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基于SYBR GreenⅡ的BVDV NS3基因实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用 被引量:2
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作者 李阳 张世勋 +4 位作者 赫鸣睿 刘珊珊 岳山 刘宇 朱战波 《黑龙江八一农垦大学学报》 2025年第2期23-31,共9页
为了建立基于SYBR GreenⅡ的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)NS3基因实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测方法,设计并筛选了BVDV NS3基因的qRT-PCR引物,建立了BVDV NS3 qRT-PCR检测方法,并利用CFX96和猪警-2000 qRT-PCR仪检测了临床牛血清样本。结果显... 为了建立基于SYBR GreenⅡ的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)NS3基因实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测方法,设计并筛选了BVDV NS3基因的qRT-PCR引物,建立了BVDV NS3 qRT-PCR检测方法,并利用CFX96和猪警-2000 qRT-PCR仪检测了临床牛血清样本。结果显示,筛选出1对特异性好的引物,CFX96和猪警-2000 qRT-PCR的标准品最小检出值分别为1×10^(1)copies·μL^(-1)和1×10^(2) copies·μL^(-1),特异性和重复性均良好,且临床血清样本的检测结果准确、一致。研究为BVDV检测提供了技术手段。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 ns3基因 实时荧光定量PCR SYBR GreenⅡ
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猪细小病毒NS1蛋白单链抗体库的构建及筛选
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作者 张丽萌 李闰婷 +6 位作者 宋月 聂晓宁 孔莉 单靖微 许盈盈 王林青 陈龙欣 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第7期3276-3285,共10页
【目的】筛选特异性抗猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)非结构蛋白NS1的单链抗体(scFv),为后续研究PPV奠定基础。【方法】通过原核表达系统诱导表达并纯化PPV NS1蛋白,利用重组NS1蛋白进行动物免疫,检测血清效价水平后,采集小鼠脾脏... 【目的】筛选特异性抗猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)非结构蛋白NS1的单链抗体(scFv),为后续研究PPV奠定基础。【方法】通过原核表达系统诱导表达并纯化PPV NS1蛋白,利用重组NS1蛋白进行动物免疫,检测血清效价水平后,采集小鼠脾脏提取总RNA并逆转录成cDNA,以其为模板扩增抗体重链可变区(variable domain of heavy chains,VH)和轻链可变区(variable domain of light chains,VL)序列;通过重叠延伸PCR扩增获得scFv基因,将其与酶切的pSEXRTL2噬菌体载体连接并电转化大肠杆菌XLⅠ-Blue感受态细胞,构建鼠源性抗PPV NS1的scFv抗体文库,并测定文库质量及库容量;利用噬菌体展示技术筛选对NS1蛋白具有特异性的scFv,通过ELISA和Western blotting检测抗原与阳性噬菌体克隆的亲和力。【结果】本试验成功表达纯化获得可溶性PPV NS1重组蛋白;构建的鼠源抗NS1 scFv文库的库容量为2.7×10^(7) CFU/mL,文库阳性率为87.5%;通过4轮“吸附-洗脱-富集”噬菌体筛选,最终获得2株与PPV NS1蛋白特异性结合的亲和力较高的scFv。【结论】本研究通过原核表达纯化重组蛋白NS1,成功构建鼠源抗PPV NS1蛋白的scFv噬菌体文库,利用噬菌体展示技术筛选获得了可与NS1重组蛋白特异性结合的scFv。试验结果为进一步研发抗PPV药物及诊断试剂提供依据。 展开更多
关键词 猪细小病毒(PPV) 单链抗体(scFv) ns1蛋白 噬菌体文库
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生物信息学和分子对接分析HuNoVs非结构蛋白NS3
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作者 王道 肖亚梅 刘丹 《微生物学杂志》 北大核心 2025年第1期85-95,共11页
