期刊文献+
共找到1,531篇文章
< 1 2 77 >
每页显示 20 50 100
苹果软枝病毒1巢式RT-PCR检测方法的建立及应用
1
作者 刘成龙 范旭东 +2 位作者 任芳 胡国君 董雅凤 《植物病理学报》 北大核心 2026年第1期181-184,共4页
苹果软枝病(apple rubbery wood disease, ARWD)是一种重要的苹果病毒病害,最早于1935年在英国苹果‘Lord Lambourne’上被发现[1-2]。主要影响木质素合成,进而使苹果的茎和枝条异常柔软,容易弯曲折断;还可以引起节间缩短,发育延迟,使... 苹果软枝病(apple rubbery wood disease, ARWD)是一种重要的苹果病毒病害,最早于1935年在英国苹果‘Lord Lambourne’上被发现[1-2]。主要影响木质素合成,进而使苹果的茎和枝条异常柔软,容易弯曲折断;还可以引起节间缩短,发育延迟,使树体对冷胁迫的敏感性增加[3-5]。在种植‘金冠’、‘嘎啦’等感病品种的地区或国家,可导致苹果减产30%[6-7]。 展开更多
关键词 木质素合成 苹果软枝病 RT-pcr检测
原文传递
16SrⅡ组槟榔黄化植原体巢式PCR检测方法的建立
2
作者 林兆威 唐庆华 +2 位作者 于少帅 龙仕达 宋薇薇 《热带作物学报》 北大核心 2026年第3期694-701,共8页
在中国,引起槟榔黄化病(areca palm yellow leaf disease,AYLD)的植原体主要有16SrⅠ组、16SrⅡ组及16SrXXXⅡ组3个种群,但目前的检测技术主要针对16SrⅠ组或3个种群的共同检测,缺乏对16SrⅡ组植原体的特异性识别手段。为了对16SrⅡ组... 在中国,引起槟榔黄化病(areca palm yellow leaf disease,AYLD)的植原体主要有16SrⅠ组、16SrⅡ组及16SrXXXⅡ组3个种群,但目前的检测技术主要针对16SrⅠ组或3个种群的共同检测,缺乏对16SrⅡ组植原体的特异性识别手段。为了对16SrⅡ组槟榔黄化植原体进行特异性检测,本研究基于16SrⅡ组植原体核糖体蛋白(rp)基因序列,设计并筛选特异性巢式PCR引物,并对该方法的特性及其应用效果进行评估。结果显示,在准确性方面,该方法能准确区分出阳性和阴性样品;在敏感性比较中,该方法敏感性高于16S rRNA和tuf基因的通用巢式PCR检测;在特异性评估中,16SrⅠ组和16SrXXXⅡ组植原体、供试的槟榔病原及内生菌均对本方法未造成干扰;在应用中,从海南文昌采集的22份槟榔样品检测出4份阳性样品,并且可检测出属于16SrⅡ组的银胶菊丛枝植原体、皱子鸟足菜丛枝植原体及花生丛枝植原体,表现出较好的适用性。综上,本研究建立的基于rp基因的巢式PCR方法对16SrⅡ组槟榔黄化植原体检测具有较好的特异性,可为16SrⅡ组槟榔黄化植原体的田间诊断、病情监测提供技术参考。 展开更多
关键词 槟榔 槟榔黄化病 植原体检测 巢式pcr
在线阅读 下载PDF
Juvenile myelo-monocytic leukemia (JMML): No effect of granulocyte monocyte-colony stimulating factor (GM-CSF) on Wilms Tumor gene (<i>WT</i>1) by nested Polymerase Chain Reaction (nPCR) and flow cytometry
3
作者 Sana Khan Marie Olszewski +1 位作者 Wei Huang Morris Kletzel 《Advances in Bioscience and Biotechnology》 2014年第2期155-159,共5页
This study was to determine whether GM-CSF induced WT1 gene expression and to establish an association with markers of proliferation CD71+CD34+ using nPCR and flow cytometry respectively, in samples obtained from 5 ne... This study was to determine whether GM-CSF induced WT1 gene expression and to