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Overexpression of the inwardly rectifying potassium channel Kir4.1 or Kir4.1 Tyr^(9)Asp in Müller cells exerts neuroprotective effects in an experimental glaucoma model 被引量:1
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作者 Fang Li Zhen Li +6 位作者 Shuying Li Hong Zhou Yunhui Guo Yongchen Wang Bo Lei Yanying Miao Zhongfeng Wang 《Neural Regeneration Research》 2026年第4期1628-1640,共13页
Downregulation of the inwardly rectifying potassium channel Kir4.1 is a key step for inducing retinal Müller cell activation and interaction with other glial cells,which is involved in retinal ganglion cell apopt... Downregulation of the inwardly rectifying potassium channel Kir4.1 is a key step for inducing retinal Müller cell activation and interaction with other glial cells,which is involved in retinal ganglion cell apoptosis in glaucoma.Modulation of Kir4.1 expression in Müller cells may therefore be a potential strategy for attenuating retinal ganglion cell damage in glaucoma.In this study,we identified seven predicted phosphorylation sites in Kir4.1 and constructed lentiviral expression systems expressing Kir4.1 mutated at each site to prevent phosphorylation.Following this,we treated Müller glial cells in vitro and in vivo with the m Glu R I agonist DHPG to induce Kir4.1 or Kir4.1 Tyr^(9)Asp overexpression.We found that both Kir4.1 and Kir4.1 Tyr^(9)Asp overexpression inhibited activation of Müller glial cells.Subsequently,we established a rat model of chronic ocular hypertension by injecting microbeads into the anterior chamber and overexpressed Kir4.1 or Kir4.1 Tyr^(9)Asp in the eye,and observed similar results in Müller cells in vivo as those seen in vitro.Both Kir4.1 and Kir4.1 Tyr^(9)Asp overexpression inhibited Müller cell activation,regulated the balance of Bax/Bcl-2,and reduced the m RNA and protein levels of pro-inflammatory factors,including interleukin-1βand tumor necrosis factor-α.Furthermore,we investigated the regulatory effects of Kir4.1 and Kir4.1 Tyr^(9)Asp overexpression on the release of pro-inflammatory factors in a co-culture system of Müller glial cells and microglia.In this co-culture system,we observed elevated adenosine triphosphate concentrations in activated Müller cells,increased levels of translocator protein(a marker of microglial activation),and elevated interleukin-1βm RNA and protein levels in microglia induced by activated Müller cells.These changes could be reversed by Kir4.1 and Kir4.1 Tyr^(9)Asp overexpression in Müller cells.Kir4.1 overexpression,but not Kir4.1 Tyr^(9)Asp overexpression,reduced the number of proliferative and migratory microglia induced by activated Müller cells.Collectively,these results suggest that the tyrosine residue at position nine in Kir4.1 may serve as a functional modulation site in the retina in an experimental model of glaucoma.Kir4.1 and Kir4.1 Tyr^(9)Asp overexpression attenuated Müller cell activation,reduced ATP/P2X receptor–mediated interactions between glial cells,inhibited microglial activation,and decreased the synthesis and release of pro-inflammatory factors,consequently ameliorating retinal ganglion cell apoptosis in glaucoma. 展开更多
关键词 apoptosis chronic ocular hypertension glial cell activation Kir4.1 overexpression Kir4.1 Tyr^(9)Asp mutation microglia Müller cells NEUROINFLAMMATION neuroprotection retinal ganglion cells
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Retraction: Truncated Bid Overexpression Induced by Recombinant Adenovirus Cre/LoxP System Suppresses the Tumorigenic Potential of CD133+ Ovarian Cancer Stem Cells
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作者 Oncology Research Editorial Office 《Oncology Research》 2026年第1期620-620,共1页
The published article titled“Truncated Bid Overexpression Induced by Recombinant Adenovirus Cre/LoxP System Suppresses the Tumorigenic Potential of CD133+Ovarian Cancer Stem Cells”has been retracted from Oncology Re... The published article titled“Truncated Bid Overexpression Induced by Recombinant Adenovirus Cre/LoxP System Suppresses the Tumorigenic Potential of CD133+Ovarian Cancer Stem Cells”has been retracted from Oncology Research,Vol.25,No.4,2017,pp.595–603. 展开更多
关键词 recombinant adenovirus Cre Loxp system CD ovarian cancer stem cells recombinant adenovirus truncated Bid overexpression bid overexpression tumorigenic potential
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Retraction: Overexpression of miR-1283 Inhibits Cell Proliferation and Invasion of Glioma Cells by Targeting ATF4
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作者 Oncology Research Editorial Office 《Oncology Research》 2025年第11期3609-3609,共1页
The published article titled“Overexpression of miR-1283 Inhibits Cell Proliferation and Invasion of Glioma Cells by Targeting ATF4”has been retracted from Oncology Research,Vol.27,No.3,2019,pp.325–334.