为了深入探究人类诺如病毒(Human noroviruses,HuNoVs)的NS3非结构蛋白的结构特征和小分子药物,运用多种生物信息学方法ProtParam、ProtScale、SignalP 5.0、TMHMM 2.0、NCBI Conserved Domains、SOPMA、SWISS-MODEL、YinOYang 1.2、Net... 为了深入探究人类诺如病毒(Human noroviruses,HuNoVs)的NS3非结构蛋白的结构特征和小分子药物,运用多种生物信息学方法ProtParam、ProtScale、SignalP 5.0、TMHMM 2.0、NCBI Conserved Domains、SOPMA、SWISS-MODEL、YinOYang 1.2、NetPhos 3.1、ABCpred、SYFPEITHI、Prankweb和Discovery Studio等预测NS3蛋白的同源性、理化性质、翻译后修饰位点、二级/三级结构、B/T细胞抗原表位、活性口袋位点及抑制化合物。HuNoVs的NS3蛋白是由363个氨基酸组成的稳定亲水性蛋白,相对分子量为39748.79 Da,理论等电点为6.37;NS3蛋白与其他病毒解旋酶序列相似性为32.52%,无信号肽和跨膜结构,二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主,具有2个功能结构域,38个O-糖基化位点和21个磷酸化位点,7个B-细胞抗原表位和19个T-细胞抗原表位;还存在6个活性口袋位置和5个潜在的小分子抑制化合物。本文为阐明人类诺如病毒非结构蛋白NS3的结构和在病毒性肠胃炎中的作用机制提供了理论依据,也为研发和筛选新疫苗和药物奠定了基础。 展开更多
关键词 人类诺如病毒 非结构蛋白ns3 生物信息学 分子对接
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稳定表达猪瘟病毒NS3-NS4A和NS3^(pro)-NS4A蛋白巨噬细胞系的构建及蛋白质组学分析
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作者 郑晓茹 王一丹 +6 位作者 张丽红 杨莹莹 赵欣如 李敏 黄娟 张乔亚 曹志 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第11期5839-5851,共13页
本研究旨在通过构建稳定表达的猪瘟病毒(classical swine fever virus, CSFV)NS3-NS4A和NS3^(pro)-NS4A蛋白巨噬细胞系,以期更好地探索宿主天然免疫与CSFV的相互作用关系。利用琼脂糖凝胶电泳、连接与转化和提取质粒等方法对重组表达载... 本研究旨在通过构建稳定表达的猪瘟病毒(classical swine fever virus, CSFV)NS3-NS4A和NS3^(pro)-NS4A蛋白巨噬细胞系,以期更好地探索宿主天然免疫与CSFV的相互作用关系。利用琼脂糖凝胶电泳、连接与转化和提取质粒等方法对重组表达载体进行构建,将构建好的pCMV-CBH-GFP-2A-Puro-CSFV NS3^(pro)-NS4A、pCMV-CBH-GFP-2A-Puro-CSFV NS3-NS4A和pCMV-CBH-GFP-2A-Puro重组表达载体分别感染HEK-293T细胞包装出慢病毒。然后利用包装成功的慢病毒感染猪肺泡巨噬细胞(3D4/21),对感染细胞进行单克隆筛选得到稳定转染细胞系,最后用Western blot方法验证稳定细胞系蛋白表达。对其进行蛋白组学分析,筛选出MAPK、PI3K通路的相互作用蛋白,并进行功能分析,利用Western blot检测CDK4、CDC37、CASP3、IKBKG、NFκB1蛋白表达量。结果表明,经MegAlign分析构建的过表达CSFV非结构蛋白NS3-NS4A以及NS3^(pro)-NS4A慢病毒载体氨基酸序列全部正确,无移码;重组表达载体感染293T细胞24 h后,感染效率可达90%以上,慢病毒包装成功;Western blot分析成功获得稳定表达CSFV NS3-NS4A、NS3^(pro)-NS4A巨噬细胞系;通过蛋白组学分析,筛选出NS3-NS4A/mock组中MAPK与PI3K通路中上调蛋白11个,下调蛋白24个;经Western blot检测CSFV NS3-NS4A显著降低了MAPK通路中CASP3、NFκB1、IKBKG的表达,PI3K通路中CDK4、CDC37的表达。本研究成功构建了稳定表达NS3-NS4A、NS3^(pro)-NS4A蛋白的3D4/21细胞系,并对蛋白组学筛选的关键蛋白进行功能分析,为研究CSFV NS3-NS4A调控宿主天然免疫应答的机制提供物质基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 ns3-ns4A ns3^(pro)-ns4A 猪肺泡巨噬细胞 稳定表达
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鸭坦布苏病毒非结构蛋白NS1和NS3诱导Neuro-2a细胞不完全自噬的研究
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作者 陈星宇 姜雅倩 +2 位作者 宋春丽 宋臣阳 王晴 《病毒学报》 北大核心 2025年第3期845-855,共11页
本研究在鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus, DTMUV)诱导小鼠神经母细胞瘤细胞(Neuro-2a)不完全自噬促进病毒复制的基础上,鉴定诱导Neuro-2a细胞自噬的病毒蛋白,探究病毒非结构蛋白NS1、NS3在诱导Neuro-2a细胞不完全自噬中的作用。用载体... 本研究在鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus, DTMUV)诱导小鼠神经母细胞瘤细胞(Neuro-2a)不完全自噬促进病毒复制的基础上,鉴定诱导Neuro-2a细胞自噬的病毒蛋白,探究病毒非结构蛋白NS1、NS3在诱导Neuro-2a细胞不完全自噬中的作用。