植物表达载体pCAMBIA2300-35S-GUS-CaMVterm的构建及验证 被引量：4

1

作者 巩元勇 冯永坤 +3 位作者 倪万潮 束红梅 郭书巧 刘来华 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期86-91,共6页

为拓宽pCAMBIA2300表达载体的使用范围,进一步方便植物基因工程科研工作者在构建表达载体时的需要,利用SacⅠ和XhoⅠ双酶切pJIT166载体获取"35S-GUS-CaMVterm"片段,将该片段插入到pCAMBIA2300表达载体的多克隆位点区,构建完成... 为拓宽pCAMBIA2300表达载体的使用范围,进一步方便植物基因工程科研工作者在构建表达载体时的需要,利用SacⅠ和XhoⅠ双酶切pJIT166载体获取"35S-GUS-CaMVterm"片段,将该片段插入到pCAMBIA2300表达载体的多克隆位点区,构建完成了pCAMBIA2300-35S-GUS-CaMVterm表达载体。所构建的表达载体通过农杆菌介导转化拟南芥,获得拟南芥转基因植株,转基因植株的GUS染色结果进一步验证了本文所构建表达载体的正确性和实用性。该表达载体的成功构建,方便了构建基因超表达载体,以及使得研究启动子的活性及GUS组织化学定位成为可能,还可以通过GUS染色对转基因植物进行鉴定,为植物基因工程科研工作提供了一个较好的备选植物表达载体。 展开更多

关键词 植物表达载体 pcambia2300 pJIT166

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水稻碱性几丁质酶基因表达载体pCAMBIA1301-RC24的构建 被引量：4

2

作者 高丽美 李永锋 徐子勤 《山西师范大学学报（自然科学版）》 2009年第3期82-86,共5页

用限制性内切酶Kpn1从质粒pYAO24中切出大小约2.75 kb的片段,此片段包含Actin1启动子、NOS终止子、水稻几丁质酶基因.将其插入到表达载体pCAMB IA1301-imp的多克隆位点内,构建成了水稻碱性几丁质酶基因的表达载体.利用液氮冻融法将构建... 用限制性内切酶Kpn1从质粒pYAO24中切出大小约2.75 kb的片段,此片段包含Actin1启动子、NOS终止子、水稻几丁质酶基因.将其插入到表达载体pCAMB IA1301-imp的多克隆位点内,构建成了水稻碱性几丁质酶基因的表达载体.利用液氮冻融法将构建好的表达载体导入发根农杆菌LBA4404中,以用于生物工程下游技术研究. 展开更多

关键词 质粒pYAO24 几丁质酶基因 表达载体pcambia1301-imp 冻融法 发根农杆菌

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适用于Nimble Cloning系统的pCambia载体改造 被引量：3

3

作者 曾妍静 沈文涛 +3 位作者 庹德财 黎小瑛 言普 周鹏 《生命科学研究》 CAS CSCD 2019年第4期276-280,共5页

为了适用于NimbleCloning这种新型的DNA分子克隆技术,本研究以pCambia1304载体作为改造对象,采用突变碱基的方式去除载体中的5个SfiI酶切位点,并且对改造后的载体在农杆菌中的稳定性以及在植物中的表达进行分析,结果表明5个SfiI位点突... 为了适用于NimbleCloning这种新型的DNA分子克隆技术,本研究以pCambia1304载体作为改造对象,采用突变碱基的方式去除载体中的5个SfiI酶切位点,并且对改造后的载体在农杆菌中的稳定性以及在植物中的表达进行分析,结果表明5个SfiI位点突变对载体的稳定性和表达没有影响。本研究为NimbleCloning系统提供了配套载体,也为其他pCambia系列载体改造成NimbleCloning系统载体提供了模板和参考。 展开更多

关键词 分子克隆技术 NimbleCloning系统 pcambia载体 突变 SfiI酶切位点

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用LBA4404/pCAMBIA系列转化水稻的最佳条件 被引量：11

4

作者 刘志学 张旭 +4 位作者 徐亚南 何艺园 马向前 沈大棱 唐克轩 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期439-443,共5页

