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鸡马立克氏病毒UL36^(USP)的pTYB1表达载体的构建及表达分析
1
作者
金雯
王梦云
+3 位作者
余致君
郑海南
邓晨
艾永兴
《吉林农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第2期223-227,共5页
UL36USP是马立克氏病毒UL36基因编码的蛋白UL36上具有去泛素化酶活性的N-端部分片段(UL36USP),为获取无冗余氨基酸残基的纯净UL36USP蛋白。试验采用p TYB1表达载体与目的基因UL36USP构建重组表达质粒,并诱导融合蛋白表达,在含有还原剂DT...
UL36USP是马立克氏病毒UL36基因编码的蛋白UL36上具有去泛素化酶活性的N-端部分片段(UL36USP),为获取无冗余氨基酸残基的纯净UL36USP蛋白。试验采用p TYB1表达载体与目的基因UL36USP构建重组表达质粒,并诱导融合蛋白表达,在含有还原剂DTT的缓冲液中利用Intein发挥内含肽的剪切活性,将UL36USP从融合蛋白上分离出来,实现目的蛋白UL36USP的单柱纯化,纯化后的蛋白不带有冗余的氨基酸残基,并利用UL36和Intein的特异性抗体进行了Western Blot鉴定。该研究尝试了一种能有利于难表达蛋白的可溶性表达的方法,并利用Intein标签的剪切活性分离产生纯净的目的蛋白,如一些难表达的病毒蛋白,为抗病毒和抗肿瘤疫苗的研究提供材料。
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关键词
鸡马立克氏病毒
内涵肽
P
TYB1
UL36
去泛素化酶
病毒蛋白
原文传递
Intein融合表达鸡IL-2蛋白的多克隆抗体制备
被引量：
4
2
作者
邓晨
郑海南
+5 位作者
于佩峰
张鑫
吴山力
王梦云
吕岩
艾永兴
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第6期889-894,共6页
鸡白介素-2(chIL-2)是一种对T淋巴细胞、B淋巴细胞和自然杀伤细胞复制与分化起重要作用的细胞因子,并在机体天然免疫和获得性免疫的发生与维持中发挥重要作用。本研究中,将去除去了N-端信号肽的chIL-2基因(366bp)克隆连接到pTYB1原核表...
鸡白介素-2(chIL-2)是一种对T淋巴细胞、B淋巴细胞和自然杀伤细胞复制与分化起重要作用的细胞因子,并在机体天然免疫和获得性免疫的发生与维持中发挥重要作用。本研究中,将去除去了N-端信号肽的chIL-2基因(366bp)克隆连接到pTYB1原核表达载体,将chIL-2基因与1 362bp的Intein基因融合在同一开放阅读框内,编码相对分子质量约为71 000的chIL-2-Intein融合蛋白。诱导表达chIL-2-intein融合蛋白,应用chitin-sepharose亲和层析进行融合蛋白纯化。用纯化的chIL-2-intein融合蛋白免疫大白兔制备多克隆抗体。应用昆虫细胞表达系统纯化出的chIL-2-6His蛋白作为抗原,包被ELISA板用于抗体效价的检测,Western blot分析抗体特异性。结果,应用纯化的chIL-2-intein融合蛋白成功制备特异性chIL-2抗体,效价高达4 096 000,且该抗体也能用于Intein标签蛋白的检测。
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关键词
INTEIN
CHICKEN
IL-2
ptyb1
多克隆抗体
原文传递
应用Intein融合的鸡IL-2蛋白制备多克隆抗体
被引量：
3
3
作者
邓晨
于佩峰
+3 位作者
张鑫
王梦云
吕岩
艾永兴
《吉林农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第3期368-374,共7页
研究Intein标签与目的蛋白chIL-2融合作为抗原,进行高效价兔抗chIL-2蛋白多克隆抗体的制备,将去除去了N-端信号肽的chIL-2基因(366 bp)克隆连接到p TYB1原核表达载体,将chIL-2基因与1 362 bp的Intein基因融合在同1开放阅读框内,编码分...