用载体pCMV14-Flag构建DTMUV十个编码蛋白基因的真核表达质粒,分别将其转染至Neuro-2a细胞,Western blot检测病毒蛋白和自噬标志性蛋白的表达,明确诱导Neuro-2a细胞自噬的病毒蛋白,并通过透射电镜、激光共聚焦、Western blot等方法进一步验证以上病毒蛋白在诱导Neuro-2a细胞不完全自噬中的作用。结果显示,本研究成功构建了DTMUV十个编码蛋白基因的真核表达质粒,且能够在Neuro-2a细胞中正常表达;非结构蛋白NS1和NS3能显著增加LC3-Ⅱ和P62蛋白水平,促进Neuro-2a细胞中自噬体形成,诱导Neuro-2a细胞发生不完全自噬,且NS1和NS3蛋白诱导的Neuro-2a细胞不完全自噬具有剂量和时间依赖性。综上所述,本研究证实DTMUV非结构蛋白NS1、NS3是诱导Neuro-2a细胞不完全自噬的关键蛋白,为进一步研究DTMUV的致病机制奠定基础。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒 非结构蛋白ns1 非结构蛋白ns3 Neuro-2a细胞 不完全自噬
原文传递
GNSS拒止场景下基于GA-Eman的GNSS/INS车辆辅助组合导航算法
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作者 文家燕 丁成业 景永年 《电子制作》 2025年第11期17-21,共5页
GNSS信号丢失会导致GNSS/I NS组合导航系统定位失准甚至失效,而现有辅助模型仍存在不足。针对这一问题,本文提出了一种基于遗传算法(GA)优化E l man神经网络的车辆辅助组合导航算法。首先,使用小波阈值去噪算法降低惯导系统测量数据的噪... GNSS信号丢失会导致GNSS/I NS组合导航系统定位失准甚至失效,而现有辅助模型仍存在不足。针对这一问题,本文提出了一种基于遗传算法(GA)优化E l man神经网络的车辆辅助组合导航算法。首先,使用小波阈值去噪算法降低惯导系统测量数据的噪声,然后再使用GA优化E l man神经网络的权重和结构参数,以提高模型的预测精度和泛化能力。其次,构建基于GA-E l man神经网络的车辆辅助导航模型。该模型将系统分为两种模式,在GNSS信号正常时进入训练模式进行在线训练;当GNSS信号丢失后系统变为纯惯导模式,此时启用训练好的模型接收惯导系统的数据进行实时解算和预测。最后,跑车实验结果表明,与PSO-BPNN辅助模型和E l man辅助模型相比,本文所提出算法的定位精度得到有效提升。 展开更多
关键词 GnsS/ns 组合导航 遗传算法 Eman 小波阈值去噪
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INS-aided GNSS jamming protection in support of resilient train positioning
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作者 Zhuojian Cao Jiang Liu +1 位作者 Wei Jiang Baigen Cai 《High-Speed Railway》 2025年第3期185-193,共9页
Railway safety and efficiency increasingly rely on precise train positioning. The integration of the Global Navigation Satellite System (GNSS) into railway control systems aims to reduce dependence on track-side infra... Railway safety and efficiency increasingly rely on precise train positioning. The integration of the Global Navigation Satellite System (GNSS) into railway control systems aims to reduce dependence on track-side infrastructure. While GNSS has significantly improved train localization, challenges such as the susceptibility to jamming remain. To address this, this paper introduces an Inertial Navigation System (INS)-aided train positioning system based on deep integration, exploring its performance through semi-physical experiments and simulations. Experimental results demonstrate that the proposed solution is able to reduce the positioning error by 63.47%, and the velocity error by 58.47% under jamming conditions. The study highlights the potential of deep integration for improving the resilience of GNSS-based train control systems, especially in the face of Radio Frequency (RF) jamming threats. 展开更多
