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PI3K及p-Smad7的表达对骨肉瘤细胞增殖的影响 被引量：3
1
作者 张小平 于哲 +4 位作者 胥云 闫康 廖博 周勇 高铜拴 《中国医药导报》 CAS 2019年第25期7-10,15,I0003,共6页
目的研究PI3K及p-Smad7的表达对骨肉瘤细胞增殖的影响。方法选取2017年1月~2018年10月解放军空军军医大学唐都医院骨科收治的60例骨肉瘤患者(骨肉瘤组织)和同期60例软骨组织(正常组织)为研究对象并进行免疫组化染色,观察两种骨组织变化... 目的研究PI3K及p-Smad7的表达对骨肉瘤细胞增殖的影响。方法选取2017年1月~2018年10月解放军空军军医大学唐都医院骨科收治的60例骨肉瘤患者(骨肉瘤组织)和同期60例软骨组织(正常组织)为研究对象并进行免疫组化染色,观察两种骨组织变化和PI3K及p-Smad7在不同组织中的表达情况。PI3K抑制剂CAL-101(2.5 nm)处理骨肉瘤MG-63细胞为实验组,未处理骨肉瘤MG-63细胞为对照组,观察两组MG-63细胞增殖能力(MTT增殖实验)、克隆形成能力(克隆形成实验)、PI3K及p-Smad7的表达(qRT-PCR和Western blot检测)。结果骨肉瘤组织中PI3K及p-Smad7的表达显著高于正常组织(P<0.01)。给药处理48、72 h后,实验组的MG-63细胞增殖能力明显低于对照组(P<0.05)。给药处理48 h,继续培养15 d后,实验组的MG-63细胞克隆形成能力明显低于对照组(P<0.05)。给药处理36 h后,实验组的MG-63细胞PI3K及p-Smad7表达均明显低于对照组(P<0.05)。结论 PI3K和p-Smad7相互作用异常表达可促进骨肉瘤细胞增殖。 展开更多
关键词 PI3K p-smad7 骨肉瘤 MG-63
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益肾化瘀方含药血清对NRK52E细胞转分化过程中p-Smad2/3、Smad7表达的影响 被引量：5
2
作者 王海亮 赵威 +2 位作者 高志卿 邢海燕 张琳琪 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期4482-4485,共4页
目的:观察益肾化瘀方含药血清对TGF-β1诱导的体外培养的肾小管上皮细胞(NRK52E)转分化过程中p-Smad2/3、Smad7表达的影响。方法:将体外培养的NRK52E细胞随机分为6组:正常对照组,TGF-β1刺激组,5%、10%、20%益肾化瘀方含药血清组,缬沙... 目的:观察益肾化瘀方含药血清对TGF-β1诱导的体外培养的肾小管上皮细胞(NRK52E)转分化过程中p-Smad2/3、Smad7表达的影响。方法:将体外培养的NRK52E细胞随机分为6组:正常对照组,TGF-β1刺激组,5%、10%、20%益肾化瘀方含药血清组,缬沙坦含药血清组,培养48h后取出。观察各组细胞形态变化,采用免疫细胞化学法检测NRK52E细胞p-Smad2/3、Smad7的表达。结果:NRK52E细胞经TGF-β1刺激后,失去原有的铺路石样形态,拉长增大呈梭形,而与益肾化瘀方含药血清共同作用后,细胞形态有所修复,细胞梭形改变减轻;免疫组化显示与正常对照组比较,TGF-β1刺激组细胞p-Smad2/3核表达明显增强(P<0.01),Smad7表达却减弱(P<0.01)。而各药物干预组与单纯TGF-β1刺激组相比,p-Smad2/3的表达随药物浓度增加呈下降趋势(P<0.01),而Smad7表达的阳性率明显增强(P<0.01)。其中20%益肾化瘀方含药血清组与缬沙坦含药血清组的表达无显著差异。结论:益肾化瘀方含药血清通过抑制Smad2/3的磷酸化,上调Smad7表达,显示出对TGF-β1刺激的NRK52E细胞转分化过程的阻抑作用,并与剂量呈正相关。 展开更多
关键词 益肾化瘀方 肾间质纤维化 大鼠近端肾小管上皮细胞 p-smad2/3 SMAD7
