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ELISA联合RT-nPCR检测慢性丙型肝炎病毒感染者结果分析 被引量:2
1
作者 高秋菊 刘殿武 +6 位作者 张世勇 佟立新 吴丽红 王春英 王淑云 周吉坤 王立民 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期69-71,共3页
目的对比酶联免疫吸附试验(ELISA)和逆转录套式聚合酶链反应(RT-nPCR)检测慢性丙型肝炎病毒感染者血清抗-HCV和HCVRNA结果。方法2005年5月对河北赵县某农村单采血浆还输血细胞HCV感染者133人及健康对照52人共185人采集空腹静脉血。该感... 目的对比酶联免疫吸附试验(ELISA)和逆转录套式聚合酶链反应(RT-nPCR)检测慢性丙型肝炎病毒感染者血清抗-HCV和HCVRNA结果。方法2005年5月对河北赵县某农村单采血浆还输血细胞HCV感染者133人及健康对照52人共185人采集空腹静脉血。该感染人群于1990年前单采血浆还输血细胞时感染、1993年被现场调查、血清生化指标及病原学标志检查确诊为HCV感染者、2002年追踪调查仍明确诊断者。用ELISA法检测抗-HCV,用RT-nPCR检测HCVRNA。结果①185份血清标本中,抗-HCV和HCVRNA均阳性者92份,占49.73%;抗-HCV阴性、HCV-RNA阳性者18份,占9.73%;抗-HCV阳性、HCV-RNA阴性者22份,占11.89%,两者均阴性53份,占28.65%。两种方法检测结果一致符合率为78.38%[(92+53)/185],检测不一致率差异无显著性(配对χ2=0.40,P>0.05);②ELISA法检测慢性HCV感染者的灵敏度为82.71%,特异度为92.31%,漏诊率为17.29%;RT-nPCR检测的灵敏度为81.20%,特异度为96.15%,漏诊率为18.80%,两种方法检测灵敏度差异无显著性(χ2=0.102,P>0.05);③并联试验检测其灵敏度为96.75%,特异度为88.76%,其灵敏度明显高于单一ELISA法82.71%(χ2=9.62,P<0.01)。结论单独用ELISA法检测抗-HCV约有17%的漏检率,同时用RT-nPCR检测HCVRNA,可明显提高HCV感染者的阳性检出率。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 抗-HCV 逆转录套式聚合酶链反应(RT-npcr)
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猪瘟病毒RT-nPCR检测方法的建立及陕西部分地区猪瘟病毒E0基因分子特征分析 被引量:6
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作者 吴旭锦 朱小甫 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2014年第10期15-21,共7页
【目的】建立一种基于E0基因高保守性的猪瘟病毒(CSFV)RT-nPCR检测方法,为临床诊断提供一种可靠方法,同时对获得的陕西猪瘟病毒E0基因进行序列分析,揭示猪瘟病毒基因的分子衍化特征,为防控猪瘟提供参考。【方法】根据GenBank中的猪瘟病... 【目的】建立一种基于E0基因高保守性的猪瘟病毒(CSFV)RT-nPCR检测方法,为临床诊断提供一种可靠方法,同时对获得的陕西猪瘟病毒E0基因进行序列分析,揭示猪瘟病毒基因的分子衍化特征,为防控猪瘟提供参考。【方法】根据GenBank中的猪瘟病毒参考序列,设计并合成了2对引物,建立猪瘟RT-nPCR检测方法,并对该方法的灵敏度和特异性进行检测。用该方法对采自陕西部分猪场的32份疑似猪瘟病料进行检测,并对获得的8株流行毒株E0基因进行测序及同源性分析。【结果】建立了猪瘟病毒RT-nPCR检测方法,该方法检测CSFV cDNA含量的最低极限为6.7×10-5 ng/L,从BVDV、PRRSV、PCV-2、PRV和PPV等参考毒株中提取或反转录获得的DNA/cDNA中不能扩增出目的条带,提示方法灵敏度高、特异性强。对32份疑似猪瘟组织病料的检测发现,有12份呈现阳性,阳性率为37.5%。序列分析表明,8株流行毒株间E0核苷酸、氨基酸同源性分别在97.0%~99.3%和94.8%~98.5%。与参考毒株的核苷酸同源性为83.4%~95.4%,氨基酸同源性为85.8%~98.1%。流行毒株与我国疫苗毒株HCLV、C HVRI的核苷酸同源性仅为83.4%~85.1%,氨基酸同源性仅为86.1%~89.1%,呈现出较明显的远离疫苗株的变异趋势。进化树分析发现,8个流行毒株均属于基因Ⅱ群。首次发现了1株流行毒株(SXWN02株)E0Rnase活性基序位点第94位由E变异为K,其他位点未发生变异。【结论】建立的RT-nPCR检测方法灵敏度高、特异性强,可作为猪瘟病毒的临床诊断方法。陕西部分地区猪场猪瘟感染仍较严重,需要做好防控工作。流行毒株E0基因发生较大变异,尤其是在关键位点上出现变异毒株,需要密切关注。 展开更多