关键词 GnsS jammingi Deeply-coupled integration GnsS/ns
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基因Ⅰ型日本脑炎病毒NS1蛋白的多克隆抗体制备及鉴定
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作者 柴风雪 田占成 +5 位作者 杨吉飞 张鸿歌 牛庆丽 独军政 关贵全 殷宏 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第1期26-32,共7页
乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE)是由三带喙库蚊媒介传播的日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染引起的,临床表现以神经症状为主。NS1蛋白作为JEV编码的非结构蛋白,能够诱导机体产生非中和作用的保护性抗体,是JE诊断... 乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE)是由三带喙库蚊媒介传播的日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染引起的,临床表现以神经症状为主。NS1蛋白作为JEV编码的非结构蛋白,能够诱导机体产生非中和作用的保护性抗体,是JE诊断和疫苗研发的主要靶标。本研究以基因Ⅰ型JEV的NS1蛋白为靶标,将构建的重组质粒p ET30a-His-NS1转化Rosetta(DE3)表达菌,以0.5 mmol/L IPTG诱导表达。结果显示,与预期蛋白分子量大小一致的重组NS1蛋白以包涵体形式表达。经亲和层析柱纯化获得浓度为2.568 mg/mL的重组His-NS1蛋白。免疫印迹和间接免疫荧光结果表明,制备的高效价抗NS1蛋白多克隆抗体能够特异性识别蛋白分子量分别为46和55 ku的天然NS1蛋白。此外,本研究首次发现制备的抗NS1蛋白多克隆抗体与JEV预孵育能够剂量依赖性的显著降低JEV感染BHK-21细胞的病毒产量。将抗NS1蛋白多克隆抗体作为免疫沉淀抗体,用于JEV感染PK-15细胞的免疫沉淀质谱分析。结果表明,NS1蛋白能够与囊膜E蛋白相互作用。总之,本研究为深入了解NS1蛋白的生物学功能、JE诊断方法的建立和疫苗研制提供了基础材料。 展开更多
关键词 日本脑炎病毒 ns1蛋白 多克隆抗体 制备 鉴定
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猪细小病毒NS1基因编码蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备
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作者 帅文娜 郭子强 +8 位作者 李佳乐 罗梦 李丽薇 周艳君 姜一峰 童武 童光志 李兆龙 高飞 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第3期314-320,共7页
本研究旨在制备PPV-NS1的多克隆抗体,并用猪细小病毒(PPV)和真核质粒pcDNA3.1(+)-NS1-3×Flag进行双重验证。首先将PPV的非结构蛋白编码基因NS1克隆至原核表达载体pETDuet,构建原核质粒pET-PPV-NS1。接着,将原核质粒pET-PPV-NS1转... 本研究旨在制备PPV-NS1的多克隆抗体,并用猪细小病毒(PPV)和真核质粒pcDNA3.1(+)-NS1-3×Flag进行双重验证。首先将PPV的非结构蛋白编码基因NS1克隆至原核表达载体pETDuet,构建原核质粒pET-PPV-NS1。接着,将原核质粒pET-PPV-NS1转化至感受态E.coli BL21细胞中,经由1 mmol/LIPTG诱导以后,通过SDS-PAGE和Western-blot对NS1表达进行检测,结果表明,NS1基因在感受态细胞中得到了良好的表达。其次,将纯化后获得的NS1蛋白采用多点注射的方式对大白兔进行免疫,制备获得针对重组NS1蛋白的多克隆抗体。然后,将真核质粒pcDNA3.1(+)-NS1-3×Flag转染HEK 293T细胞;同时PPV感染ST细胞后收取蛋白样品,用上述制备的NS1多克隆抗体进行验证。结果显示,制备的NS1多克隆抗体具有良好的反应性和特异性。 展开更多
关键词 猪细小病毒 ns1蛋白 多克隆抗体 原核表达
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辽宁省沈阳市猫泛白细胞减少症病毒VP2、NS1基因的遗传进化分析
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作者 刘琪 刘正伟 +6 位作者 张利 王超 郝春晖 高锋 姜仁礼 梁琳 田长永 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2025年第6期81-87,共7页