关键词 ATF overexpression mir targeting atf cell proliferation glioma cells INVASION
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Correction to:Overexpression of Tau Rescues Nogo-66-Induced Neurite Outgrowth Inhibition In Vitro
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作者 Yu-Chao Zuo Hong-Lian Li +4 位作者 Nan-Xiang Xiong Jian-Ying Shen Yi-Zhi Huang Peng Fu Hong-Yang Zhao 《Neuroscience Bulletin》 2025年第9期1710-1710,共1页
Correction to:Neurosci.Bull.December,2016,32(6):577–584.https://doi.org/10.1007/s12264-016-0068-z In this article,in Fig 5A,the picture of the Vector+Nogo-66 group was incorrect and should have appeared as shown below.
关键词 VITRO overexpression neurite outgrowth TAU NOGO INHIBITION
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Overexpression of demethylase-related gene FTO improves salt and drought tolerance in rapeseed
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作者 Yuting Zou Rijin Zhou +4 位作者 Yinghai Xu Mengyu Hao Wenxiang Wang Jia Liu Wenliang Wei 《Oil Crop Science》 2025年第4期311-320,共10页
Drought and salt stresses are major abiotic factors that severely affect the growth,development,and yield formation of Brassica napus.Human derived FTO gene(Fat mass and obesity-associated),is a member of the Alk B fa... Drought and salt stresses are major abiotic factors that severely affect the growth,development,and yield formation of Brassica napus.Human derived FTO gene(Fat mass and obesity-associated),is a member of the Alk B family,encoding a m RNA demethylase that is dependent onα-ketoglutarate.Although previous studies have demonstrated that exogenous overexpression of FTO gene can increase plant biomass,its impact on plant stress resistance is still unclear.In this study,we cloned the FTO gene and conducted an analysis of its biological functions for drought and salt resistance for Brassicaceae plants.By overexpressing the FTO gene in Arabidopsis thaliana,the inhibitory effect of salt and drought stress on the root length growth of transgenic lines was significantly lower than that of the control.Moreover,the overexpression of FTO markedly enhanced the tolerance of Arabidopsis to drought and salt stress.It also led to a decrease in malondialdehyde(MDA)content,an increase in proline content,and a boost in superoxide dismutase(SOD)activity.Meanwhile,when the FTO gene was heterologously expressed in B.napus,the transgenic plants were less affected by stress.In comparison to control plants,they exhibited significantly lower MDA levels and markedly higher proline content and SOD activity.Furthermore,staining results with Trypan blue and nitroblue tetrazolium(NBT)staining indicate that the FTO gene can alleviate the damage to plants under stress and inhibit the accumulation of O_(2)^(-).Comprehensively,the results indicate that overexpression of the FTO gene can improve the drought and salt tolerance in transgenic plants,providing valuable references for further exploring the FTO-mediated stress resistance mechanisms. 展开更多