关键词 猪瘟 RT-npcr方法 E0基因 分子特征
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动物戊型肝炎病毒(HEV)RT-nPCR检测方法的建立及应用
3
作者 张维谊 周锦萍 +2 位作者 王缦 刘健 鞠厚斌 《中国动物检疫》 CAS 2010年第11期34-35,共2页
根据戊型肝炎病毒(HEV)的4个基因亚型,寻找其保守序列ORF2,成功设计了一套以Ⅰ、Ⅳ型为主兼顾Ⅱ、Ⅲ型的通用简并引物,摸索条件,建立检测动物戊型肝炎病毒反转录套式聚合酶链反应(RT-nPCR)的方法,扩增片段为507 bp。该方法检测所需时间... 根据戊型肝炎病毒(HEV)的4个基因亚型,寻找其保守序列ORF2,成功设计了一套以Ⅰ、Ⅳ型为主兼顾Ⅱ、Ⅲ型的通用简并引物,摸索条件,建立检测动物戊型肝炎病毒反转录套式聚合酶链反应(RT-nPCR)的方法,扩增片段为507 bp。该方法检测所需时间为5 h,灵敏度可达10 pg,特异性强、重复性好;经优化研制了动物戊型肝炎病毒RT-nPCR检测试剂盒,保存期半年以上,该试剂盒可用于动物粪便、胆汁HEV RNA的检测。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 RT—npcr 动物
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绍兴地区孕妇及育龄妇女MG病原体nPCR检测与分子流行病学调查
4
作者 俞信忠 许平 +1 位作者 雷谢东 曾艳 《中国优生与遗传杂志》 2000年第4期30-30,123,共2页
目的 :了解绍兴地区孕妇及育龄妇女生殖支原体 (Mgcoplasmagenitalium ,MG)的感染和流行状况。方法 :应用被认为是目前检测支原体最为灵敏、特异的套式PCR(nPCR)技术 ,检测了 85例孕妇、85例育龄妇女及 115例生殖道炎症妇女的宫颈脱落... 目的 :了解绍兴地区孕妇及育龄妇女生殖支原体 (Mgcoplasmagenitalium ,MG)的感染和流行状况。方法 :应用被认为是目前检测支原体最为灵敏、特异的套式PCR(nPCR)技术 ,检测了 85例孕妇、85例育龄妇女及 115例生殖道炎症妇女的宫颈脱落细胞标本。结果 :绍兴地区孕妇、育龄妇女中MG有一定的阳性检出率 ,并且阴道炎妇女MG阳性率达 11.3 % ,明显高于育龄妇女的 3 .5 % ,RR值达 3 41。表示阴道炎与Mg感染相关。结论 :绍兴地区存在着MG感染 ,应引起围产医学工作者的重视 ! 展开更多
关键词 孕妇 育龄妇女 生殖支原体 npcr 流行病学
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树鼩呼肠孤病毒RT-nPCR检测方法的建立及初步应用 被引量:7
5
作者 李晓飞 殷安国 +3 位作者 张媛 罗军 孙晓梅 代解杰 《中国比较医学杂志》 CAS 2014年第6期63-68,共6页
目的建立树鼩呼肠孤病毒(TRV)RT-nPCR检测方法,为树鼩的质量控制提供检测方法。方法从三批野外来源的具有感染临床症状的树鼩粪便中分离得到三株病毒,经电镜观察和聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为哺乳动物呼肠孤病毒(MRV)。根据GenBank中已发... 目的建立树鼩呼肠孤病毒(TRV)RT-nPCR检测方法,为树鼩的质量控制提供检测方法。方法从三批野外来源的具有感染临床症状的树鼩粪便中分离得到三株病毒,经电镜观察和聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为哺乳动物呼肠孤病毒(MRV)。根据GenBank中已发表的MRV L1基因的保守区域,设计合成巢式引物,对所分离的三株树鼩呼肠孤病毒(TRV1、TRV2、TRV3)的RNA进行RT-nPCR扩增,优化反应条件,进行特异性、敏感性试验。应用RT-nPCR方法对25只野外来源的相同症状疑似病例样本进行检测。结果针对分离到的三株树鼩呼肠孤病毒的RNA进行RT-nPCR扩增,均得到513 bp的特异性目的片段,培养细胞及甲肝病毒、轮状病毒、单纯疱疹病毒阴性对照均未扩增出条带。敏感性试验结果显示可检测到的最小RNA模板浓度为0.01 pg/μL。25只树鼩粪便样本经RT-nPCR检测,有14只TRV阳性,其中死亡动物组10只,检出率为100%;存活动物组15只,检出率为27%。结论建立的TRV RT-nPCR检测方法特异、敏感、稳定,可用于TRV的常规检测。 展开更多
