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A型塞内卡病毒和水泡性口炎病毒多重纳米PCR方法的建立及初步应用
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作者 李晓君 兰云刚 +7 位作者 赵越 李思锐 尚丽元 呼延含蓉 宋斯伟 贺文琦 高飞 王改丽 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第5期934-939,970,共7页
由于A型塞内卡病毒(SVA)、水泡性口炎病毒(VSV)新泽西血清型(VSNJV)和印第安纳血清型(VSIV)均可感染猪群,引起口唇及蹄部水疱性损伤,且临床症状相似,易造成误诊。因此,本研究根据SVA-P基因、VSNJV-N基因、VSIV-N基因的保守区分别设计了... 由于A型塞内卡病毒(SVA)、水泡性口炎病毒(VSV)新泽西血清型(VSNJV)和印第安纳血清型(VSIV)均可感染猪群,引起口唇及蹄部水疱性损伤,且临床症状相似,易造成误诊。因此,本研究根据SVA-P基因、VSNJV-N基因、VSIV-N基因的保守区分别设计了3对特异性引物,优化了退火温度、引物浓度及反应体系;并利用纳米金材料,建立了一种能同时检测SVA、VSNJV和VSIV的新型、快速、灵敏的多重纳米PCR检测方法。特异性试验结果表明,该检测方法可特异性扩增SVA、VSNJV和VSIV目的基因,且与猪伪狂犬病毒(PRV)、非洲猪瘟病毒(ASFV)、猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)和猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV)均无交叉反应性。敏感性试验结果显示,该检测方法的最低核酸检测限为10拷贝/μL,敏感性较好。此外,最优引物比对不同批次的酶和质粒反应性良好,稳定性强。应用该方法对50份病猪样品进行检测,检出SVA阳性样品7份,普通单一PCR方法检出SVA阳性样品5份;2种检测方法均未检出VSNJV和VSIV阳性。结果表明,本研究建立的多重纳米PCR方法在检测SVA、VSNJV和VSIV方面具有更高的特异性和敏感性,可为猪病毒性水疱性疾病的快速鉴别诊断及防控提供技术支持。 展开更多
关键词 A型塞内卡病毒 水泡性口炎病毒 多重纳米PCR方法
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产毒艰难梭菌多重实时荧光PCR检测方法的建立与应用
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作者 殷仑仑 万旺 +3 位作者 邓中平 田向荣 周强 任小梅 《生命科学研究》 2025年第1期62-68,共7页
本研究建立了一种能同时快速检测艰难梭菌(Clostridioides difficile)不同毒力基因的四重实时荧光PCR方法。首先,分别以艰难梭菌的tcdA(毒素A基因)、tcdB(毒素B基因)、cdtB(二元毒素B亚基基因)和TPI(丙糖磷酸异构酶基因)为靶基因设计特... 本研究建立了一种能同时快速检测艰难梭菌(Clostridioides difficile)不同毒力基因的四重实时荧光PCR方法。首先,分别以艰难梭菌的tcdA(毒素A基因)、tcdB(毒素B基因)、cdtB(二元毒素B亚基基因)和TPI(丙糖磷酸异构酶基因)为靶基因设计特异性引物和探针,建立多重实时荧光PCR体系;然后,优化该体系中的引物、探针以及退火温度,并检测优化后体系的灵敏度、特异性、重复性等;最后,将其应用于临床样本检测。结果表明,该方法特异性强、重复性好、成本低,能够检测1000 copies/mL的样本,与其他常见肠道致病菌无交叉反应。 展开更多
关键词 艰难梭菌 毒力基因 多重实时荧光PCR 检测方法
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多重聚合酶链式反应-毛细管电泳技术检测5种食源性致病菌 被引量:1
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作者 范宏伟 朱应飞 +3 位作者 翟平平 占忠旭 唐小叶 蔡玉霞 《食品安全质量检测学报》 2025年第1期180-186,共7页
