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p53RFP基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建及鉴定 被引量：4
1
作者 裴静娴 王月刚 +2 位作者 张艺军 刘城 吴平生 《广东医学》 CAS 北大核心 2017年第2期170-172,共3页
目的构建人p53RFP基因启动子序列不同截短片段的荧光素酶报告基因载体,研究启动子的转录活性。方法 PCR扩增人p53RFP基因启动子区域不同长度的目的片段,克隆到pGL3-Basic中,构建启动子区域3个不同截短片段的荧光素酶报告基因载体,经双... 目的构建人p53RFP基因启动子序列不同截短片段的荧光素酶报告基因载体,研究启动子的转录活性。方法 PCR扩增人p53RFP基因启动子区域不同长度的目的片段,克隆到pGL3-Basic中,构建启动子区域3个不同截短片段的荧光素酶报告基因载体,经双酶切和基因测序鉴定正确后,转染HEK293细胞,双荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶活性。结果成功构建了p53RFP启动子不同截短片段的荧光素酶报告基因载体,经双荧光素酶报告基因检测分析,3个启动子片段均具有转录活性。结论成功构建了人p53RFP基因启动子荧光素酶报告基因载体,为研究p53RFP基因的转录调控机制提供了实验基础。 展开更多
关键词 p53rfp 启动子 荧光素酶报告基因
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p53RFP表达载体的构建及其对HEK293A细胞增殖的抑制作用 被引量：1
2
作者 裴静娴 王月刚 +2 位作者 张艺军 赖文岩 吴平生 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期494-496,503,共4页
目的构建p53RFP表达载体,观察p53RFP表达上调对HEK293A细胞生长的影响。方法利用DNA克隆技术,将人p 53RFP基因的编码序列克隆至质粒pcDNA4/Myc-HisA,经限制性酶切、DNA测序鉴定重组载体。质粒扩增提取,经脂质体介导法转染HEK293A细胞,... 目的构建p53RFP表达载体,观察p53RFP表达上调对HEK293A细胞生长的影响。方法利用DNA克隆技术,将人p 53RFP基因的编码序列克隆至质粒pcDNA4/Myc-HisA,经限制性酶切、DNA测序鉴定重组载体。质粒扩增提取,经脂质体介导法转染HEK293A细胞,实时定量RT-PCR、Western blot检测转染后p53RFP mRNA及蛋白的表达水平。采用CCK-8检测p53RFP表达上调对HEK293A细胞增殖的影响。结果 p 53RFP转染后其mRNA及蛋白表达水平均显著上调;p 53RFP转染后72 h、96 h,细胞增殖受到显著抑制(P<0.01)。结论成功构建p53RFP表达载体pcDNA4-p53RFP,并可在HEK293A细胞内有效表达,其表达可抑制HEK293A细胞增殖。 展开更多
关键词 p53rfp 表达载体 HEK293A
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p53RFP对SW480细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响 被引量：2
3
作者 裴静娴 王月刚 +2 位作者 程诚 刘城 吴平生 《广州医科大学学报》 2022年第3期17-20,共4页
目的:观察p53RFP过表达对SW480细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法:利用脂质体介导法将p53RFP表达载体转染SW480细胞,Western blot检测p53RFP蛋白表达水平,实时定量RT-PCR检测细胞周期相关蛋白mRNA表达。采用CCK-8检测p53RFP表达上调... 目的:观察p53RFP过表达对SW480细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法:利用脂质体介导法将p53RFP表达载体转染SW480细胞,Western blot检测p53RFP蛋白表达水平,实时定量RT-PCR检测细胞周期相关蛋白mRNA表达。采用CCK-8检测p53RFP表达上调对SW480细胞增殖的影响、PI染色流式细胞术进行细胞周期分析、Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡。结果:p53RFP转染后48 h、72 h、96 h细胞增殖受到显著抑制(P<0.001),p53RFP转染后48 h细胞G2期细胞含量显著高于空载转染组(P<0.05),细胞凋亡率亦显著高于空载对照组(P<0.05)。p53RFP过表达可诱导p21 WAF1/CIP1mRNA表达增加(P<0.05),对CyclinB1、CyclinD1、CDK1 mRNA表达无显著影响。结论:p53RFP过表达可抑制SW480细胞增殖、介导G2期阻滞、诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 p53rfp 增殖 细胞周期 凋亡
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低氧调控p53RFP基因启动子活性的初步研究
4
作者 裴静娴 莫沛 王月刚 《广州医药》 2023年第1期25-29,共5页
目的观察低氧对p53RFP基因表达及启动子活性的影响,探索低氧反应元件(HRE)是否参与了低氧对p53RFP基因启动子活性的调控。方法将HEK293细胞置于低氧条件下培养,实时定量PCR及Western blot检测p53RFP mRNA及蛋白表达水平;通过定点突变技... 目的观察低氧对p53RFP基因表达及启动子活性的影响,探索低氧反应元件(HRE)是否参与了低氧对p53RFP基因启动子活性的调控。方法将HEK293细胞置于低氧条件下培养,实时定量PCR及Western blot检测p53RFP mRNA及蛋白表达水平;通过定点突变技术构建HRE突变型p53RFP启动子双荧光素酶报告基因载体并转染HEK293细胞,分别置于常氧和低氧条件下培养,双荧光素酶报告基因检测系统检测启动子活性。结果低氧处理不同时间点p53RFP mRNA表达水平均显著增加,差异有统计学意义(F=96.493,P<0.001);低氧组p53RFP及HIF-1α蛋白表达量均呈时间依赖性递增。成功构建了HRE突变型p53RFP启动子双荧光素酶报告基因载体,双荧光素酶报告基因检测显示,与常氧组相比,低氧条件下野生型p53RFP基因启动子活性增加(t=-19.504,P<0.001),HRE单突变或双突变后启动子活性均较野生型降低(F=160.891,P<0.001)。结论低氧可诱导p53RFP基因表达上调;成功构建了HRE突变型p53RFP双荧光素酶报告基因载体,HRE位点可能在低氧调控p53RFP基因启动子活性中发挥关键作用。 展开更多
关键词 低氧 p53rfp 启动子 低氧反应元件
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