用带有ｇｕｓ报告基因的农杆菌ＬＢＡ４４０４／ｐＣＡＭＢＩＡ１３０１ 转化水稻品种鄂宜１０５ 成熟胚诱导的愈伤组织，以ｇｕｓ基因瞬间表达活性为指标测定转化频率，对于利用ｐＣＡＭＢＩＡ 表达载体系列进行水稻遗传转化的最佳条... 用带有ｇｕｓ报告基因的农杆菌ＬＢＡ４４０４／ｐＣＡＭＢＩＡ１３０１ 转化水稻品种鄂宜１０５ 成熟胚诱导的愈伤组织，以ｇｕｓ基因瞬间表达活性为指标测定转化频率，对于利用ｐＣＡＭＢＩＡ 表达载体系列进行水稻遗传转化的最佳条件进行了初步的研究．结果表明：最适菌液浓度值为Ｄ（６００）＝ １．０；最适共培养温度为２２～２８ ℃；共培养培养基的ｐＨ 值在５．２～６．２ 这一较宽的范围内均可．共培养时间以不超过３ ｄ 为宜；在共培养培养基中加入乙酰丁香酮对提高转化效率非常重要，而在菌液中加入乙酰丁香酮处理对提高转化效率作用不大．但不同品种，甚至不同转化受体之间存在一定的差别，其最佳转化条件应视具体情况在此基础上加以摸索． 展开更多

关键词 pcambia载体 农杆菌 水稻 遗传转化 LBA4404

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拟南芥HIS1-3基因克隆及表达载体构建 被引量：6

5

作者 吕申超 汪海涛 +2 位作者 鱼斌 孟卫卫 曹树青 《合肥工业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期120-123,共4页

文章提取拟南芥植株总RNA,通过RT-PCR扩增出HIS1-3基因的cDNA片段,连接到pEASY-T1Simple载体上,转化到Trans1-T1感受态细胞内,筛选阳性单克隆并抽提质粒。利用限制性内切酶Eco91Ⅰ和NcoⅠ对质粒pEASY-T1-HIS1-3和植物表达载体pCAMBIA230... 文章提取拟南芥植株总RNA,通过RT-PCR扩增出HIS1-3基因的cDNA片段,连接到pEASY-T1Simple载体上,转化到Trans1-T1感受态细胞内,筛选阳性单克隆并抽提质粒。利用限制性内切酶Eco91Ⅰ和NcoⅠ对质粒pEASY-T1-HIS1-3和植物表达载体pCAMBIA2301进行完全双酶切,通过电转化法,将重组表达载体pCAMBIA2301-HIS1-3导入根癌农杆菌C58中以期获得携带HIS1-3基因的根瘤农杆菌株,为研究HIS1-3基因的抗逆分子机理以及遗传改良作物抗逆性奠定了基础。 展开更多

关键词 拟南芥 HIS1-3基因 pcambia2301植物表达载体

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CaCl_2诱导大豆花粉管通道农杆菌转基因研究 被引量：9

6

作者 李卉 武天龙 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期55-59,共5页

为了提高大豆花粉管通道法转基因效率,研究直接用农杆菌转化方法的可行性,以秋大豆品种上海本地青为受体材料,用花粉管通道法在三种CaCl2浓度水平下进行质粒pCAMBIA3301转化,又以GV3101、LBA4404、EHA105三种农杆菌菌株直接导入花粉管... 为了提高大豆花粉管通道法转基因效率,研究直接用农杆菌转化方法的可行性,以秋大豆品种上海本地青为受体材料,用花粉管通道法在三种CaCl2浓度水平下进行质粒pCAMBIA3301转化,又以GV3101、LBA4404、EHA105三种农杆菌菌株直接导入花粉管通道为处理进行了遗传转化。以质粒为外源基因平均结实率为36.83%,T0代种子平均成活率为60.89%,T1植株喷施除草剂后平均存活率为8.24%。以农杆菌直接转化平均结实率为15.92%。T0代种子平均成活率为20.40%,T1植株喷施除草剂后平均存活率为7.79%。对存活的植株提取DNA进行PCR检测,以质粒为外源基因的处理共获得20株转化苗,三种CaCl2浓度水平的转化效率分别为0.56%、1.64%、1.40%,有两种水平的转化效率约为传统转化效率的三倍。以农杆菌直接转化的处理共获得5株转化苗,转化效率分别为0.17%、0.33%、0.29%。 展开更多