establish an association with markers of proliferation CD71+CD34+ using nPCR and flow cytometry respectively, in samples obtained from 5 newly diagnosed JMML patients. Overtime (day 0 to day 14) there was an insignificant difference in WT1 gene expression and CD71+CD34+ in JMML samples when compared to peripheral blood of normal volunteers (n = 3). Our study suggests that there is a correlation between WT1 gene expression and cellular proliferation and that GMCSF in vitro does not create a significant difference in JMML samples. 展开更多
关键词 JUVENILE Myelo-Monocytic Leukemia WILMS Tumor nested pcr JMML WT1 GM-CSF npcr
暂未订购
猪细小病毒巢式PCR检测方法的建立
4
作者 郑佳 仇德洋 +2 位作者 曹志 姜莉群 吕延飞 《中国动物检疫》 2026年第3期89-94,共6页
为建立猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)的鉴别检测方法,针对编码PPV非结构蛋白1的基因(NS1)序列,分别设计了1对内套引物和1对外套引物,经优化反应条件,成功建立了PPV巢式PCR检测方法。该方法仅能特异性扩增PPV,对其他猪源病毒扩增... 为建立猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)的鉴别检测方法,针对编码PPV非结构蛋白1的基因(NS1)序列,分别设计了1对内套引物和1对外套引物,经优化反应条件,成功建立了PPV巢式PCR检测方法。该方法仅能特异性扩增PPV,对其他猪源病毒扩增均呈阴性,特异性好;对PPV重组质粒的检测限为5.60×10^(1) copies/μL,灵敏度高;组内和组间试验中,在同等扩增条件下,均出现同样的目的条带,重复性好。应用本研究建立的方法对76份临床样品进行检测,并将其检测结果与常规PCR进行比对,符合率为96.05%。结果表明,本研究建立的PPV巢式PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,为PPV感染的临床检测和及时防控提供了技术支撑。 展开更多
关键词 巢式pcr 猪细小病毒 检测方法 NS1蛋白
在线阅读 下载PDF
应用PCR及Nested-PCR技术检测柑橘黄龙病病原研究 被引量:35
5
作者 丁芳 易干军 王国平 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期803-806,共4页
以采自田间和广东省农业科学院果树研究所防虫隔离网室内嫁接并感染黄龙病的5个柑橘品种叶片为材料,以草本指示植物长春花(Catharanthusroseas)和木本指示植物柑(CitrusreticulataBlanco)鉴定为基础,采用改良的CTAB法提取总DNA,在此... 以采自田间和广东省农业科学院果树研究所防虫隔离网室内嫁接并感染黄龙病的5个柑橘品种叶片为材料,以草本指示植物长春花(Catharanthusroseas)和木本指示植物柑(CitrusreticulataBlanco)鉴定为基础,采用改良的CTAB法提取总DNA,在此基础上进行常规PCR与NestedPCR检测,并对特异目的片段进行克隆、测序。试验证明NestedPCR比常规PCR的灵敏度更高。这两种方法均可以检测出未显症的黄龙病材料,但NestedPCR可以在木本指示植物嫁接后40d左右、草本指示植物摩擦接种1个月左右检测到病原;而常规PCR在木本植物嫁接后60d左右、草本植物摩擦接种近2个月左右才能检测到病原。常规PCR所能检测到的最低DNA的量为pg数量级;NestedPCR检测病原DNA灵敏度约为常规PCR的104倍。 展开更多
