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pEGFP-C2-GATA4真核表达载体的构建及在P19细胞中的表达 被引量:7
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作者 张金平 王巍 +4 位作者 张雷 王慧娟 赵春芳 陈炜 赵秀军 《第四军医大学学报》 北大核心 2008年第2期134-137,共4页
目的:构建小鼠GATA4基因融合绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C2-GATA4,并检验其在P19细胞中的瞬时表达.方法:以真核表达质粒pEFSA-GATA4为模板,PCR扩增得到小鼠GATA4基因片段,将目的片段亚克隆到pEG-FP-C2载体,卡那霉素筛选阳性克隆,经... 目的:构建小鼠GATA4基因融合绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C2-GATA4,并检验其在P19细胞中的瞬时表达.方法:以真核表达质粒pEFSA-GATA4为模板,PCR扩增得到小鼠GATA4基因片段,将目的片段亚克隆到pEG-FP-C2载体,卡那霉素筛选阳性克隆,经菌落PCR、酶切鉴定和测序鉴定.将重组质粒pEGFP-C2-GATA4以脂质体法瞬时转染P19细胞,用免疫细胞化学、共聚焦扫描显微镜、PCR、免疫印记法检测GATA4在P19细胞中的表达.结果:酶切、测序结果表明将基因片段GATA4正确插入pEGFP-C2载体,并可在P19细胞中检测到GATA4基因和GATA4-EGFP融合蛋白表达.结论:成功构建真核表达质粒pEGFP-C2-GATA4,并在P19细胞瞬时表达成功,为进一步研究GATA4在心脏发育中的作用奠定了基础. 展开更多
关键词 pEGFP—C2载体 GATA4 真核表达质粒 P19细胞 转染
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新疆细毛羊pEGFP-C2-KAP6.1真核表达质粒的构建与鉴定 被引量:3
2
作者 沈文 孙延鸣 +3 位作者 崔茹鹏 鲁海富 肖林晋 石国庆 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第12期17-20,共4页
试验采集新疆细毛羊皮肤组织,提取RNA,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术扩增出KAP6.1基因,并通过DNA重组技术将该基因片段重组于pEGFP-C2真核表达载体上,构建pEGFP-C2-KAP6.1重组质粒,并进行PCR、酶切鉴定。结果表明,本试验成功构... 试验采集新疆细毛羊皮肤组织,提取RNA,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术扩增出KAP6.1基因,并通过DNA重组技术将该基因片段重组于pEGFP-C2真核表达载体上,构建pEGFP-C2-KAP6.1重组质粒,并进行PCR、酶切鉴定。结果表明,本试验成功构建了新疆细毛羊的pEGFP-C2-KAP6.1真核表达重组质粒,为进一步研究该基因所编码的蛋白与毛品质的关系,以及培育超细羊毛等经济性生物学性状相互关系提供理论依据。 展开更多
关键词 新疆细毛羊 pegfp-c2载体 KAP6 1基因 真核表达
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鼠源pEGFP-C2-NLRC5重组质粒的构建及其表达 被引量:1
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作者 李琳 彭云云 +2 位作者 黄成 徐涛 李俊 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2014年第2期145-148,共4页
目的构建鼠源pEGFP-C2-NLRC5表达质粒,并观察其在RAW264.7细胞中的表达。方法从小鼠巨噬细胞RAW264.7中获得NLRC5基因的cDNA,用EcoRⅠ和BamHⅠ限制性内切酶双酶切后连接至pEGFP-C2载体上。表达载体经PCR、限制性内切酶酶切和DNA序列分... 目的构建鼠源pEGFP-C2-NLRC5表达质粒,并观察其在RAW264.7细胞中的表达。方法从小鼠巨噬细胞RAW264.7中获得NLRC5基因的cDNA,用EcoRⅠ和BamHⅠ限制性内切酶双酶切后连接至pEGFP-C2载体上。表达载体经PCR、限制性内切酶酶切和DNA序列分析正确后转染至小鼠巨噬细胞RAW264.7中,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,RT-PCR法鉴定其转录,Western blot法分析其蛋白表达。结果进行双酶切鉴定该质粒可见NLRC5DNA片段,转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR法可检测到NLRC5基因的转录,Western blot法可检测到NLRC5蛋白表达。结论成功构建重组pEGFP-C2-NLRC5表达载体,NLRC5蛋白可与绿色荧光蛋白在RAW264.7细胞中融合表达。 展开更多
关键词 NLRC5 pegfp-c2 RAW264 7 基因表达 蛋白表达 NLRC5 pegfp-c2 RAW264 7
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Construction of Recombinant Adenovirus Vector Containing CEVB2L Gene 被引量:2
4