目的利用多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)-毛细管电泳技术,构建一种快速检测沙门氏菌、大肠埃希氏菌O157:H7、单核细胞增生李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌的方法。方法针对5种食源性致病菌,选择保守性较... 目的利用多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)-毛细管电泳技术,构建一种快速检测沙门氏菌、大肠埃希氏菌O157:H7、单核细胞增生李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌的方法。方法针对5种食源性致病菌,选择保守性较好的致病基因设计特异性多重PCR引物,利用毛细管电泳成像分析多重PCR产物。通过对PCR及电泳条件进行优化,建立5种食源性致病菌的多重PCR-毛细管电泳检测方法,并对其特异性、灵敏度进行研究。结果5对引物特异性良好,均未出现非特异性扩增,多重PCR最佳引物浓度为0.2μmol/L,最佳退火温度为56.0℃,毛细管电泳最佳分离模式为AM900,灵敏度较高,检测灵敏度可达到5×10^(-3) ng/μL。结论本研究建立的多重PCR-毛细管电泳方法用于检测5种食源性致病菌,操作简便、特异性和灵敏度高,在食源性致病菌检验中具有较好的实用价值。 展开更多
关键词 多重聚合酶链式反应 毛细管电泳 食源性致病菌 检测方法
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单管闭管多重PCR检测技术的发展
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作者 胡婷婷 张云龙 邹秉杰 《中国生物化学与分子生物学报》 北大核心 2025年第8期1115-1126,共12页
核酸检测技术因快速、灵敏和特异等特点,在病原体检测等领域广泛应用。因疾病相关的核酸标志物众多,多重核酸检测需求渐增。多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)可对多种靶标同时扩增,但扩增后分析过程存在开管易污染和... 核酸检测技术因快速、灵敏和特异等特点,在病原体检测等领域广泛应用。因疾病相关的核酸标志物众多,多重核酸检测需求渐增。多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)可对多种靶标同时扩增,但扩增后分析过程存在开管易污染和技术要求高等问题。随着检测技术的不断进步,一系列简便和可靠且无需开管处理的单管多重PCR检测技术相继出现。常见的技术有基于荧光探针的单管闭管多重PCR检测方法,主要利用不同荧光标记对多种靶标进行区分,与不同的特异性酶切反应结合,能够实现肿瘤罕见突变的多重检测以及单核苷酸特异性分型。此外,基于熔解温度差异的单色熔解曲线分析方法,在单个荧光通道内实现了多靶标并行检测,若在多个荧光通道内进行则称为多色熔解曲线分析方法,可将检测靶标数量提升至数十种,显著突破了荧光通道数量对检测重数的限制。同时,利用荧光标记进行不同组合的荧光编码方法,也为单管闭管多重PCR检测提供了新的思路,包括编码同一靶标对应的不同荧光标记产生信号的先后顺序、利用2种荧光标记组合识别特定靶标、控制不同靶标荧光信号幅度等方式,也能够提高检测重数。本文从原理、应用及方法优缺点等多个维度出发,对近年来单管闭管多重PCR检测技术的研究进展进行概括并展望,为此后的科研探索与应用提供有价值的参考。 展开更多
关键词 核酸检测 多重核酸检测 聚合酶链式反应 单管反应 检测方法
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多重核酸检测与传统细菌培养方法的比较
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作者 王晓翠 高海月 +1 位作者 官文姣 周明志 《首都食品与医药》 2025年第19期80-82,共3页
目的对比分析6种呼吸道病原菌核酸检测与传统细菌培养方法对实际病原体检测的实际效果。方法选取存在呼吸道感染患者的痰液样本(样本纳入例数:100例;纳入时间:2025年1月-2025年4月),均进行6种呼吸道病原菌核酸检测(PCR检测)和传统细菌... 目的对比分析6种呼吸道病原菌核酸检测与传统细菌培养方法对实际病原体检测的实际效果。方法选取存在呼吸道感染患者的痰液样本(样本纳入例数:100例;纳入时间:2025年1月-2025年4月),均进行6种呼吸道病原菌核酸检测(PCR检测)和传统细菌培养方法检测痰液样本中的细菌。结果多重核酸检测的细菌检出结果相较于传统细菌培养方法的检出结果检出数更高(P<0.05)。结论多重核酸检测方式的细菌检出率更高,相较于传统细菌培养方法检测效果更优,可为后续诊疗提供有效数据支持。 展开更多
关键词 多重核酸检测 传统细菌培养方法 比较
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生鲜乳中16种致病微生物多重荧光定量PCR集成检测技术的建立与初步应用 被引量:2
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作者 肖沙 赵格 +6 位作者 赵建梅 向祝 宋时萍 刘娜 张喜悦 徐莹 王君玮 《中国动物检疫》 CAS 2024年第7期86-95,116,共11页