关键词 花粉管通道 大豆 CACL2 质粒pcambia3301 农杆菌

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RP-6启动子连接的IPT基因的双元载体构建 被引量：1

7

作者 张红心 李晓星 +2 位作者 苏勇波 黄维雪 陈亮 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期432-435,共4页

以含有IPT基因的中间载体pSG516为基础,采用酶切的方法获得IPT-Nos核酸片段,以水稻品种9311为材料,采用PCR的方法克隆出种子中特异表达的醇溶谷蛋白RP-6基因启动子,并将此启动子连接到pCAMBIA1300上,构建pCAMBIA1300-pRP-6载体,将IPT-No... 以含有IPT基因的中间载体pSG516为基础,采用酶切的方法获得IPT-Nos核酸片段,以水稻品种9311为材料,采用PCR的方法克隆出种子中特异表达的醇溶谷蛋白RP-6基因启动子,并将此启动子连接到pCAMBIA1300上,构建pCAMBIA1300-pRP-6载体,将IPT-Nos核酸片段插入到pCAMBIA1300-pRP-6,构建了pCAMBIA1300-pRP-6-IPT-Nos双元表达载体. 展开更多

关键词 pRP-6 IPT pcambia1300-pRP-6-IPT-Nos 特异表达

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2A肽介导的割手密ScNAC1、ScDREB融合基因表达载体构建 被引量：1

8

作者 徐荣 吴清莲 +4 位作者 孟玉 陈疏影 王先宏 何丽莲 李富生 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第7期1492-1497,共6页

【目的】本研究旨在构建适合甘蔗遗传转化的双基因表达载体,用于提高甘蔗栽培品种的抗旱能力,并探讨基因表达规律及互作效应。【方法】本研究以前期课题组在割手密中克隆到的具有抗旱功能ScNAC1和ScDREB为目的基因,以对单子叶植物高效... 【目的】本研究旨在构建适合甘蔗遗传转化的双基因表达载体,用于提高甘蔗栽培品种的抗旱能力,并探讨基因表达规律及互作效应。【方法】本研究以前期课题组在割手密中克隆到的具有抗旱功能ScNAC1和ScDREB为目的基因,以对单子叶植物高效、专一的Ubiquitin为启动子,以适于单子叶植物遗传转化的表达载体pCAMBIA1300-nu为基础载体,利用改造后的FMDV2A多肽进行连接,采用重叠延伸PCR(简称SOE PCR)将ScNAC1和ScDREB基因相融合,利用同源重组的方法连接表达载体。【结果】经PCR验证获得约2000 bp的目的条带,利用BamH I与Sac I双酶切,切出了载体的1条大片段和连接目的基因的3条小片段,测序结果验证扩增产物的正确性,融合基因在扩增过程中无突变发生。【结论】本研究成功构建了符合需要的融合基因表达载体,为后期甘蔗的遗传转化研究奠定了基础。 展开更多

关键词 ScNAC1 ScDREB 融合基因 2A肽 pcambia1300nu

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大豆外源基因转化体系建立及条件优化研究 被引量：1

9

作者 姬丹丹 王鹏 向凤宁 《山东大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期116-122,共7页

建立了适用于多个大豆品种的萌动胚真空渗透辅助的外源基因转化方法,对影响农杆菌介导转化的有关参数进行了比较研究。确定的优化条件为:预培养3d,在菌种活化液的OD600值为0.6并加以200μmol.L-1乙酰丁香酮的农杆菌菌种活化液,侵染时间... 建立了适用于多个大豆品种的萌动胚真空渗透辅助的外源基因转化方法,对影响农杆菌介导转化的有关参数进行了比较研究。确定的优化条件为:预培养3d,在菌种活化液的OD600值为0.6并加以200μmol.L-1乙酰丁香酮的农杆菌菌种活化液,侵染时间为6h,共培养3d。在优化条件下,将携带GUS基因的35S启动子驱动的表达载体pCAMBIA1304的根癌农杆菌菌株GV3101分别转入鲁豆11和潍6823中,获得510株鲁豆11再生植株和591株潍6823再生植株,其中,抗性再生植株分别为444株和462株。通过PCR和GUS检测,证明分别获得了13株和15株转基因植株,转化率分别为2.2%和2.5%。 展开更多

