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pEGFPC1-uPAR重组质粒的构建及对细胞增殖和侵袭性的影响
被引量：
1
1
作者
高强国
符刚
+1 位作者
曾益军
杨恬
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第19期1928-1930,共3页
目的构建含人uPAR基因片断的真核表达绿色荧光蛋白质粒,并进行初步的细胞生物学研究。方法设计引物,利用PCR从原核表达质粒中扩增人全长uPAR基因,并导入真核表达载体绿色荧光蛋白质粒pGFPC1中,测序确认后转染Pam212细胞,使之在细胞中表...
目的构建含人uPAR基因片断的真核表达绿色荧光蛋白质粒,并进行初步的细胞生物学研究。方法设计引物,利用PCR从原核表达质粒中扩增人全长uPAR基因,并导入真核表达载体绿色荧光蛋白质粒pGFPC1中,测序确认后转染Pam212细胞,使之在细胞中表达,检测其细胞生长特性和侵袭能力的变化。结果测序证实构建的含uPAR的绿色荧光蛋白质粒,其uPARcDNA阅读框完整,连接部位序列正确;转染Pam212细胞后,能促进细胞的生长并能增强细胞的侵袭能力。结论成功构建了含pEGFPC1-uPAR质粒,确认uPAR能促进Pam212细胞的生长和侵袭,为进一步在体定位研究打下了基础。
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关键词
UPAR
pegfpc1
Pare
212细胞
暂未订购
低氧诱导因子1α过表达对PC12细胞在CoCl2拟缺氧模型中凋亡的影响
被引量：
5
2
作者
赵宁辉
杨勇涛
+3 位作者
徐蔚
郝金刚
赵娜
黄晓玮
《中华神经医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第12期1189-1192,共4页
目的 研究CoCl2处理拟缺氧损伤条件下低氧诱导因子1α（HIF-1α）过表达对PC12神经细胞凋亡状态的影响.方法 分化后的PC12细胞分为2组,实验组转染pEGFPC1-HIF-1α△ODD表达质粒,对照组转染pEGFPC1.CoCl2处理模拟细胞缺氧损伤条件;Wester...
目的 研究CoCl2处理拟缺氧损伤条件下低氧诱导因子1α（HIF-1α）过表达对PC12神经细胞凋亡状态的影响.方法 分化后的PC12细胞分为2组,实验组转染pEGFPC1-HIF-1α△ODD表达质粒,对照组转染pEGFPC1.CoCl2处理模拟细胞缺氧损伤条件;Western blotting检测2组细胞常氧和缺氧时HIF-1α的表达;Hochest33342染色、流式细胞仪和Caspase-3活性检测3种方法观察神经细胞拟缺氧损伤时HIF-1α的过表达对细胞凋亡的影响.结果 50 μmol/L及100μmol/L CoCl2处理PC12细胞12 h、24 h可以诱导细胞拟缺氧损伤模型,实验组细胞常氧和缺氧时HIF-1α表达均高于对照组.Hochest33342染色结果提示实验组凋亡细胞明显少于对照组细胞.50 μmol/L CoCl2处理24 h后,流式细胞仪结果显示实验组细胞凋亡率为（5.41±3.29）%,对照组为（8.35±2.59）%,差异有统计学意义（P＜0.05）.加入50μmol/LCoCl2处理12 h后,实验组细胞中Caspase-3活性的增加倍数明显低于实验组细胞.结论 适量CoCl2处理的神经细胞系拟缺氧损伤模型中,HIF-1α的过表达对细胞凋亡有显著的抑制作用.
