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质粒pAAV-HRE-CD151的构建和鉴定
1
作者 魏全 林敬阳 +4 位作者 左后娟 费宇杰 彭丹 黄晓琳 刘正湘 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2011年第2期112-115,共4页
目的为了增加CD151基因转染大鼠缺血心肌的效率和靶向特异性。方法以质粒pAAV-CD151为模板,采用克隆技术,构建一个含缺氧反应元件(hypoxia response element,HRE)和CD151基因序列的腺相关病毒载体,通过HRE促进CD151在大鼠缺血心肌的表... 目的为了增加CD151基因转染大鼠缺血心肌的效率和靶向特异性。方法以质粒pAAV-CD151为模板,采用克隆技术,构建一个含缺氧反应元件(hypoxia response element,HRE)和CD151基因序列的腺相关病毒载体,通过HRE促进CD151在大鼠缺血心肌的表达。结果经过测序鉴定成功构建了含缺氧反应元件的质粒pAAV-HRE-CD151。结论成功构建了pAAV-HRE-CD151质粒,为CD151治疗缺血性心血管病的靶向研究奠定了基础。 展开更多
关键词 心肌缺血 CD151 HRE 基因治疗 paav-HRE-CD151
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以pAAV为载体的RANi沉默E2F3对前列腺癌LNCAP细胞系的影响
2
作者 陈涛 胡海龙 +1 位作者 孙岩 吴长利 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期70-73,共4页
目的:探讨以pAAV为载体的RANi沉默E2F3对前列腺癌LNCAP细胞系的影响及其作用机制。方法:用pAAV-siE2F3穿梭质粒转染LNCAP细胞,流式细胞计数检测转染后细胞凋亡,细胞周期变化;Westernblot检测转染后E2F3蛋白与Bcl-2蛋白表达的变化,分析E... 目的:探讨以pAAV为载体的RANi沉默E2F3对前列腺癌LNCAP细胞系的影响及其作用机制。方法:用pAAV-siE2F3穿梭质粒转染LNCAP细胞,流式细胞计数检测转染后细胞凋亡,细胞周期变化;Westernblot检测转染后E2F3蛋白与Bcl-2蛋白表达的变化,分析E2F3蛋白与Bcl-2蛋白变化相关性。结果:与对照组相比,pAAV-siE2F3穿梭质粒有效的沉默了E2F3蛋白表达(P<0.01),pAAV-siE2F3穿梭质粒组细胞凋亡明显增加(P<0.01),G期细胞明显增加(P<0.01),S期明显减少(P<0.01),pAAV-siE2F3穿梭质粒组与对照组相比,Bcl-2蛋白表达明显减少(P<0.01)。结论:本实验初步明确了E2F3在前列腺癌细胞周期调控细胞凋亡方面起的作用,E2F3可能通过影响Bcl-2表达调控细胞凋亡;为进一步阐明E2F3基因与前列腺癌的关系,及以E2F3为靶点的前列腺癌基因治疗提供理论基础。 展开更多
关键词 E2F3 BCL-2 paav RNAI 前列腺癌
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不同种小鼠乙型肝炎模型的建立及其感染状况研究 被引量：3
3
作者 周云 李盛 +2 位作者 唐宗生 杨东亮 宋景娇 《实用肝脏病杂志》 CAS 2017年第5期533-537,共5页
目的探讨建立急性或慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染小鼠模型的方法。方法采用高压尾静脉注射p AAV/HBV1.2表达质粒,建立急性或慢性HBV感染小鼠模型,采用ELISA法检测HBV抗原,采用RT-PCR法检测免疫相关分子基因,使用FACS检测肝内淋巴细胞活化... 目的探讨建立急性或慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染小鼠模型的方法。方法采用高压尾静脉注射p AAV/HBV1.2表达质粒,建立急性或慢性HBV感染小鼠模型,采用ELISA法检测HBV抗原,采用RT-PCR法检测免疫相关分子基因,使用FACS检测肝内淋巴细胞活化情况,采用酶联免疫斑点实验(ELISPOT)法检测脾脏相关免疫细胞特征。结果成功建立急性和慢性高压尾静脉注射HBV感染小鼠模型;在急性BALB/c小鼠模型,血清HBs Ag持续时间分别为(3.25±1.04)w,显著短于慢性C57BL/6小鼠组【(10.0±3.74)w,P<0.05)】;在BALB/c小鼠模型,注射2.5μg病毒质粒小鼠血清HBs Ag持续时间为(3.67±1.03)w,显著长于注射50μg组【(2.33±0.52)w,(P<0.05)】;在高压尾静脉注射后第10 d,BALB/c小鼠脾脏出现了HBc Ag特异性T淋巴细胞。结论成功建立高压尾静脉注射HBV感染小鼠模型,发现宿主遗传背景、免疫应答状态和病毒剂量影响HBV感染小鼠模型的建立。 展开更多
关键词 乙型肝炎 paav/I-IBVl.2表达质粒 高压尾静脉注射 小鼠
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PDX-1基因对人胚肾细胞胰岛发育相关基因表达的影响
4
作者 夏华强 徐小明 +1 位作者 刘律君 卢光琇 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2010年第5期22-26,共5页