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Smad2/3与Smad7在大鼠化疗性卵巢早衰卵泡中的表达和意义 被引量：6
3
作者 丁艳 陶然 +2 位作者 张静 陈婧 任君旭 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期497-505,共9页
目的探讨顺铂对大鼠卵巢结构和功能损伤的影响及其可能的分子机制。方法 3月龄SD雌性大鼠随机分为对照组(C组,5只)和化疗组(H组,5只)。H组给予每只大鼠腹腔注射顺铂2 mg/(kg.d),C组给予腹腔注射等体积生理盐水,连续注射7 d后检测大鼠卵... 目的探讨顺铂对大鼠卵巢结构和功能损伤的影响及其可能的分子机制。方法 3月龄SD雌性大鼠随机分为对照组(C组,5只)和化疗组(H组,5只)。H组给予每只大鼠腹腔注射顺铂2 mg/(kg.d),C组给予腹腔注射等体积生理盐水,连续注射7 d后检测大鼠卵巢指数(卵巢湿重/体重);酶联免疫吸附法检测血清雌二醇(E2)和促卵泡刺激素(FSH)水平;苏木素-伊红染色观察卵泡发育并计数各级卵泡;免疫组织化学和Real-time PCR法检测各组Smad2、磷酸化Smad2(p-Smad2)、Smad3、磷酸化Smad3(p-Smad3)、Smad4和Smad7的蛋白和mRNA表达。结果与C组相比,H组大鼠卵巢体积减小,生长卵泡数明显减少(P<0.05),大鼠卵巢指数下降(P<0.05),血清中E2水平降低和FSH水平上升(P<0.05)。免疫组织化学和Real-time PCR结果显示,Smad2(p-Smad2)、Smad3(p-Smad3)、Smad4和Smad7蛋白在卵巢各级卵泡均有表达,H组Smad2蛋白和mRNA表达增加(P<0.05),Smad2磷酸化水平(p-Smad2)表达增高(P<0.05);Smad3、Smad4和Smad7蛋白和mRNA表达减少(P<0.05),p-Smad3表达降低(P<0.05)。结论顺铂诱导大鼠卵泡损伤并促进卵巢早衰,引起卵泡细胞内Smad2表达增加,Smad3、Smad7表达降低,Smad细胞内信号通路参与了化疗性卵巢损伤的过程。 展开更多
关键词 顺铂 卵巢早衰 Smad2(p-smad2)/Smad3(p-smad3) Smad4 SMAD7 免疫组织化学 实时定量聚合酶链反应 大鼠
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癌相关成纤维细胞通过TGF-βRⅡ/smad7调控前列腺癌细胞株PC-3增殖
4
作者 孙代宇 何明芳 孙宏斌 《泌尿外科杂志（电子版）》 2017年第1期42-46,共5页
目的研究癌相关成纤维细胞(cancer associated fibroblasts,CAFs)通过TGF-β/Smads信号通路对前列腺癌细胞株PC3、LNCa P增殖能力的影响及通路关键蛋白TGF-βRⅡ、Smad2、Smad7在其中的作用。方法原代培养源于人前列腺癌基质的CAFs。Wes... 目的研究癌相关成纤维细胞(cancer associated fibroblasts,CAFs)通过TGF-β/Smads信号通路对前列腺癌细胞株PC3、LNCa P增殖能力的影响及通路关键蛋白TGF-βRⅡ、Smad2、Smad7在其中的作用。方法原代培养源于人前列腺癌基质的CAFs。Western blot检测CAFs、PC3和LNCa P细胞TGF-β受体II型(TGF-βRⅡ)表达。用CAFs原代培养液制备条件培养液CAFs-CM,用TGF-βRⅡ抑制剂(LY2109761)处理CAFs后制备出另一条件培养液CAFs-LY-CM,分别观察PC3和LNCa P在常规培养基、CAFs-CM、CAFs-LY-CM条件培养液中的增殖能力及差异性,以及活性形式磷酸化的Smad2(P-Smad2)、Smad7表达水平的变化。结果 CAFs、PC3细胞阳性表达TGF-βRⅡ,LNCa P细胞呈弱阳性表达。