作者 邵洪泽 毛文智 +4 位作者 宋阳 李琳 程荣华 孙健 孙强 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2010年第3期94-97,共4页
[Objective] Sheep contagious ecthyma virus B2L gene recombinant adenovirus was built by adenovirus vector system.[Method] Genome DNA extracted from sheep contagious ecthyma virus strain JLSY04 as a template,Gene fragm... [Objective] Sheep contagious ecthyma virus B2L gene recombinant adenovirus was built by adenovirus vector system.[Method] Genome DNA extracted from sheep contagious ecthyma virus strain JLSY04 as a template,Gene fragments obtained from B2L by PCR amplification;B2L gene cloning was cloned into PDNR-CMD vector,screening positive clones and plasmid CTC572-6 was obtained;CTC572-6 plasmid for homologous was recombined with the adenoviral vector.Screening positive clones and bacilli PCR,digestion and sequencing and so on were identified.[Result] After identified by enzyme digestion and gene sequencing,recombinant adenovirus vector CTC572Ade-30 of carrying sheep contagious ecthyma virus B2L gene was constructed successfully.[Conclusion] Which laid the foundation for sheep contagious ecthyma genetically engineered vaccine. 展开更多
关键词 CEV B2L gene Adenovirus vector
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Combination Computing of Support Vector Machine, Support Vector Regression and Molecular Docking for Potential Cytochrome P450 1A2 Inhibitors 被引量:1
5
作者 陈茜 乔连生 +2 位作者 蔡漪涟 张燕玲 李贡宇 《Chinese Journal of Chemical Physics》 SCIE CAS CSCD 2016年第5期629-634,I0002,共7页
The computational approaches of support vector machine (SVM), support vector regression (SVR) and molecular docking were widely utilized for the computation of active compounds. In this work, to improve the accura... The computational approaches of support vector machine (SVM), support vector regression (SVR) and molecular docking were widely utilized for the computation of active compounds. In this work, to improve the accuracy and reliability of prediction, the strategy of combining the above three computational approaches was applied to predict potential cytochrome P450 1A2 (CYP1A2) inhibitors. The accuracy of the optimal SVM qualitative model was 99.432%, 97.727%, and 91.667% for training set, internal test set and external test set, respectively, showing this model had high discrimination ability. The R2 and mean square error for the optimal SVR quantitative model were 0.763, 0.013 for training set, and 0.753, 0.056 for test set respectively, indicating that this SVR model has high predictive ability for the biolog-ical activities of compounds. According