关键词 Brassica napus FTO gene overexpression Drought stress Salt stress
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Discovery of new polyketide-amino acid conjugates in Antarctic-derived Talaromyces sp.HDN1820200 by overexpression of a pathway-specific transcriptional factor TwnD
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作者 ZHANG Xiao LIU Luyang +3 位作者 MA Chuanteng CHE Qian LI Dehai ZHU Tianjiao 《Advances in Polar Science》 2025年第4期301-319,共19页
A polyketide synthase-nonribosomal peptide synthetase gene cluster twn in Talaromyces sp.HDN1820200 was activated by overexpression of the pathway-specific transcriptional factor TwnD.Large-scale fermentation and chem... A polyketide synthase-nonribosomal peptide synthetase gene cluster twn in Talaromyces sp.HDN1820200 was activated by overexpression of the pathway-specific transcriptional factor TwnD.Large-scale fermentation and chemical investigation of the mutant strain HDN1820200/TwnD led to the discovery of one new polyketide-amino acid conjugate,bipolamide C and one new polyketide compound,variotin A.The structures of the new compounds were determined by nuclear magnetic resonance(NMR)analysis,high-resolution electrospray ionization mass spectrometry,feeding experiments,NMR calculation and DP4^(+)analysis.This study revealed that the overexpression of the pathway-specific transcriptional factor represents a promising approach for the discovery of new natural products in fungi within specialized habitat. 展开更多
关键词 transcription factor overexpression polyketide-amino acid conjugates Antarctic fungi natural product discovery
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LINC02086通过调控Wnt/β-catenin通路介导巨噬细胞M2极化对胃癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响
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作者 李军 卜亚飞 +2 位作者 陈杰 丁波 王磊 《安徽医科大学学报》 北大核心 2026年第2期192-200,共9页
目的探讨长链间隔非编码RNA02086(LINC02086)过表达介导的巨噬细胞极化对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法采用qRT-PCR检测人胃黏膜上皮细胞GES-1及人胃癌细胞系HCG-27、NCI-N87、AGS中的LINC02086表达水平。使用佛波酯(PMA... 目的探讨长链间隔非编码RNA02086(LINC02086)过表达介导的巨噬细胞极化对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法采用qRT-PCR检测人胃黏膜上皮细胞GES-1及人胃癌细胞系HCG-27、NCI-N87、AGS中的LINC02086表达水平。使用佛波酯(PMA)将人急性单核细胞白血病细胞(THP-1)诱导分化为M0型巨噬细胞,分别用LINC02086过表达慢病毒(OE-LINC02086)及其阴性对照慢病毒(Vector)感染HGC-27细胞,收集培养上清液作为条件培养基1(CM1);将M0型巨噬细胞与感染后的HGC-27细胞共培养,收集培养上清液得到CM2。使用CM1单独或联合Wnt/β-catenin通路抑制剂(IWR-1)处理M0型巨噬细胞,分别设为Vector+CM1组、OE-LINC02086+CM1组和OE-LINC02086+CM1+IWR-1组;通过流式细胞术检测细胞中甘露糖受体(CD206)水平;qRT-PCR检测细胞中白细胞介素-10(IL⁃10)、转化生长因子-β(TGF⁃β)、血管内皮生长因子(VEGF)和趋化因子配体22(CCL22)mRNA表达水平;Western blot检测细胞中CD206、VEGF蛋白和Wnt/β-catenin通路相关蛋白Wnt家族成员3a(Wnt3a)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、β-连环蛋白(β-catenin)表达水平。