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pPIC3.5K/Thanatin-(G8S2)-PPA毕赤酵母表达载体的构建和表达 被引量：1
1
作者 刘学锋 吕正兵 +1 位作者 汪波 徐涛 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2012年第6期847-851,共5页
将掌叶半夏凝集素和死亡素的融合基因thanatin-linker-ppa定向连接到pPIC3.5K,构建酵母表达载体pPIC3.5K/Thanatin-(G8S2)-PPA并进行序列分析,经SalI单酶切线性化后电转化到GS115毕赤酵母感受态细胞中,PCR鉴定后在含有G418抗性的YPD平... 将掌叶半夏凝集素和死亡素的融合基因thanatin-linker-ppa定向连接到pPIC3.5K,构建酵母表达载体pPIC3.5K/Thanatin-(G8S2)-PPA并进行序列分析,经SalI单酶切线性化后电转化到GS115毕赤酵母感受态细胞中,PCR鉴定后在含有G418抗性的YPD平板筛选高拷贝重组子。利用甲醇在BMMY培养基中诱导表达融合蛋白,经SDS-PAGE和Western bloting分析显示获得分子量约31kD的融合蛋白,融合蛋白经纯化后MTT分析其抗肿瘤活性,结果显示融合蛋白具有显著的抗肿瘤效果。 展开更多
关键词 掌叶半夏凝集素 死亡素 ppic3.5K MTT
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抗菌肽Magainin基因的克隆及其在Pichia pastoris中的表达 被引量：24
2
作者 陈海旭 邹冠玉 +1 位作者 屈贤铭 杨胜利 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期461-464,共4页
用化学合成法合成了以酵母偏爱密码子编码的抗菌肽magainin基因片段 ,合成片段拼接后 ,与pUC19重组 ,获得magainin基因 .Magainin基因与酵母表达载体pPIC3重组 ,构建胞内表达载体pPIC3 Mag ,电击法转化GS115宿主菌 ,经表型筛选和PCR鉴... 用化学合成法合成了以酵母偏爱密码子编码的抗菌肽magainin基因片段 ,合成片段拼接后 ,与pUC19重组 ,获得magainin基因 .Magainin基因与酵母表达载体pPIC3重组 ,构建胞内表达载体pPIC3 Mag ,电击法转化GS115宿主菌 ,经表型筛选和PCR鉴定证实了目的基因已稳定整合入Pichiapastoris酵母基因组中 .阳性克隆用甲醇诱导表达 ,用免疫印迹法确定了产物的正确性 . 展开更多
关键词 抗菌肽 Magainin基因 克隆 酶母表达 ppic3
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芽孢杆菌植酸酶基因在毕赤酵母中的胞内表达 被引量：3
3
作者 吴琦 王红宁 +2 位作者 邹立扣 赵海霞 刘世贵 《吉首大学学报（自然科学版）》 CAS 2004年第1期36-41,共6页
根据已知的枯草芽孢杆菌WHNB02植酸酶phyC基因全序列设计一对引物,采用PCR法从含有该基因的pUC18-phyC质粒上获得了长约1.1kb不含有信号肽序列的植酸酶phyC基因表达片段.经T载体克隆及序列测定后,构建毕赤巴斯德表达载体pPIC3.5K-phyC,... 根据已知的枯草芽孢杆菌WHNB02植酸酶phyC基因全序列设计一对引物,采用PCR法从含有该基因的pUC18-phyC质粒上获得了长约1.1kb不含有信号肽序列的植酸酶phyC基因表达片段.经T载体克隆及序列测定后,构建毕赤巴斯德表达载体pPIC3.5K-phyC,并电转化毕赤巴斯德酵母宿主菌GS115.经MD和MM平板筛选、酶活性测定,获得了阳性转化子,并进行了诱导表达.SDS-PAGE分析表明:表达产物分子量为42.01KD,表达量占细胞可溶性总蛋白的24%,并具有植酸酶的生物学活性.酶学性质分析结果显示:胞内表达的植酸酶酶促反应最适pH值为7.5;最适反应温度为70℃;经90℃处理10min,残留酶活性42% 均优于出发菌株天然植酸酶的相应性质. 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 植酸酶基因 phyC基因 ppic3.K表达栽体 毕赤巴斯德酵母 胞内表达
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