关键词 柑橘 黄龙病 pcr nestedpcr 检测
在线阅读 下载PDF
广西砂糖橘黄龙病亚洲种的Nested-PCR检测 被引量:8
6
作者 黄宏明 王茜 +2 位作者 徐宁 韦宗便 廖惠红 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1997-2000,共4页
【目的】利用柑橘黄龙病病原亚洲种16S rDNA序列的特异引物检测疑似黄龙病的砂糖橘叶片样品,为砂糖橘黄龙病的综合防控提供理论依据。【方法】选取采自广西9市17个采样点的214份疑似黄龙病及无症状砂糖橘叶片样品,用试剂盒法提取叶脉基... 【目的】利用柑橘黄龙病病原亚洲种16S rDNA序列的特异引物检测疑似黄龙病的砂糖橘叶片样品,为砂糖橘黄龙病的综合防控提供理论依据。【方法】选取采自广西9市17个采样点的214份疑似黄龙病及无症状砂糖橘叶片样品,用试剂盒法提取叶脉基因组DNA,采用柑橘黄龙病亚洲种16S rDNA特异引物进行PCR扩增,扩增结果在1%琼脂糖凝胶电泳上检测,统计待检样品柑橘黄龙病病原菌亚洲种的带菌率。【结果】对214份样品的Nested-PCR扩增结果,部分样品可得到1160 bp左右的特异条带,与预期大小相符但条带明暗不同。来自广西9市17个采样点的砂糖橘叶片样品均检测出黄龙病亚洲种病原,平均检出率均在66.0%以上,其中检出率最高的是来自东兴市的样品,检出率为100.0%,检出率最低的是来自南宁市的样品,检出率为66.9%;斑驳、缺素型黄化、叶脉黄化、小叶和无症状叶片样品中均可检测出黄龙病亚洲种。【结论】Nested-PCR技术具有灵敏度高、特异性强的特点,能够快速、准确检测出各种症状样品的黄龙病病原,可用于柑橘黄龙病的早期诊断。 展开更多
关键词 砂糖橘 黄龙病病原 检测率 nestedpcr 广西
在线阅读 下载PDF
大豆油中转基因成分的Nested PCR和Semi-nested PCR检测方法研究 被引量:10
7
作者 闻伟刚 崔俊霞 赵秀玲 《生物技术通报》 CAS CSCD 2005年第6期84-87,共4页
对大豆油中DNA提取方法进行了研究,结果表明CTAB、SDS和Wizard试剂盒提取大豆油DNA均具有良好的效果。利用nested PCR和semi-nested PCR检测大豆(Roundup Ready)油中的转基因成分发现,该方法能够检测到大豆原油中的Lectin基因(112bp)、C... 对大豆油中DNA提取方法进行了研究,结果表明CTAB、SDS和Wizard试剂盒提取大豆油DNA均具有良好的效果。利用nested PCR和semi-nested PCR检测大豆(Roundup Ready)油中的转基因成分发现,该方法能够检测到大豆原油中的Lectin基因(112bp)、CaMV35S基因(147bP)和CP4-EPSPS基因(205bp),检测灵敏度达到10-6ng/μl;但该方法未能从人豆成品油(一级)中扩增到上述基因,当中的转基因成分DNA含量低于10-12ng/μl。 展开更多
关键词 大豆油 转基因成分 nested pcr Semi-nested pcr检测
在线阅读 下载PDF
应用nested和touch down PCR技术分离牦牛CAPN1大亚基基因EST 被引量:6
8
作者 蔡欣 吴建平 +3 位作者 徐明旭 张利平 汪虹英 刘雅楠 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2005年第2期14-18,共5页
 钙激活中性蛋白酶1(CAPN1)基因是影响肉嫩度的侯选基因。根据GeneBank中已公布的CAPN1基因cDNA序列设计同源PCR引物,通过RT,nested和touch-downPCR技术从牦牛肌肉组织总RNA中分离目的序列,与pGEM-T-easy载体连接后转化DH5α感受态菌株...  钙激活中性蛋白酶1(CAPN1)基因是影响肉嫩度的侯选基因。根据GeneBank中已公布的CAPN1基因cDNA序列设计同源PCR引物,通过RT,nested和touch-downPCR技术从牦牛肌肉组织总RNA中分离目的序列,与pGEM-T-easy载体连接后转化DH5α感受态菌株,通过PCR扩增、限制性酶切和测序分析鉴定阳性克隆。分离到的基因片段为牦牛CAPN1大亚基的部分编码序列,在GeneBank中的注册号为AY197555,与奶牛、人、食蟹猴、小鼠、绵羊以及大鼠相应序列的同源性分别为98%,89%,89%,83%,96%和81%,在不同物种之间具有较强的保守性。CAPN1基因EST的分离为进一步研究牦牛CAPN1基因奠定了基础。此研究表明,在总RNA质量不理想的情况下,同时采用这2种技术可以较大限度地获取目的序列。 展开更多