使用CM2单独或联合IWR-1处理HGC-27细胞,分别设为Vector+CM2组、OE-LINC02086+CM2组和OE-LINC02086+CM2+IWR-1组;CCK-8法检测细胞增殖活性;Transwell检测细胞迁移、侵袭能力。结果与GES-1细胞比较,HCG-27、NCI-N87及AGS细胞中LINC02086表达水平均升高(P<0.05),其中HCG-27细胞升高幅度最小。与Vector+CM1组比较,OE-LINC02086+CM1刺激后,巨噬细胞中CD206水平以及IL⁃10、TGF⁃β、VEGF和CCL22 mRNA表达水平升高(P<0.05),同时,细胞中Wnt3a和β-catenin蛋白表达水平升高(P<0.05),GSK-3β蛋白表达水平降低(P<0.05);然而,IWR-1联合干预可明显逆转LINC02086过表达对巨噬细胞CD206和IL⁃10、TGF⁃βmRNA等M2型极化标志物表达的促进作用(P<0.05)以及对Wnt/β-catenin通路的激活作用(P<0.05)。与Vector+CM2组比较,OELINC02086+CM2处理后,HGC-27细胞增殖活性及迁移、侵袭细胞数量升高(P<0.05);然而,IWR-1联合干预可明显逆转LINC02086过表达对HGC-27细胞增殖、迁移和侵袭的促进作用(P<0.05)。结论LINC02086过表达可通过激活Wnt/β-catenin通路介导巨噬细胞M2极化并促进胃癌细胞增殖、迁移和侵袭。 展开更多
关键词 长链间隔非编码RNA02086 过表达 胃癌 巨噬细胞 极化 增殖 WNT/Β-CATENIN通路
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过表达KLHL34基因的HEK-293T细胞系的构建及对水疱性口炎病毒增殖的影响
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作者 陈创伟 张伟 +7 位作者 邵文华 吴魏 牛艺璇 刘泓屹 赵晓义 曹伟军 郑海学 杨帆 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第2期168-174,共7页
旨在探索Kelch样蛋白34(KLHL34)对水疱性口炎病毒(VSV)复制和Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)信号通路下游干扰素刺激基因(ISGs)转录的影响。首先,扩增KLHL34基因,构建重组质粒,并与辅助质粒pMD2.G和psPAX2共转染至HEK-293T细胞进行慢病毒包装,然后... 旨在探索Kelch样蛋白34(KLHL34)对水疱性口炎病毒(VSV)复制和Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)信号通路下游干扰素刺激基因(ISGs)转录的影响。首先,扩增KLHL34基因,构建重组质粒,并与辅助质粒pMD2.G和psPAX2共转染至HEK-293T细胞进行慢病毒包装,然后将包装好的慢病毒感染HEK-293T细胞,并通过嘌呤霉素筛选获得过表达KLHL34基因的阳性细胞系,经荧光显微镜观察,用蛋白免疫印迹(Western-blot)、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和病毒滴度测定(TCID50)等方法,比较VSV在过表达KLHL34/HEK-293T细胞系和野生型HEK-293T细胞中的复制差异,并分析过表达KLHL34基因对VSV诱导的IFN-Ⅰ和ISGs的影响。结果表明,经双酶切和测序鉴定,慢病毒表达质粒pLV-puro-3×Flag-KLHL34成功构建;内外源Western-blot验证了在70 kDa左右KLHL34蛋白的表达,即过表达KLHL34/HEK-293T细胞系成功建立;而后,荧光图像、Western-blot、RT-qPCR及TCID50显示,在过表达KLHL34/HEK-293T细胞系中,VSV的复制能力显著降低,且该细胞系在VSV诱导下ISGs的转录水平较野生型HEK-293T细胞显著升高。本研究构建的过表达KLHL34/HEK-293T细胞系能显著抑制VSV的增殖并促进IFN-Ⅰ信号通路,为深入研究KLHL34的功能及其在抗病毒天然免疫信号通路中的作用提供了生物材料。 展开更多
关键词 Kelch样蛋白34 水疱性口炎病毒 慢病毒包装 过表达细胞系 干扰素
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非模式黑曲霉An-1的遗传编辑体系构建及其对β-葡萄糖苷酶的高效表达
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作者 张慧 梁宇馨 +3 位作者 王昕 马东旭 龚大春 吕育财 《食品与发酵工业》 北大核心 2026年第2期192-202,共11页
β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase, BGL)作为重要的糖苷水解酶,不仅可用于功能性活性物质的生产,改善食品风味、提升食品营养价值,还是新一代工业发酵用碳源秸秆糖生产的关键限速酶,具有重要的应用价值。为了有效改造自主筛选的非模式黑曲... β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase, BGL)作为重要的糖苷水解酶,不仅可用于功能性活性物质的生产,改善食品风味、提升食品营养价值,还是新一代工业发酵用碳源秸秆糖生产的关键限速酶,具有重要的应用价值。为了有效改造自主筛选的非模式黑曲霉An-1产BGL活力,该研究系统优化了黑曲霉An-1原生质体的制备条件与再生方法,建立了稳定的黑曲霉An-1遗传转化体系,具体为:将固体平板培养的菌丝作为酶解材料,使用混合酶(1%纤维素+0.5%蜗牛酶+0.25%溶菌酶,质量分数)处理2 h;在STC缓冲液孵育后,采用直接抗性筛选的方式,转化子的阳性率高达100%;通过比较不同的破壁方式对菌丝PCR的影响,确定了碱裂解法的破菌效果最佳,以其裂解液作为模版的检测效率最高达97%。然后以红色荧光蛋白作为报告基因,以P_(gpd)为启动子和T_(gla)为终止子,成功过表达了带有报告基因的11条BGL基因,筛选出黑曲霉An-1的关键BGL为HQM9510。以pFC332-Cas9-sgRNA为质粒,以黑曲霉An-1基因组为模板,以kus-up-F和kus-down-R为引物获取供体片段,精准敲除kusA基因,建立了非模式黑曲霉An-1的基因组编辑体系。所构建的过表达HQM9510基因的工程菌株O9510,以纤维二糖和p-硝基苯酚-α-D-吡喃葡萄糖苷为底物的摇瓶酶活力分别提升至12.88 U/mL和17.10 U/mL,实现了BGL的高效表达。该研究为分子改造黑曲霉An-1以提升其产酶能力奠定了科学基础。 展开更多