to the results of the SVM and SVR models, some types of descriptors were identi ed to be essential to bioactivity prediction of compounds, including the connectivity indices, constitutional descriptors and functional group counts. Moreover, molecular docking studies were used to reveal the binding poses and binding a n-ity of potential inhibitors interacting with CYP1A2. Wherein, the amino acids of THR124 and ASP320 could form key hydrogen bond interactions with active compounds. And the amino acids of ALA317 and GLY316 could form strong hydrophobic bond interactions with active compounds. The models obtained above were applied to discover potential CYP1A2 inhibitors from natural products, which could predict the CYPs-mediated drug-drug inter-actions and provide useful guidance and reference for rational drug combination therapy. A set of 20 potential CYP1A2 inhibitors were obtained. Part of the results was consistent with references, which further indicates the accuracy of these models and the reliability of this combinatorial computation strategy. 展开更多
关键词 Support vector machine Support vector regression Molecular docking CYPIA2 inhibitor
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重组pEGFP-C2-p100质粒构建及表达 被引量:2
6
作者 何津岩 东莉洁 +6 位作者 葛林 赵钢 邵洁 陆燕欣 李晓冬 姚智 杨洁 《天津医科大学学报》 2008年第2期135-137,共3页
目的:将人类p100基因定向连入pEGFP-C2质粒,使p100蛋白可与绿色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达,为进一步研究p100蛋白的功能及定位奠定实验基础。方法:采用EcoRI和BamHI双酶切方法,从pSG5-p100质粒中获得p100蛋白的cDNA全长;将该cDNA连接... 目的:将人类p100基因定向连入pEGFP-C2质粒,使p100蛋白可与绿色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达,为进一步研究p100蛋白的功能及定位奠定实验基础。方法:采用EcoRI和BamHI双酶切方法,从pSG5-p100质粒中获得p100蛋白的cDNA全长;将该cDNA连接入pEGFP-C2质粒。将构建成功的pEGFP-C2-p100质粒转染入HeLa细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达。结果:(1)将该质粒进行双酶切鉴定可见p100片段。(2)转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达。结论:(1)p100 cDNA全长成功载入pEGFP-C2质粒。(2)p100蛋白可与绿色荧光蛋白在HeLa细胞中融合表达。 展开更多
关键词 人类p100蛋白 pegfp-c2 重组质粒 融合蛋白
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Cloning of Cotton Delta-12 Oleate Desaturase Gene FAD2-1 and Construction of Its ihpRNA and amiRNA Interference Vectors 被引量:1
7
作者 赵立群 李红岺 +3 位作者 李仁 李蔚 华金平 郭仰东 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2012年第11期2281-2283,2286,共4页