为满足生鲜乳中微生物快速通量检测的需求,建立多重荧光定量PCR集成方法,从而快速检测生鲜乳中潜在的16种致病微生物,通过设计致病性大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌等目标菌株的特异性引物和探针,优化反应体系,验证方法的特异性、敏... 为满足生鲜乳中微生物快速通量检测的需求,建立多重荧光定量PCR集成方法,从而快速检测生鲜乳中潜在的16种致病微生物,通过设计致病性大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌等目标菌株的特异性引物和探针,优化反应体系,验证方法的特异性、敏感性等,建立了稳定的4组多重集成荧光定量PCR反应体系,并利用人工污染的生鲜乳样品对所建立的方法和传统培养法进行了验证比较。结果显示:各对引物探针对目标菌株均能有效识别并扩增,每组体系中引物探针未发现交叉反应,对其余3组体系的12株非目标菌均未有特异性反应;组内和组间变异系数均低于3%;该方法对布鲁氏菌的最低检出限为10^(2) CFU/mL,对阪崎肠杆菌、志贺菌、沙门菌等7种致病微生物的最低检出限为10^(3) CFU/mL,对蜡样芽胞杆菌、弯曲杆菌、结核分枝杆菌等8种致病微生物的最低检出限为10^(4) CFU/mL;所建方法和传统培养法对人工污染不同致病菌的各25份样品检测结果基本一致。结果表明,本研究建立的多重集成荧光定量PCR方法灵敏度高,特异性及重复性好,可实现对生鲜乳样品中多种致病微生物的快速高效检测,为生鲜乳微生物性风险监测提供了技术支撑。 展开更多
关键词 致病微生物 多重荧光定量PCR 生鲜乳 集成检测技术
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ASFV和PRV野毒及PRV疫苗毒多重纳米PCR检测方法的建立及应用 被引量:1
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作者 赵越 姚来顺 +7 位作者 涂忠忠 曹泽昭 王炳量 薛珺 王改丽 贺文琦 宋德光 兰云刚 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1345-1350,共6页
为建立一种可同时检测ASFV、PRV野毒和PRV疫苗毒(缺失g E基因)的方法,本研究以ASFV的B646L基因、PRV的g E基因以及PRV的g D基因为检测对象,建立了可同时检测ASFV、PRV野毒和PRV疫苗毒的多重纳米PCR方法,并对其特异性、敏感性进行了研究... 为建立一种可同时检测ASFV、PRV野毒和PRV疫苗毒(缺失g E基因)的方法,本研究以ASFV的B646L基因、PRV的g E基因以及PRV的g D基因为检测对象,建立了可同时检测ASFV、PRV野毒和PRV疫苗毒的多重纳米PCR方法,并对其特异性、敏感性进行了研究。结果显示,该方法可特异性扩增ASFV、PRV野毒和PRV疫苗毒的目的基因,而检测塞内卡病毒、猪血凝性脑脊髓炎病毒、猪水疱性口炎病毒、猪圆环病毒2型时结果均呈阴性;B646L基因、g D基因和g E基因的检测限分别为4、7和8 copies/μL。此外,将商品化试剂盒检验结果与本试验建立的多重纳米PCR检测结果进行比对,结果表明符合率为100%。综上所述,本试验建立的多重纳米PCR方法具有特异性好、灵敏度高的优点,且能够同时检测ASFV、PRV野毒和PRV疫苗毒,可用于猪重大疾病的鉴别诊断和疫病防控。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 非洲猪瘟病毒 多重纳米PCR检测方法 冷链猪肉
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Developing an efficient multiplex PCR method to detect mcr-like genes 被引量:1
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作者 Sheng Lei Jiali Lv +2 位作者 Shuai Gao Swaminath Srinivas Youjun Feng 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS CSCD 2019年第5期705-707,共3页
Dear Editor,Since 2016, a growing number of mobile colistin resistance(mcr) genes have been identified and characterized (Liu et al., 2016). In addition to mcr-1 and its variants, mcr-2 to mcr-8 have now been reported... Dear Editor,Since 2016, a growing number of mobile colistin resistance(mcr) genes have been identified and characterized (Liu et al., 2016). In addition to mcr-1 and its variants, mcr-2 to mcr-8 have now been reported, which reflects a significant threat to public health and agricultural production (Sun et al.,2018). 展开更多
