期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到7篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
构建表达猪卵透明带抗原(pZP3α)的重组乳酸杆菌 被引量：2
1
作者 熊亚明 潘善培 +2 位作者 陈敬 黄丹 关艺青 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期123-127,共5页
目的:构建表达猪卵透明带蛋白(pZP3α)的重组乳酸杆菌。方法:用PCR方法扩增得到短小乳酸杆菌染色体中的S-层蛋白的信号肽序列和猪卵透明带的pZP3α基因,并依次克隆到乳酸杆菌整合型表达质粒pIlac的lac启动子下游,得到质粒pIlac-pZP3α... 目的:构建表达猪卵透明带蛋白(pZP3α)的重组乳酸杆菌。方法:用PCR方法扩增得到短小乳酸杆菌染色体中的S-层蛋白的信号肽序列和猪卵透明带的pZP3α基因,并依次克隆到乳酸杆菌整合型表达质粒pIlac的lac启动子下游,得到质粒pIlac-pZP3α。将质粒pIlac-pZP3α电穿孔转化干酪乳酸杆菌(L.casei CECT5276),挑选转化后的耐药菌落,在含5μg/mL红霉素的MRS培养基中培养,抽提其基因组DNA做模板,PCR鉴定验证pZP3α基因是否整合到乳酸杆菌的基因组中。筛选重组菌在无红霉素选择压力下传代培养直至发生第2次重组使红霉素抗性基因消失。结果:酶切与测序结果表明信号肽和pZP3α基因正确克隆到载体pIlac中;PCR鉴定证实pZP3α基因成功重组到乳酸杆菌的基因组中,培养50 d后重组乳酸杆菌抗性消失,用斑点免疫印迹化学发光法检测到经终质量分数为0.75%乳糖诱导后的上清中有pZP3α蛋白分泌。结论:成功构建表达pZP3α的重组乳酸杆菌,pZP3α在乳酸杆菌中得到了稳定的、分泌表达。 展开更多
关键词 卵透明带抗原-3α(pzp3α) 乳酸杆菌 免疫避孕 同源重组 疫苗
暂未订购
重组质粒pPIC9K-pZP3α-hCGβCTP^(109～145)的构建 被引量：1
2
作者 李伟涛 潘善培 +2 位作者 谢琪旋 肖銮娟 芦春斌 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 2002年第3期100-106,共7页
目的 :为发展多特异性避孕疫苗 ,制备重组抗原pZP3α -hCGβCTP10 9～ 14 5,用基因工程技术构建重组质粒pPIC9K -pZP3α -hCGβCTP10 9～ 14 5.方法 :根据pZP3α全长和hCGβCTP10 9～ 14 5编码的DNA列设计两对引物 ,通过部分重叠聚合酶... 目的 :为发展多特异性避孕疫苗 ,制备重组抗原pZP3α -hCGβCTP10 9～ 14 5,用基因工程技术构建重组质粒pPIC9K -pZP3α -hCGβCTP10 9～ 14 5.方法 :根据pZP3α全长和hCGβCTP10 9～ 14 5编码的DNA列设计两对引物 ,通过部分重叠聚合酶链式反应 (overlappingPCR) ,扩增出pZP3α -hCGβ -CTP10 9～ 14 5DNA片断 ,克隆到载体质粒pPIC9K中 ,然后导入大肠杆菌DH5α ,用PCR和双酶切反应鉴定重组质粒 ,并用DNA测序仪对重组质粒测序 .结果 :3步PCR扩增出pZP3α -hCGβ -CTP10 9～ 14 5DNA片段 ,插入到载体质粒pPIC9K的克隆位点 ,获得重组pPIC9K -pZP3α -hCGβ -CTP10 9～ 14 5表达质粒 ,测序结果显示插入序列与设计预期完全一致 .结论 :重组质粒pPIC9K -pZP3α -hCGβ -CTP10 9～ 14 5构建成功 ,为表达重组抗原pZP3α -hCGβ -CTP10 9～ 14 5。 展开更多
关键词 重组质粒 PPIC9K pzp3α HCGΒ CTP^109-145 猪卵透明带 人绒毛膜促性腺激素 部分重叠聚合酶链式反应 避孕疫苗 重组抗原