关键词 农杆菌介导 pcambia1304 遗传转化

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东方山羊豆GoMIPS双元表达载体的构建及鉴定 被引量：1

10

作者 李春艳 刘建宁 高洪文 《家畜生态学报》 北大核心 2013年第1期25-28,共4页

从东方山羊豆(Galega.orientalis L.)中克隆出的GoMIPS(肌醇-1-磷酸合成酶)基因序列设计合成1对带有NcoI和SpeI酶切位点的引物,用RT-PCR方法从东方山羊豆幼嫩叶片总RNA中扩增出GoMIPS基因的cDNA序列,经纯化后,克隆至pMD19-T载体上,构建p... 从东方山羊豆(Galega.orientalis L.)中克隆出的GoMIPS(肌醇-1-磷酸合成酶)基因序列设计合成1对带有NcoI和SpeI酶切位点的引物,用RT-PCR方法从东方山羊豆幼嫩叶片总RNA中扩增出GoMIPS基因的cDNA序列,经纯化后,克隆至pMD19-T载体上,构建pMD-MIPS的中间载体,测序鉴定。然后用NcoI和SpeI限制性酶对含有目的基因的pMD-MIPS和pCAMBIA1302空载体进行双酶切,通过酶切鉴定和测序分析表明,已成功构建了CaMV35S启动子驱动GFP报告基因的双元植物表达载体pCAMBIA1302-MIPS。 展开更多

关键词 东方山羊豆(Galega.orientalis L.) GoMIPS pMD19-T pcambia1302

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单链抗体hs83基因植物表达载体的构建

11

作者 许培芳 何俊蓉 +2 位作者 吴洁 李萍 阎文昭 《西南农业学报》 CSCD 2008年第1期213-216,共4页

成功构建了单链抗体hs83基因植物表达载体pCAMB IA1301-hs83。首先根据基因的序列重新设计了两条含有合适酶切位点的引物,酶切位点保证了基因能够插入取代pCAMB IA1301上GUS基因的第二外显子;第二步是PCR反应克隆目的基因,然后连接到pMD... 成功构建了单链抗体hs83基因植物表达载体pCAMB IA1301-hs83。首先根据基因的序列重新设计了两条含有合适酶切位点的引物,酶切位点保证了基因能够插入取代pCAMB IA1301上GUS基因的第二外显子;第二步是PCR反应克隆目的基因,然后连接到pMD-18 T载体,进行测序鉴定;第三步是对pCAMB IA1301质粒和T-hs83质粒进行双酶切,释放出两个目的片段,分别回收后连接,酶切鉴定后将重组子通过冻融法转化根癌农杆菌EHA105,并用PCR法进行鉴定。 展开更多

关键词 hs83基因 植物表达载体 pcambia1301 PCR 农杆菌

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水稻CRE基因的克隆、分析及其高效表达载体的构建

12

作者 桂腾琴 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第14期136-138,共3页

基于GenBank中公布的水稻(Oryza sativa)基因组序列信息,设计特异引物,结合RT-PCR技术克隆水稻细胞分裂素受体(CTK response,CRE)基因的cDNA全长序列,并利用生物信息学工具进行初步分析。通过限制性内切酶将目的基因片段连接在载体pCAMB... 基于GenBank中公布的水稻(Oryza sativa)基因组序列信息,设计特异引物,结合RT-PCR技术克隆水稻细胞分裂素受体(CTK response,CRE)基因的cDNA全长序列,并利用生物信息学工具进行初步分析。通过限制性内切酶将目的基因片段连接在载体pCAMBIA 1390-35S上,重组质粒分别通过PCR检测和酶切鉴定,成功获得水稻CRE基因的高效表达载体,可直接用于水稻的遗传转化研究。 展开更多

