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磷酸丝氨酸转氨酶(serC)基因的克隆与原核表达 被引量：2
1
作者 赵忠润 包慧芳 +3 位作者 王宁 周亚飞 杨慧 王炜 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期2505-2509,共5页
【目的】检测磷酸丝氨酸转氨酶(serC)基因在大肠杆菌中能否高效表达。【方法】根据GenBank所公布的serC基因序列设计一对特异性引物,以E.coli JM109基因组为模板PCR扩增目的基因片段,将得到的目的基因定向克隆至大肠杆菌/黄色短杆菌穿... 【目的】检测磷酸丝氨酸转氨酶(serC)基因在大肠杆菌中能否高效表达。【方法】根据GenBank所公布的serC基因序列设计一对特异性引物,以E.coli JM109基因组为模板PCR扩增目的基因片段,将得到的目的基因定向克隆至大肠杆菌/黄色短杆菌穿梭表达载体pEC7中,构建重组表达载体并转化宿主菌E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE分析。【结果】通过PCR扩增得到约1100 bp的DNA片段,经测序后分析该基因与已发表的serC基因具有99.27%的同源性;对重组表达载体进行酶切和PCR方法鉴定正确的命名为pEC7-C;重组表达载体转化宿主菌,SDS-PAGE分析可见约41 kD与理论大小一致的目标蛋白条带。【结论】重组表达载体转化后E.coliBL21中蛋白表达量比原始菌株的蛋白表达量高,证明serC基因在E.coli BL21(DE3)中成功表达,为进一步构建L-丝氨酸高产基因工程菌奠定了基础。 展开更多
关键词 serC基因 pec7 基因克隆 原核表达
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谷氨酸棒状杆菌gdh基因在黄色短杆菌C-11中的克隆及表达
2
作者 王宁 包慧芳 +1 位作者 杨慧 王炜 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1711-1715,共5页
【目的】研究谷氨酸脱氢酶的表达对L-丝氨酸产率及发酵效率的影响。【方法】从谷氨酸棒杆菌模式菌株C.glutamicum ATCC39135中克隆出gdh基因,以大肠杆菌-黄色短杆菌穿梭表达载体pEC7为基础,构建重组质粒pEC7G,并转化黄色短杆菌B.flavum ... 【目的】研究谷氨酸脱氢酶的表达对L-丝氨酸产率及发酵效率的影响。【方法】从谷氨酸棒杆菌模式菌株C.glutamicum ATCC39135中克隆出gdh基因,以大肠杆菌-黄色短杆菌穿梭表达载体pEC7为基础,构建重组质粒pEC7G,并转化黄色短杆菌B.flavum C-11,获得重组菌株C-11G。【结果】重组菌株C-11G的GDH酶活力提高32.7%,产酸率为15.28 g/L,比原宿主菌提高了33.80%。【结论】成功构建重组菌株C-11G,所克隆的gdh基因有较高表达活性,并对L-丝氨酸产量的提高有促进作用。 展开更多
关键词 谷氨酸脱氢酶 pec7 穿梭表达 电击转化
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广佛线列车踏面制动单元异响原因分析及对策
3
作者 侯品杨 《机车电传动》 北大核心 2014年第6期89-91,共3页
针对广佛线列车踏面制动单元异响问题,调查分析发现闸瓦间隙调节器内部面齿存在偶发性啮合不到位,导致正线运营发出响声,对此制定了状态修和预防维护措施。
关键词 广佛线 pec7 踏面制动单元 异响 制动系统 施加缓解
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广佛线地铁车辆踏面制动单元异响原因分析及解决措施
4
作者 贺锐 全明 曹小龙 《机电信息》 2017年第15期150-151,共2页
通过分析广佛线列车基础制动单元的工作原理,找出了制动单元产生异响的原因,最后提出了消除异响的措施。
关键词 广佛线列车 pec7型制动单元 异响 措施
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