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Myostatin基因真核表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达 被引量：2
1
作者 唐量 胡柏平 +1 位作者 熊正英 张英起 《体育科学》 CSSCI 北大核心 2008年第12期45-49,94,共6页
目的:构建人Myostatin基因的真核表达载体pVAC-Ms,并在真核细胞中进行表达,为后续研究Myostatin蛋白的检测方法、强力药物的筛选及废用性肌肉萎缩的治疗提供实验依据。方法:化学耦联方法合成Myostatin C-末端区(330bp)基因序列,利用PCR... 目的:构建人Myostatin基因的真核表达载体pVAC-Ms,并在真核细胞中进行表达,为后续研究Myostatin蛋白的检测方法、强力药物的筛选及废用性肌肉萎缩的治疗提供实验依据。方法:化学耦联方法合成Myostatin C-末端区(330bp)基因序列,利用PCR技术扩增5′端和3′端酶切位点为BamH I和EcoR I,然后克隆至真核表达载体pVAC1-cms,得到重组质粒pVAC-Ms。质粒纯化后采用脂质体介导转染CHO细胞,瞬时转染后收集CHO细胞,利用RT-PCR技术和细胞荧光免疫技术检测Myostatin在CHO细胞中的转录和蛋白表达。结果:酶切和测序结果表明,Myostatin真核表达载体pVAC-Ms构建成功,RT-PCR和细胞荧光免疫检测结果表明,瞬时转染的CHO细胞中Myostatin基因明显转录,蛋白明显表达。结论:实验成功构建了在真核细胞中能有效表达人Myostatin重组蛋白的真核表达载体,为运动员Myostatin蛋白表达的检测、强力药物筛选、训练监控及废用性肌肉萎缩治疗等方面的后续研究提供实验基础。 展开更多
关键词 MYOSTATIN pvac1-cms CHO细胞 RT-PCR 细胞免疫荧光
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融合Th细胞表位序列Myostatin重组基因疫苗的构建及其对免疫动物肌肉力量的影响 被引量：1
2
作者 唐量 刘晨涛 +2 位作者 王园丽 罗凯 王旭丹 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 2013年第1期16-19,共4页
目的:本实验利用基因重组技术,构建融合Th细胞TT830-844表位序列的人重组Myostatin基因疫苗真核表达载体pVAC-TT-Ms,检测该基因疫苗对免疫小鼠前肢抓力的影响,为后续以Myostatin作为靶分子来改善废用性肌肉萎缩等病症的研究提供实验基... 目的:本实验利用基因重组技术,构建融合Th细胞TT830-844表位序列的人重组Myostatin基因疫苗真核表达载体pVAC-TT-Ms,检测该基因疫苗对免疫小鼠前肢抓力的影响,为后续以Myostatin作为靶分子来改善废用性肌肉萎缩等病症的研究提供实验基础。方法:化学耦联方法合成Myostatin C-末端成熟肽(330 bp)基因序列及其N-端融合TT表位序列的DNA片段,重组质粒pVAC-TT-Ms的构建、纯化及瞬时转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)按该类研究中的常规实验操作,并检测重组基因疫苗pVAC-TT-Ms免疫小鼠骨骼肌前肢抓力的变化。结果:酶切和测序结果表明,重组Myostatin基因疫苗表达载体pVAC-TT-Ms构建成功。重组质粒pVAC-TT-Ms OD260/280比值和电泳结果显示,该质粒作为基因疫苗符合免疫动物的质量要求。细胞荧光免疫检测结果表明,瞬时转染的CHO细胞中目的蛋白明显表达。动物免疫实验初步证明,重组Myostatin基因疫苗可显著提高免疫小鼠的前肢抓力,与正常对照组比较,免疫小鼠前肢抓力平均增加了29.88%。结论:本实验成功构建了在真核细胞中能有效表达融合TT表位序列人重组Myostatin基因疫苗表达载体,初步证明了重组Myostatin基因疫苗可显著增加免疫小鼠前肢抓力。 展开更多
关键词 Myostatin基因疫苗 pvac1-cms质粒 TT表位 骨骼肌 抓力
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