关键词 PCR DEVELOPING an efficient multiplex PCR method to detect mcr-like GENES Figure
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多重实时定量PCR技术在口罩致病菌快速检测中的应用研究 被引量:1
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作者 蒋彦洁 张辉 +1 位作者 应珂 凌明 《实验室检测》 2024年第11期17-20,共4页
目的本研究旨在开发一种基于多重实时定量PCR技术的快速检测方法,用于准确识别并量化口罩中常见致病菌,以评估口罩的卫生状况并控制院内感染。方法采用TaqMan探针法实时荧光定量PCR为核心技术,设计并优化特异性引物和荧光标记探针,通过... 目的本研究旨在开发一种基于多重实时定量PCR技术的快速检测方法,用于准确识别并量化口罩中常见致病菌,以评估口罩的卫生状况并控制院内感染。方法采用TaqMan探针法实时荧光定量PCR为核心技术,设计并优化特异性引物和荧光标记探针,通过一管式多重检测来同时定量三种病原菌的特异性基因序列。实验首先从NCBI数据库中筛选特异性靶基因和序列,并设计引物和探针。随后对引物和探针进行质量检测,并通过扩增特异性序列和TA克隆方法制备标准品。最终建立起标准曲线,并对口罩样本进行了检测。结果通过优化实验条件后,成功地建立了一个高效、稳定的多重实时定量PCR检测体系,并在不同浓度梯度下评估了三种病原菌标准品的检测效率。检测数据显示,引物和探针对于目标病原菌具有高度特异性,且扩增效率和信号强度均满足实验要求。在对口罩样本进行检测中,能够准确定量出其中的铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌和溶血性链球菌的基因组DNA拷贝数,并据此评估口罩上的微生物污染程度。结论基于多重实时定量PCR技术的口罩中致病菌快速检测方法具有高敏感性、特异性和快速性,能够为临床和公共卫生监控提供有力的技术支撑。这种方法可以应用于医院环境的卫生监测以及对日常使用口罩的卫生状况进行评估,有助于防止传染病的传播,提升公共卫生安全。 展开更多
关键词 多重实时定量PCR 口罩 微生物污染 铜绿假单胞菌 快速检测方法
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马铃薯5种病毒多重PCR检测技术的建立及应用 被引量:30
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作者 罗文彬 李华伟 +5 位作者 汤浩 邱思鑫 纪荣昌 许泳清 刘中华 邱永祥 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期280-288,共9页
采用多重RT-PCR方法,建立可同时检测马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯M病毒(PVM)、马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯A病毒(PVA)和马铃薯S病毒(PVS)的方法。根据Gen Bank中PVX、PVM、PVY、PVA及PVS(CP)基因序列设计特异引物,对多重RT-PCR退火温度、循... 采用多重RT-PCR方法,建立可同时检测马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯M病毒(PVM)、马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯A病毒(PVA)和马铃薯S病毒(PVS)的方法。根据Gen Bank中PVX、PVM、PVY、PVA及PVS(CP)基因序列设计特异引物,对多重RT-PCR退火温度、循环次数、延伸温度、引物组合浓度进行优化,建立了能同时检测5种马铃薯病毒的多重RT-PCR方法。该方法能同时扩增出PVX、PVM、PVY、PVA及PVS特异片段,其大小分别是138、213、369、468和657 bp。测序结果表明,5种病毒的序列与相应参考序列相似性达到97%以上。灵敏度分析结果表明,多重RT-PCR方法能够检测植物组织量为10-3 mg。应用建立的多重RT-PCR检测方法对田间样品和组培苗进行检测,结果显示,该方法可以准确、快速、灵敏地同时检测单一或复合侵染的5种马铃薯病毒。 展开更多