关键词 黑曲霉 原生质体 基因编辑 Β-葡萄糖苷酶 过表达
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鲤lpl-a序列特征及其过表达对脂肪变化的影响
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作者 肖黄璇 刘天奇 +5 位作者 鲁翠云 孙志鹏 张渴新 任舒乐 那荣滨 郑先虎 《水生生物学报》 北大核心 2026年第4期63-72,共10页
为探究过表达鲤(Cyprinus carpio)脂蛋白脂肪酶a(lipoprotein lipase a,lpl-a)基因对脂肪沉积模式及脂代谢基因表达的影响,本研究分析了鲤lpl-a基因序列及结构特征,检测lpl-a在鲤5种体内组织(腹腔脂肪、肝、肾、肌肉、肠)的表达量,基于... 为探究过表达鲤(Cyprinus carpio)脂蛋白脂肪酶a(lipoprotein lipase a,lpl-a)基因对脂肪沉积模式及脂代谢基因表达的影响,本研究分析了鲤lpl-a基因序列及结构特征,检测lpl-a在鲤5种体内组织(腹腔脂肪、肝、肾、肌肉、肠)的表达量,基于同源重组技术构建鲤lpl-a过表达质粒载体,导入斑马鱼活体和鲤肝细胞,分析过表达lpl-a对总胆固醇(T-CHO)、甘油三酯(TG)含量及脂代谢标志基因(pparγ、fabp 3、pnpla 2等)表达的影响。结果,预测鲤lpl-a有7个开放阅读框、编码507个氨基酸大小的蛋白质,其在硬骨鱼的进化中有较高保守性;体内组织表达显示lpl-a呈显著特异性表达,腹腔脂肪、肝和肾表达量显著高于肌肉和肠(P<0.05)。构建鲤lpl-a过表达质粒载体,个体层面,斑马鱼(Danio rerio)显微注射过表达鲤lpl-a后,肌肉T-CHO含量较野生型增加约7倍、肝脏T-CHO和TG含量均增加约1倍,伴随肌肉和肝脏中lpl-a、pparγ、fabp 3等脂代谢相关基因表达上调;细胞层面,鲤肝细胞转染lpl-a过表达载体72h后,该基因表达及脂解相关基因pnpla 2表达显著升高。分析表明,过表达鲤lpl-a导致鲤科鱼类在个体和细胞层面呈现差异化的脂质代谢调控,即个体中肌肉储脂增强与肝脏脂质积蓄,细胞中脂解激活与合成抑制,为靶向该基因调控经济动物脂肪沉积提供了理论依据。 展开更多
关键词 脂蛋白脂肪酶a 鲤科鱼类 过表达质粒载体 脂代谢
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工程化改造里氏木霉提高其基因编辑效率
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作者 胡传俊 杨海泉 +2 位作者 夏媛媛 沈微 陈献忠 《食品与发酵工业》 北大核心 2026年第3期27-36,共10页
里氏木霉(Trichoderma reesei)拥有强大的翻译后修饰系统和蛋白分泌能力,已经成为纤维素酶等酶制剂相关产品生产的主要宿主。为了提高其基因编辑效率,研究中以前期构建的异源表达重组人乳铁蛋白的T.reesei CJ2095为出发菌株,敲除了DNA... 里氏木霉(Trichoderma reesei)拥有强大的翻译后修饰系统和蛋白分泌能力,已经成为纤维素酶等酶制剂相关产品生产的主要宿主。为了提高其基因编辑效率,研究中以前期构建的异源表达重组人乳铁蛋白的T.reesei CJ2095为出发菌株,敲除了DNA修复蛋白基因ku80,获得基因编辑效率显著提升的重组菌株T.reesei CJ2095Δku80,其基因编辑效率由对照菌株的1.04%提高至7.14%。为了实现乳清酸核苷-5′-磷酸脱羧酶基因pyr4筛选标记的循环使用,敲除了重组菌株T.reesei CJ2095Δku80基因组上的基因pyr4,获得了重组菌株T.reesei CJ2095Δku80Δpyr4。在此基础上,考察了过表达T.reesei内源的同源重组酶rad51和rad52基因对同源重组效率的影响。结果表明,过表达基因rad52,工程菌株T.reesei CJ2095Δku80Δpyr4::rad52的同源重组效率能够提高至43.75%,是出发菌株的42倍。进一步在基因组上过表达木聚糖酶调节因子1基因xyr1验证了菌株T.reesei CJ2095Δku80Δpyr4::rad52的高效基因编辑效率,并显著提高了其重组人乳铁蛋白产量。重组菌株T.reesei CJ2095Δku80Δpyr4::rad52::xyr1的重组人乳铁蛋白产量提高了22.21%,产量达234.64 mg/L,该研究为首次采用基因编辑策略来提高T.reesei中重组人乳铁蛋白的生产水平。 展开更多
关键词 里氏木霉 基因编辑效率增强 基因敲除 过表达 重组人乳铁蛋白
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花生AhFAB2-2生物信息学分析、克隆及过表达载体的构建
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作者 吴秋霖 张君 +5 位作者 韩笑 丛炜轩 杨松楠 姚丹 朱静静 李雪莹 《吉林农业大学学报》 北大核心 2026年第1期36-45,共10页
以吉林农业大学选育的花生品种“吉农花7号”“吉农花8号”和“花育668”为试验材料,对编码硬脂酰-ACP脱饱和酶的SAD基因家族中的亚型AhFAB2-2进行生物信息学分析与克隆,并进行pCAMBIA3301-FAB2-2过表达载体的构建。结果显示:AhFAB2-2... 以吉林农业大学选育的花生品种“吉农花7号”“吉农花8号”和“花育668”为试验材料,对编码硬脂酰-ACP脱饱和酶的SAD基因家族中的亚型AhFAB2-2进行生物信息学分析与克隆,并进行pCAMBIA3301-FAB2-2过表达载体的构建。结果显示:AhFAB2-2位于栽培种花生16号染色体上,主要在花生籽粒中表达;其编码的蛋白属于不稳定疏水非泌性蛋白;与其他物种已验证功能的SAD基因亚型编码的蛋白存在多个相同保守结构域;蛋白互作预测发现,与其互作蛋白负责调控细胞氮化合物生物合成、DNA模板转录的启动及高分子生物合成;荧光定量PCR结果显示,其在高油酸品种中的表达量高于低油酸品种,同时在低油酸品种中表达量随着籽粒成熟而逐渐升高,高油酸品种中表达量则随着籽粒成熟而降低。启动子元件预测分析发现,AhFAB2-2启动子存在光响应、激素调控、抗逆境相关转录因子结合位点。该结果可为后续深入研究AhFAB2-2对于花生油酸含量的调控与油料组成成分的改良提供理论基础。 展开更多
