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pIRES2-EGFP-4-1BBL质粒的导入对减毒沙门菌生物学行为的影响 被引量：2
1
作者 仉元亭 叶建新 +2 位作者 陈卫昌 张学光 任大明 《苏州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2009年第2期236-239,共4页
目的探讨真核表达质粒pIRES2-EGFP-4-1BBL转入对减毒鼠伤寒沙门菌SL3261生物学行为的影响。方法将真核表达质粒pIRES2-EGFP-4-1BBL通过两步电转化获得含pIRES2-EGFP质粒的SL3261,接种于LB培养基中观察其生长特性、革兰染色观察其形态和... 目的探讨真核表达质粒pIRES2-EGFP-4-1BBL转入对减毒鼠伤寒沙门菌SL3261生物学行为的影响。方法将真核表达质粒pIRES2-EGFP-4-1BBL通过两步电转化获得含pIRES2-EGFP质粒的SL3261,接种于LB培养基中观察其生长特性、革兰染色观察其形态和血清凝集试验检测其表面抗原变化。利用该重组菌体外感染HepG2细胞,观察其对细胞的侵袭能力的影响。结果含pIRES2-EGFP-4-1BBL质粒SL3261在体外生长繁殖较原细菌慢,革兰染色呈阴性丝状菌体,含pIRES2-EGFP-4-1BBL质粒的SL3261 A-F多价、O4菌体和H1鞭毛抗原和SL3261完全一致;体外感染HepG2能力,SL3261为201±46 CFU/200HepG2细胞,SL3261-pIRES2-EGFP为163±37,而SL3261-pIRES2-EGFP-4-1BBL为158±32,3组间的差异无统计意义(P>0.05)。结论导入pIRES2-EGFP-4-1BBL质粒对SL3261的生长和形态有部分影响,而表面抗原以及侵入HepG2细胞的功能不变,该结果为含pIRES2-EGFP-4-1BBL质粒SL3261疫苗菌的进一步研究奠定了实验依据。 展开更多
关键词 pires2-EGFP-4-1BBL质粒 减毒沙门菌 生物学行为
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人高致病性禽流感病毒H5N1安徽株HA、M2蛋白双顺反子表达载体的构建及表达研究 被引量：5
2
作者 刘源 张柯 +4 位作者 谭文杰 王慧娟 舒跃龙 胡桂学 阮力 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期415-420,共6页
将我国分离的人H5N1亚型禽流感病毒A/Anhui/1/2005作为研究对象,扩增其HA和M2基因片段并克隆至DNA疫苗表达载体pVRC中,构建成真核表达质粒。为提高HA的表达量,按照人偏爱密码子将HA基因进行优化改造,经全基因合成后插入真核表达载体pVRC... 将我国分离的人H5N1亚型禽流感病毒A/Anhui/1/2005作为研究对象,扩增其HA和M2基因片段并克隆至DNA疫苗表达载体pVRC中,构建成真核表达质粒。为提高HA的表达量,按照人偏爱密码子将HA基因进行优化改造,经全基因合成后插入真核表达载体pVRC,以β-actin蛋白为内参比证明了优化后的HA蛋白表达效果明显提高。将M2基因和优化后的HA基因共同克隆入双顺反子表达载体pIRES中,获得同时表达HA或M2的双顺反子真核表达质粒;通过Western blot和间接免疫荧光检测方法,确认构建的重组质粒在真核细胞中成功地表达了目的蛋白HA和M2。通过上述结果为进一步开展人高致病性禽流感病毒安徽株HA和M2基因的功能与致病性研究及使用表达HA和M2蛋白进行新型人用禽流感双价疫苗研发奠定基础。 展开更多
关键词 H5N1 HA M2 密码子优化pires
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大鼠NeuroD2基因的克隆、真核表达载体的构建及其在小鼠MSCs细胞中的表达
3
作者 姬菩忠 赵兴绪 +3 位作者 秦文 宋学文 张勇 赵红斌 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期134-141,共8页
克隆大鼠NeuroD2基因,旨在构建p IRES2-Ac GFP1-ND2真核表达载体并检测其在小鼠MSCs中的表达。采用RTPCR技术克隆大鼠NeuroD2基因,分析该蛋白质结构、功能域、细胞定位及与其他物种同源性;构建pIRES2-AcGFP1-ND2表达载体并转染小鼠骨髓... 克隆大鼠NeuroD2基因,旨在构建p IRES2-Ac GFP1-ND2真核表达载体并检测其在小鼠MSCs中的表达。采用RTPCR技术克隆大鼠NeuroD2基因,分析该蛋白质结构、功能域、细胞定位及与其他物种同源性;构建pIRES2-AcGFP1-ND2表达载体并转染小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs);采用Real-time PCR、免疫荧光及Western blot技术检测重组质粒在小鼠MSCs中的表达。结果表明,大鼠NeuroD2基因CDS区全长1 149 bp,共编码382个氨基酸,属于b HLH家族,二级结构以α-螺旋和无规卷曲为主,空间结构呈现近似"螺旋-环-螺旋(HLH)"结构,主要分布在细胞核,氨基酸序列与家鼠(99%)、罗猴(98%)、人(97.7%)同源性较高;Real-time PCR结果表明转染组NeuroD2基因表达量显著高于对照组(P<0.05);免疫荧光及Western blot结果显示转染组NeuroD2蛋白表达量显著高于对照组(P<0.05)。成功克隆大鼠NeuroD2基因并构建了pIRES2-AcGFP1-ND2真核表达载体。 展开更多