研究Intein标签与目的蛋白chIL-2融合作为抗原,进行高效价兔抗chIL-2蛋白多克隆抗体的制备,将去除去了N-端信号肽的chIL-2基因(366 bp)克隆连接到p TYB1原核表达载体,将chIL-2基因与1 362 bp的Intein基因融合在同1开放阅读框内,编码分子量约为71 ku的chIL-2-Intein融合蛋白。诱导表达chIL-2-Intein融合蛋白,应用Chitin-Sepharose亲和层析进行融合蛋白纯化。用纯化的chIL-2-Intein融合蛋白免疫大白兔制备多克隆抗体。应用昆虫细胞表达系统纯化出的chIL-2-6His蛋白作为抗原,包被ELISA板用于抗体效价的检测,Western Blot分析抗体特异性。结果表明:应用纯化的chIL-2-Intein融合蛋白成功制备特异性chIL-2抗体,效价高达4 096 000,且该抗体也能用于Intein标签蛋白的检测。
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关键词
内肽酶
鸡白介素-2
ptyb1
多克隆抗体
原文传递
题名
鸡马立克氏病毒UL36^(USP)的pTYB1表达载体的构建及表达分析
1
作者
金雯
王梦云
余致君
郑海南
邓晨
艾永兴
机构
吉林大学动物医学学院
吉林大学动物科学学院
出处
《吉林农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第2期223-227,共5页
基金
国家自然科学基金项目(31272528)
教育部新世纪优秀人才支持计划项目(NCET-12-0232)
教育部留学回国人员科研启动基金项目(教外司留2013-693号)
文摘
UL36USP是马立克氏病毒UL36基因编码的蛋白UL36上具有去泛素化酶活性的N-端部分片段(UL36USP),为获取无冗余氨基酸残基的纯净UL36USP蛋白。试验采用p TYB1表达载体与目的基因UL36USP构建重组表达质粒,并诱导融合蛋白表达,在含有还原剂DTT的缓冲液中利用Intein发挥内含肽的剪切活性,将UL36USP从融合蛋白上分离出来,实现目的蛋白UL36USP的单柱纯化,纯化后的蛋白不带有冗余的氨基酸残基,并利用UL36和Intein的特异性抗体进行了Western Blot鉴定。该研究尝试了一种能有利于难表达蛋白的可溶性表达的方法,并利用Intein标签的剪切活性分离产生纯净的目的蛋白,如一些难表达的病毒蛋白,为抗病毒和抗肿瘤疫苗的研究提供材料。
关键词
鸡马立克氏病毒
内涵肽
P
TYB1
UL36
去泛素化酶
病毒蛋白
Keywords
MDV
intein
ptyb1
UL36
deubiquitinase
viral protein
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
Intein融合表达鸡IL-2蛋白的多克隆抗体制备
被引量：
4
2
作者
邓晨
郑海南
于佩峰
张鑫
吴山力
王梦云
吕岩
艾永兴
机构
吉林大学动物科学学院
吉林大学基础医学院
出处
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第6期889-894,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(31272528)
教育部新世纪优秀人才支持计划资助项目(NCET-12-0232)
教育部留学回国人员科研启动基金资助
文摘
鸡白介素-2(chIL-2)是一种对T淋巴细胞、B淋巴细胞和自然杀伤细胞复制与分化起重要作用的细胞因子,并在机体天然免疫和获得性免疫的发生与维持中发挥重要作用。本研究中,将去除去了N-端信号肽的chIL-2基因(366bp)克隆连接到pTYB1原核表达载体,将chIL-2基因与1 362bp的Intein基因融合在同一开放阅读框内,编码相对分子质量约为71 000的chIL-2-Intein融合蛋白。诱导表达chIL-2-intein融合蛋白,应用chitin-sepharose亲和层析进行融合蛋白纯化。用纯化的chIL-2-intein融合蛋白免疫大白兔制备多克隆抗体。应用昆虫细胞表达系统纯化出的chIL-2-6His蛋白作为抗原,包被ELISA板用于抗体效价的检测,Western blot分析抗体特异性。结果,应用纯化的chIL-2-intein融合蛋白成功制备特异性chIL-2抗体,效价高达4 096 000,且该抗体也能用于Intein标签蛋白的检测。
关键词
INTEIN
CHICKEN
IL-2
ptyb1
多克隆抗体
Keywords
intein
chicken IL-2
ptyb1
vector
polyclonal antibodies
分类号
S852.4 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
应用Intein融合的鸡IL-2蛋白制备多克隆抗体
被引量：
3
3
作者
邓晨
于佩峰
张鑫
王梦云
吕岩
艾永兴
机构
吉林大学动物科学学院
出处
《吉林农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第3期368-374,共7页
基金
国家自然科学基金项目(31272528)
教育部新世纪优秀人才支持计划项目(NCET-12-0232)
教育部留学回国人员科研启动基金项目[教外司留(2013)693号]
文摘
研究Intein标签与目的蛋白chIL-2融合作为抗原,进行高效价兔抗chIL-2蛋白多克隆抗体的制备,将去除去了N-端信号肽的chIL-2基因(366 bp)克隆连接到p TYB1原核表达载体,将chIL-2基因与1 362 bp的Intein基因融合在同1开放阅读框内,编码分子量约为71 ku的chIL-2-Intein融合蛋白。诱导表达chIL-2-Intein融合蛋白,应用Chitin-Sepharose亲和层析进行融合蛋白纯化。用纯化的chIL-2-Intein融合蛋白免疫大白兔制备多克隆抗体。应用昆虫细胞表达系统纯化出的chIL-2-6His蛋白作为抗原,包被ELISA板用于抗体效价的检测,Western Blot分析抗体特异性。结果表明:应用纯化的chIL-2-Intein融合蛋白成功制备特异性chIL-2抗体,效价高达4 096 000,且该抗体也能用于Intein标签蛋白的检测。
关键词
内肽酶
鸡白介素-2
ptyb1
多克隆抗体
Keywords
intein
chicken IL-2
pTYB 1 vector
polyclonal antibody
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
S831.2 [农业科学—畜牧学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
鸡马立克氏病毒UL36^(USP)的pTYB1表达载体的构建及表达分析
金雯
王梦云
余致君
郑海南
邓晨
艾永兴
《吉林农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
0
原文传递
2
Intein融合表达鸡IL-2蛋白的多克隆抗体制备
邓晨
郑海南
于佩峰
张鑫
吴山力
王梦云
吕岩
艾永兴
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
4
原文传递
3
应用Intein融合的鸡IL-2蛋白制备多克隆抗体
邓晨
于佩峰
张鑫
王梦云
吕岩
艾永兴
《吉林农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
3
原文传递
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