关键词 花生 硬脂酰-ACP脱饱和酶 生物信息学分析 基因克隆 过表达载体构建
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马铃薯转录因子StBBX21的克隆及其在干旱与盐胁迫下的功能验证
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作者 刘欣雨 范彩霞 肖继坪 《植物生理学报》 北大核心 2026年第2期203-214,共12页
B-box(BBX)基因家族在调节植物多种生理和发育过程以及介导胁迫反应中起着至关重要的作用,是植物中最重要的转录因子之一。马铃薯(Solanum tuberosum)作为我国重要的经济作物,具有低投入、高产出等特性,但BBX基因在马铃薯干旱和盐胁迫... B-box(BBX)基因家族在调节植物多种生理和发育过程以及介导胁迫反应中起着至关重要的作用,是植物中最重要的转录因子之一。马铃薯(Solanum tuberosum)作为我国重要的经济作物,具有低投入、高产出等特性,但BBX基因在马铃薯干旱和盐胁迫响应中的潜在功能尚不明晰。因此,本研究从马铃薯中克隆得到StBBX21基因,对其进行生物信息学分析与表达模式分析,并通过对过表达该基因的马铃薯植株进行干旱和盐胁迫处理,验证其功能。结果显示,StBBX21的CDS全长为897 bp,编码298个氨基酸,为亲水性蛋白,具有2个B-box结构域。StBBX21基因启动子上有多个光响应元件和激素响应元件。表达模式分析表明,StBBX21基因在马铃薯不同组织的表达水平为块茎>茎>叶,并且该基因在干旱和盐胁迫下被显著诱导。与野生型马铃薯相比,干旱和盐胁迫处理使得过表达StBBX21马铃薯的相对电导率和丙二醛(MDA)显著降低,游离脯氨酸(Pro)、可溶性蛋白、可溶性糖的含量以及过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活性均显著提高,抗逆相关基因的表达量显著上调。结果表明,过表达StBBX21通过调节生理适应和胁迫相关基因网络增强马铃薯的耐旱性和耐盐性。该发现为进一步研究马铃薯BBX家族的功能提供了参考依据,也丰富了对马铃薯抗逆分子机制的认识。 展开更多
关键词 马铃薯 StBBX21 过表达 干旱 盐胁迫
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藜麦LOC110717159基因克隆及功能分析
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作者 陶小所 姚晓华 姚有华 《植物学报》 北大核心 2026年第1期53-67,共15页
糖基水解酶家族在调控植物籽粒大小方面起关键作用。该研究克隆了藜麦(Chenopodium quinoa)糖基水解酶家族LOC110717159基因,并通过生物信息学、表达模式分析和拟南芥(Arabidopsis thaliana)异源表达实验,解析了其在籽粒充实过程中的生... 糖基水解酶家族在调控植物籽粒大小方面起关键作用。该研究克隆了藜麦(Chenopodium quinoa)糖基水解酶家族LOC110717159基因,并通过生物信息学、表达模式分析和拟南芥(Arabidopsis thaliana)异源表达实验,解析了其在籽粒充实过程中的生物学功能。生物信息学分析表明,大、小粒藜麦种质LOC110717159基因编码序列全长为1023 bp,编码339个氨基酸残基,存在1个碱基差异;其启动子区(~2000 bp)含有119个顺式作用元件,包括3个激素响应元件(茉莉酸甲酯、水杨酸和赤霉素)。系统进化分析显示,该基因与甜菜(Beta vulgaris)、菠菜(Spinacia oleracea)和苋(Amaranthus tricolor)的亲缘关系较近。qRT-PCR分析表明,灌浆21天时,LOC110717159在大粒藜麦种质籽粒中高表达。拟南芥过表达株系的千粒重显著低于野生型(P<0.05),但粒长和粒宽无显著差异。单倍型分析发现,LOC110717159编码序列在17个藜麦种质中存在差异,62.5%千粒重大于4.0 g的种质与大粒藜麦种质碱基序列一致,77.8%千粒重小于3.0 g的种质与小粒藜麦种质碱基序列一致。综上,LOC110717159可能负调控藜麦籽粒的充实过程。 展开更多
关键词 藜麦 LOC110717159基因 克隆 生物信息学分析 过表达分析
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转录因子MpR2R3-MYB17调控地钱胞芽发育的功能研究
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作者 曾厅 张兰 罗睿 《生物技术通报》 北大核心 2026年第1期208-217,共10页
【目的】探究MpR2R3-MYB17基因在地钱胞芽发育调控中的功能及分子机制,为进一步揭示地钱胞芽发育调控机制提供新的依据。【方法】基于地钱基因组信息克隆MpR2R3-MYB17的全长CDS序列,对其编码蛋白质进行生物信息学分析并瞬时转化烟草检测... 【目的】探究MpR2R3-MYB17基因在地钱胞芽发育调控中的功能及分子机制,为进一步揭示地钱胞芽发育调控机制提供新的依据。【方法】基于地钱基因组信息克隆MpR2R3-MYB17的全长CDS序列,对其编码蛋白质进行生物信息学分析并瞬时转化烟草检测MpR2R3-MYB17亚细胞定位。构建过表达载体和CRISPR/Cas9基因编辑载体,利用农杆菌介导的非组培依赖的地钱转化方法获得MpR2R3-MYB17过表达株系和突变体株系以评估表型变化。【结果】生物信息学分析表明,MpR2R3-MYB17的开放阅读框的长度为1277 bp,编码421个氨基酸,具有2个保守的SANT序列,是R2R3型MYB转录因子。系统发育树揭示MpR2R3-MYB17与拟南芥R2R3-MYB第9亚家族聚为一支,其中与AtMYB17同源性最高。亚细胞定位分析表明,MpR2R3-MYB17蛋白定位于细胞核内,提示其可能直接参与转录调控过程。表型分析表明,与野生型相比,过表达株系的叶状体上胞芽杯密度和胞芽数量显著增加,或在高表达状态下形成未分化细胞团,且叶状体的生长受到抑制。突变体株系的胞芽杯密度及单个胞芽杯内胞芽数量均较野生型显著降低。【结论】MpR2R3-MYB17作为细胞核定位的转录因子参与调控地钱胞芽杯和胞芽的发育过程。 展开更多
关键词 地钱 MpR2R3-MYB17 转录因子 胞芽发育 亚细胞定位 过表达 CRISPR/Cas9 无性繁殖