关键词 树鼩 哺乳动物呼肠孤病毒 反转录巢式聚合酶链式反应 巢式引物
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猪戊型肝炎病毒RT-nPCR检测方法的建立及应用
6
作者 丁宁 佟铁铸 +3 位作者 朱事康 王国胜 江礼华 刘康 《畜牧兽医科技信息》 2017年第9期24-24,共1页
猪戊型肝炎病毒(以下简称为SHEV)一般是正链的RNA病毒,能够使猪感染猪戊型肝炎。现如今,此类病毒在我们国家十分普遍,如果没能将其进行控制,则会造成更大的风险。
关键词 猪戊型肝炎病毒 Rt—npcr检测方法 应用
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Juvenile myelo-monocytic leukemia (JMML): No effect of granulocyte monocyte-colony stimulating factor (GM-CSF) on Wilms Tumor gene (<i>WT</i>1) by nested Polymerase Chain Reaction (nPCR) and flow cytometry
7
作者 Sana Khan Marie Olszewski +1 位作者 Wei Huang Morris Kletzel 《Advances in Bioscience and Biotechnology》 2014年第2期155-159,共5页
This study was to determine whether GM-CSF induced WT1 gene expression and to establish an association with markers of proliferation CD71+CD34+ using nPCR and flow cytometry respectively, in samples obtained from 5 ne... This study was to determine whether GM-CSF induced WT1 gene expression and to establish an association with markers of proliferation CD71+CD34+ using nPCR and flow cytometry respectively, in samples obtained from 5 newly diagnosed JMML patients. Overtime (day 0 to day 14) there was an insignificant difference in WT1 gene expression and CD71+CD34+ in JMML samples when compared to peripheral blood of normal volunteers (n = 3). Our study suggests that there is a correlation between WT1 gene expression and cellular proliferation and that GMCSF in vitro does not create a significant difference in JMML samples. 展开更多
关键词 JUVENILE Myelo-Monocytic Leukemia WILMS Tumor Nested PCR JMML WT1 GM-CSF npcr
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Lightweight Multi-Layered Encryption and Steganography Model for Protecting Secret Messages in MPEG Video Frames
8
作者 Sara H.Elsayed Rodaina Abdelsalam +2 位作者 Mahmoud A.Ismail Shoman Raed Alotaibi Omar Reyad 《Computers, Materials & Continua》 2025年第12期4995-5013,共19页