为了解辽宁沈阳地区猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)VP2和NS1基因的遗传变异情况,试验从辽宁省沈阳市3个动物医院和1个猫繁育场收集疑似FPV感染的猫粪便拭子样本13份(编号为FPV-8~FPV-20),利用胶体金试纸条进行FP... 为了解辽宁沈阳地区猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)VP2和NS1基因的遗传变异情况,试验从辽宁省沈阳市3个动物医院和1个猫繁育场收集疑似FPV感染的猫粪便拭子样本13份(编号为FPV-8~FPV-20),利用胶体金试纸条进行FPV检测,提取阳性样本中的病毒DNA后进行VP2和NS1基因的PCR扩增、测序、同源性分析、编码蛋白的氨基酸突变位点分析及遗传进化树构建。结果表明:13份样本均呈FPV阳性,经PCR扩增均得到大小为1755 bp的VP2基因和大小为2007 bp的NS1基因。13份样本中的FPV VP2基因之间的核苷酸相似性为98.7%~100%,与GenBank中FPV参考毒株的核苷酸相似性为98.6%~100%,其中FPV-LN15、FPV-LN18、FPV-LN19与BJ540(MT270553.1)、FPV ZJFPV15(MW495840.1)和FPV-SH2003(MW811187.1)的核苷酸相似性为100%;13份样本中的FPV NS1基因之间的核苷酸相似性为99.0~100%,与GenBank中FPV参考毒株的核苷酸相似性为99.1%~99.9%,其中FPV-LN8、FPV-LN10和PPV-LN13的核苷酸相似性为100%,FPV-LN9、FPV-LN18和FPV-LN19的核苷酸相似性为100%,PPV-LN15和FPV-LN17的核苷酸相似性为100%。13份样本中的FPV VP2蛋白共存在5个氨基酸突变位点(第91,301,302,305,307位),FPV NS1蛋白共存在6个氨基酸突变位点(第17,23,60,247,443,596位)。基于VP2基因构建的遗传进化树中共分为2个大分支,FPV和水貂肠炎病毒(Mink enteritis virus,MEV)毒株聚为一支,犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)毒株处于一个独立分支。样本FPV-LN11、FPV-LN13、FPV-LN8、FPV-LN16、FPV-LN10、FPV-LN20处于一个较小分支,样本FPV-LN14处于独立小分支,且与FPV HNZZ2株(MZ005633.1,郑州)、FPV Barut株(MZ391096.1,土耳其)、FPV 17D01株(OP153925.1,韩国)、FPV DLC02株(MN418998.1,大连)处于不同小分支;样本FPV-LN9、FPV-LN12、FPV-LN15、FPV-LN18、FPV-LN19与FPV JSNJ-21G5株(OP796709.1,扬州)、FPV BJ540株(MT270553.1,北京)、FPV-SH2003株(MW811187.1,上海)、FPV ZJFPV15株(MW495840.1,扬州)处于一个较小分支,样本FPV-LN17处于独立小分支,且与FPV_ARG08(FJ440714.1)株(阿根廷)处于不同小分支。基于NS1基因构建的遗传进化树共分为两个大分支,FPV毒株和CPV毒株分别为两个独立的分支,FPV-LN9、FPV-LN12、FPV-LN15、FPV-LN17、FPV-LN14、FPV-LN18、FPV-LN19与FPV-SH2003株(MW811187.1,上海)和FPV-SH2001株(MW650831.1,上海)处于一个较小分支,FPV-LN8、FPV-LN11、FPV-LN13、FPV-LN10、FPV-LN16、FPV-LN20株与FPV HNZZ2株(MZ005633.1,郑州)处于一个较小分支,均与FPV_IZSSI_42807_15株(KX434462.1,意大利)、FPV株(X55115.1,澳大利亚)处于不同小分支。说明各样本两种基因的亲缘关系基本一致(除样本FPV-LN14外),FPV毒株在同一地理范围内具有较高的遗传相似性。 展开更多
关键词 猫泛白细胞减少症病毒 VP2基因 ns1基因 基因突变 遗传进化分析
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猫杯状病毒NS2蛋白的截短表达及多克隆抗体的制备与应用
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作者 董宁宁 张琦 +4 位作者 谈晓梅 李娜 朱雯琪 刘光清 孟春春 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第2期78-83,共6页
旨在鉴定并深入研究NS2蛋白在猫杯状病毒(FCV)感染中的作用。根据FCV SH2014株的基因序列,利用生物信息学技术对NS2蛋白进行了分析,将其在110 aa处截短为2个基因片段(NS2-N和NS2-C),将2个NS2-N相连接。筛选出成功表达的重组蛋白,使用弗... 旨在鉴定并深入研究NS2蛋白在猫杯状病毒(FCV)感染中的作用。根据FCV SH2014株的基因序列,利用生物信息学技术对NS2蛋白进行了分析,将其在110 aa处截短为2个基因片段(NS2-N和NS2-C),将2个NS2-N相连接。筛选出成功表达的重组蛋白,使用弗氏佐剂乳化后免疫新西兰大白兔。通过Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)验证多克隆抗体的特异性识别能力。结果:成功构建了pET-32a-NS2-N和pET-32a-NS2-N-N重组质粒,并在上清液和包涵体中稳定表达了预期大小的重组蛋白。制备的多克隆抗体能特异性识别多个病毒株的NS2蛋白。结论:成功制备兔抗NS2蛋白的多克隆抗体,为深入研究FCV NS2蛋白的结构和功能提供了试验材料,为进一步阐明该病毒的致病机制奠定基础。 展开更多
关键词 猫杯状病毒 ns2蛋白截短 原核表达 多克隆抗体
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C、N含量对NS1402耐蚀合金晶间腐蚀性能的影响