在线阅读 下载PDF
重组猪卵透明带抗原pZP3α在毕赤酵母中的分泌表达
3
作者 高彦茹 潘善培 +4 位作者 谢琪璇 肖銮娟 柯琼 李文星 史卫卫 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期499-503,共5页
为制备rpZP3a蛋白供发展避孕疫苗研究，将编码天然提取pZP3a上的DNA序列（446—1423）插入至毕赤酵母分泌型表达载体pPICZaA上，重组质粒pPICZaA—pZP3a线性化后通过电穿孔转入毕赤酵母GS115，经抗生素Zeoein筛选获得工程菌。在2L发酵... 为制备rpZP3a蛋白供发展避孕疫苗研究，将编码天然提取pZP3a上的DNA序列（446—1423）插入至毕赤酵母分泌型表达载体pPICZaA上，重组质粒pPICZaA—pZP3a线性化后通过电穿孔转入毕赤酵母GS115，经抗生素Zeoein筛选获得工程菌。在2L发酵罐中，用甲醇诱导工程菌进行高密度发酵生产rpZP3a。分离浓缩发酵上清液，通过螯合铜离子的亲和柱纯化rpZP3a，用SDS-PAGE和Westernblot进行鉴定，以Quantity One软件对rpZP3a进行定量分析并计算纯度和回收率。用rpZP3a免疫家兔，以ELISA法和间接免疫荧光法检测抗血清对rpZP3a和猪卵透明带的抗体反应。获得了分泌表达rpZP3a的工程菌，其高密度发酵产物经分离纯化后获得能与抗pZP3抗体反应的46kD成分，命名为rpZP3a，平均产量为8mg／L，纯度达92％。回收率为63％。用其免疫家兔获得抗rpZP3a抗血清，ELISA测定显示能与rpZP3a和天然提取pZP3反应。间接免疫荧光法分析显示抗rpZP3a抗血清能与猪卵透明带反应，产生亮绿荧光。用酵母表达系统成功表达了rpZP3a，该蛋白保留有天然pZP3的免疫活性。 展开更多
关键词 重组pzp3a蛋白 毕赤酵母 分泌表达
在线阅读 下载PDF
去N端信号肽和C端跨膜区猪卵透明带-3β蛋白在原核系统表达的研究 被引量：10
4
作者 徐万祥 邱德义 +5 位作者 熊艳 申庆祥 顾少华 曹根涛 应康 谢毅 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期16-19,共4页
猪卵透明带 (Zonapellucida ,ZP)由生物化学和免疫学性质截然不同的三种糖蛋白 (pZP1、pZP3α和pZP3β)组成。由于抗 pZP3β抗体能在体外与人ZP发生交叉反应 ,因此 pZP3β一直被认为是研制抗受精避孕疫苗的潜在抗原之一。为了能在原核... 猪卵透明带 (Zonapellucida ,ZP)由生物化学和免疫学性质截然不同的三种糖蛋白 (pZP1、pZP3α和pZP3β)组成。由于抗 pZP3β抗体能在体外与人ZP发生交叉反应 ,因此 pZP3β一直被认为是研制抗受精避孕疫苗的潜在抗原之一。为了能在原核系统中获得无卵巢因子污染的 pZP3β蛋白 ,本文采用PCR方法删除了原cDNA中编码5′ 和 3′ 端信号肽和跨膜区的DNA顺序。扩增的 pZP3β基因核心片段 (pZP3β″)经DNA测序验证后 ,通过引入其两端的EcoRI和SalI酶切位点被定向插入 pBV2 2 1质粒PRPL 启动子下游的多克隆区。SDS PAGE分析表明 :工程菌在热诱导后能特异地表达pZP3β蛋白 ,并能在蛋白印迹实验中被兔抗 pZPIgGs识别。 展开更多
关键词 pzp3β蛋白 基因表达 免疫印迹
在线阅读 下载PDF
猪卵透明带-3β融合蛋白在E.coli中的表达和鉴定 被引量：3
5
作者 徐万祥 邱德义 +4 位作者 王健 谢毅 顾少华 黄燕 赵寿元 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第6期420-423,共4页