Ensuring the secure transmission of secret messages,particularly through video—one of the most widely used media formats—is a critical challenge in the field of information security.Relying on a single-layered secur... Ensuring the secure transmission of secret messages,particularly through video—one of the most widely used media formats—is a critical challenge in the field of information security.Relying on a single-layered security approach is often insufficient for safeguarding sensitive data.This study proposes a triple-lightweight cryptographic and steganographic model that integrates the Hill Cipher Technique(HCT),Rotation Left Digits(RLD),and Discrete Wavelet Transform(DWT)to embed secret messages within video frames securely.The approach begins with encrypting the secret text using a private key matrix(PK^(1))of size 2×2 up to 6×6 via HCT.A second encryption layer is applied using a dynamic private key(PK2)derived from the RGB pixel values of the video frame,resulting in a rotated cipher.The doubly encrypted message is then embedded into the video frames using the DWT method.Upon transmission,the concealed message is extracted using inverse DWT and decrypted in two steps—first with PK2 and then with the inverse of PK^(1).Experiments conducted using MPEG video sequences and message lengths ranging from 10 to 300 bytes demonstrate strong performance in terms of Mean Square Error(MSE),Peak Signal-to-Noise Ratio(PSNR),and Correlation Coefficient(CC)between original and encrypted messages.The similarity between original and stego frames is further validated using Structural Similarity Index(SSIM),Mean Absolute Error(MAE),Number of Pixel Change Rate(NPCR),and Unified Average Changing Intensity(UACI).Results confirm that utilizing video frames to generate PK2 offers superior security compared to static key images.Moreover,the indistinguishability between original and stego frames highlights the method’s robustness against visual and statistical attacks. 展开更多
关键词 Lightweight encryption stego frame HCT RLD DWT SSIM MAE npcr UACI
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基于巢式PCR的紫草鉴别引物筛选 被引量:1
9
作者 刘杰 谷海媛 +4 位作者 戴胜云 乔菲 连超杰 郑健 加沙尔·斯哈克 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期756-765,共10页