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作者 舒玮 谷宇 《金属热处理》 北大核心 2025年第4期85-88,共4页
研究了不同C、N含量对NS1402合金晶间腐蚀性能的影响。结果表明,NS1402合金试样经675℃和750℃敏化处理后的微观组织中无析出物产生。675℃敏化条件下,当N含量小于0.01%时,降低C含量对合金晶间腐蚀速率的影响较小。敏化温度升高至750℃... 研究了不同C、N含量对NS1402合金晶间腐蚀性能的影响。结果表明,NS1402合金试样经675℃和750℃敏化处理后的微观组织中无析出物产生。675℃敏化条件下,当N含量小于0.01%时,降低C含量对合金晶间腐蚀速率的影响较小。敏化温度升高至750℃后,C、N含量均在0.01%以上的晶间腐蚀试样表现出较为严重的腐蚀特征,平均腐蚀率为0.03 mm/月,腐蚀深度达24μm。C、N含量降低至0.01%以下后,合金在750℃敏化条件下表现出优良的耐晶间腐蚀性能,平均腐蚀率只有0.01 mm/月。 展开更多
关键词 ns1402耐蚀合金 C含量 N含量 晶间腐蚀
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坦布苏病毒NS1蛋白的原核表达、生物信息学分析及鼠源多克隆抗体制备
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作者 李娜 林翠 +4 位作者 吴诚诚 张帆帆 谭佳 黄江南 李海琴 《南方农业学报》 北大核心 2025年第3期962-972,共11页
[目的]对坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV)NS1蛋白进行生物信息学分析,原核表达NS1蛋白并制备鼠源NS1多克隆抗体,为TMUV检测及NS1蛋白功能研究提供理论基础。[方法]使用ProtParam、ProtScale、TMHMM-2.0、SignalP-5.0、NetPhos 3.1、NetN... [目的]对坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV)NS1蛋白进行生物信息学分析,原核表达NS1蛋白并制备鼠源NS1多克隆抗体,为TMUV检测及NS1蛋白功能研究提供理论基础。[方法]使用ProtParam、ProtScale、TMHMM-2.0、SignalP-5.0、NetPhos 3.1、NetNGlyc-1.0、YinOYang-1.2、SOPMA、AlphaFold2等生物信息学软件分析NS1蛋白氨基酸组成、理论等电点、亲/疏水性、跨膜结构域、信号肽、磷酸化位点、糖基化位点、二级结构、三级结构。扩增NS1基因,构建重组质粒并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞表达NS1蛋白。NS1蛋白经尿素处理后使用Ni^(2+)-NTA亲和层析纯化并浓缩,随后使用SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定。制备鼠源NS1多克隆抗体,建立间接ELISA检测方法,检测鼠源NS1多克隆抗体效价和特异性。[结果]生物信息学分析结果显示,NS1蛋白编码320个氨基酸残基,分子质量约36.1 kD,理论等电点8.24,为稳定的亲水性蛋白。NS1蛋白不存在跨膜结构域和信号肽,具有42个磷酸化位点(22个丝氨酸位点、17个苏氨酸位点和3个酪氨酸位点)和13个糖基化位点(3个N-糖基化位点和10个O-糖基化位点)。NS1蛋白二级结构中α-螺旋占21.88%,延伸链占25.00%,β-转角占11.87%,无规则卷曲占41.25%,NS1蛋白三级结构由2个结构域组成。成功构建原核表达载体pET-28a-NS1,经纯化后成功获得NS1蛋白。制备的鼠源NS1多克隆抗体经间接ELISA检测效价达1∶3276800,可用于TMUV的特异性检测和间接免疫荧光分析。[结论]NS1蛋白不含信号肽和跨膜结构域,为亲水性蛋白,适合在原核系统内表达。利用原核表达系统成功构建pET-28a-NS1,通过尿素变性及Ni~2+-NTA亲和层析纯化后得到纯度和生物学活性较高的NS1蛋白。成功制备效价高、特异性强的鼠源NS1多克隆抗体,可用于TMUV的特异性检测。 展开更多
关键词 坦布苏病毒 ns1蛋白 原核表达 多克隆抗体
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猫杯状病毒非结构蛋白NS2与宿主细胞互作蛋白的筛选与鉴定
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作者 陈尚琛 董宁宁 +9 位作者 高嘉溪 谈晓梅 李娜 罗茂青 王诗诗 朱雯琪 邓应坤 庞帅赛 刘光清 孟春春 《病毒学报》 北大核心 2025年第5期1470-1477,共8页
本研究旨在筛选并鉴定猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)NS2蛋白与宿主细胞蛋白的相互作用,探讨NS2在病毒复制和宿主免疫逃逸中的潜在功能。采用FCV的NS2真核表达质粒转染CRFK细胞,同时设立空载体对照组,每组各三个样本于转染后24h收... 本研究旨在筛选并鉴定猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)NS2蛋白与宿主细胞蛋白的相互作用,探讨NS2在病毒复制和宿主免疫逃逸中的潜在功能。采用FCV的NS2真核表达质粒转染CRFK细胞,同时设立空载体对照组,每组各三个样本于转染后24h收样进行LC-MS/MS质谱分析,筛选与NS2相互作用的差异蛋白。通过生物信息学分析筛选出与NS2可能存在高度相互作用的宿主蛋白,采用免疫共沉淀(Co-IP)逐一验证宿主蛋白与NS2蛋白之间的相互作用。质谱分析筛选出617个可能与NS2存在特异互作的蛋白。通过GO和KEGG分析,发现差异蛋白主要参与细胞周期调控、DNA代谢、核糖体生物发生等生物学过程。结合FCV在胞内的生活史初步判定HEXIM1、SEC62、FKBP11、RPS15A和DDX20这五个蛋白与NS2蛋白最有可能发生相互作用。最后通过Co-IP实验确认HEXIM1、FKBP11均与NS2之间存在相互作用。本研究通过质谱和免疫共沉淀技术筛选并验证了与NS2发生互作的宿主蛋白,为深入解析其在FCV增殖中的作用提供了新研究方向。 展开更多