对全长猪卵透明带－３β（ｐＺＰ３β）ｃＤＮＡ的５端重新测序分析，发现文献报道的该克隆基因５端非编码序列中漏读了两个碱基，继而选择符合ｐＺＰ３βｃＤＮＡ阅读框的ｐＷＲ４５０－２载体质粒，通过双酶切构建了β－半乳糖苷... 对全长猪卵透明带－３β（ｐＺＰ３β）ｃＤＮＡ的５端重新测序分析，发现文献报道的该克隆基因５端非编码序列中漏读了两个碱基，继而选择符合ｐＺＰ３βｃＤＮＡ阅读框的ｐＷＲ４５０－２载体质粒，通过双酶切构建了β－半乳糖苷酶／ｐＺＰ３β融合蛋白基因的细菌表达质粒。转化宿主菌后用ＩＰＴＧ诱导，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明ｐＺＰ３β融合蛋白在Ｅ．ｃｏｌｉ中获得表达，并在蛋白印迹鉴定中能同兔抗猪ＺＰＩｇＧ呈特异性免疫反应。 展开更多
关键词 猪卵 透明带 pzp3β 融合蛋白 基因表达
暂未订购
猪卵透明带3α重组腺病毒的构建及纯化
6
作者 陈敬 潘善培 +2 位作者 熊亚明 黄丹 关艺青 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第9期857-860,共4页
目的构建猪卵透明带3α(pZP3α)重组腺病毒,并包装与纯化病毒,为研究猪ZP3α重组腺病毒避孕疫苗奠定基础。方法将pZP3α基因克隆至穿梭质粒pShuttle,重组穿梭质粒pSshuttle-pZP3α再与腺病毒骨架质粒pAdEasy-5共转化大肠杆菌BJ5183,筛... 目的构建猪卵透明带3α(pZP3α)重组腺病毒,并包装与纯化病毒,为研究猪ZP3α重组腺病毒避孕疫苗奠定基础。方法将pZP3α基因克隆至穿梭质粒pShuttle,重组穿梭质粒pSshuttle-pZP3α再与腺病毒骨架质粒pAdEasy-5共转化大肠杆菌BJ5183,筛选重组腺病毒质粒pAd-pZP3α,脂质体法转染HEK293A细胞,包装并扩增病毒至第4代。收集重组病毒颗粒,经两轮氯化铯密度梯度离心纯化,紫外吸收法测定总病毒颗粒数(VP),并计算病毒的颗粒性滴度,空斑形成试验测定病毒的感染性滴度。以MOI为10的病毒剂量感染HeLa细胞,PCR鉴定插入病毒的目的基因,斑点免疫印迹法鉴定目的蛋白的表达。结果pZP3α基因成功插入病毒基因组,pZP3α蛋白能在病毒感染的HeLa细胞中正常表达。病毒的颗粒性滴度约为1.3×1011VP/ml,感染性滴度约为3×109PFU/ml。结论已成功构建猪ZP3α重组腺病毒质粒pAd-pZP3α,包装并纯化了重组pZP3α腺病毒颗粒。 展开更多
关键词 猪卵透明带3α 重组腺病毒 避孕疫苗
原文传递
不同浓度弗氏佐剂对B6AF1小鼠免疫性卵巢早衰模型建立的影响
7
作者 陈玥 王佩娟 +1 位作者 陈思 卢燕 《实验动物与比较医学》 CAS 2019年第4期294-297,共4页
目的观察不同浓度弗氏佐剂对透明带3多肽(pZP3)诱导的B6AF1小鼠免疫性卵巢早衰(POF)模型的影响。方法取6~8周龄雌性B6AF1小鼠80只,随机分为空白组、不完全弗氏佐剂组、完全弗氏佐剂组[含结核分枝杆菌(TB)1 mg/mL)和不完全弗氏佐剂+TB(3.... 目的观察不同浓度弗氏佐剂对透明带3多肽(pZP3)诱导的B6AF1小鼠免疫性卵巢早衰(POF)模型的影响。方法取6~8周龄雌性B6AF1小鼠80只,随机分为空白组、不完全弗氏佐剂组、完全弗氏佐剂组[含结核分枝杆菌(TB)1 mg/mL)和不完全弗氏佐剂+TB(3.3 mg/mL)组,应用HE染色法比较不同注射量的弗氏佐剂对POF模型小鼠免疫效果的影响。结果免疫后模型组小鼠卵巢体积萎缩,闭锁卵泡增多,卵泡周围见间质淋巴细胞浸润。不完全弗氏佐剂+TB(3.3 mg/mL)组免疫效果最好,完全弗氏佐剂组次之。结论不同浓度弗氏佐剂联合pZP3均可诱导B6AF1小鼠成功构建POF疾病模型,引起免疫性卵巢炎;含高浓度TB造模效果较好。 展开更多
关键词 卵巢早衰(POF) 弗氏佐剂 结核分枝杆菌(TB) 透明带3多肽(pzp3) B6AF1小鼠 卵巢炎
在线阅读 下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部