目的:基于巢式聚合酶链式反应(PCR)理念设计并筛选出可用于高效扩增与鉴别紫草市场样品真伪的特异性引物。方法:针对新疆紫草的ITS序列和紫草非《中华人民共和国药典》品ITS2序列,利用Primer Premier 5软件进行巢式引物设计;比较ITS2通... 目的:基于巢式聚合酶链式反应(PCR)理念设计并筛选出可用于高效扩增与鉴别紫草市场样品真伪的特异性引物。方法:针对新疆紫草的ITS序列和紫草非《中华人民共和国药典》品ITS2序列,利用Primer Premier 5软件进行巢式引物设计;比较ITS2通用引物PCR和巢式PCR对紫草药材基因组DNA的扩增效率;基于巢式引物直接扩增紫草基因组DNA,并进行琼脂糖凝胶电泳检测;基于扩增产物片段长度、变异位点覆盖情况对设计的紫草药材特异性引物进行评价。结果:经过Primer Premier 5软件进行引物设计共选出11对引物进行合成;巢式PCR对紫草药材基因组DNA的扩增效率明显优于ITS2通用引物PCR;基于巢式引物直接扩增紫草基因组DNA琼脂糖凝胶电泳检测的结果明显优于ITS2引物直接扩增紫草基因组DNA,且呈单一条带;确定AE-9S/AE-2A、AE-4S/AE-10A、AE-12S/10A、AE-29S/AE-29A共4对引物适用于紫草正伪品鉴定。结论:在DNA条形码鉴定和巢式PCR技术的基础上,确定了4对可以用于有效区分药材市场中主流的新疆紫草和紫草非《中华人民共和国药典》品的特异性引物,为后续紫草药材及其他中药民族药品种的鉴定方法研究与开发提供了可参考的依据。 展开更多
关键词 紫草 聚合酶链式反应(PCR) 内部转录间隔区2(ITS2) DNA条形码 巢式PCR(npcr)
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2018—2020年福建地区猪瘟病毒E0基因遗传变异分析 被引量:1
10
作者 戴爱玲 张鑫杰 +4 位作者 林楚云 尹会方 薛少华 刘建奎 杨小燕 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第2期201-207,共7页
为了了解2018—2020年福建地区猪瘟病毒流行及遗传变异情况,收集福建省不同地区临床发病猪的血液和肺脏、脾脏、淋巴结等组织样本1464份,采用RT-nPCR的方法对样品进行CSFV检测,对部分CSFV阳性样品E0基因进行克隆测序。结果显示,CSFV总... 为了了解2018—2020年福建地区猪瘟病毒流行及遗传变异情况,收集福建省不同地区临床发病猪的血液和肺脏、脾脏、淋巴结等组织样本1464份,采用RT-nPCR的方法对样品进行CSFV检测,对部分CSFV阳性样品E0基因进行克隆测序。结果显示,CSFV总体阳性率为1.9%(29/1464),并获得13株CSFV E0基因序列。同源性分析发现所得13株CSFV E0基因之间的同源性在82.2%-99.7%,其中11株CSFV E0基因与1.1亚型代表毒株HCLV的核苷酸同源性为99.0%~99.9%,与Shimen株的核苷酸同源性94.1%~95.0%;1株与2.1c型参考毒株HNSD-2012核苷酸同源性为98.2%;1株与2.1d亚型毒株CSFV/JPN/2018核苷酸同源性为99.6%。遗传进化分析发现,10株CSFV与HCLV、C-ZJ-2008、Shimen和Brescia处于同一分支,属于1.1亚型;1株CSFV与HNSD-2012等位于同一分支,属于2.1c亚亚型;1株与CSFV/JPN/2018等位于同一分支,属于2.1d亚亚型。氨基酸序列分析发现,13株毒株与HCLV等代表毒株在重要的Rnase活性位点高度保守,其中2株2.1亚型毒株与HCLV毒株相比,其在第35位非关键氨基酸残基上发生由G→E的突变。结果表明福建地区CSFV流行情况趋向多样化,提示仍需加强对CSFV流行及遗传变异的持续监测,为猪瘟的诊断及有效防控奠定基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 RT-npcr E0基因 遗传变异
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中国西南地区猪群中TTV分子流行病学调查 被引量:5
11
作者 伍志伟 王红宁 +2 位作者 杨鑫 管仲斌 周英顺 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期779-782,共4页
为了解西南地区猪群中Torque teno virus(TTV)感染流行情况,以TTV 5′非编码区(5′UTR)保守序列设计引物,建立了猪TTV检测的巢式PCR(nPCR)方法,并对该地区22个规模化养猪场363份血清进行了检测。结果表明,在被检血清样品中TTV1和TTV2感... 为了解西南地区猪群中Torque teno virus(TTV)感染流行情况,以TTV 5′非编码区(5′UTR)保守序列设计引物,建立了猪TTV检测的巢式PCR(nPCR)方法,并对该地区22个规模化养猪场363份血清进行了检测。结果表明,在被检血清样品中TTV1和TTV2感染率为79.6%、87.1%,两者的混合感染率为68.3%。证实TTV在西南地区猪群中广泛存在,提示人们应当重视防止TTV感染的进一步流行。 展开更多