关键词 马铃薯 病毒 检测方法 多重RT-PCR
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转基因抗草甘膦油菜的实用PCR检测方法 被引量:17
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作者 潘爱虎 张大兵 +3 位作者 潘良文 陈家华 袁政 梁婉琪 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第7期856-860,共5页
利用定性PCR技术 ,建立了检测孟山都公司培育的转基因抗草甘膦油菜中的epsps、gox和fmv35s的方法 ,同时设立了阳性内对照napin。该方法的检测灵敏度为 0 .0 5 %。利用复合PCR可以在一个PCR反应中同时检测出epsps、gox、fmv35s和napin基... 利用定性PCR技术 ,建立了检测孟山都公司培育的转基因抗草甘膦油菜中的epsps、gox和fmv35s的方法 ,同时设立了阳性内对照napin。该方法的检测灵敏度为 0 .0 5 %。利用复合PCR可以在一个PCR反应中同时检测出epsps、gox、fmv35s和napin基因。这种方法可以有效地用于转基因抗草甘膦油菜中的外源基因的检测。 展开更多
关键词 转基因抗草甘膦油菜 PCR检测方法 灵敏度 外源基因 检测技术
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荧光假单胞菌、沙门氏菌和单增李斯特菌多重PCR检测方法的建立 被引量:22
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作者 胡冰雪 舒沿沿 +2 位作者 潘道东 曾小群 吴振 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第20期209-214,共6页
针对肉制品中易污染的荧光假单胞菌、沙门氏菌和单增李斯特菌等有害微生物,通过3种标准菌株及肉制品建立多重聚合酶链式反应方法,实现肉制品中这3种菌的同时、快速检测。利用荧光假单胞菌的gyrB基因、沙门氏菌的invA基因和单增李斯特菌... 针对肉制品中易污染的荧光假单胞菌、沙门氏菌和单增李斯特菌等有害微生物,通过3种标准菌株及肉制品建立多重聚合酶链式反应方法,实现肉制品中这3种菌的同时、快速检测。利用荧光假单胞菌的gyrB基因、沙门氏菌的invA基因和单增李斯特菌的hly A基因设计3对特异性引物,在确定引物特异性的基础上,对3种标准菌株及在冷却肉上过夜富集后进行灵敏度检测。结果表明,该多重聚合酶链式反应方法对于同时检测这3种有害微生物具有高度的特异性;同时检测这3种菌时,纯菌DNA检测限可达1 pg/μL;将3种菌一起接种到冷却肉中35℃过夜培养后,荧光假单胞菌、沙门氏菌和单增李斯特菌的检测限分别可达到9、5、70 CFU/m L。 展开更多
关键词 多重聚合酶链式反应 检测方法 荧光假单胞菌 沙门氏菌 单增李斯特菌
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食源性致病菌多重分子生物学检测技术研究进展 被引量:12
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作者 索标 汪月霞 艾志录 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第6期71-75,共5页
快速、可靠的食源性致病菌高通量检测方法对于确保食品安全具有重要意义,近年基于DNA水平的多重分子生物学检测技术迅速发展,针对各种不同的食源性致病菌建立了多种多重分子检测技术,包括多重PCR、多重实时荧光PCR以及基因芯片等。对这... 快速、可靠的食源性致病菌高通量检测方法对于确保食品安全具有重要意义,近年基于DNA水平的多重分子生物学检测技术迅速发展,针对各种不同的食源性致病菌建立了多种多重分子检测技术,包括多重PCR、多重实时荧光PCR以及基因芯片等。对这些多重分子检测技术的最新研究进展作一综述,并且建议在今后该技术的研究中,仍需要在食品中多种致病菌同时选择性增菌培养、亚致死损伤修复以及检测内标的构建等方面取得突破,从而能够更好地实现食源性致病菌的高通量检测。 展开更多
关键词 多重分子方法 食源性致病菌 多重PCR 基因芯片 检测
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同时检测美洲型及欧洲型PRRSV的多重RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量:12
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作者 施开创 莫胜兰 +3 位作者 张步娴 屈素洁 赵日浪 钟诚 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期810-814,共5页