关键词 nested和touch-down pcr EST分离 CAPN1大亚基基因 牦牛
在线阅读 下载PDF
禽弱毒疫苗中鸡传染性贫血病病毒nested-PCR检测方法的建立 被引量:3
9
作者 李晓晗 房立春 +3 位作者 李阳 崔治中 常爽 赵鹏 《中国家禽》 北大核心 2017年第10期18-22,共5页
疫苗中污染鸡传染性贫血病毒(CIAV)是造成CIAV感染的途径之一,而通常疫苗中CIAV污染剂量较低,应用一般的技术难以检测到。为了更灵敏地检测禽弱毒疫苗中CIAV的污染,根据Gen Bank已发表的CIAV基因序列,针对其保守区设计了外用引物和内用... 疫苗中污染鸡传染性贫血病毒(CIAV)是造成CIAV感染的途径之一,而通常疫苗中CIAV污染剂量较低,应用一般的技术难以检测到。为了更灵敏地检测禽弱毒疫苗中CIAV的污染,根据Gen Bank已发表的CIAV基因序列,针对其保守区设计了外用引物和内用引物,通过优化反应体系和反应条件建立了检测CIAV的nested-PCR检测方法。结果显示,所建立的检测方法灵敏度比常规PCR高100倍,该方法可以检测到1 000羽份弱毒疫苗中1 EID_(50)的低剂量CIAV污染,应用该方法从送检的50个疫苗样品中检测出4个样品为CIAV阳性。该方法与禽白血病病毒、禽网状内皮组织增生症病毒以及马立克氏病病毒等的基因均无交叉反应,具有很好的特异性。提示所建立的nested-PCR灵敏度高、特异性强,可用于检测禽弱毒疫苗中CIAV低剂量的污染。 展开更多
关键词 CIAV nestedpcr 灵敏性 特异性 污染
原文传递
进口锦鲤暴发病病原的nested-PCR鉴定 被引量:63
10
作者 刘荭 史秀杰 +1 位作者 高隆英 江育林 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期414-418,共5页
为了查明锦鲤暴发性疾病的病因 ,将患病锦鲤的脑、肝、脾和肾等组织悬液接种到CO、CK和EPC等鱼类细胞系中培养 ,均未发现细胞病变 ;从病灶中取样进行病原菌的分离和培养 ,证明锦鲤有副溶血弧菌和嗜水气单胞菌的感染。制备锦鲤疱疹病毒 (... 为了查明锦鲤暴发性疾病的病因 ,将患病锦鲤的脑、肝、脾和肾等组织悬液接种到CO、CK和EPC等鱼类细胞系中培养 ,均未发现细胞病变 ;从病灶中取样进行病原菌的分离和培养 ,证明锦鲤有副溶血弧菌和嗜水气单胞菌的感染。制备锦鲤疱疹病毒 (KHV)的 2对引物KHV9/ 5F和KHV9/ 5R ,KHV1和KHV2 ,用嵌套式聚合酶链式反应 (nested -PCR)在脑和脾脏组织的抽提物中扩增出长度为 4 12bp的特异性的DNA片段。将该片段的nested -PCR扩增产物纯化后 ,克隆、测序。用NCBI -Blast软件将测序结果在Genebank中进行搜寻、比较 ,结果发现与注册号为AF4 1180 3的KHV基因序列的一部分片段有 99%的同源性。因此初步判断这次锦鲤暴发性疾病是由KHV引起的 。 展开更多
关键词 锦鲤 暴发病 病原 nested-pcr鉴定 嵌套式聚合酶链式反应
在线阅读 下载PDF
猕猴巨细胞病毒(RhCMV)nested PCR检测方法的建立与初步应用 被引量:2
11
作者 黄璋琼 叶尤松 +2 位作者 江勤芳 匡德宣 孙晓梅 《四川动物》 CSCD 北大核心 2007年第4期800-803,共4页
目的建立猴巨细胞(RhCMV)病毒的nested PCR检测方法,并初步应用。方法根据GenBank中报道的RhCMV全基因序列,针对其中的保守区域Rh85设计两对引物进行nested PCR反应,利用此方法对20份猕猴全血标本进行检测,将检测到的猕猴阳性标本扩增... 目的建立猴巨细胞(RhCMV)病毒的nested PCR检测方法,并初步应用。方法根据GenBank中报道的RhCMV全基因序列,针对其中的保守区域Rh85设计两对引物进行nested PCR反应,利用此方法对20份猕猴全血标本进行检测,将检测到的猕猴阳性标本扩增片段进行克隆测序。结果利用保守区域Rh85设计的引物可对人HCMV阳性对照进行扩增。用此方法检测的20份猕猴全血标本,出现2例阳性。其中一例扩增片段经纯化、回收克隆测序后用BLAST软件进行同源性对比,与GenBank中报道的RhCMV序列基本相同。结论建立了从猴全血中直接检测猴RhCMV病毒DNA的敏感、特异的nested PCR方法。 展开更多
