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pTYB11载体的应用及其重组子破菌条件的研究
被引量:
1
1
作者
毕智丽
《科技信息》
2012年第5期34-34,20,共2页
IMPACTTM—CN蛋白质纯化系统的pTYB11载体的应用,有利于快速分离靶蛋白。因靶蛋白位于胞内,需采取有效破碎手段获取。采用超声波破碎,试验找出重组大肠杆菌的最佳破碎条件为:超声时间占空比为3:7,输出功率40W,破碎0.5h。western-blottin...
IMPACTTM—CN蛋白质纯化系统的pTYB11载体的应用,有利于快速分离靶蛋白。因靶蛋白位于胞内,需采取有效破碎手段获取。采用超声波破碎,试验找出重组大肠杆菌的最佳破碎条件为:超声时间占空比为3:7,输出功率40W,破碎0.5h。western-blotting检验可以得到抗原性正常的靶蛋白。
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关键词
IMPACTTM—CN
ptyb11
超声破菌
融合蛋白
大肠杆菌
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职称材料
利用SUMO融合系统高效表达可溶性重组蛋白的研究
被引量:
22
2
作者
姜媛媛
尹成凯
+3 位作者
李晋南
任桂萍
张薇
李德山
《东北农业大学学报》
CAS
CSCD
2008年第10期57-62,共6页
利用pSUMO表达载体在大肠杆菌中高效可溶性表达若干种外源蛋白,如鼠源成纤维细胞生长因子(FGF)-21、人源FGF-21、人源白细胞介素(IL)-1β,并与pET-30a(+)及pTYB11表达系统作比较。将鼠源FGF-21、人源FGF-21及人源IL-1β基因分别亚克隆至...
利用pSUMO表达载体在大肠杆菌中高效可溶性表达若干种外源蛋白,如鼠源成纤维细胞生长因子(FGF)-21、人源FGF-21、人源白细胞介素(IL)-1β,并与pET-30a(+)及pTYB11表达系统作比较。将鼠源FGF-21、人源FGF-21及人源IL-1β基因分别亚克隆至pSUMO表达载体上,在大肠杆菌Rosetta(DE3)中诱导表达,并用镍离子螯合柱(Ni-NTA)纯化重组蛋白,透析后利用SUMO蛋白酶I切割融合蛋白,获得纯度较高的成熟蛋白。上述基因在pET-30a(+)及pTYB11中表达量极低,考马斯亮蓝染色几乎检测不到。在pSUMO表达体系中这些基因均以可溶形式表达,且可被SUMO蛋白酶I有效的切割,获得纯度较高的成熟蛋白。上述蛋白可在pSUMO表达系统中获得高效可溶性表达。
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关键词
SUMO
SUMO蛋白酶
分子伴侣
ptyb11
pET-30a(+)
表达
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职称材料
乳源性免疫活性肽在E.coli BL21中分泌表达的诱导条件优化
被引量:
1
3
作者
胡迪
张少辉
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2011年第11期198-203,共6页
设计4个乳源性免疫活性肽的目的基因后,利用基因重组技术成功构建原核表达载体pTYB11,并将重组质粒转化到E.coli BL21中,通过改变异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)的浓度、培养时间和培养温度,设计正交试验来优化乳源活性小肽的IPTG...