为建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的快速鉴别检测方法,本研究针对PRRSV基因序列设计3对特异性引物,即第1对通用引物扩增美洲型和欧洲型病毒株ORF7基因(433 bp/398 bp)、第2对引物扩增美洲型经典病毒株和高致病性变异株(HP-PRRSV)Nsp... 为建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的快速鉴别检测方法,本研究针对PRRSV基因序列设计3对特异性引物,即第1对通用引物扩增美洲型和欧洲型病毒株ORF7基因(433 bp/398 bp)、第2对引物扩增美洲型经典病毒株和高致病性变异株(HP-PRRSV)Nsp2基因(338 bp/248 bp)、第3对引物扩增欧洲型病毒株ORF5基因(614 bp)。经过反应条件的优化,建立了能够同时检测并区分美洲型经典病毒株、HP-PRRSV株以及欧洲型病毒株的多重RT-PCR检测方法。该方法可以特异扩增3种病毒的基因,其重组质粒标准品的检出下限均为1.67×103拷贝;而与猪的其它重要病原均无交叉反应。应用该方法检测176份临床疑似病料样品,结果 PRRSV阳性45份,其中美洲型变异病毒株41份、经典病毒株4份,未检测到欧洲型病毒株。表明本研究建立的多重RT-PCR检测方法可以用于PRRSV的快速鉴别诊断和流行病学调查。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 美洲型病毒株 欧洲型病毒株 多重RT.PCR 检测方法
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侵染甘薯的SPCSV、SPVG、SPFMV多重RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量:15
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作者 李华伟 许泳清 +4 位作者 邱思鑫 刘中华 邱永祥 汤浩 余华 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1464-1470,共7页
为建立可同时检测甘薯褪绿矮化病毒(SPCSV)、甘薯G病毒(SPVG)和甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)多重RT-PCR检测方法,本文根据SPCSV热激蛋白基因(hsp70)及SPVG、SPFMV外壳蛋白基因(CP)基因核苷酸序列的保守区域设计特异性引物,通过引... 为建立可同时检测甘薯褪绿矮化病毒(SPCSV)、甘薯G病毒(SPVG)和甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)多重RT-PCR检测方法,本文根据SPCSV热激蛋白基因(hsp70)及SPVG、SPFMV外壳蛋白基因(CP)基因核苷酸序列的保守区域设计特异性引物,通过引物筛选,优化多重RT-PCR反应条件,建立了能同时检测SPCSV、SPVG和SPFMV 3种病毒的多重RT-PCR检测方法。该体系能有效扩增出大小为304、433、601 bp 3个特异性片段。测序结果表明3种病毒与参考序列的一致性达94%-99%。应用建立的多重RT-PCR检测方法可稳定、准确、灵敏地同时检测单一或复合侵染3种甘薯病毒,为甘薯脱毒和病毒病诊断奠定基础。 展开更多
关键词 甘薯病毒 褪绿矮化病毒 G病毒 羽状斑驳病毒 多重RT-PCR 检测方法
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实验动物皮肤病原真菌多重PCR检测方法的建立与初步应用 被引量:3
16
作者 邢进 冯育芳 +1 位作者 岳秉飞 贺争鸣 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第12期65-70,共6页
目的建立石膏样毛癣菌(Tm)、石膏样小孢子菌(Mg)、犬小孢子菌(Mc)和猴类毛癣菌(Am)的多重PCR检测方法,用于实验动物皮肤病原真菌的快速检测。方法根据Genbank公布的四种皮肤病原真菌的18S-28S rRNA序列设计特异性引物,通过引物、d NTP、... 目的建立石膏样毛癣菌(Tm)、石膏样小孢子菌(Mg)、犬小孢子菌(Mc)和猴类毛癣菌(Am)的多重PCR检测方法,用于实验动物皮肤病原真菌的快速检测。方法根据Genbank公布的四种皮肤病原真菌的18S-28S rRNA序列设计特异性引物,通过引物、d NTP、Taq DNA聚合酶浓度及退火温度和时间的优化,建立四种皮肤病原真菌的多重PCR体系。经特异性和敏感性检验后,对15份人工感染真菌大鼠毛和260份实验动物毛发样本进行检测。结果所建多重PCR方法能够有效区分四种皮肤病原真菌,产生192 bp(Tm)、460 bp(Mg)、290 bp(Mc)和602 bp(As)的目的片段,最低检测限分别为5.9 pg/μL、6.6 pg/μL、9.5 pg/μL和5.1 pg/μL。被检的15份人工感染样本扩增结果准确,260份毛发样本中未检测出四种真菌。结论所建立的多重PCR方法能够同时对实验动物中的四种皮肤病原真菌进行快速的检测,具有较高的应用价值。 展开更多