关键词 猕猴巨细胞病毒 nested pcr 检测
在线阅读 下载PDF
用Nested-PCR诊断鸡弯曲菌病的研究 被引量:2
12
作者 张康 龚振华 +8 位作者 李蕾 王洪伟 李玉清 张丽娟 王丽萍 庄青叶 于建敏 李金平 刘国庆 《中国动物检疫》 CAS 2012年第11期44-46,共3页
本研究采用Nested-PCR方法,对于临床采集的感染空肠弯曲菌的病鸡组织样品进行了检测,研究结果表明,采用Nested-PCR方法检测空肠弯曲菌具有结果清晰,操作简便,快速等特点。研究还发现,空肠弯曲菌对鸡的致病性可能增强,应引起重视。
关键词 空肠弯曲菌 nested pcr 禽病诊断
在线阅读 下载PDF
应用RT-nested PCR检测猪传染性胃肠炎病毒 被引量:8
13
作者 王玉洁 刘金龙 +2 位作者 彭树英 杨瑞锋 张涌 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2005年第2期23-26,共4页
 根据GenBank中已发表的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)基因序列,利用Primer5.0程序软件,设计并合成了M基因的2对引物,以mRNA为模板,通过RT-PCR,RT-nestedPCR方法,成功扩增出长度为1328bp和1037bp的TGEV目的片段,但未扩增出猪传染性腹泻病毒...  根据GenBank中已发表的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)基因序列,利用Primer5.0程序软件,设计并合成了M基因的2对引物,以mRNA为模板,通过RT-PCR,RT-nestedPCR方法,成功扩增出长度为1328bp和1037bp的TGEV目的片段,但未扩增出猪传染性腹泻病毒(PEDV)片段。在优化RT-PCR反应条件的基础上,建立了快速检测TGEV的诊断方法。结果表明,RT-nestedPCR方法可用于检测猪传染性胃肠炎病毒,而且此方法简单省时、灵敏性高,可以作为检测RNA病毒的一种分子生物学方法。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 RT-pcr RT-nested pcr M基因
在线阅读 下载PDF
Nested-PCR检测种传番茄细菌性溃疡病菌 被引量:6
14
作者 闵现华 刘箐 +6 位作者 韩跃武 文朝慧 王军平 刘姝彤 刘雅莉 宋蕤 施颖波 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期28-31,共4页
利用番茄溃疡病菌特异性引物对纯菌液、模拟带菌种子及自然感染种子提取液分别进行Direct-PCR和Nested-PCR检测。结果在纯菌液中,Direct-PCR的检测灵敏度为105cfu/mL,Nested-PCR为102cfu/mL;在模拟带菌种子提取液中,Direct-PCR的检测灵... 利用番茄溃疡病菌特异性引物对纯菌液、模拟带菌种子及自然感染种子提取液分别进行Direct-PCR和Nested-PCR检测。结果在纯菌液中,Direct-PCR的检测灵敏度为105cfu/mL,Nested-PCR为102cfu/mL;在模拟带菌种子提取液中,Direct-PCR的检测灵敏度为107cfu/mL,Nested-PCR为104cfu/mL;在自然感染种子提取液中,稀释104倍后Nested-PCR仍然可以检出。建立的番茄种子Nested-PCR检测技术,无需经过核酸提取步骤,可以在8 h内完成整个检测过程,方便快捷,成本低廉,可作为番茄种子带菌的常规检测方法。 展开更多
关键词 番茄溃疡病 番茄种子 Direct-pcr nested-pcr
在线阅读 下载PDF
nested-PCR试剂盒检测牛精液中的布鲁氏菌DNA 被引量:6
15
作者 曹小安 邱昌庆 +2 位作者 周继章 蔺国珍 郑福英 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期137-139,共3页