设计4个乳源性免疫活性肽的目的基因后,利用基因重组技术成功构建原核表达载体pTYB11,并将重组质粒转化到E.coli BL21中,通过改变异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)的浓度、培养时间和培养温度,设计正交试验来优化乳源活性小肽的IPTG诱导表达条件,使目的蛋白可在E.coli BL21中高效表达。依据15%SDS-PAGE电泳分析得到融合蛋白的表达量,选出最适诱导条件为IPTG终浓度0.1~0.2mmol/L,在12~15℃条件下培养20h,得到大小为59.2kD左右的融合目的蛋白,其表达量可占总蛋白表达量的40%,经Western Blotting鉴定正确。
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关键词
乳源性免疫活性肽
ptyb11
原核表达
异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷
诱导条件优化
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职称材料
题名
pTYB11载体的应用及其重组子破菌条件的研究
被引量:
1
1
作者
毕智丽
机构
滨州职业学院护理学院
出处
《科技信息》
2012年第5期34-34,20,共2页
基金
滨州职业学院科研项目第07XYA04号
文摘
IMPACTTM—CN蛋白质纯化系统的pTYB11载体的应用,有利于快速分离靶蛋白。因靶蛋白位于胞内,需采取有效破碎手段获取。采用超声波破碎,试验找出重组大肠杆菌的最佳破碎条件为:超声时间占空比为3:7,输出功率40W,破碎0.5h。western-blotting检验可以得到抗原性正常的靶蛋白。
关键词
IMPACTTM—CN
ptyb11
超声破菌
融合蛋白
大肠杆菌
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
利用SUMO融合系统高效表达可溶性重组蛋白的研究
被引量:
22
2
作者
姜媛媛
尹成凯
李晋南
任桂萍
张薇
李德山
机构
东北农业大学生命科学学院
出处
《东北农业大学学报》
CAS
CSCD
2008年第10期57-62,共6页
基金
黑龙江省科技厅重点攻关项目(2006G0461-00)
文摘
利用pSUMO表达载体在大肠杆菌中高效可溶性表达若干种外源蛋白,如鼠源成纤维细胞生长因子(FGF)-21、人源FGF-21、人源白细胞介素(IL)-1β,并与pET-30a(+)及pTYB11表达系统作比较。将鼠源FGF-21、人源FGF-21及人源IL-1β基因分别亚克隆至pSUMO表达载体上,在大肠杆菌Rosetta(DE3)中诱导表达,并用镍离子螯合柱(Ni-NTA)纯化重组蛋白,透析后利用SUMO蛋白酶I切割融合蛋白,获得纯度较高的成熟蛋白。上述基因在pET-30a(+)及pTYB11中表达量极低,考马斯亮蓝染色几乎检测不到。在pSUMO表达体系中这些基因均以可溶形式表达,且可被SUMO蛋白酶I有效的切割,获得纯度较高的成熟蛋白。上述蛋白可在pSUMO表达系统中获得高效可溶性表达。
关键词
SUMO
SUMO蛋白酶
分子伴侣
ptyb11
pET-30a(+)
表达
Keywords
SUMO
SUMO protease I
molecular chaperones
ptyb11
pET-30a(+)
expression
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
乳源性免疫活性肽在E.coli BL21中分泌表达的诱导条件优化
被引量:
1
3
作者
胡迪
张少辉
机构
上海交通大学农业与生物学院
出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2011年第11期198-203,共6页
基金
国家"863"计划项目(008AA10Z329)
文摘
设计4个乳源性免疫活性肽的目的基因后,利用基因重组技术成功构建原核表达载体pTYB11,并将重组质粒转化到E.coli BL21中,通过改变异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)的浓度、培养时间和培养温度,设计正交试验来优化乳源活性小肽的IPTG诱导表达条件,使目的蛋白可在E.coli BL21中高效表达。依据15%SDS-PAGE电泳分析得到融合蛋白的表达量,选出最适诱导条件为IPTG终浓度0.1~0.2mmol/L,在12~15℃条件下培养20h,得到大小为59.2kD左右的融合目的蛋白,其表达量可占总蛋白表达量的40%,经Western Blotting鉴定正确。
关键词
乳源性免疫活性肽
ptyb11
原核表达
异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷
诱导条件优化
Keywords
milk-derived immune peptide
ptyb11
prokaryotic expression
IPTG
optimization of induction conditions
分类号
TS252.9 [轻工技术与工程—农产品加工及贮藏工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
pTYB11载体的应用及其重组子破菌条件的研究
毕智丽
《科技信息》
2012
1
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职称材料
2
利用SUMO融合系统高效表达可溶性重组蛋白的研究
姜媛媛
尹成凯
李晋南
任桂萍
张薇
李德山
《东北农业大学学报》
CAS
CSCD
2008
22
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
乳源性免疫活性肽在E.coli BL21中分泌表达的诱导条件优化
胡迪
张少辉
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2011
1
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职称材料
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