Delta-12 oleate desaturase gene (FAD2-1) which converts oleic acid into linoleic acid, is the key enzyme determining the fatty acid composition of cottonseed oil. By employing RT-PCR method, full length cDNA of cott... Delta-12 oleate desaturase gene (FAD2-1) which converts oleic acid into linoleic acid, is the key enzyme determining the fatty acid composition of cottonseed oil. By employing RT-PCR method, full length cDNA of cotton delta-12 oleate desat- urase gene GhFAD2-1 containing an open reading frame of 1 158 bp was cloned for constructing RNAi vector. A 515 bp long specific fragment of this gene was se- lected for constructing ihpRNA vector under the control of a seed-specific promoter NAPIN, named pFGC1008-NAPIN-FAD2-1; meanwhile miRNA gene-silencing vector pCAMBIA1302-amiRNA-FAD2-1 targeting GhFAD2-1 was also constructed. 展开更多
关键词 Cotton delta-12 oleate desaturase gene GhFAD2-1 ihpRNA interferencevector amiRNA interference vector High oleic acid contents
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人pEGFP-C2-PRDX3真核表达载体构建与在人髓母细胞瘤DAOY细胞中表达
8
作者 王晓玫 金红涛 +7 位作者 成志强 彭全洲 胡锦涛 高利昆 许静 张石芬 曾照成 刘汉勇 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1325-1328,共4页
目的构建人pEGFP-C2-PRDX3真核表达载体,并检测其在人髓母细胞瘤DAOY细胞中的表达。方法从人髓母细胞瘤DAOY细胞中提取总RNA,采用RT-PCR法对编码PRDX3的基因片段进行扩增,应用基因重组技术,将目的片段亚克隆到pEGFP-C2真核表达载体,经PC... 目的构建人pEGFP-C2-PRDX3真核表达载体,并检测其在人髓母细胞瘤DAOY细胞中的表达。方法从人髓母细胞瘤DAOY细胞中提取总RNA,采用RT-PCR法对编码PRDX3的基因片段进行扩增,应用基因重组技术,将目的片段亚克隆到pEGFP-C2真核表达载体,经PCR、酶切和测序鉴定后,用脂质体法将重组质粒转染入DAOY细胞,分别采用RT-PCR法、West-ern blot法检测PRDX3在DAOY细胞中的表达。结果双酶切及测序结果验证PRDX3片段正确插入pEGFP-C2质粒,转染后的PRDX3基因mRNA及蛋白质水平均明显上调。结论成功构建了具有报告基因-增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因的真核表达载体pEGFP-C2-PRDX3,为进一步研究PRDX3基因在人髓母细胞瘤中的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 pegfp-c2质粒 PRDX3 DAOY细胞 真核表达载体
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pEGFP-C2-ASIC2a真核表达载体的构建及其在大鼠关节软骨细胞中的表达
9
作者 倪文琳 唐杰 +2 位作者 潘春晓 葛金芳 陈飞虎 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2014年第3期304-308,共5页
目的通过构建真核表达pEGFP-C2-ASIC2a质粒,转染大鼠关节软骨细胞,建立ASIC2a在关节软骨细胞中过表达的模型,观察ASIC2a mRNA及其蛋白在细胞中的表达。方法从大鼠脑组织中提取目的基因ASIC2a,并用EcoRⅠ和KpnⅠ进行双酶切,同时用这两种... 目的通过构建真核表达pEGFP-C2-ASIC2a质粒,转染大鼠关节软骨细胞,建立ASIC2a在关节软骨细胞中过表达的模型,观察ASIC2a mRNA及其蛋白在细胞中的表达。方法从大鼠脑组织中提取目的基因ASIC2a,并用EcoRⅠ和KpnⅠ进行双酶切,同时用这两种酶双酶切质粒pEGFPC2,将其酶切产物按常规方法连接并转化入大肠杆菌DH5a,挑单克隆菌进行培养,提取质粒,再通过双酶切鉴定及测序后,用Lipofectamine 2000将所构建质粒转染入关节软骨细胞,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,使用RT-PCR和Western blot法检测ASIC2a mRNA和蛋白表达,以鉴定模型建立成功与否。结果进行双酶切鉴定目的条带清晰准确,转染后可在荧光显微镜下观察到绿色荧光表达,通过RT-PCR可发现mRNA转录,Western blot法可发现目的蛋白表达。结论成功构建重组pEGFP-C2-ASIC2a表达载体,将用于进一步观察ASICs对软骨细胞的影响。 展开更多
关键词 ASIC2a pegfp-c2 软骨细胞 基因表达 蛋白表达
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pEGFP-C3/SUMF2重组真核表达载体的构建及在人支气管上皮细胞中的表达 被引量:3
10
作者 杨春 张婉莹 +1 位作者 梁红艳 姜晓峰 《中华临床免疫和变态反应杂志》 2012年第3期168-172,共5页