关键词 NeuroD2 基因克隆 生物信息学分析 pires2-acgfp1-ND2
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HBcAg基因和PreS1(1～65)肽基因真核重组载体的构建和鉴定
4
作者 李晖 田德英 陈淼 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2008年第4期232-234,共3页
目的：构建并鉴定包含人乙型肝炎病毒（HBV）HBcAg基因和PreS1（1～65）肽基因的真核重组载体。方法：采用PCR法扩增HBcAg基因，并通过基因突变在79～80位氨基酸处生成一个NheⅠ酶切位点，然后将这段基因连接到真核表达载体pIRES2-EGFP... 目的：构建并鉴定包含人乙型肝炎病毒（HBV）HBcAg基因和PreS1（1～65）肽基因的真核重组载体。方法：采用PCR法扩增HBcAg基因，并通过基因突变在79～80位氨基酸处生成一个NheⅠ酶切位点，然后将这段基因连接到真核表达载体pIRES2-EGFP启动子下游的EcoRⅠ和BamHⅠ之间。同时PCR扩增PreS1第1～65氨基酸基因，并在其两端分别引入NheⅠ酶切位点，通过酶切、连接，将这段基因插入到HBcAg基因的NheⅠ酶切位点上。将构建的重组载体pIREScS1转化大肠杆菌DH5α，分别用上述内切酶双酶切及DNA测序鉴定重组质粒。结果：酶切鉴定示，插入片段大小均与预计相符。测序结果与已知序列结果一致。结论：成功构建了HBcAg基因和PreS1（1～65）肽基因的真核重组载体。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒(HBV) 乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg) PreS1(1-65)肽基因 真核重组载体 pires2-EGFP
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携带绿色荧光报告基因EBV-LMP2A真核表达载体构建及转染鼻咽癌细胞
5
作者 鄢雪敏 撖子建 +2 位作者 蔡琰 余展鹏 黄元姣 《中国癌症防治杂志》 CAS 2016年第4期207-211,共5页
目的构建携带绿色荧光基因的真核表达载体p IRES2-Zs-Green1-LMP2A,并转染至鼻咽癌CNE2细胞。方法从EB病毒阳性的狨猴淋巴瘤细胞B95-8中克隆EB病毒编码的EBV潜伏膜蛋白2A(latent membrane protein 2A,LMP2A)序列,并定向克隆入p IRES2-Zs... 目的构建携带绿色荧光基因的真核表达载体p IRES2-Zs-Green1-LMP2A,并转染至鼻咽癌CNE2细胞。方法从EB病毒阳性的狨猴淋巴瘤细胞B95-8中克隆EB病毒编码的EBV潜伏膜蛋白2A(latent membrane protein 2A,LMP2A)序列,并定向克隆入p IRES2-Zs-Green1载体,双酶切及测序鉴定重组的真核表达载体p IRES2-Zs-Green1-LMP2A;通过脂质体转染将重组的真核表达载体p IRES2-Zs-Green1-LMP2A转染至鼻咽癌CNE2细胞(实验组),同时另设转染p IRES2-Zs-Green1载体的阴性对照组及未转染的空白对照组。利用质粒所携带的绿色荧光蛋白表达计算细胞转染效率,RT-PCR检测目的基因LMP2A在鼻咽癌CNE2细胞中的表达。结果双酶切及测序鉴定证实真核表达载体p IRES2-Zs-Green1-LMP2A构建成功,荧光显微镜下发现实验组和阴性对照组细胞均发出绿色荧光,实验组细胞转染率约为75%;RT-PCR检测发现实验组细胞中有目的基因LMP2A表达,但阴性对照组和空白对照组均未检测到目的基因表达。结论成功构建了p IRES2-Zs-Green1-LMP2A真核表达载体并转染鼻咽癌CNE2细胞,目的基因LMP2A可在转染的鼻咽癌CNE2细胞中稳定表达。 展开更多
关键词 鼻咽肿瘤 EBV潜伏膜蛋白2A 序列克隆 pires2-Zs-Green1载体 pires2-Zs-Green1-LMP2A真核表达载体 基因转染 基因表达
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Construction of the pIRES2-ZsGreen1 eukaryotic expression vector of factor Ⅸ gene and expression in HEK-293 cells
6
作者 陈剑芳 《China Medical Abstracts(Internal Medicine)》 2017年第1期53-,共1页
Objective To construct p IRES2-ZsG reen1/FⅨexpression vector,using the pcDNA/FⅨplasmid containing FⅨcDNA as template,and expressing in HEK-293cells.Methods The total ORF of FⅨgene was amlified from pcDNA/FⅨplasmi... Objective To construct p IRES2-ZsG reen1/FⅨexpression vector,using the pcDNA/FⅨplasmid containing FⅨcDNA as template,and expressing in HEK-293cells.Methods The total ORF of FⅨgene was amlified from pcDNA/FⅨplasmid,then the amplified fragment was clonded into the p IRES2-ZsG reen1 vector using 展开更多
