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OmpD对肠炎沙门菌生物学特性影响的研究 被引量:4
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作者 张志强 苏硕青 +5 位作者 杜万年 李永慧 刘勃兴 吴同垒 朱国强 史秋梅 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1106-1112,共7页
为研究外膜孔蛋白Omp D在肠炎沙门菌致病中的作用,本研究利用λ-Red同源重组技术构建了肠炎沙门菌(C50336)omp D基因缺失突变株(C50336Δomp D)。测定了C50336,缺失株C50336Δomp D,回补株p BR322-omp D/C50336Δomp D各菌株在LB和M9培... 为研究外膜孔蛋白Omp D在肠炎沙门菌致病中的作用,本研究利用λ-Red同源重组技术构建了肠炎沙门菌(C50336)omp D基因缺失突变株(C50336Δomp D)。测定了C50336,缺失株C50336Δomp D,回补株p BR322-omp D/C50336Δomp D各菌株在LB和M9培养基中的生长情况,结果显示,缺失株C50336Δomp D与野生型菌株和回补菌株相比,其生长速度无明显差异。利用结晶紫染色方法观察和测定生物被膜(BF)表达量,结果显示,C50336Δomp D与野生型菌株和回补菌株相比,其BF形成受到明显抑制;利用刚果红培养基和荧光剂培养基分析细菌BF成分变化,结果显示C50336Δomp D构成BF的主要成分卷毛和纤维素的表达量明显减少。通过K-B药敏试验结果显示,C50336Δomp D菌株与野生型菌株和回补菌株相比,其对包括多黏菌素B在内的多种抗生素的敏感性显著增强。利用小鼠模型评估omp D基因缺失对肠炎沙门菌致病力的影响,结果显示,omp D基因缺失突变株对小鼠的LD50相较野生菌株提高约20倍,表明Omp D蛋白与肠炎沙门菌致病力密切相关,毒力基因检测结果显示缺失株BF调控基因均转录水平下调。本研究为进一步阐释肠炎沙门菌致病机制奠定基础。 展开更多
关键词 肠炎沙门菌 基因缺失 ompd 生物学特性
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羊布鲁菌外膜蛋白Omp25d的原核表达、鉴定及纯化 被引量:1
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作者 张蕾 张芳琳 +5 位作者 张亮 王海涛 胡刚 吴兴安 徐志凯 白文涛 《科学技术与工程》 2010年第25期6146-6149,6154,共5页
研究羊布鲁菌外膜蛋白Omp25d基因的克隆,原核表达,以及纯化,根据羊布鲁菌M5株外膜蛋白Omp25d蛋白基因序列设计引物,扩增出大小约为650bp的目的基因片断,克隆入融合表达载体pGEX-4T-1,构建重组质粒pGEX-4T-1-Omp25d。在大肠杆菌中将该蛋... 研究羊布鲁菌外膜蛋白Omp25d基因的克隆,原核表达,以及纯化,根据羊布鲁菌M5株外膜蛋白Omp25d蛋白基因序列设计引物,扩增出大小约为650bp的目的基因片断,克隆入融合表达载体pGEX-4T-1,构建重组质粒pGEX-4T-1-Omp25d。在大肠杆菌中将该蛋白表达并用亲和层析法纯化。用Western-blot分析方法鉴定GST-Omp25d蛋白。结果成功地构建了pGEX-4T-1-Omp25d原核表达载体并在大肠杆菌中表达了Omp25d基因,纯化后所获得的融合蛋白与兔抗布鲁菌血清发生特异性反应。表明研究成功构建了pGEX-4T-1-Omp25d元和表达载体,并且在大肠杆菌中进行表达,纯化的融合蛋白具有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 羊布鲁菌 omp25d蛋白 克隆 表达 纯化
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沙门菌Omp D介导的rBCG口服疫苗的制备与鉴定
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作者 郭晓雅 邵成 +2 位作者 胡琳洁 侯美娜 史皆然 《国际呼吸杂志》 2012年第19期1457-1462,F0003,共7页
目的利用重组BCG(rBCG)技术,构建能以串联和并联形式、在细菌表面表达Derp2和OmpD抗原的两种rBCGLI服疫苗。方法经PCR法分别扩增获得Derp2和OmpD基因,测序正确后将两者克隆人原核表达载体pProEXHTb,获得pProEXHTb-De.rp2-OmpD质... 目的利用重组BCG(rBCG)技术,构建能以串联和并联形式、在细菌表面表达Derp2和OmpD抗原的两种rBCGLI服疫苗。方法经PCR法分别扩增获得Derp2和OmpD基因,测序正确后将两者克隆人原核表达载体pProEXHTb,获得pProEXHTb-De.rp2-OmpD质粒。①串联表达:将Derp2-OmpD融合基因亚克隆人穿梭胞壁表达载体pCW,经酶切鉴定阳性命名为pCW-Derp2-OmpD质粒。将此重组质粒电穿导人BCG感受态细胞,构建可胞壁串噘表达Derp2-OmpD融合蛋白的rBCG;②并联表达:构建pCW-Derp2与pCW-OmpD两种质粒,井将二者同时电穿导人BCG感受态细胞,以构建胞壁并联表达Derp2和OmpD蛋白的rBCG。经潮霉素抗性筛选的阳性克隆,均采用以下三种方式进行鉴定:PCR特异性扩增目的基因片段;用兔抗Derp2多克隆抗体与兔抗OmpD多克隆抗体对阳性克隆分别进行斑点免疫杂交法和间接免疫荧光法鉴定。结果采用基因工程手段制备出以胞壁形式串联和并联表达Derp2和OmpD蛋白的两种rBCG口服疫苗,并通过PCR、斑点免疫杂交法及间接免疫荧光法分别进行鉴定。结论两种rBCG口服疫苗构建成功,为体外实验和临床应用提供基础。 展开更多
关键词 omp d 屋尘螨抗原der P2 重组BCG 口服疫苗
原文传递
不同能级强夯加固处理现场试验对比 被引量:1
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作者 易礼 周丁恒 曹力桥 《水运工程》 北大核心 2017年第12期221-227,共7页
开展6 000和10 000 k N·m能级强夯的现场试验,以强夯前后多道瞬态面波测试和重型动力触探试验方法,对强夯处理效果进行测试。试验结果表明:强夯加固处理后地基承载力和土体工程特性得到改善,但地基承载力特征值和压缩模量局部深度... 开展6 000和10 000 k N·m能级强夯的现场试验,以强夯前后多道瞬态面波测试和重型动力触探试验方法,对强夯处理效果进行测试。试验结果表明:强夯加固处理后地基承载力和土体工程特性得到改善,但地基承载力特征值和压缩模量局部深度仍不能满足设计要求;6 000和10 000 k N·m能级有效加固深度分别为6.0~7.0 m和7.0~8.0 m;10 000 k N·m能级试验区浅层加固处理效果较差,与浅层存在淤泥质土、夯坑回填方式及第3遍夯点间距过大和夯能过小等因素有关,需采取相应的处理措施。 展开更多
关键词 软弱地基土 强夯 多能级 处理效果 现场试验
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