备重组质粒 pc DAN3- SAG1,然后将其导入 BAL B/ c小鼠体内 ,每隔 2 1d接种一次 ,一共免疫三次。用 ... 目的 :用 pc DNA3- SAG1真核表达质粒直接免疫小鼠 ,观察 DNA免疫所诱导的小鼠细胞免疫应答 ,为研制弓形虫疫苗奠定基础。方法 :大量制备重组质粒 pc DAN3- SAG1,然后将其导入 BAL B/ c小鼠体内 ,每隔 2 1d接种一次 ,一共免疫三次。用 MTT方法对脾脏的 NK细胞和其淋巴细胞的转化率进行测定 ;采用免疫荧光法对 CD4+、CD8+ 细胞进行测定。结果 :实验组 NK细胞杀伤率为 :70 .0± 3.6 4,而 pc DNA3及空白对照分别为 :48.5± 6 .0 8和 47.0± 5 .93。实验组 NK细胞活性比对照组明显增高 (P<0 .0 5 ) ,而 pc DNA3质粒及空白对照组差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ;对 T淋巴细胞亚群 CD4+、CD8+进行动态分析 ,可见随着感染时间的延长 ,CD8+的数量逐渐上升 ,CD4+ / CD8+的比率逐渐下降 ,实验组与 pc DNA3质粒及空白对照有明显差异 (P<0 .0 5 ) ;Con A刺激小鼠淋巴细胞转化实验 ,能刺激免疫鼠及对照鼠淋巴细胞增生 ,实验组与 pc DNA3质粒及空白对照组差异无显著性 (P>0 .0 5 )。结论 :重组质粒pc DNA3- SAG1免疫 BAL B/ c小鼠可诱导一定的细胞免疫。 展开更多
关键词 弓形体 重组质粒 pcdna3-SAG1 DNA疫苗 细胞免疫 免疫应答
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核酸疫苗pcDNA3cC1小鼠体内表达的血清学分析
17
作者 章亚南 何晓文 +4 位作者 王芳 姜磊 任丁 李德安 孙树汉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期957-958,共2页
关键词 疫苗 DNA pcdna3 cC1 cC1循环抗原
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堆型艾美耳球虫重组DNA质粒pcDNA3-3-1E的免疫原性
18
作者 常丽云 赵月兰 +2 位作者 刘义伟 张丽娟 秦建华 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1301-1303,共3页
用E.acervulina重组质粒pcDNA3-3-1E免疫雏鸡,观察其对雏鸡细胞免疫和体液免疫功能的影响。将7日龄雏鸡随机分为4组,即空白对照组、pcDNA3.1空质粒组、重组质粒免疫组和卵囊免疫组,每组30只。pcDNA3-3-1E经肌肉注射途径免疫雏鸡,剂量为5... 用E.acervulina重组质粒pcDNA3-3-1E免疫雏鸡,观察其对雏鸡细胞免疫和体液免疫功能的影响。将7日龄雏鸡随机分为4组,即空白对照组、pcDNA3.1空质粒组、重组质粒免疫组和卵囊免疫组,每组30只。pcDNA3-3-1E经肌肉注射途径免疫雏鸡,剂量为50μL/只(含质粒1g/L)。7日龄免疫1次,14日龄加强免疫1次。检测雏鸡血液T淋巴细胞增殖率,测定血清抗体水平。结果显示,与空质粒组和健康对照组相比,重组质粒组淋巴细胞的增殖能力明显增强(P<0.05),外周血中IgG的含量均显著升高(P<0.05),表明pcDNA3-3-1E裸质粒DNA能有效的提高雏鸡的细胞免疫和体液免疫水平。 展开更多
关键词 堆型艾美耳球虫 质粒pcdna3-3-1E 免疫原性
原文传递
phCMV1和pcDNA3表达人绒毛膜促性腺激素β-C3d3融合蛋白的表达效率比较
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作者 王秀丽 李大金 +1 位作者 袁敏敏 朱影 《生殖医学杂志》 CAS 2004年第4期205-212,共8页
目的　比较真核表达载体 phCMV1和pcDNA3在中国仓鼠卵巢 (CHO)细胞中表达人绒毛膜促性腺激素 β(hCGβ) C3d3融合蛋白的表达效率 ,以获得hCGβ C3d3融合蛋白的高效表达。　 方法　利用高效真核表达载体 phCMV1,构建带有 6个组氨酸纯化... 目的　比较真核表达载体 phCMV1和pcDNA3在中国仓鼠卵巢 (CHO)细胞中表达人绒毛膜促性腺激素 β(hCGβ) C3d3融合蛋白的表达效率 ,以获得hCGβ C3d3融合蛋白的高效表达。　 方法　利用高效真核表达载体 phCMV1,构建带有 6个组氨酸纯化标签的融合蛋白表达质粒phCMV1 6His hCGβ C3d3;脂质体法介导phCMV1 6His hCGβ C3d3和pcDNA3 hCGβ C3d3转染CHO细胞 ,G4 18(80 0 μg/ml)筛选抗性克隆 ,G4 18(30 0 μg/ml)维持培养、扩增 ,待阳性克隆 95 % 汇片时换用无血清培养基培养。放射免疫法检测hCGβ表达量 ,Westernblot鉴定表达产物 ,Raji细胞免疫化学染色法鉴定hCGβ与C3d分子的成功融合。反复冻存和复苏高效表达hCGβ C3d3融合蛋白的阳性克隆 ,比较表达效率的变化。用镍柱和凝胶过滤层析纯化表达产物。　结果　酶切鉴定及测序证实 phCMV1 6His hCGβ C3d3构建正确 ,并成功地在CHO细胞中获得了 6His hCGβ C3d3融合蛋白的表达。无血清培液中 2 4、4 8、72h融合蛋白的表达量分别为 4 96、5 2 7、6 33mIU/ml/ 1× 10 6细胞 (以hCGβ含量计算 ) ,phCMV1比 pcDNA3载体的表达效率高 1.4倍。 3次冻存和复苏高效表达hCGβ C3d3融合蛋白的阳性克隆 ,表达效率无明显变化。表达产物经纯化后获得了所需的hCGβ C3d3? 展开更多
关键词 phCMV1 pcdna3 人绒毛膜促性腺激素β C3D3 蛋白表达
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弓形虫pcDNA3/T.g-R1的构建与保护性效果观察
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作者 蒋立平 舒衡平 +2 位作者 吴翔 蔡力汀 王丹静 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第6期545-546,555,共3页
弓形虫能感染几乎所有的温血动物,但对各种动物易感性各不相同:大鼠和绵羊对弓形虫有较高的天然抵抗力;人对弓形虫不太敏感,有较强的天然抵抗力,人感染弓形虫后绝大多数为隐性感染.
关键词 弓形虫 pcdna3/T.g—R1 构建 保护性效果 研制 弓形虫病疫苗
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