关键词 HEK gene and expression in HEK-293 cells Construction of the pires2-ZsGreen1 eukaryotic expression vector of factor
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GST-π表达水平与人食管鳞癌耐顺铂的关系研究 被引量：5
7
作者 唐悦 龚光明 +1 位作者 柳璐璐 李敏 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期30-34,共5页
目的拟通过调控GST-π的表达水平,观察其对食管癌细胞耐药性的影响。方法构建GST-π基因的真核表达载体,转染入亲本细胞EC9706细胞后观察GST-π的过表达是否会促使食管癌细胞耐药性的产生。结果 GST-π的表达载体pIRES2-AcGFP1-GST-π... 目的拟通过调控GST-π的表达水平,观察其对食管癌细胞耐药性的影响。方法构建GST-π基因的真核表达载体,转染入亲本细胞EC9706细胞后观察GST-π的过表达是否会促使食管癌细胞耐药性的产生。结果 GST-π的表达载体pIRES2-AcGFP1-GST-π转染入EC9706细胞后,RT-PCR检测GST-πmRNA表达增强,Western blotting见其蛋白表达增强,MTT实验显示该细胞针对顺铂的耐药性增强,耐药指数达2.36。结论该实验说明增加食管癌细胞内GST-π的表达会促使食管癌细胞的耐药性产生。 展开更多
关键词 食管鳞癌 顺铂耐药 GST-Π pires2-acgfp1
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原癌基因c-myc真核表达载体构建及其生物学作用
8
作者 荆志波 韦丹丹 逄越 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期705-709,共5页
目的利用基因工程技术构建携带原癌基因c-myc的真核表达载体pIRES2-AcGFP1-Nuc-c-myc重组质粒并在Hela细胞中表达。方法以构建好的表达质粒pET28a-c-myc为基础,利用PCR方法扩增c-myc基因,并加入EcoRⅠ和SmaⅠ酶切位点,克隆至pMD19-T Sim... 目的利用基因工程技术构建携带原癌基因c-myc的真核表达载体pIRES2-AcGFP1-Nuc-c-myc重组质粒并在Hela细胞中表达。方法以构建好的表达质粒pET28a-c-myc为基础,利用PCR方法扩增c-myc基因,并加入EcoRⅠ和SmaⅠ酶切位点,克隆至pMD19-T Simple载体,双酶切后将其与同样经过双酶切的真核表达载体pIRES2-AcGFP1-Nuc连接,通过PCR、酶切及测序鉴定重组质粒的正确性,再将重组质粒pIRES2-AcGFPl-Nuc-c-myc转染Hela细胞,利用荧光显微镜观察GFP表达,利用MTT和免疫印迹证实c-myc蛋白表达量提高。结果经PCR和酶切鉴定与预期结果相符,测序结果与GenBank中报道的序列完全一致,成功构建了重组表达质粒。免疫印迹证实c-myc基因在Hela细胞中得到表达。MTT结果显示Hela细胞数量显著增加。结论真核表达载体pIRES2-AcGFP1-Nuc-c-myc成功构建,c-myc基因在Hela细胞中成功表达,具有生物学活性。 展开更多
关键词 C-MYC pires2-acgfp1-Nuc 载体构建
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人类DCC基因克隆及真核表达载体构建与鉴定 被引量：10
9
作者 翟保平 李文涛 +2 位作者 张斌 于洋 李育红 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期226-228,共3页
目的 克隆人类DCC基因并构建其真核表达载体pIRES2-AcGFPI/DCC.方法 从正常皮肤组织中提取总RNA,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法扩增DCC基因全长cDNA（4351bp）,克隆人pMD18-T载体并转化大肠杆菌JM109,经PCR、酶切鉴定均为阳性... 目的 克隆人类DCC基因并构建其真核表达载体pIRES2-AcGFPI/DCC.方法 从正常皮肤组织中提取总RNA,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法扩增DCC基因全长cDNA（4351bp）,克隆人pMD18-T载体并转化大肠杆菌JM109,经PCR、酶切鉴定均为阳性的克隆,进行核苷酸测序分析,再将DCC基因定向克隆人pIRES2-AcGFP1载体中构建表达载体pIRES2-AcGFP1/DCC.结果 RT-PCR扩增后的产物在约4351 bp处出现明显的特异性条带,DCC基因的cDNA片段被成功插入真核表达载体pIRES2-AcGFP1质粒的多克隆位点,经鉴定与GenBank收录的DCC cDNA序列一致.结论 DCC基因的cDNA片段被成功克隆. 展开更多
关键词 DCC基因 pires2-acgfp1 克隆
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