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大肠杆菌过表达cscA基因对甜高粱汁发酵生产L-乳酸的研究
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作者 孙瑞雪 王金华 +1 位作者 王永泽 谢爱娣 《工业微生物》 2026年第1期133-141,共9页
甜高粱主要种植在我国西北地区,被广泛应用于酿酒工业。甜高粱茎秆压榨制得的甜高粱汁富含可溶性糖,蔗糖含量约60%,开发利用价值极高。文章选取能高效转化蔗糖的大肠杆菌EL206057作为研究对象,嵌入过表达cscA基因,进一步优化该菌株对蔗... 甜高粱主要种植在我国西北地区,被广泛应用于酿酒工业。甜高粱茎秆压榨制得的甜高粱汁富含可溶性糖,蔗糖含量约60%,开发利用价值极高。文章选取能高效转化蔗糖的大肠杆菌EL206057作为研究对象,嵌入过表达cscA基因,进一步优化该菌株对蔗糖的利用效率,充分挖掘甜高粱的资源潜力。发酵实验结果表明,相较于未过表达csc A基因的对照菌株,工程菌E-L206057/p Trc99a-MI-93-cscA的蔗糖消耗速率显著提升19.64%,L-乳酸的平均生产强度提高15.6%。在7 L发酵罐中,以甜高粱汁为唯一碳源,菌株E-L206057/pTrc99a-MI-93-cscA完成发酵仅需14 h,最终L-乳酸产量达81.41 g/L,平均生产强度为5.82 g/L/h,相较对照菌株,提高14.34%。研究成果为利用非粮作物发酵生产L-乳酸提供了全新思路,有望为降低L-乳酸的生产成本开辟新的有效途径。 展开更多
关键词 cscA过表达 甜高粱汁 L-乳酸 大肠杆菌 蔗糖
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甘蓝型油菜冷调节基因BnaCOR27的克隆及表达分析
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作者 彭泱瑜 陈雨蝶 +3 位作者 张泽荣 洪波 邢曼 熊兴华 《山东农业科学》 北大核心 2026年第1期8-16,共9页
COR27基因是一种冷调节基因,在植物响应冷胁迫过程中起重要作用。为探明甘蓝型油菜COR27基因功能,本研究用甘蓝型油菜‘中双11号’作为材料,克隆出一条COR27的CDS序列,全长723 bp,编码240个氨基酸,将其命名为BnaCOR27。生物信息学分析... COR27基因是一种冷调节基因,在植物响应冷胁迫过程中起重要作用。为探明甘蓝型油菜COR27基因功能,本研究用甘蓝型油菜‘中双11号’作为材料,克隆出一条COR27的CDS序列,全长723 bp,编码240个氨基酸,将其命名为BnaCOR27。生物信息学分析结果表明,BnaCOR27蛋白为稳定性较差的亲水性蛋白,无跨膜结构域和信号肽,为非分泌蛋白。多重序列比对显示其与白菜型油菜、灰芥、萝卜等17种植物的COR27蛋白序列同源性不高;系统发育树显示十字花科植物的COR27聚到了一支,其中BnaCOR27与白菜型油菜的COR27进化关系最相近。启动子元件分析表明BnaCOR27的表达不仅受低温诱导,还受光信号调节,在响应冷胁迫及其他逆境胁迫中发挥重要作用。实时荧光定量PCR检测结果显示,BnaCOR27在‘中双11号’不同组织中的表达量呈现叶>根>花>茎>角果的趋势。同时成功构建了过表达载体pCAMBIA1301-BnaCOR27。这可为深入探究BnaCOR27基因在油菜耐寒过程中的作用机制奠定基础,为耐寒油菜分子育种提供理论指导。 展开更多
关键词 COR27 甘蓝型油菜 冷胁迫 生物信息学分析 表达分析 过表达载体
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泛素融合蛋白Rp2zheng327促进刺槐的共生结瘤
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作者 尹婷 张红雨 +1 位作者 杨瑞萍 丑敏霞 《西北农业学报》 北大核心 2026年第2期317-326,共10页
探究刺槐的Rp2zheng327基因在共生结瘤过程中的作用,为深入研究该基因功能奠定基础,也为研究泛素融合蛋白在豆科植物与根瘤菌共生互作过程中的作用提供借鉴。利用qRT-PCR分析Rp2zheng327基因的时空表达模式和干扰或过表达效率,通过基因... 探究刺槐的Rp2zheng327基因在共生结瘤过程中的作用,为深入研究该基因功能奠定基础,也为研究泛素融合蛋白在豆科植物与根瘤菌共生互作过程中的作用提供借鉴。利用qRT-PCR分析Rp2zheng327基因的时空表达模式和干扰或过表达效率,通过基因枪转化洋葱表皮细胞瞬时表达法研究Rp2zheng327蛋白的亚细胞定位,获取Rp2zheng327基因干扰和过表达瞬时转化植株,统计其茎长、根长、干质量、根瘤数等生理指标,观察根瘤显微结构。亚细胞定位分析表明Rp2zheng327在细胞中各个位置均有表达。Rp2zheng327-RNAi植株长势较弱,茎长、根长和干质量显著减少,结瘤数降低且多为白色无效瘤。Rp2zheng327过表达的转化苗中,植株长势良好,各项生理指标均优于对照组。泛素融合蛋白Rp2zheng327可促进刺槐与根瘤菌的共生互作。 展开更多
关键词 刺槐 泛素融合蛋白UbL40 共生结瘤 亚细胞定位 RNA干扰 过表达
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Physiological and transcriptomic insights into ethanol stress tolerance in Lentilactobacillus hilgardii Q19
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作者 Jinxian Sun Xiaowen Liu +2 位作者 Luqiang Huang Wen Ma Gang Jin 《Food Science and Human Wellness》 2026年第2期836-850,共15页