关键词 TORQUE teno VIRUS TTV1 TTV2 npcr 流行病学调查
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牛病毒性腹泻病毒巢式RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量:6
12
作者 韩猛立 李娜 +4 位作者 黄新 薄新文 王新华 赵玉龙 钟发刚 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期6-9,15,共5页
参照多株不同基因型和基因亚型牛病毒性腹泻病毒(BVDV)5′UTR相对保守的基因序列,设计3对引物,其中1对能够扩增不同基因型BVDV 5′UTR片段(288 bp),另2对分别能够扩增BVDV-1型和BVDV-2型5′UTR片段(195 bp和116 bp)。扩增片段大小与预... 参照多株不同基因型和基因亚型牛病毒性腹泻病毒(BVDV)5′UTR相对保守的基因序列,设计3对引物,其中1对能够扩增不同基因型BVDV 5′UTR片段(288 bp),另2对分别能够扩增BVDV-1型和BVDV-2型5′UTR片段(195 bp和116 bp)。扩增片段大小与预计片段一致。对PCR反应条件进行优化,建立了一种特异、敏感的RT-nPCR检测方法。敏感性试验表明,敏感性为10-2TCID50/mL。特异性试验表明,对猪瘟兔化弱毒疫苗株、牛轮状病毒、牛传染性鼻气管炎病毒的检测结果均为阴性。通过对新疆部分地区无BVD临床症状的牛场208份奶牛血样检测,阳性率为50.43%,表明该方法具有快速、简便、特异性强和灵敏度高等特点,可以作为BVDV隐性感染临床诊断的有效方法。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 RT-npcr 检测 应用
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安徽省戊型肝炎基因分型及临床特征研究 被引量:6
13
作者 吴金菊 马尔健 +2 位作者 苏虹 张文艳 刘怀珠 《中华疾病控制杂志》 CAS 2009年第5期541-544,共4页
目的研究安徽省戊型病毒性肝炎的基因型及其分布特点,为预防和控制戊型病毒性肝炎和疫苗的研制提供科学依据。方法按照戊型病毒性肝炎诊断标准及处理原则(GB17011-1997)于2006年12月~2007年12月从安徽省的4家综合性三甲医院收集戊型病... 目的研究安徽省戊型病毒性肝炎的基因型及其分布特点,为预防和控制戊型病毒性肝炎和疫苗的研制提供科学依据。方法按照戊型病毒性肝炎诊断标准及处理原则(GB17011-1997)于2006年12月~2007年12月从安徽省的4家综合性三甲医院收集戊型病毒性肝炎132例,分析临床特征,其中采集血清50份,用RT-nPCR法检测戊型肝炎病毒基因型。结果HEV RNA阳性率为22%(11/50),经测序证实为戊型肝炎病毒(Hepatitis Evirus,HEV)的基因序列;用DNA STAR软件分析,11例的病毒株中2例为HEVⅠ型,9例为HEVⅣ型。Ⅳ型中又有ⅣA型3例和ⅣD型6例。结论安徽省急性散发性戊型肝炎的病毒基因型以HEVⅣ型为主,Ⅰ型次之,而Ⅳ型又有不同的亚型,主要为ⅣA和ⅣD型。 展开更多
关键词 肝炎 戊型 基因型 RT-npcr
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肺炎衣原体套式聚合酶链式反应检测研究 被引量:10
14
作者 秦玲 糜祖煌 陆亚华 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2000年第2期84-86,共3页
目的探讨肺炎衣原体(Cpn)的套式聚合酶链式反应(nPCR)检测技术。方法根据Campbell克隆的CpnDNA序列设计套式引物,并建立nPCR反应体系。结果Cpn经nPCR扩增出现378bp的阳性条带,而沙眼衣原体和鹦鹉热衣原体以及其他用作特异性试验... 目的探讨肺炎衣原体(Cpn)的套式聚合酶链式反应(nPCR)检测技术。方法根据Campbell克隆的CpnDNA序列设计套式引物,并建立nPCR反应体系。结果Cpn经nPCR扩增出现378bp的阳性条带,而沙眼衣原体和鹦鹉热衣原体以及其他用作特异性试验的微生物均不能扩增。3例阳性标本经DNA测序与Cpn(CWL—29)序对完全一致。CpnnPCR之灵敏度比传统PCR高100倍。各种呼吸系统病患儿咽拭子CpnnPCR阳性率明显高于健康儿童(P均<0.01)。结论nPCR检测可能是Cpn感染的灵敏、特异、快速的诊断方法。 展开更多
