[目的]探讨PAD4通过JAK/STAT3通路调控三阴性乳腺癌(TNBC)细胞增殖的潜在机制。[方法]采用乳腺正常细胞系及TNBC细胞系进行实验,通过慢病毒感染TNBC细胞系以敲低或过表达PAD4并使用JAK激动剂和抑制剂处理细胞。使用细胞计数试剂盒(CCK-8...[目的]探讨PAD4通过JAK/STAT3通路调控三阴性乳腺癌(TNBC)细胞增殖的潜在机制。[方法]采用乳腺正常细胞系及TNBC细胞系进行实验,通过慢病毒感染TNBC细胞系以敲低或过表达PAD4并使用JAK激动剂和抑制剂处理细胞。使用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖水平,通过高通量测序和通路分析检测mRNA表达水平,免疫共沉淀检测JAK1分子相互作用,免疫印迹检测JAK和STAT3的磷酸化水平,以及RNA抽取与实时荧光定量PCR分析基因表达。[结果]PAD4在TNBC患者组织中的表达水平高于非TNBC患者(9.49±0.67 vs 14.43±2.30,P<0.05),且中位生存期更长(P<0.05)。敲低PAD4抑制TNBC细胞系的增殖(1.55±0.14 vs 1.00±0.05,P<0.05),而过表达PAD4则促进增殖(1.65±0.14 vs 3.03±0.13,P<0.05)。过表达PAD4使JAK/STAT3通路活性上升,表现为JAK和STAT3的磷酸化水平增加;敲低PAD4则使其磷酸化水平下降。使用JAK激动剂处理敲低PAD4的TNBC细胞系或使用JAK抑制剂处理过表达PAD4的TNBC细胞系后,细胞增殖水平无变化。[结论]PAD4在TNBC中高表达并通过激活JAK/STAT3通路促进细胞增殖(1.65±0.14 vs 3.03±0.13)。调控PAD4可能是TNBC治疗的潜在策略。展开更多
文摘[目的]探讨PAD4通过JAK/STAT3通路调控三阴性乳腺癌(TNBC)细胞增殖的潜在机制。[方法]采用乳腺正常细胞系及TNBC细胞系进行实验,通过慢病毒感染TNBC细胞系以敲低或过表达PAD4并使用JAK激动剂和抑制剂处理细胞。使用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖水平,通过高通量测序和通路分析检测mRNA表达水平,免疫共沉淀检测JAK1分子相互作用,免疫印迹检测JAK和STAT3的磷酸化水平,以及RNA抽取与实时荧光定量PCR分析基因表达。[结果]PAD4在TNBC患者组织中的表达水平高于非TNBC患者(9.49±0.67 vs 14.43±2.30,P<0.05),且中位生存期更长(P<0.05)。敲低PAD4抑制TNBC细胞系的增殖(1.55±0.14 vs 1.00±0.05,P<0.05),而过表达PAD4则促进增殖(1.65±0.14 vs 3.03±0.13,P<0.05)。过表达PAD4使JAK/STAT3通路活性上升,表现为JAK和STAT3的磷酸化水平增加;敲低PAD4则使其磷酸化水平下降。使用JAK激动剂处理敲低PAD4的TNBC细胞系或使用JAK抑制剂处理过表达PAD4的TNBC细胞系后,细胞增殖水平无变化。[结论]PAD4在TNBC中高表达并通过激活JAK/STAT3通路促进细胞增殖(1.65±0.14 vs 3.03±0.13)。调控PAD4可能是TNBC治疗的潜在策略。