目的布鲁氏菌是兼性细胞内寄生菌,能够在吞噬细胞内长期存活并繁殖,引起家畜流产和人的波浪热。根据病原性和感染宿主的不同将布鲁氏菌分为六个种,能否快速、有效地从各种病料中检出布鲁氏菌,对及时控制布鲁氏菌在家畜中的传播和预防对... 目的布鲁氏菌是兼性细胞内寄生菌,能够在吞噬细胞内长期存活并繁殖,引起家畜流产和人的波浪热。根据病原性和感染宿主的不同将布鲁氏菌分为六个种,能否快速、有效地从各种病料中检出布鲁氏菌,对及时控制布鲁氏菌在家畜中的传播和预防对人的感染十分重要。方法2006年6月,宁夏某公司奶牛场工作人员送检3份奶牛冻干精液,用巢式PCR检测出其中的2份为布鲁氏菌感染阳性,这年8月,重复取这2头种公牛的冻精、鲜精复查。结果用本方法检测全部为布鲁氏菌感染阳性。结论这是国内首次用巢式聚合酶链反应(nested-PCR)试剂盒从送检的牛精液中检出了布鲁氏菌DNA片段。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 nested-pcr 牛精液 检测
暂未订购
树鼩呼肠孤病毒RT-nPCR检测方法的建立及初步应用 被引量:7
16
作者 李晓飞 殷安国 +3 位作者 张媛 罗军 孙晓梅 代解杰 《中国比较医学杂志》 CAS 2014年第6期63-68,共6页
目的建立树鼩呼肠孤病毒(TRV)RT-nPCR检测方法,为树鼩的质量控制提供检测方法。方法从三批野外来源的具有感染临床症状的树鼩粪便中分离得到三株病毒,经电镜观察和聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为哺乳动物呼肠孤病毒(MRV)。根据GenBank中已发... 目的建立树鼩呼肠孤病毒(TRV)RT-nPCR检测方法,为树鼩的质量控制提供检测方法。方法从三批野外来源的具有感染临床症状的树鼩粪便中分离得到三株病毒,经电镜观察和聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为哺乳动物呼肠孤病毒(MRV)。根据GenBank中已发表的MRV L1基因的保守区域,设计合成巢式引物,对所分离的三株树鼩呼肠孤病毒(TRV1、TRV2、TRV3)的RNA进行RT-nPCR扩增,优化反应条件,进行特异性、敏感性试验。应用RT-nPCR方法对25只野外来源的相同症状疑似病例样本进行检测。结果针对分离到的三株树鼩呼肠孤病毒的RNA进行RT-nPCR扩增,均得到513 bp的特异性目的片段,培养细胞及甲肝病毒、轮状病毒、单纯疱疹病毒阴性对照均未扩增出条带。敏感性试验结果显示可检测到的最小RNA模板浓度为0.01 pg/μL。25只树鼩粪便样本经RT-nPCR检测,有14只TRV阳性,其中死亡动物组10只,检出率为100%;存活动物组15只,检出率为27%。结论建立的TRV RT-nPCR检测方法特异、敏感、稳定,可用于TRV的常规检测。 展开更多
关键词 树鼩 哺乳动物呼肠孤病毒 反转录巢式聚合酶链式反应 巢式引物
暂未订购
猪瘟病毒RT-nested PCR检测方法的优化和应用 被引量:14
17
作者 朱小甫 张志 +2 位作者 李晓成 陈德坤 吴旭锦 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2007年第6期11-14,共4页
为了优化猪瘟病毒的RT-nested PCR检测方法,对福建省猪瘟流行情况进行了调查。根据GenBank上发表的猪瘟病毒Shimen株基因序列设计并合成了2对引物,优化了猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)的RT-nested PCR检测方法,并对所优化... 为了优化猪瘟病毒的RT-nested PCR检测方法,对福建省猪瘟流行情况进行了调查。根据GenBank上发表的猪瘟病毒Shimen株基因序列设计并合成了2对引物,优化了猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)的RT-nested PCR检测方法,并对所优化的RT-nested PCR特异性进行了检验。结果表明,该方法检测CSFV cDNA含量的最低极限为1×10-7ng/mL,只有CSFV扩增出了272 bp的目的条带,从猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪流感病毒(SIV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪细小病毒(PPV)阳性毒和健康猪脾、肝组织及阴性PK-15细胞均未扩增出特异性条带,说明该方法特异性强。应用此方法对福建省133份病料进行检测,结果有60份病料为阳性,阳性率为45.1%。结果提示优化的检测方法灵敏度高,特异性强;福建省猪群CSFV感染率高,需要加强CSF预防控制工作。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 RT-nestedpcr 检测方法