和常规培养基相比,浓度为0.75g/L CAFs-CM的条件培养基可显著提升PC3[分别为(6.36±0.65)和(2.94±0.19),P<0.05]和LNCa P细胞[分别为(5.06±0.38)和(2.86±0.39),P<0.05]的增殖能力。CAFs-CM上调PC3细胞Smad7蛋白表达水平,对LNCa P细胞P-Smad2蛋白表达几无影响。采用10^(-6)mol/L LY2109761处理CAFs后,CAFs-LY-CM可显著抑制PC3细胞增殖[分别为(4.09±0.36)和(6.36±0.65),P<0.05],并呈剂量依赖性,但对LNCa P细胞增殖无显著抑制作用。结论 CAFs通过TGF-βRⅡ/Smad7关键蛋白调控PC3增殖,是PCa潜在的治疗新靶点。CAFs通过TGF-β信号通路调控LNCaP细胞增殖的作用不显著,存在其他的分子机制。 展开更多
关键词 癌相关成纤维细胞 条件培养基 TGF-βRⅡ p-smad2 SMAD7
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依那普利和厄贝沙坦对肾血管性高血压大鼠颈动脉重构及转化生长因子β_1/Smads表达的影响 被引量：2
5
作者 陈剑玲 商黔惠 +4 位作者 胡威 刘婵 毛万姮 刘华庆 祝荣文 《中华高血压杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期659-665,共7页
目的观察依那普利和厄贝沙坦单用及联用对肾血管性高血压大鼠(RHR)颈动脉重构及转化生长因子β1(TGF-β1)/Smads表达的影响。方法 8～12周龄雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠30只。建立"两肾一夹"RHR模型,设立模型组、假手术组、... 目的观察依那普利和厄贝沙坦单用及联用对肾血管性高血压大鼠(RHR)颈动脉重构及转化生长因子β1(TGF-β1)/Smads表达的影响。方法 8～12周龄雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠30只。建立"两肾一夹"RHR模型,设立模型组、假手术组、依那普利组[10mg/(kg·d)]、厄贝沙坦组[50mg/(kg·d)]、联合用药组[厄贝沙坦25mg/(kg·d)+依那普利5mg/(kg·d)],每组6只大鼠。药物连续干预6周。采用HE染色、Masson染色法及免疫组化染色检测颈动脉中膜形态及结构变化并测量中膜厚度、中膜厚度/腔径以及颈动脉中膜α肌动蛋白(α-actin)、增殖细胞核抗原(PCNA)、TGF-β1、磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)、Smad7的表达水平。结果 RHR模型组颈动脉中膜明显肥厚,平滑肌细胞体积增大,排列紊乱;中膜厚度、中膜厚度/腔径、颈动脉中膜平滑肌细胞的增殖指数及胶原纤维面积百分比均高于假手术组[中膜厚度(91.28±11.17)比(52.15±7.18)μm,中膜厚度/腔径(20.75±3.07)%比(9.94±1.52)%,增殖指数(35.31±12.97)%比(1.84±0.52)%,胶原纤维面积百分比(67.53±7.68)%比(15.35±4.47)%,均P<0.01];TGF-β1和p-Smad2/3的表达较假手术组均增多(均P<0.05),Smad7表达较假手术组减少(P<0.01)。依那普利和厄贝沙坦均能改善颈动脉平滑肌肥大和胶原沉积,减小RHR颈动脉中膜厚度、中膜厚度/腔径、平滑肌细胞的增殖指数、胶原纤维面积百分比及TGF-β1和p-Smad2/3的表达(P<0.05),增加Smad7表达(P<0.01),且两药联用较单用更能改善颈动脉重构,降低TGF-β1和p-Smad2/3的表达(P<0.05),增加Smad7表达(P<0.05)。结论依那普利和厄贝沙坦通过影响TGF-β1/Smads信号通路中TGF-β1、p-Smad2/3和Smad7的表达而改善RHR颈动脉重构,且两药联用有协同作用。 展开更多
关键词 高血压 血管重构 转化生长因子β1 p-smad2/3 SMAD7 依那普利 厄贝沙坦