关键词 水稻 pcambia 1390-35S CRE 载体构建

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BenA3基因双元载体的初步构建及转化绿僵菌189的初步研究

13

作者 姚洪平 王广君 +2 位作者 张泽华 农向群 魏松红 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期214-217,共4页

用XholⅠ和SalⅠ分别双酶切植物表达载体pCAMB IA1300和含有目的基因的pMD19-T-BenA3,定向连接得到重组质粒pCAMB IA1300-BenA3,将其导入农杆菌AGL-1。经PCR鉴定后,得到可用于绿僵菌转化的农杆菌双元载体。采用的预培养时间、菌液浓度... 用XholⅠ和SalⅠ分别双酶切植物表达载体pCAMB IA1300和含有目的基因的pMD19-T-BenA3,定向连接得到重组质粒pCAMB IA1300-BenA3,将其导入农杆菌AGL-1。经PCR鉴定后,得到可用于绿僵菌转化的农杆菌双元载体。采用的预培养时间、菌液浓度、共培养时间、乙酰丁香酮浓度的条件下,进行农杆菌介导绿僵菌的遗传转化,得到可以稳定性遗传的绿僵菌转化子,随机挑选转化子进行苯菌灵抗性基因的PCR扩增表明,绿僵菌转化子含有了苯菌灵抗性基因。该转化体系的建立,将有利于绿僵菌生防功能基因的克隆和作用机制的研究。 展开更多

关键词 BenA3基因 pcambia1300-BenA3 农杆菌 双元载体 绿僵菌 转化

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超重力对导入大肠杆菌质粒的诱变效应

14

作者 施丽丽 孙献亮 +4 位作者 冯昊 沈斌 肖燕萍 王金胜 董晶剑 《嘉兴学院学报》 2020年第6期75-81,共7页

利用超重力(Hypergravity)处理导入大肠杆菌(DH5α)的质粒,研究超重力对质粒DNA的影响,为超重力作为一种诱变方法提供更充分的理论依据.研究材料经超重力(8500×g,1.5 h)多代定向处理后,利用卡那霉素抗性基因(Kan r)进行筛选,从而... 利用超重力(Hypergravity)处理导入大肠杆菌(DH5α)的质粒,研究超重力对质粒DNA的影响,为超重力作为一种诱变方法提供更充分的理论依据.研究材料经超重力(8500×g,1.5 h)多代定向处理后,利用卡那霉素抗性基因(Kan r)进行筛选,从而验证超重力对基因有一定的诱变效果.在第3代菌株中得到3株突变体,发现突变体与重组菌相比,一条链的序列发生变化.经PCR扩增测序发现:3株突变体突变位点相同,质粒DNA的部分碱基缺失.由于碱基的缺失,产生移码突变,导致提前出现终止子,蛋白质合成终止.对突变菌株继续传代培养得到相同的结果,证明了该突变的可遗传性.通过该研究,初步证实了超重力可以诱发质粒DNA的突变,拓宽了超重力作为一种诱变方法的应用范围. 展开更多

关键词 超重力 pcambia-1304 大肠杆菌 突变

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闽北某区地球化学普查数据处理及成果

15

作者 周菊芳 《福建地质》 1999年第1期45-50,共6页

利用闽北某区（带） 地球化学普查中２ 幅１∶５ 万水系沉积物测量数据， 分别进行单变量 （元素） 数据处理和多变量 （元素） 广义幂转换因子分析数据处理， 取得较好的地质成果：清晰、简明地反映区内各元素的分布规律和异常集中... 利用闽北某区（带） 地球化学普查中２ 幅１∶５ 万水系沉积物测量数据， 分别进行单变量 （元素） 数据处理和多变量 （元素） 广义幂转换因子分析数据处理， 取得较好的地质成果：清晰、简明地反映区内各元素的分布规律和异常集中地段； 将成晕元素进行有机组合， 以单变量形式表达出来， 使某些有价值的弱信息强化， 更客现 “真实”地展现区域成矿潜力。 展开更多

关键词 水系沉积物 数据处理 闽北 地球化学

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