目的构建与增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)融合的人硫酸酯酶修饰因子2(SUMF2)真核表达载体。方法用RT-PCR技术从人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells,HBEC)获得SUMF2的cDNA模板,PCR方法... 目的构建与增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)融合的人硫酸酯酶修饰因子2(SUMF2)真核表达载体。方法用RT-PCR技术从人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells,HBEC)获得SUMF2的cDNA模板,PCR方法扩增人SUMF2基因。用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切扩增人SUMF2基因及质粒pEGFP-C3;将2种酶切产物按常规方法连接、转化大肠杆菌Top10;挑取菌落培养,提取质粒,酶切鉴定,测序;将测序正确的重组载体用脂质体法转染HBEC,荧光倒置显微镜观察。提取转染细胞的总蛋白进行Western blot检测。结果扩增出1条约857bp的片段,与预期的SUMF2大小相符。酶切结果显示重组质粒pEGFP-C3/SUMF2被切成2条片段,其中1条为pEGFP-C3载体,另1条为目的片段。经测序鉴定,序列与GenBank(NM_015411.2)中的序列高度同源。荧光倒置显微镜观察显示,人SUMF2基因主要在内质网表达。Western blot结果显示在相对分子质量为37×103处有一蛋白条带,与预期大小相符。结论成功构建重组表达载体pEGFP-C3/SUMF2,为进一步研究SUMF2对IL-13的作用奠定了实验基础。 展开更多
关键词 硫酸酯酶修饰因子2 真核表达载体 人支气管上皮细胞
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重组组蛋白去乙酰化酶2-pEGFP-C2质粒的构建及表达
11
作者 章慧 黄成 +5 位作者 卞尔保 赵斌 吴宝明 刘昌伟 陈小霞 李俊 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期812-816,共5页
目的将组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)基因克隆入pEGFP-C2载体,探讨构建的质粒转染进非洲绿猴肾成纤维细胞COS-7株相关蛋白和mRNA的表达及蛋白分布部位的情况。方法从人肝癌细胞(HepG2)中获得组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)的cDNA,采用Xho I和Bam... 目的将组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)基因克隆入pEGFP-C2载体,探讨构建的质粒转染进非洲绿猴肾成纤维细胞COS-7株相关蛋白和mRNA的表达及蛋白分布部位的情况。方法从人肝癌细胞(HepG2)中获得组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)的cDNA,采用Xho I和BamH I双酶切,用T4连接酶将该cDNA连接pEGFP-C2质粒,将构建成功的pEGFP-C2-HDAC2质粒经PCR、限制性内切酶酶切和测序鉴定后转染非洲绿猴肾成纤维细胞(COS-7),荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,RT-PCR和Western blot鉴定HDAC2的表达。结果双酶切鉴定可见HDAC2质粒片段,转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达,PCR结果可检测到HDAC2 mRNA表达,同时Western blot可检测HDAC2蛋白和GFP蛋白的表达。结论成功构建了重组pEGFP-C2-HDAC2表达质粒,HDAC2蛋白可与绿色荧光蛋白在COS-7细胞中融合表达。 展开更多
关键词 组蛋白去乙酰化酶2 COS-7 融合蛋白 pegfp-c2 HEPG2 绿色荧光蛋白
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pEGFP-C2/LAT-ORF3真核表达载体的构建及其在Vero细胞中的表达
12
作者 薛礼长 杨慧兰 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期157-161,共5页
克隆单纯疱疹病毒Ⅱ型(herpes simplex virusⅡ,HSV-2)潜伏相关转录体(latency associated transcript,LAT)第3个开放阅读框(open reading frame3,ORF3)的DNA序列,构建pEGFP-C2/LAT-ORF3真核表达载体,并观察其在非洲绿猴肾细胞(Vero)中... 克隆单纯疱疹病毒Ⅱ型(herpes simplex virusⅡ,HSV-2)潜伏相关转录体(latency associated transcript,LAT)第3个开放阅读框(open reading frame3,ORF3)的DNA序列,构建pEGFP-C2/LAT-ORF3真核表达载体,并观察其在非洲绿猴肾细胞(Vero)中的表达,为进一步研究LAT基因及ORF3的生物学功能奠定基础。用HSV-2333株感染Vero细胞,从Vero细胞培养液中收集HSV-2并提取HSV-2基因组。以HSV-2基因组为模板,PCR扩增得到HSV-2LAT ORF3DAN片段。将ORF3片段连接到pEGFP-C2质粒上,用卡那霉毒筛选阳性克隆,经菌落PCR,双酶切及测序验证pEGFP-C2/LAT-ORF3真核表达载体构建成功。用Xfect转染试剂将重组载体转染入Vero细胞,倒置荧光显微镜观察其在Vero细胞中的表达。双酶切及测序结果验证ORF3片段正确插入pEGFP-C2质粒,荧光显微镜观察到融合蛋白在转染的Vero细胞中的表达。成功构建pEGFP-C2/LAT-ORF3真核表达载体,该重组质粒能在Vero细胞中成功表达。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒Ⅱ型 pegfp-c2质粒 LAT ORF3 真核表达载体 VERO细胞