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色素上皮衍生因子对高糖诱导人肾小球系膜细胞转化生长因子-β1／Smad信号转导途径的影响 被引量：1
6
作者 毛拓华 黄汉奇 +1 位作者 洪练 李竞 《临床内科杂志》 CAS 2018年第7期488-492,共5页
目的观察色素上皮衍生因子（PEDF）对高糖诱导人肾小球系膜细胞（HMCs）转化生长因子-β1（TGF-β1）／Smad信号转导途径的影响。方法体外培养HMCs并将其分为正常对照组（5．6mmol／L葡萄糖）、渗透压对照组（5．6mmol／L葡萄糖＋24．4m... 目的观察色素上皮衍生因子（PEDF）对高糖诱导人肾小球系膜细胞（HMCs）转化生长因子-β1（TGF-β1）／Smad信号转导途径的影响。方法体外培养HMCs并将其分为正常对照组（5．6mmol／L葡萄糖）、渗透压对照组（5．6mmol／L葡萄糖＋24．4mmol／L甘露醇）、高糖组（30mmol／L葡萄糖）、干预1组（30mmol／L葡萄糖＋10nmol／LPEDF）、干预2组（30mmol／L葡萄糖＋40nmol／LPEDF）和干预3组（30mmol／L葡萄糖＋100nmol／LPEDF），分别作用24h后收集样本，采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测TGF-β1、纤维连接蛋白（FN）及Smad7 mRNA表达，Western blot检测Smad7蛋白的表达，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测TGF-β1、FN蛋白水平，免疫细胞化学检测p-Smad2／3蛋白的表达。结果与正常对照组比较，高糖组TGF-β1、FN表达明显增加，Smad7表达明显减少（P〈0．05或P〈0．01），p-Smad2／3蛋白表达增加，而渗透压对照组与正常对照组比较无明显改变。与高糖组比较，PEDF干预组TGF-β1、FN表达减少，Smad7表达增加（P〈0．05或P〈0．01），p-Smad2／3蛋白表达呈下降趋势。结论PEDF能抑制高糖诱导的TGF-β1、FN和p-Smad2／3蛋白过度表达及上调Smad7表达。PEDF可能通过影响TGF-β1／Smad信号转导途径达到抗纤维化的作用，延缓糖尿病肾病的进程。 展开更多
关键词 色素上皮衍生因子 转化生长因子-Β1 纤维连接蛋白 P—Smad2/3 SMAD7
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氯沙坦对癫痫大鼠转化生长因子-β信号通路的影响 被引量：4
7
作者 潘学威 张晓光 +3 位作者 朱思亮 郑建乐 金洁 蒋艳艳 《中国药师》 CAS 2019年第4期640-644,共5页
目的:探讨氯沙坦对癫痫大鼠转化生长因子-β(TGF-β)信号通路的影响。方法:选取建模成功的大鼠75只,随机分为5组,每组15只,分别为:模型对照组、拉莫三嗪组(25 mg·kg^(-1)·d^(-1))、氯沙坦低(15 mg·kg^(-1)·d^(-1))... 目的:探讨氯沙坦对癫痫大鼠转化生长因子-β(TGF-β)信号通路的影响。方法:选取建模成功的大鼠75只,随机分为5组,每组15只,分别为:模型对照组、拉莫三嗪组(25 mg·kg^(-1)·d^(-1))、氯沙坦低(15 mg·kg^(-1)·d^(-1))、中(30 mg·kg^(-1)·d^(-1))、高(45 mg·kg^(-1)·d^(-1))剂量组,另取未建模大鼠15只为空白对照组。各给药组灌胃给予相应药物,空白对照组及模型对照组给予等体积生理盐水,持续给药11 d。观察各组癫痫大鼠一般情况与行为变化,利用实时荧光定量和蛋白免疫印迹检测TGF-β、Smad7、p-Smad2/3、Smad4的转录和翻译水平。结果:与空白对照组相比,模型对照组大鼠精神萎靡,皮毛脏乱,饮食量下降,体质量增加量显著减少(P<0.05);TGF-β、p-Smad2/3、Smad4的表达量显著升高,Smad7的表达量显著降低(P<0.05)。与模型对照组相比,氯沙坦干预组大鼠一般情况明显得到改善,体质量增加量显著上升(P<0.05);大鼠癫痫发作级别显著降低(P<0.05);TGF-β、p-Smad2/3、Smad4的表达量显著降低,Smad7的表达量显著升高(P<0.05),且呈剂量依赖性。氯沙坦中、低剂量组的以上各指标均与拉莫三嗪组差异有统计学意义(P<0.05)。结论:氯沙坦可能通过调节TGFβ/Smads信号通路参与控制大鼠癫痫发作。 展开更多