关键词 肺炎衣原体 聚合酶链反应 npcr 诊断
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3种药用红树植物rDNA ITS序列初步研究 被引量:5
15
作者 牛宪立 吴群 姬可平 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第17期109-110,116,共3页
应用改良CTAB法分别提取生长于珠海和海南的3种药用红树植物秋茄、老鼠簕和桐花树的基因组DNA,以真核生物rDNA ITS区的通用引物分别对其rDNA ITS区进行nPCR扩增及测序,并对测序结果进行对位排列。结果表明,不同来源的药用红树植物的rDNA... 应用改良CTAB法分别提取生长于珠海和海南的3种药用红树植物秋茄、老鼠簕和桐花树的基因组DNA,以真核生物rDNA ITS区的通用引物分别对其rDNA ITS区进行nPCR扩增及测序,并对测序结果进行对位排列。结果表明,不同来源的药用红树植物的rDNA ITS序列上存在扩增碱基差异,rDNA ITS测序结果可作为鉴定药用红树植物种质资源的分子标记之一。 展开更多
关键词 RDNA 红树植物 npcr 测序 种质资源
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病毒性心肌炎患者血白细胞中肠道病毒的检测及意义 被引量:4
16
作者 杨笛 耿茜 +2 位作者 方五旺 张寄南 马文珠 《江苏医药》 CAS CSCD 2000年第10期755-757,共3页
目的 建立肠道病毒 (EVs)检测方法 ,探讨EVs感染与心肌损伤的关系。方法 用套式逆转录聚合酶链反应 (nPCR)方法 ,对 2 2 5例临床拟诊病毒性心肌炎 (VMC)患者血白细胞中EVs RNA进行检测 ,并用ELISA方法检测患者血清心肌肌钙蛋白I(cTnI... 目的 建立肠道病毒 (EVs)检测方法 ,探讨EVs感染与心肌损伤的关系。方法 用套式逆转录聚合酶链反应 (nPCR)方法 ,对 2 2 5例临床拟诊病毒性心肌炎 (VMC)患者血白细胞中EVs RNA进行检测 ,并用ELISA方法检测患者血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)。结果  46例EVs RNA阳性 ,检出率为 2 0 4% ;13例正常对照均阴性。EVs RNA阳性患者血清cTnI水平 (13 3± 12 3ng/ml)略高于EVs RNA阴性患者血清cTnI水平 (11 6± 13 7ng/ml)。 14例EVs RNA阳性患者随访 4个月 ,血清cTnI水平从 19 7± 9 8ng/ml增至 32 0± 8 5ng/ml,呈明显增高趋势。 结论 nPCR方法是检测EVs感染的可靠方法。EVs RNA的存在可能是心肌炎不良愈后的指标之一。 展开更多
关键词 肠道病毒RNA 病毒性心肌炎 肌钙蛋白Ⅰ npcr
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上海地区猪戊型肝炎病毒部分序列的克隆与分析 被引量:4
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作者 宁海强 李震 +2 位作者 于瑞嵩 张佩华 牛钟相 《西南农业学报》 CSCD 2007年第5期1105-1108,共4页
对上海地区几个猪场的戊型肝炎感染情况进行了调查,共采集粪便样品36份,通过RT-nPCR的方法应用通用引物对病毒基因组的ORF2部分片断进行扩增,36份样品中有5份RT-nPCR阳性,HEV RNA阳性率为13.9%,去除相同的序列,得到2株HEV的ORF2部分序... 对上海地区几个猪场的戊型肝炎感染情况进行了调查,共采集粪便样品36份,通过RT-nPCR的方法应用通用引物对病毒基因组的ORF2部分片断进行扩增,36份样品中有5份RT-nPCR阳性,HEV RNA阳性率为13.9%,去除相同的序列,得到2株HEV的ORF2部分序列。序列分析表明,这两段序列与基因I、II、III、IV的遗传距离分别为0.183、0.207、0.230、0.102和0.177、0.226、0.240、0.108。系统进化分析显示,这两株病毒都属于基因Ⅳ型。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 RT-npcr 序列分析 基因型
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O型、A型及Asia1型3个型口蹄疫病毒通用套式RT-PCR检测方法的建立 被引量:4
