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聪耳通窍剂经NEFM/MAPK通路对抗小鼠老年性耳蜗感音神经细胞凋亡机制的探讨
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作者 宣伟军 文艺群 +4 位作者 黄力毅 唐俊波 陈思仲 陆灵娟 丁大连 《中国耳鼻咽喉颅底外科杂志》 2025年第5期6-12,共7页
目的探讨聪耳通窍剂通过调控C57BL/6J小鼠耳蜗神经丝中链多肽(NEFM)/丝裂原活化蛋白激酶14(MAPK14)信号转导对抗老年性耳蜗感音神经细胞凋亡的机制。方法实验选取刚断奶1月龄C57BL/6J小鼠54只,随机分为3组,其中10只小鼠饮用自来水至出生... 目的探讨聪耳通窍剂通过调控C57BL/6J小鼠耳蜗神经丝中链多肽(NEFM)/丝裂原活化蛋白激酶14(MAPK14)信号转导对抗老年性耳蜗感音神经细胞凋亡的机制。方法实验选取刚断奶1月龄C57BL/6J小鼠54只,随机分为3组,其中10只小鼠饮用自来水至出生后2个月作为幼龄对照组(2月龄对照组);22只小鼠饮用自来水至出生后7个月作为老年性耳蜗感音神经细胞凋亡模型对照组(7月龄对照组);22只小鼠饮用聪耳通窍剂至出生后7个月作为中药治疗组(7月龄中药组)。各组小鼠月龄期满即终止实验,每组分别取5只小鼠进行全耳蜗基底膜铺片观察内/外毛细胞形态学,5只小鼠进行耳蜗环氧树脂包埋切片观察螺旋神经节神经元(SGNs)形态学。另从7月龄对照组和7月龄中药组中每组各取6只小鼠耳蜗通过蛋白质组学技术检测NEFM丰度值,6只小鼠耳蜗通过RT-PCR技术检测MAPK14表达量。将数据结果进行统计学分析,并结合String和KEGG数据库分析分子信号转导机制。结果各组耳蜗钩端附近区域基底膜转弯处内/外毛细胞及相应区域耳蜗SGNs比较显示,2月龄对照组耳蜗内/外毛细胞及SGNs完好无缺,7月龄对照组内/外毛细胞及SGNs丧失殆尽,7月龄中药组内/外毛细胞及SGNs损失明显减少(P<0.001)。蛋白质组学研究发现众多富集差异蛋白之一且表达强度排序前列的耳蜗NEFM在中药干预下,与7月龄对照组比较,丰度值显著增加(P<0.001)。RT-PCR研究显示,与7月龄对照组比较,7月龄中药组耳蜗MAPK14表达量明显下调(P<0.001)。NEFM与MAPK14介导的MAPK信号转导通路和超氧化物歧化酶1(SOD1)介导的抗氧化信号转导通路密切关联,进而和活性氧(ROS)/Bcl-2/Bax/caspase-9等与细胞凋亡或抗凋亡因子形成上下信号转导调控相互关系。结论聪耳通窍剂具有对抗老年性耳蜗感音神经细胞凋亡的作用,其机制可能通过NEFM/MAPK14调控SOD1/ROS介导的抗细胞调亡信号转导通路从而达到药物效果,提示NEFM和MAPK14可能是聪耳通窍剂有效对抗老年性感音神经细胞凋亡作用的重要靶点之一。 展开更多
关键词 老年性聋 耳蜗 小鼠 神经丝中链多肽 丝裂原活化蛋白激酶14 中药
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黄姑鱼耐寒相关基因CIRP、nefm的克隆及表达特征分析 被引量:2
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作者 田璐 游翘楚 +3 位作者 迟长凤 宋红彬 楼宝 徐冬冬 《浙江海洋大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2019年第4期286-294,308,共10页
为了研究黄姑鱼耐低温相关的基因,对耐寒候选基因冷诱导RNA结合蛋白CIRP(cold-inducible RNA-binding protein)和神经微丝蛋白nefm(neurofilament medium polypeptide)进行了克隆并分析其在低温下的表达模式。通过同源克隆和5′/3′Rac... 为了研究黄姑鱼耐低温相关的基因,对耐寒候选基因冷诱导RNA结合蛋白CIRP(cold-inducible RNA-binding protein)和神经微丝蛋白nefm(neurofilament medium polypeptide)进行了克隆并分析其在低温下的表达模式。通过同源克隆和5′/3′Race的方法扩增得到耐寒候选基因CIRP和nefm基因的cDNA核心序列。CIRP基因cDNA核心序列为3460 bp,其开放阅读框为543 bp,编码180个氨基酸;nefm基因cDNA核心序列为1116 bp,其开放阅读框为1107 bp,编码369个氨基酸。采用N-J bootstrap方法构建的系统进化树同源性分析表明黄姑鱼的CIRP和nefm氨基酸序列分别与银鳕和大黄鱼的相似度最高。利用qRT-PCR分析2个基因在脑、鳃、肝和肾等4个组织中随低温胁迫的相对表达量变化,结果显示CIRP和nefm基因在上述4个组织中都发生显著变化,表明这2个基因可能都参与了黄姑鱼抵抗低温胁迫的过程,可以作为抗寒或选育等相关研究的候选基因。 展开更多
关键词 黄姑鱼 冷胁迫 CIRP nefm QRT-PCR
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