关键词 氯沙坦 癫痫大鼠 TGFβ/Smads信号通路 SMAD7 p-smad2/3 SMAD4
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高盐对乳鼠心脏成纤维细胞增殖与胶原分泌的影响及相关机制
8
作者 刘娟 商黔惠 +1 位作者 李璐 赵宇 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2020年第1期135-140,共6页
目的观察高盐对乳鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖及胶原分泌的影响,并分析其可能的相关机制。方法胰酶、Ⅱ型胶原酶两步消化法消化分离乳鼠心肌组织,通过差速贴壁法收集、培养乳鼠CFs。CFs传至第4代去血清同步化24 h,分为对照组(培养基Na+... 目的观察高盐对乳鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖及胶原分泌的影响,并分析其可能的相关机制。方法胰酶、Ⅱ型胶原酶两步消化法消化分离乳鼠心肌组织,通过差速贴壁法收集、培养乳鼠CFs。CFs传至第4代去血清同步化24 h,分为对照组(培养基Na+终浓度139 mmol/L)、高盐组(培养基Na^+终浓度146、149、152、155、158、161、164、167、170、173和176 mmol/L),培养24、48、72和96 h后,CCK-8检测CFs增殖情况。选择增殖作用最为明显的Na+浓度和作用时间,以Na^+139 mmol/L为对照进行后续实验,高盐组(培养基Na^+终浓度161 mmol/L),甘露醇组(甘露醇浓度为29.334 mg/ml),其中甘露醇组与高盐组渗透压相同。CCK-8检测渗透压对CFs增殖的影响。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测CFs培养上清液中Ⅰ型和Ⅲ型胶原的表达。Western印迹检测CFs中转化生长因子(TGF)-β1、p-smad3及smad7蛋白的表达情况。结果CCK-8结果显示,Na+146~176 mmol/L作用48、72 h可促进乳鼠CFs增殖(Na+161 mmol/L作用48 h最明显);检测渗透压对CFs增殖显示,高盐组(Na+161 mmol/L)细胞发生增殖明显,而甘露醇组细胞较对照组(Na+139 mmol/L)并无增殖差异;ELISA结果显示,高盐组中Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达均增加(P<0.05),甘露醇组胶原Ⅰ和胶原Ⅲ表达较对照组比无差异(P>0.05)。Western印迹结果显示,高盐组TGF-β1和p-smad3蛋白表达较对照组和甘露醇组明显增多(P<0.05),smad7蛋白表达明显减少(P<0.05);甘露醇组TGF-β1、p-smad3、smad7蛋白表达与对照组比较无差异(P>0.05)。结论高盐可诱导乳鼠CFs发生增殖,且能够促使Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原分泌增加,且与渗透压改变无关,其机制可能与TGF-β1/smads表达异常相关。 展开更多
关键词 高盐 乳鼠心脏成纤维细胞 细胞增殖 胶原分泌 转化生长因子β1 p-smad3 SMAD7
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