在线阅读 下载PDF
16S nested-PCR技术检测玉米细菌性枯萎病菌(英文) 被引量:10
18
作者 吴琼 陈枝楠 +1 位作者 范怀忠 金显忠 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期420-427,共8页
玉米细菌性枯萎病是玉米上的重要种传病害,病原菌为Pantoea stewartiisubsp.stewartii。本研究设计了16S通用引物,扩增该病菌及其近似种的16S rDNA,通过序列测定和分析,针对该病菌设计了特异性引物,采用nested-PCR技术,能够准确地区别... 玉米细菌性枯萎病是玉米上的重要种传病害,病原菌为Pantoea stewartiisubsp.stewartii。本研究设计了16S通用引物,扩增该病菌及其近似种的16S rDNA,通过序列测定和分析,针对该病菌设计了特异性引物,采用nested-PCR技术,能够准确地区别该病菌及其近似种,检测的灵敏度在DNA水平上达到10-3pg级,检测活菌则达到2 cfu。检测人工污染的玉米种子时,不受种子提取液中其它物质的干扰,灵敏度依然达到2 cfu。 展开更多
关键词 玉米细菌性枯萎病菌 16S RDNA 检测 巢式pcr
在线阅读 下载PDF
应用RT-nested-PCR检测犬唾液中狂犬病毒的初步研究 被引量:5
19
作者 张建明 王灵岚 +2 位作者 林代华 张志珊 严延生 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期641-643,共3页
目的建立RT-nested-PCR方法,用于检测可疑狂犬唾液中的狂犬病毒,为狂犬病的快速诊断提供一种新思路。方法根据N基因的保守区序列设计2对引物,通过反应条件的优化,建立RT-nested-PCR的方法,以扩增狂犬病毒的N基因,并用该方法检测可疑狂... 目的建立RT-nested-PCR方法,用于检测可疑狂犬唾液中的狂犬病毒,为狂犬病的快速诊断提供一种新思路。方法根据N基因的保守区序列设计2对引物,通过反应条件的优化,建立RT-nested-PCR的方法,以扩增狂犬病毒的N基因,并用该方法检测可疑狂犬唾液中的狂犬病毒。结果该方法的最小RNA检出量可达11.2fg,并具有较好的特异性和重复性。结论建立的RT-nested-PCR检测法,特异性强,敏感度高,结果可靠,操作便捷,值得推广应用。 展开更多
关键词 狂犬病毒 RT-nestedpcr 唾液
暂未订购
应用套入式聚合酶链反应(Nested-PCR)检测蓝舌病病毒的研究 被引量:4
20
作者 马洪超 孙淑芳 +8 位作者 陶茂辉 尹燕博 郭福生 龚振华 蔡丽娟 蒋正军 丁有胜 黄运生 陈书琨 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期145-149,共5页
本实验建立了一种Nested PCR方法。应用该方法检测 5株标准株蓝舌病病毒 (T4、T10、T11、T16、T2 0 )和 5株国内蓝舌病病毒分离株 (CF4、AF6、Z1、H1、G14) ,检测结果均为阳性 ,而检测相关环状病毒 (EHD2、EHD6、Ibraki) ,检测结果均为... 本实验建立了一种Nested PCR方法。应用该方法检测 5株标准株蓝舌病病毒 (T4、T10、T11、T16、T2 0 )和 5株国内蓝舌病病毒分离株 (CF4、AF6、Z1、H1、G14) ,检测结果均为阳性 ,而检测相关环状病毒 (EHD2、EHD6、Ibraki) ,检测结果均为阴性。研究证明 ,此方法可检测到3 5fg的BTV—RNA ,灵敏度较高。该方法成功区分了蓝舌病病毒和相关环状病毒 ,比血清学方法更加优越 ,在临床检测方面具有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 家畜 蓝舌病病毒 nested-pcr 检测方法
在线阅读 下载PDF
上一页 1 2 77 下一页 到第
使用帮助 返回顶部