【目的】研究人PDX-1基因对胰岛发育相关基因和胰岛素基因(Insulin,INS)表达的影响,探讨PDX-1基因诱导非β细胞为胰岛素分泌细胞的可能性。【方法】采用PCR扩增技术,从人的胰腺cDNA中扩增PDX-1基因和INS基因的阅读框架,分别构建了质粒pA... 【目的】研究人PDX-1基因对胰岛发育相关基因和胰岛素基因(Insulin,INS)表达的影响,探讨PDX-1基因诱导非β细胞为胰岛素分泌细胞的可能性。【方法】采用PCR扩增技术,从人的胰腺cDNA中扩增PDX-1基因和INS基因的阅读框架,分别构建了质粒pAAV-PDX-1和pAAV-INS;将pAAV-PDX-1转染人胚肾细胞(293T)48 h后,RT-PCR检测293T细胞中胰岛发育相关基因的表达;再将pAAV-PDX-1和pAAV-INS共转染293T细胞48 h后,RT-PCR检测293T细胞中INS的表达。【结果】转染pAAV-PDX-1的293T细胞中,检测到胰岛发育相关基因PDX-1、Ngn3、PC2、BETA2的表达;PDX-1没有直接增强INS基因表达的作用。【结论】在293T细胞中,PDX-1基因对胰岛发育相关基因的表达有重要影响,PDX-1在诱导非β细胞为胰岛素分泌细胞的过程中可能有着重要的作用。 展开更多
关键词 paav-PDX-1 paav-INS 293T细胞 胰岛发育相关基因 表达
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基于hACE2转导建立SARS-CoV-2 spike假病毒感染病证结合的小鼠病毒肺炎模型
5
作者 邱敏 陈欢 +2 位作者 江飞龙 朱青 刘莉 《中国中医急症》 2024年第9期1553-1556,1565,共5页
目的建立与评价一种安全、经济、有效的病证结合小鼠新冠病毒感染肺炎模型。方法30只KM种小鼠随机分为空白组、对照组及实验1组、实验2组、实验3组,每组各6只。每天把KM小鼠置于模拟寒湿环境中4 h,将表达hACE2的重组腺相关病毒(pAAV-hAC... 目的建立与评价一种安全、经济、有效的病证结合小鼠新冠病毒感染肺炎模型。方法30只KM种小鼠随机分为空白组、对照组及实验1组、实验2组、实验3组,每组各6只。每天把KM小鼠置于模拟寒湿环境中4 h,将表达hACE2的重组腺相关病毒(pAAV-hACE2)采用改良悬挂法气管内给药转导至肺组织,继以新型冠状病毒(SARS-CoV-2)spike假病毒采用相同的气管内给药方式造模。观察各组小鼠一般情况,检测体重变化、肺指数、血清炎性因子及肺部病理变化。结果免疫组化法显示h ACE2在小鼠肺组织中有效表达;在寒湿环境中给予SARS-CoV-2 spike假病毒后,实验组小鼠表现出类似疫毒犯肺证候的体征;且同样喂养条件和时间下,与空白组和对照组小鼠比较,实验组小鼠出现体重下降;实验1、2、3组小鼠出现肺指数显著增大(P<0.05或P<0.01),血清炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)显著升高(P<0.01),肺组织病理改变明显。结论本研究成功建立了一种安全、经济、有效的病证结合小鼠新冠病毒感染肺炎模型。 展开更多
关键词 新型冠状病毒(SARS-CoV-2)spike假病毒 重组腺相关病毒(paav-hACE2) 寒湿疫 病证结合 病毒 肺炎 小鼠动物模型
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miR375表达质粒构建及表达研究 被引量：1
6
作者 夏华强 潘艺 +3 位作者 徐小明 刘律君 彭炬 卢光琇 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期652-655,共4页
目的寻找一种高效、简便的构建表达miRNA质粒的方法。方法该研究用PCR方法直接从小鼠gDNA扩增了包含miRNA375(miR375)前体序列在内的一个126bp片段以构建质粒pAAV-miR375。该研究用pAAV-miR375转染Hela细胞48h后,用定量RT-PCR方法和Nort... 目的寻找一种高效、简便的构建表达miRNA质粒的方法。方法该研究用PCR方法直接从小鼠gDNA扩增了包含miRNA375(miR375)前体序列在内的一个126bp片段以构建质粒pAAV-miR375。该研究用pAAV-miR375转染Hela细胞48h后,用定量RT-PCR方法和Northernblot检测Hela细胞中miR375的表达。结果转染了pAAV-miR375的Hela细胞中有miR375的表达,而在转染了空质粒pAAV-MCS和未转染的Hela细胞中没有检测到miR375的表达。结论该研究所构建的pAAV-miR375质粒能够表达miR-NA375。作者介绍的这一种构建表达miRNA质粒的方法比以往的方法更快速、高效、简便和保证序列的正确性。 展开更多
关键词 质粒构建 paav-miR375 HELA细胞
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PDX-1表达质粒的构建及表达
7
作者 夏华强 刘律君 +1 位作者 徐小明 卢光琇 《现代生物医学进展》 CAS 2009年第22期4265-4268,共4页
目的:为进一步研究PDX-1基因的功能打下基础。方法:从人的胰腺cDNA中PCR扩增PDX-1基因的阅读框架,构建质粒pAAV-PDX-1。用pAAV-PDX-1转染293T细胞48小时后,用RT-PCR和Western Blot方法检测293T细胞中mRNA和蛋白水平PDX-1的表达。结果:... 目的:为进一步研究PDX-1基因的功能打下基础。方法:从人的胰腺cDNA中PCR扩增PDX-1基因的阅读框架,构建质粒pAAV-PDX-1。用pAAV-PDX-1转染293T细胞48小时后,用RT-PCR和Western Blot方法检测293T细胞中mRNA和蛋白水平PDX-1的表达。结果:转染了pAAV-PDX-1的293T细胞中有PDX-1的表达,而在转染质粒pAAV-MCS和未转染的293T细胞中均没有检测到PDX-1的表达。结论:构建的pAAV-PDX-1质粒在mRNA和蛋白水平都能表达PDX-1。 展开更多
关键词 质粒构建 paav-PDX-1 293T细胞
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