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题名人p52Shc1蛋白的真核表达及其活性鉴定
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作者
邓昊
熊玉锋
杨恒
郝文波
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机构
南方医科大学检验与生物技术学院抗体工程研究所
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出处
《生物技术》
北大核心
2017年第5期434-439,共6页
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基金
国家自然科学基金面上项目("羊口疮病毒ORFV118蛋白调控宿主细胞凋亡的分子机制研究"
No.31672536)
+3 种基金
广州市科技计划项目("产前快速诊断自动化设备及其创新型试剂的开发"
No.201604010046
"系列全自动管式化学发光免疫检测试剂盒及配套设备的产业化"
No.201604040003)
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文摘
[目的]构建带his标签的人p52Shc1基因真核表达载体,并根据其生物学活性进行鉴定。[方法]采用PCR技术以Shc1 cDNA基因为模板扩增Shc1基因,将其插入pEnter载体构建pEnter-p52shc1重组质粒,将重组质粒与空载体分别转入293T细胞,利用Western Blot检测p52Shc1表达情况,并使用cck-8法绘制细胞生长曲线。[结果]通过双酶切获得2条与目的基因大小相符的片段,测序结果显示符合率为100%,Western Blot结果显示在52 kDa大小处出现清晰单一条带,cck-8法绘制的细胞生长曲线显示,转染重组质粒pEnter-p52Shc1的细胞生长速率明显大于转染pEnter空载的细胞(P<0.01)。[结论]成功构建带his标签的人p52Shc1基因真核表达载体并在293T细胞中成功表达,转染重组质粒并表达p52Shc1蛋白的293T细胞的增值速率明显提高。
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关键词
p52shc1
293T
重组质粒构建
真核表达
cck-8法
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Keywords
p52shc1,293T, recombinant plasmid, eukaryotic expression, cck - 8 assay
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分类号
Q291
[生物学—细胞生物学]
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