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作者 李金海 李兴玉 +3 位作者 曹三杰 陈斌 文心田 张毅 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期784-787,共4页
为了建立针对流行于我国及周边国家主要口蹄疫病毒(FMDV)血清型的检测方法,本实验设计2对特异性引物,通过对反应条件的优化,建立了能够同时扩增O型、A型及Asia1型FMDV VP1全基因的套式RT-PCR(RT-nPCR)方法。该方法能特异性检测O型、A型... 为了建立针对流行于我国及周边国家主要口蹄疫病毒(FMDV)血清型的检测方法,本实验设计2对特异性引物,通过对反应条件的优化,建立了能够同时扩增O型、A型及Asia1型FMDV VP1全基因的套式RT-PCR(RT-nPCR)方法。该方法能特异性检测O型、A型和Asia1型FMDV,对其它相关动物病毒的检测结果均为阴性;比FMDV多重RT-PCR商品试剂盒敏感约1 000倍。利用该方法对10份FMDV样品进行扩增检测,结合扩增产物的克隆测序技术,对所检样品进行了准确定型。实验结果表明,该方法通用型强,可用于3个血清型FMDV的检测和分子流行病学调查。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 RT-npcr VP1基因
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猪瘟病毒感染仔猪接种猪瘟疫苗后抗原的跟踪检测 被引量:3
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作者 姚华伟 范学政 +6 位作者 徐璐 陈锴 黄伟 沙莎 孟萌 郑然 王琴 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2011年第5期6-8,共3页
为了解猪瘟病毒感染仔猪免疫猪瘟疫苗后带毒情况,并比较实验室几种猪瘟抗原检测方法的适用性,采用(CSFV)RT-nPCR、猪瘟兔化弱毒疫苗荧光定量RT-PCR(HCLV-FQ-PCR)和CSFV实时荧光定量RT-PCR(CSFV-FQ-PCR)3种检测方法对田间感染CSFV仔猪疫... 为了解猪瘟病毒感染仔猪免疫猪瘟疫苗后带毒情况,并比较实验室几种猪瘟抗原检测方法的适用性,采用(CSFV)RT-nPCR、猪瘟兔化弱毒疫苗荧光定量RT-PCR(HCLV-FQ-PCR)和CSFV实时荧光定量RT-PCR(CSFV-FQ-PCR)3种检测方法对田间感染CSFV仔猪疫苗免疫前后带毒情况进行定期跟踪检测。结果显示:本实验室建立的CSFV-FQ-PCR灵敏度高于CSFV-RT-nPCR;猪瘟疫苗免疫48 d后,采用HCLV-FQ-PCR方法检测不到血液中的HCLV;猪瘟病毒感染猪免疫疫苗后仍存在持续带毒现象,因此对猪瘟病毒感染猪必须彻底淘汰。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 RT-npcr 荧光定量RT-PCR
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检测猪戊型肝炎病毒的荧光定量PCR方法的建立 被引量:4
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作者 张亮权 欧阳昀 +5 位作者 刘志刚 曹宗喜 闫明菲 王文华 郭泗虎 张桂红 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2011年第10期16-18,共3页
根据GenBank中猪戊型肝炎病毒的ORF2核苷酸序列的保守区域设计合成一对特异性引物,建立了一套SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测猪源戊型肝炎病毒(swHEV)的方法,并评价了该方法的灵敏度、稳定性和特异性,同时与常规的RT-nPCR进行对比分析。结... 根据GenBank中猪戊型肝炎病毒的ORF2核苷酸序列的保守区域设计合成一对特异性引物,建立了一套SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测猪源戊型肝炎病毒(swHEV)的方法,并评价了该方法的灵敏度、稳定性和特异性,同时与常规的RT-nPCR进行对比分析。结果表明,建立标准曲线的相关系数为0.998,斜率为-3.039,Ct值变异系数(CV)在0.17%~1.41%之间,有良好的稳定性。同时在检测猪群常见病中显示出很好的特异性,并且比RT-nPCR更灵敏,适合于swHEV的检测。 展开更多
关键词 猪戊型肝炎病毒 荧光定量PCR RT-npcr
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