Malolactic fermentation,started by lactic acid bacteria,plays a crucial role in the production of high-quality wines.As global warming increases the ethanol content in wines,the success of malolactic fermentation depe... Malolactic fermentation,started by lactic acid bacteria,plays a crucial role in the production of high-quality wines.As global warming increases the ethanol content in wines,the success of malolactic fermentation depends on selecting ethanol-tolerant strains,especially for wines from increasingly warm climates.Lentilactobacillus hilgardii Q19 was isolated and characterized as an indigenous malolactic bacterium with higher ethanol tolerance properties.In this study,it was indicated that ethanol stress had significant effects on ATPase activity,antioxidant system,and cell membrane of L.hilgardii Q19 by measuring the physiological indicators under stress which include H^(+)-ATPase,Na^(+)/K^(+)-ATPase,Ca^(2+)/Mg^(2+)-ATPase activity,glutathione content,superoxide dismutase(SOD)activity and intracellular reactive oxygen species(ROS)content.The main metabolic pathways involved in ethanol stress such as ATP-binding cassette(ABC)transporters,pentose phosphate pathway,phosphotransferase system,glutathione metabolic pathway and two-component systems were screened by transcriptome sequencing analysis.The functions of the pentose phosphate pathway,pyruvate metabolic pathway and glycerolipid metabolism under ethanol stress were verified by constructing the L.hilgardii Q19 ethanol stress related key genes gnt K,pyk,and glp K overexpression vectors.The above findings may contribute to our understanding of the metabolic pathways and regulatory mechanisms of L.hilgardii Q19 in response to ethanol stress. 展开更多
关键词 Lentilactobacillus hilgardii Ethanol stress TRANSCRIPTOME Gene overexpression Molecular mechanism
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代谢工程耦合响应面法优化盐单胞菌合成四氢嘧啶的关键技术
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作者 李昊鑫 何珊珊 +4 位作者 张宗豪 李永臻 王嵘 韩睿 朱德锐 《微生物学报》 北大核心 2026年第3期1447-1466,共20页
【目的】通过构建5种含Ptac启动子的重组质粒pHX01−pHX05(组合基因asd、lysC、ectA、ectB、ectC),导入坎帕尼亚盐单胞菌(Halomonas campaniensis)XH26,构建高产工程菌株,并结合响应面法(response surface methodology,RSM)优化培养条件... 【目的】通过构建5种含Ptac启动子的重组质粒pHX01−pHX05(组合基因asd、lysC、ectA、ectB、ectC),导入坎帕尼亚盐单胞菌(Halomonas campaniensis)XH26,构建高产工程菌株,并结合响应面法(response surface methodology,RSM)优化培养条件提高四氢嘧啶(ectoine)的积累量。【方法】重组质粒经大肠埃希氏菌(Escherichia coli)S17-1(λ-pir)接合转移至菌株XH26,利用庆大霉素(50μg/mL)筛选阳性克隆子;以0.2 mmol/L IPTG诱导表达重组菌株,用HPLC检测四氢嘧啶的积累量;采用单因素试验、Plackett-Burman与Box-Behnken设计优化关键变量因素(NaCl、蛋白胨、L-谷氨酸钠、葡萄糖)。【结果】构建了5株重组菌株(XH26/pHX01−pHX05)。采用MG培养基培养重组菌株,发现菌株XH26/pHX04(asd-lysC-ectA-ectB)的四氢嘧啶积累量最高,达(1.32±0.04)g/L;菌株XH26/pHX05和菌株XH26/pHX03次之,四氢嘧啶积累量分别为(1.19±0.07)g/L和(1.07±0.08)g/L;而XH26/pHX02积累量较低,为(1.02±0.14)g/L。利用响应面法优化培养基的关键成分,确定最优条件为NaCl 116.08 g/L、蛋白胨16.30 g/L、L-谷氨酸钠169.57 g/L、葡萄糖15.53 g/L。在此条件下,重组菌株XH26/pHX04的四氢嘧啶积累量提高至(1.81±0.02)g/L,较野生型菌株XH26显著提高了301.56%。【结论】以坎帕尼亚盐单胞菌为“底盘细胞”,利用强启动子组合过表达基因asd、lysC、ectA/B,辅以响应面法优化重组菌株的培养基条件,可显著提高重组菌株的四氢嘧啶积累量,为后续工业化生产提供了一定的技术参考依据。 展开更多
关键词 四氢嘧啶 坎帕尼亚盐单胞菌 代谢工程 响应面法 基因过表达 合成生物学
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