关键词 猫杯状病毒 ns2 免疫共沉淀技术 质谱分析
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表达猫杯状病毒NS2质粒转染猫肾传代细胞的转录组学分析
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作者 陈尚琛 董宁宁 +8 位作者 谈晓梅 李娜 张琦 罗茂青 邓应坤 庞帅赛 高嘉溪 刘光清 孟春春 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第12期6339-6350,共12页
旨在研究FCV NS2蛋白与宿主细胞之间的相互关系。本研究用FCV的NS2真核表达质粒转染CRFK细胞同时设立空载体转染对照组,每组各三个样本于转染后24 h收样进行转录组测序。结果显示:通过比较两组测序结果,发现转染NS2蛋白的试验组细胞存在... 旨在研究FCV NS2蛋白与宿主细胞之间的相互关系。本研究用FCV的NS2真核表达质粒转染CRFK细胞同时设立空载体转染对照组,每组各三个样本于转染后24 h收样进行转录组测序。结果显示:通过比较两组测序结果,发现转染NS2蛋白的试验组细胞存在218个差异表达基因,其中上调基因200个下调基因18个。通过GO富集分析和KEGG富集分析,发现显著差异基因主要集中病毒胞内入侵和免疫逃逸相关信号通路。本研究揭示NS2蛋白对CRFK细胞的内体转运、TGF-β和RIG-I等多个信号通路在转录水平具有明显的调控作用,系统性揭示FCV NS2蛋白对宿主细胞整体转录调控模式,为后期研究FCV与宿主细胞互作提供了新的研究思路。 展开更多
关键词 猫杯状病毒 ns2 转录组学测序 差异表达基因
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ROE格式的物理增强图神经网络求解Euler与层流不可压NS方程
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作者 宋尚校 姜龙祥 +2 位作者 王丽媛 褚新坤 张浩 《应用数学和力学》 北大核心 2025年第1期55-71,共17页
近年来,融合物理信息的深度学习方法为偏微分方程的求解提供了一个新的思路.然而,到目前为止,大多数工作在解空间存在间断的问题上的计算精度不高,时间外推能力差.针对以上两个问题,该文提出了使用图神经网络结合流体计算领域的ROE格式... 近年来,融合物理信息的深度学习方法为偏微分方程的求解提供了一个新的思路.然而,到目前为止,大多数工作在解空间存在间断的问题上的计算精度不高,时间外推能力差.针对以上两个问题,该文提出了使用图神经网络结合流体计算领域的ROE格式融合方程或数据信息的模型———ROE-PIGNN.数值实验表明,该模型在求解由Euler方程控制的激波管问题时,可达到与传统ROE格式相当的计算精度,并具备一定时间范围的外推能力.最后,对由Navier-Stokes(NS)方程控制的二维圆柱绕流问题进行了求解,实验结果表明:模型可以预测后续的周期性流动,并实现对部分关键位置流动结构的更精确的复现,相比纯数据驱动,误差降低了60%. 展开更多
关键词 深度学习 图神经网络 ROE格式 EULER方程 ns方程
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优良玉米自交系NS189的选育与特性
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作者 吴涵雅 秦晓彦 +6 位作者 陶春来 田庆武 樊惠超 曹丽娜 杨雪 张建东 元文革 《园艺与种苗》 2025年第10期91-92,110,共3页
NS189系廊坊市农林科学院利用引自美国的高蛋白玉米材料AM01与国内玉米农家种‘八趟白’杂交,按预定育种目标,经多代自交定向选育而成的白粒玉米自交系。该自交系具有穗大、矮秆、秆硬、耐密植、出籽率高、结实性好、一般配合力高等特... NS189系廊坊市农林科学院利用引自美国的高蛋白玉米材料AM01与国内玉米农家种‘八趟白’杂交,按预定育种目标,经多代自交定向选育而成的白粒玉米自交系。该自交系具有穗大、矮秆、秆硬、耐密植、出籽率高、结实性好、一般配合力高等特点。该自交系杂交一代具有高产、出籽率高、抗病性和适应性强的优点。作为一个创新资源,该自交系预期可在玉米高产育种、白粒玉米育种、高蛋白玉米新品种选育上具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 玉米 白粒自交系 ns189
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Hom-李代数的广义Reynolds算子和Hom-NS-李代数 被引量:2
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作者 徐森荣 汪为 赵嘉 《吉林大学学报(理学版)》 北大核心 2025年第2期353-359,共7页