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pEGFP-C_3-insig2融合基因真核表达质粒的构建、表达及其对下游基因的影响
13
作者 陈科 莫朝晖 +3 位作者 邢晓为 胡平安 杨幼波 谢艳红 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期309-311,316,共4页
目的构建insig2基因的真核表达质粒,转染3T3-L1细胞并观察对下游脂肪酸结合蛋白(AP2)mRNA、脂联素mRNA表达的影响。方法采用RT-PCR法获取小鼠全长insig2基因,并克隆入真核表达载体pEGFP-C3中。酶切、测序鉴定后,经脂质体转染入3T3-L1细... 目的构建insig2基因的真核表达质粒,转染3T3-L1细胞并观察对下游脂肪酸结合蛋白(AP2)mRNA、脂联素mRNA表达的影响。方法采用RT-PCR法获取小鼠全长insig2基因,并克隆入真核表达载体pEGFP-C3中。酶切、测序鉴定后,经脂质体转染入3T3-L1细胞,通过荧光显微镜观察及RT-PCR检测其在3T3-L1细胞中的表达及下游基因的变化。结果成功地构建了pEGFP-C3-insig2融合基因的真核表达载体,荧光显微镜观察到pEGFP-C3-insig2融合蛋白在转染的3T3-L1细胞胞质中的表达,insig2基因的转录明显上调。转染后24h、72h较0hAP2 mRNA和脂联素mRNA的转录水平明显下调。结论构建了insig2基因的真核表达质粒,在转染的3T3-L1细胞中insig2的过表达可能影响该细胞的脂肪代谢。 展开更多
关键词 pegfp-c3-insig2 3T3-L1细胞 表达
原文传递
VECTOR2X电子罗盘OEM板及其应用
14
作者 罗卫兵 马力男 王永生 《半导体技术》 CAS CSCD 北大核心 2001年第7期37-40,共4页
介绍了美国 PNI公司的一种 2轴电子罗盘及其单片机接口,并描述了一种利用该电子罗盘设计的自动定向天线伺服系统。
关键词 电子罗盘 姿态传感器 定向天线 单片机 vector2X 专用集成电路
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重组pEGFP-C2-FOXC1-C真核表达质粒的构建与表达
15
作者 刘博 董亮 +3 位作者 李颖 郝永娜 魏瑞华 东莉洁 《天津医科大学学报》 2012年第2期148-150,154,共4页
目的:将人FOXC1-C基因定向连入pEGFP-C2质粒,使FOXC1-C蛋白可与绿色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达,为进一步研究FOXC1-C蛋白的功能及定位奠定实验基础。方法:采用EcoR I和NotI双酶切方法,从pcDNA3.1(+)-FOXC1-C质粒中获得FOXC1-C蛋白的c... 目的:将人FOXC1-C基因定向连入pEGFP-C2质粒,使FOXC1-C蛋白可与绿色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达,为进一步研究FOXC1-C蛋白的功能及定位奠定实验基础。方法:采用EcoR I和NotI双酶切方法,从pcDNA3.1(+)-FOXC1-C质粒中获得FOXC1-C蛋白的cDNA羧基末端;连入pEGFP-C2质粒的C端。将构建成功的pEGFP-C2-FOXC1-C质粒转染入HeLa细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达。结果:(1)将该质粒进行双酶切鉴定可见FOXC1-C片段;(2)转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达。结论:(1)FOXC1-C cDNA羧基末端成功连入pEGFP-C2质粒(;2)FOXC1-C蛋白可与绿色荧光蛋白在HeLa细胞中融合表达。 展开更多
关键词 人类FOXC1-C蛋白 pegfp-c2 重组质粒 融合蛋白
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大鼠pEGFP-C3/BMP-2真核表达载体的构建
16
作者 孙欣 曾荣 +4 位作者 郭伟韬 肖启贤 王斌 黄云 林颢 《中国医药导报》 CAS 2012年第19期18-20,共3页
目的通过克隆大鼠的BMP2基因,构建EGFP-C3/BMP2基因的真核细胞表达载体。方法把大鼠的基因组DNA通过PCR获得BMP2,克隆构建载体pEGFP/C3-BMP2,并将其转化到大肠杆菌里面,最后进行重组真核表达载体pEGFP-C3-BMP2的构建和鉴定,并可观察其... 目的通过克隆大鼠的BMP2基因,构建EGFP-C3/BMP2基因的真核细胞表达载体。方法把大鼠的基因组DNA通过PCR获得BMP2,克隆构建载体pEGFP/C3-BMP2,并将其转化到大肠杆菌里面,最后进行重组真核表达载体pEGFP-C3-BMP2的构建和鉴定,并可观察其在真核细胞中的表达。结果以大鼠总DNA为模板扩增出1200 bp左右的特异性条带,测序结果与Gene-Bank测序结果相比,翻译成的氨基酸序列相同并完全一致,并可在真核细胞中表达。对重组质粒pEGFP-C3/BMP2进行双酶切鉴定并测序,结果也完全一致。结论为进一步研究利用BMP2基因修饰骨组织工程骨,促进骨折愈合再生提供实验基础。 展开更多