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关键词
细胞低氧
低氧诱导因子1Α
二氯化钴
细胞凋亡
原文传递
题名
pEGFPC1-uPAR重组质粒的构建及对细胞增殖和侵袭性的影响
被引量：
1
1
作者
高强国
符刚
曾益军
杨恬
机构
第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室
出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第19期1928-1930,共3页
基金
国家自然科学基金资助项目(30270671
30371383)~~
文摘
目的构建含人uPAR基因片断的真核表达绿色荧光蛋白质粒,并进行初步的细胞生物学研究。方法设计引物,利用PCR从原核表达质粒中扩增人全长uPAR基因,并导入真核表达载体绿色荧光蛋白质粒pGFPC1中,测序确认后转染Pam212细胞,使之在细胞中表达,检测其细胞生长特性和侵袭能力的变化。结果测序证实构建的含uPAR的绿色荧光蛋白质粒,其uPARcDNA阅读框完整,连接部位序列正确;转染Pam212细胞后,能促进细胞的生长并能增强细胞的侵袭能力。结论成功构建了含pEGFPC1-uPAR质粒,确认uPAR能促进Pam212细胞的生长和侵袭,为进一步在体定位研究打下了基础。
关键词
UPAR
pegfpc1
Pare
212细胞
Keywords
human uPAR
pegfpc1
Pam 212 cells
分类号
R329.28 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
R394.33 [医药卫生—医学遗传学]
暂未订购
题名
低氧诱导因子1α过表达对PC12细胞在CoCl2拟缺氧模型中凋亡的影响
被引量：
5
2
作者
赵宁辉
杨勇涛
徐蔚
郝金刚
赵娜
黄晓玮
机构
昆明医学院第二附属医院神经外科
昆明医学院第二附属医院放射科
云南大学生物资源保护与利用重点实验室
出处
《中华神经医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第12期1189-1192,共4页
基金
国家自然科学基金面上项目（30660190）
云南省科技厅-昆明医学院联合专项基金（2008CD021,20080CD19）
云南省中青年学术技术带头人后备人才项目（2009C1034）
文摘
目的 研究CoCl2处理拟缺氧损伤条件下低氧诱导因子1α（HIF-1α）过表达对PC12神经细胞凋亡状态的影响.方法 分化后的PC12细胞分为2组,实验组转染pEGFPC1-HIF-1α△ODD表达质粒,对照组转染pEGFPC1.CoCl2处理模拟细胞缺氧损伤条件;Western blotting检测2组细胞常氧和缺氧时HIF-1α的表达;Hochest33342染色、流式细胞仪和Caspase-3活性检测3种方法观察神经细胞拟缺氧损伤时HIF-1α的过表达对细胞凋亡的影响.结果 50 μmol/L及100μmol/L CoCl2处理PC12细胞12 h、24 h可以诱导细胞拟缺氧损伤模型,实验组细胞常氧和缺氧时HIF-1α表达均高于对照组.Hochest33342染色结果提示实验组凋亡细胞明显少于对照组细胞.50 μmol/L CoCl2处理24 h后,流式细胞仪结果显示实验组细胞凋亡率为（5.41±3.29）%,对照组为（8.35±2.59）%,差异有统计学意义（P＜0.05）.加入50μmol/LCoCl2处理12 h后,实验组细胞中Caspase-3活性的增加倍数明显低于实验组细胞.结论 适量CoCl2处理的神经细胞系拟缺氧损伤模型中,HIF-1α的过表达对细胞凋亡有显著的抑制作用.
关键词
细胞低氧
低氧诱导因子1Α
二氯化钴
细胞凋亡
Keywords
Objective To investigate the effects of over-expression ofhypoxia inducible factor 1α （HIF-1α） on apoptosis of PC12 cells under hypoxic injury condition mimicked by CoCl2. Methods To obtain the neural cell line over-expressing HIF-1α, the recombinant eukaryotic expression vector of
pegfpc1
-HIF-1α△ODD was transfected into the differentiated PC12 cells, and
pegfpc1
was transfected into the PC12 cells as control group. PC12 cells under simulative hypoxic injury condition was constructed by CoCl2 treatment. The expression of HIF-1α was analyzed under normal and hypoxia conditions, respectively, using the method of Western blotting. Then Hoechst33342 staining, flow cytometer and caspase-3 activity detection were employed to measure and compare the cell apoptosis rates between the over-expressing HIF-1α cell line and the controls. Results We successfully constructed the model with simulative hypoxic injury to the PC12 cell line via the treatment of 50 μ mol/L or 100 μ mol/L CoCl2 for 12-24 h. The results from Western blotting illustrated that cells transfected by
pegfpc1
-HIF-1α△ODD highly expressed HIF-1α under both normal and hypoxic conditions as compared with the control cells. Furthermore, Hoechst33342 staining indicated that the apoptosis rate in those transfected by
pegfpc1
-HIF-1α△ODD was significantly decreased as compared with that in the control cells
the apoptosis rate in those transfected by
pegfpc1
-HIF-1α△ODD （5.41±3.29）% and the control cells （8.35±2.59）% was obviously different 24 h after treatment with 50 μ mol/L CoCl2 （P＜0.05）.The caspase-3 activities were significantly different between those transfected by
pegfpc1
-HIF-1α△ODD （2.152±0.384） and control cells （0.921 ±0.287） 12 h after treatment with 50μmol/L CoCl2 （P＜0.05）. Conclusion In the model of neural cells undergoing simulative hypoxic injury by the treatment of CoCl2, over-expression of HIF-1α can inhibit the cell apoptosis.Keywords：Cell hypoxia
Hopoxia inducible factor
CoCl2
Apoptosis
分类号
R686 [医药卫生—骨科学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
pEGFPC1-uPAR重组质粒的构建及对细胞增殖和侵袭性的影响
高强国
符刚
曾益军
杨恬
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005
1
暂未订购
2
低氧诱导因子1α过表达对PC12细胞在CoCl2拟缺氧模型中凋亡的影响
赵宁辉
杨勇涛
徐蔚
郝金刚
赵娜
黄晓玮
《中华神经医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010
5
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