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pTYB11载体的应用及其重组子破菌条件的研究 被引量:1
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作者 毕智丽 《科技信息》 2012年第5期34-34,20,共2页
IMPACTTM—CN蛋白质纯化系统的pTYB11载体的应用,有利于快速分离靶蛋白。因靶蛋白位于胞内,需采取有效破碎手段获取。采用超声波破碎,试验找出重组大肠杆菌的最佳破碎条件为:超声时间占空比为3:7,输出功率40W,破碎0.5h。western-blottin... IMPACTTM—CN蛋白质纯化系统的pTYB11载体的应用,有利于快速分离靶蛋白。因靶蛋白位于胞内,需采取有效破碎手段获取。采用超声波破碎,试验找出重组大肠杆菌的最佳破碎条件为:超声时间占空比为3:7,输出功率40W,破碎0.5h。western-blotting检验可以得到抗原性正常的靶蛋白。 展开更多
关键词 IMPACTTM—CN ptyb11 超声破菌 融合蛋白 大肠杆菌
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利用SUMO融合系统高效表达可溶性重组蛋白的研究 被引量:22
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作者 姜媛媛 尹成凯 +3 位作者 李晋南 任桂萍 张薇 李德山 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2008年第10期57-62,共6页
利用pSUMO表达载体在大肠杆菌中高效可溶性表达若干种外源蛋白,如鼠源成纤维细胞生长因子(FGF)-21、人源FGF-21、人源白细胞介素(IL)-1β,并与pET-30a(+)及pTYB11表达系统作比较。将鼠源FGF-21、人源FGF-21及人源IL-1β基因分别亚克隆至... 利用pSUMO表达载体在大肠杆菌中高效可溶性表达若干种外源蛋白,如鼠源成纤维细胞生长因子(FGF)-21、人源FGF-21、人源白细胞介素(IL)-1β,并与pET-30a(+)及pTYB11表达系统作比较。将鼠源FGF-21、人源FGF-21及人源IL-1β基因分别亚克隆至pSUMO表达载体上,在大肠杆菌Rosetta(DE3)中诱导表达,并用镍离子螯合柱(Ni-NTA)纯化重组蛋白,透析后利用SUMO蛋白酶I切割融合蛋白,获得纯度较高的成熟蛋白。上述基因在pET-30a(+)及pTYB11中表达量极低,考马斯亮蓝染色几乎检测不到。在pSUMO表达体系中这些基因均以可溶形式表达,且可被SUMO蛋白酶I有效的切割,获得纯度较高的成熟蛋白。上述蛋白可在pSUMO表达系统中获得高效可溶性表达。 展开更多
关键词 SUMO SUMO蛋白酶 分子伴侣 ptyb11 pET-30a(+) 表达
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乳源性免疫活性肽在E.coli BL21中分泌表达的诱导条件优化 被引量:1
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作者 胡迪 张少辉 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第11期198-203,共6页
设计4个乳源性免疫活性肽的目的基因后,利用基因重组技术成功构建原核表达载体pTYB11,并将重组质粒转化到E.coli BL21中,通过改变异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)的浓度、培养时间和培养温度,设计正交试验来优化乳源活性小肽的IPTG... 设计4个乳源性免疫活性肽的目的基因后,利用基因重组技术成功构建原核表达载体pTYB11,并将重组质粒转化到E.coli BL21中,通过改变异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)的浓度、培养时间和培养温度,设计正交试验来优化乳源活性小肽的IPTG诱导表达条件,使目的蛋白可在E.coli BL21中高效表达。依据15%SDS-PAGE电泳分析得到融合蛋白的表达量,选出最适诱导条件为IPTG终浓度0.1~0.2mmol/L,在12~15℃条件下培养20h,得到大小为59.2kD左右的融合目的蛋白,其表达量可占总蛋白表达量的40%,经Western Blotting鉴定正确。 展开更多
关键词 乳源性免疫活性肽 ptyb11 原核表达 异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷 诱导条件优化
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