关键词 BMP2基因 PCR 真核表达载体构建
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人NDRG2基因截短体在pEGFP-C2真核表达载体中的表达和鉴定 被引量:1
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作者 王健 吴琳 +4 位作者 张健 刘学武 张璟 沈岚 刘新平 《现代生物医学进展》 CAS 2009年第4期631-633,共3页
目的:在pEGFP-C2真核表达载体中表达人NDRG2基因的截短部分并进行鉴定。方法:以含有人NDRG2基因的pGKBT7质粒为模板,通过PCR的方法扩增获得截短的人NDRG2基因,然后克隆入表达载体pEGFP-C2;以荧光显微镜观察和WesternBlotting方法对表达... 目的:在pEGFP-C2真核表达载体中表达人NDRG2基因的截短部分并进行鉴定。方法:以含有人NDRG2基因的pGKBT7质粒为模板,通过PCR的方法扩增获得截短的人NDRG2基因,然后克隆入表达载体pEGFP-C2;以荧光显微镜观察和WesternBlotting方法对表达产物进行鉴定。结果:表达产物中在分子量67kD左右可见与目的蛋白分子量相符的条带,该条带可被Ndrg2单克隆抗体特异性识别。结论:构建了截短的人NDRG2基因真核表达载体,并在真核细胞中(HEK-293)获得成功表达。 展开更多
关键词 NDRG2 基因 PCR 真核表达载体pegfp-c2
原文传递
表达猪圆环病毒2d型Cap蛋白的重组猪伪狂犬病病毒的构建
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作者 焦显芹 马晓 +3 位作者 田润博 刘颖 马世杰 陈红英 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第5期2278-2286,共9页
【目的】利用同源重组技术和CRISPR/Cas9基因编辑技术,获得表达猪圆环病毒2d型(PCV2d)Cap蛋白的重组猪伪狂犬病病毒(PRV),为开发预防和控制PCV2d和PRV感染的疫苗提供技术支持。【方法】基于PCV2d KF1株ORF 2基因序列设计1对特异引物,以P... 【目的】利用同源重组技术和CRISPR/Cas9基因编辑技术,获得表达猪圆环病毒2d型(PCV2d)Cap蛋白的重组猪伪狂犬病病毒(PRV),为开发预防和控制PCV2d和PRV感染的疫苗提供技术支持。【方法】基于PCV2d KF1株ORF 2基因序列设计1对特异引物,以PCV2d KF1株DNA为模板扩增ORF 2基因。经限制性内切酶Bam HⅠ酶切后将ORF 2基因引入到含有绿色荧光蛋白(EGFP)基因的PRV转移载体pG中,获得重组质粒pG-PCV2d-EGFP。运用转染试剂ZLip2000将质粒pG-PCV2d-EGFP和PRV三基因缺失毒株gE^(-)/gI^(-)/TK^(-)PRV NY DNA共转染至ST单层细胞中拯救重组病毒,并利用CRISPR/Cas9 EGFP基因双敲除质粒敲除重组病毒中EGFP基因。经EGFP基因测序、PCR和Western blotting对获得的重组病毒进行鉴定。【结果】经8轮绿色荧光蚀斑筛选,纯化得到重组病毒rPRV-PCV2d-EGFP。CRISPR/Cas9 EGFP基因双敲除质粒敲除EGFP基因后,经3轮筛选没有绿色荧光的蚀斑,获得重组病毒rPRV-PCV2d。EGFP基因测序结果表明,rPRV-PCV2d中EGFP基因被剪截了1251 bp,PCR和Western blotting结果显示,rPRV-PCV2d携带的ORF 2基因能在ST细胞中转录与表达。【结论】本研究成功构建表达PCV2d Cap蛋白的重组病毒rPRV-PCV2d,为进一步研制重组活载体疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2 猪伪狂犬病病毒 重组病毒活载体疫苗
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基于Word2vector的文本特征化表示方法 被引量:22
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作者 周顺先 蒋励 +2 位作者 林霜巧 龚德良 王鲁达 《重庆邮电大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2018年第2期272-279,共8页
针对基于词语统计的特征化表示无法有效提取文本的词义特征的问题,提出一种基于上下文关系的文本特征化表示方法。该方法利用Word2vector提取词义特征,获得词向量;再对词向量进行"最优适应度划分"的聚类,并根据聚类结果将词... 针对基于词语统计的特征化表示无法有效提取文本的词义特征的问题,提出一种基于上下文关系的文本特征化表示方法。该方法利用Word2vector提取词义特征,获得词向量;再对词向量进行"最优适应度划分"的聚类,并根据聚类结果将词语替代表示为聚类质心;根据质心及其所代表的词语的词频,构成词向量聚类质心频率模型(semantic frequency-inverse document frequency,SF-IDF),用于特征化表示文本。在不依赖语义规则的情况下,分别以路透社文本集Reuter-21578、维基百科(extensible markup language,XML)数据为文本数据集,采用神经网络语言模型(neural network language model,NNLM)算法进行文本分类实验,并采用F1-measure标准进行样本分类的效果评估,词向量聚类质心频率模型SF-IDF(semantic frequency-inverse document frequency,SF-IDF)向量与现有技术中词频-逆向文件频率(term frequency-inverse document frequency,TF-IDF)向量的分类效果对比,与TF-IDF模型进行对比实验;在Reuter-21578数据集上平均准确率由原有的57.1%提高到63.3%,在Wikipedia XML数据集上平均准确率由原有的48.7%提高到59.2%。SF-IDF模型可适用于现行的基于特征向量的信息检索算法,且较TF-IDF模型有更高的文本相似性分析效率,可提升文本分类准确率。 展开更多