首先,通过给定一个Hom-李代数及其表示,证明Hom-李代数上的强拟迹函数可以诱导3-Hom-李代数及其表示,从而证明Hom-李代数上的广义Reynolds算子也是诱导3-Hom-李代数上的广义Reynolds算子;其次,研究Hom-NS-李代数和广义Reynolds算子的相... 首先,通过给定一个Hom-李代数及其表示,证明Hom-李代数上的强拟迹函数可以诱导3-Hom-李代数及其表示,从而证明Hom-李代数上的广义Reynolds算子也是诱导3-Hom-李代数上的广义Reynolds算子;其次,研究Hom-NS-李代数和广义Reynolds算子的相互导出性质,并给出相应范畴的伴随关系. 展开更多
关键词 Hom-李代数 广义Reynolds算子 3-Hom-李代数 Hom-ns-李代数
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登革病毒Ⅱ型NS1蛋白的特异性单克隆抗体的制备和配对抗体筛选
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作者 蒋宇欣 李巍 +11 位作者 徐应佳 赖玉珍 张迩馨 刘文婧 李佳萌 宋悦 林思嘉 王雪琴 周培泽 吕瑞辰 孙一仟 李越希 《病毒学报》 北大核心 2025年第4期1112-1120,共9页
登革热是由登革病毒(Dengue virus,DENV)感染引起的急性虫媒传播疾病。早期诊断和控制疾病发展可以降低严重登革热的发病率和死亡率。虽然已有的DENV NS1抗原检测试剂可以早期诊断登革热,但都不能区分DENV四种血清型。本研究通过制备DEN... 登革热是由登革病毒(Dengue virus,DENV)感染引起的急性虫媒传播疾病。早期诊断和控制疾病发展可以降低严重登革热的发病率和死亡率。虽然已有的DENV NS1抗原检测试剂可以早期诊断登革热,但都不能区分DENV四种血清型。本研究通过制备DENV2 NS1抗原的单克隆抗体,筛选特异性识别DENV2 NS1的抗体对,建立特异检测DENV2 NS1抗原的双抗体夹心ELISA技术,用于DENV NS1抗原的快速分型检测。利用昆虫细胞-杆状病毒系统表达重组DENV2 NS1蛋白(rDENV2 NS1),通过镍柱亲和层析纯化rDENV2 NS1。用纯化的rDENV2 NS1蛋白免疫BALB/c鼠,分离免疫小鼠的脾脏淋巴细胞与SP2/0细胞融合,筛选阳性杂交瘤细胞系,获得三株阳性单克隆抗体F1、B12、A2,亚型依次为IgG1(κ)、IgG2a(κ)、IgG1(κ),间接ELISA和Western blot鉴定结果显示B12、A2单抗能与rDENV2 NS1特异性结合,F1单抗与其他DENV血清型NS1有交叉反应。细胞培养生产纯化单克隆抗体,HRP标记单抗,双抗体夹心ELISA法筛选可特异识别DENV2 NS1抗原的抗体对。结果显示,B12作为捕获抗体,A2-HRP作为检测抗体,能特异性结合DENV2 NS1蛋白,与其他DENV血清型NS1没有交叉反应,成功筛选出特异性识别DENV2型NS1的配对抗体,并初步建立了特异检测DENV2 NS1抗原的双抗体夹心ELISA检测技术,为研发登革病毒早期分型快速诊断试剂奠定基础。 展开更多
关键词 登革病毒 ns1蛋白 单克隆抗体 配对抗体
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牛病毒性腹泻病毒1c型NS3解旋酶结构域蛋白原核表达及间接ELISA的建立
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作者 吴玉湖 王进千 +3 位作者 高明阳 安乐乐 张丽娟 刘俊林 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第11期89-97,共9页
旨在建立NS3解旋酶结构域蛋白间接ELISA检测方法,为牛病毒性腹泻病毒(BVDV)血清学检测提供简便高效的方法。PCR扩增获得编码NS3解旋酶结构域基因,构建原核表达载体pET28a-BVDV1c-NS3-H;1mmol/LIPTG25℃诱导表达目的蛋白后,采用Ni-NTA亲... 旨在建立NS3解旋酶结构域蛋白间接ELISA检测方法,为牛病毒性腹泻病毒(BVDV)血清学检测提供简便高效的方法。PCR扩增获得编码NS3解旋酶结构域基因,构建原核表达载体pET28a-BVDV1c-NS3-H;1mmol/LIPTG25℃诱导表达目的蛋白后,采用Ni-NTA亲和层析纯化目的蛋白并通过Westernblot验证其与阳性血清的特异性反应;之后采用纯化的NS3解旋酶结构域蛋白建立间接ELISA方法,进行了特异性、敏感性和重复性检验,并对不同地区的288份临床牛血清样品进行了检测,与IDEXX公司BVDV抗原试剂盒检测结果进行比较,确定符合率。结果:成功表达并纯化出NS3解旋结构域并证实其具有反应原性;ELISA优化结果表明,NS3解旋酶结构域蛋白最佳抗原包被浓度为125μg/mL,最佳包被液为1×TBST,最佳血清稀释浓度比为1∶10,最佳酶标二抗稀释浓度比为1∶10000;阴阳性结果判定值OD_(450nm)为008787;该抗原与小反刍兽疫病毒阳性血清、口蹄疫病毒阳性血清、牛传染性鼻气管炎阳性血清均不发生交叉性反应,敏感性高达1∶12800,批次内与批次间的变异系数均小于10%,并且对不同来源的牛血清样品进行检测,其符合率为8574%。结论:本研究建立的NS3解旋酶结构域蛋白的间接ELISA方法可用于BVDV抗体检测并为BVD诊断奠定了基础。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 ns3解旋结构域蛋白 抗原表位 原核表达 ELISA
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