关键词 Word2vector 上下文关系 特征化表示 文本分类
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Derivation of Cloud-Free-Region Atmospheric Motion Vectors from FY-2E Thermal Infrared Imagery 被引量:3
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作者 Zhenhui WANG Xinxiu SUI +5 位作者 Qing ZHANG Lu YANG Hang ZHAO Min TANG Yizhe ZHAN Zhiguo ZHANG 《Advances in Atmospheric Sciences》 SCIE CAS CSCD 2017年第2期272-282,共11页
The operational cloud-motion tracking technique fails to retrieve atmospheric motion vectors (AMVs) in areas lacking cloud; and while water vapor shown in water vapor imagery can be used, the heights assigned to the... The operational cloud-motion tracking technique fails to retrieve atmospheric motion vectors (AMVs) in areas lacking cloud; and while water vapor shown in water vapor imagery can be used, the heights assigned to the retrieved AMVs are mostly in the upper troposphere. As the noise-equivalent temperature difference (NEdT) performance of FY-2E split win- dow (10.3-11.5 μm, 11.6-12.8 μm) channels has been improved, the weak signals representing the spatial texture of water vapor and aerosols in cloud-free areas can be strengthened with algorithms based on the difference principle, and applied in calculating AMVs in the lower troposphere. This paper is a preliminary summary for this purpose, in which the principles and algorithm schemes for the temporal difference, split window difference and second-order difference (SD) methods are introduced. Results from simulation and cases experiments are reported in order to verify and evaluate the methods, based on comparison among retrievals and the "truth". The results show that all three algorithms, though not perfect in some cases, generally work well. Moreover, the SD method appears to be the best in suppressing the surface temperature influence and clarifying the spatial texture of water vapor and aerosols. The accuracy with respect to NCEP 800 hPa reanalysis data was found to be acceptable, as compared with the accuracy of the cloud motion vectors. 展开更多
关键词 atmospheric motion vector cloud-free area FY-2E IR split window imagery difference method
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