关键词 皮肤病原真菌 多重PCR 检测方法 实验动物
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改良酚-氯仿法提取及不同试剂盒扩增检测陈旧性人骨DNA 被引量:2
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作者 张玥 徐国昌 +3 位作者 徐凯 王友政 任甫 李红卫 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1134-1137,共4页
目的:探讨改良酚-氯仿法提取及不同试剂盒扩增对陈旧性人骨DNA检测的效果。方法:用传统和改良的酚-氯仿法对30例陈旧性人骨进行DNA提取,用Identifiler-plus试剂盒、Minifiler试剂盒和Godeneye TM 20A试剂盒行荧光标记和复合扩增,Genetic... 目的:探讨改良酚-氯仿法提取及不同试剂盒扩增对陈旧性人骨DNA检测的效果。方法:用传统和改良的酚-氯仿法对30例陈旧性人骨进行DNA提取,用Identifiler-plus试剂盒、Minifiler试剂盒和Godeneye TM 20A试剂盒行荧光标记和复合扩增,Genetic Analyzer软件对基因位点进行检测和分析。结果:改良酚-氯仿法提取及3种试剂盒对陈旧性人骨DNA基因位点检出469、262、588个,高于传统法的307、175、436个。结论:改良酚-氯仿法、3种试剂盒PCR复合扩增能对陈旧性人骨DNA进行有效提取和检测。 展开更多
关键词 DNA检验 酚-氯仿法 复合扩增 陈旧性骨
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肺炎克雷伯菌中质粒介导AmpC酶的检测 被引量:6
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作者 曾吉 胡丽华 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1182-1185,共4页
目的建立检测肠杆菌科细菌中质粒介导AmpC酶的方法并了解其酶型。方法用K-B法检测15株对头孢西丁不敏感肺炎克雷伯菌对常用抗菌药物的敏感性,采用双纸片确证法检测其中质粒介导的AmpC酶,并用三维试验与质粒介导的AmpC酶酶量直接测定法... 目的建立检测肠杆菌科细菌中质粒介导AmpC酶的方法并了解其酶型。方法用K-B法检测15株对头孢西丁不敏感肺炎克雷伯菌对常用抗菌药物的敏感性,采用双纸片确证法检测其中质粒介导的AmpC酶,并用三维试验与质粒介导的AmpC酶酶量直接测定法进行对比,同时检测这些菌产ESBLs的情况,用多重PCR方法检测AmpC酶型。结果15株菌对亚胺培南的敏感率为93.3%,对其他抗菌药物的敏感率均<40.0%;双纸片确证法检测出8株质粒介导的AmpC酶,占53.3%,且不受ESBLs的干扰,与直接酶量检测法完全一致,敏感性高于三维试验;8株菌酶型测定均DHA-1型AmpC酶。结论双纸片确证法可作为临床检测质粒介导的AmpC酶的方法,湖北地区的质粒AmpC酶以DHA-1型为主。 展开更多
关键词 检测方法 多重PCR 质粒介导AMPC酶
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鸡传染性支气管炎的多重RT-PCR检测及793/B血清型的鉴定 被引量:2
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作者 孟凡磊 刁有祥 +4 位作者 张伟 王辉 刘方娜 王妮 马雪杰 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2008年第6期45-48,共4页
【目的】建立鸡传染性支气管炎病毒(IBV)快速、准确的检测方法。【方法】根据GenBank中已经发表的793/B型和多株IBV的N基因和S1基因,对比分析后以N基因的保守序列设计合成了1对引物,跨度为582bp;以793/B的S1基因设计合成了1对特异型引物... 【目的】建立鸡传染性支气管炎病毒(IBV)快速、准确的检测方法。【方法】根据GenBank中已经发表的793/B型和多株IBV的N基因和S1基因,对比分析后以N基因的保守序列设计合成了1对引物,跨度为582bp;以793/B的S1基因设计合成了1对特异型引物,跨度为891 bp;建立了能检测出IBV并能够同时鉴定出793/B血清型的实验室一次性PCR诊断方法。【结果】多重RT-PCR检测表明,793/B血清型可出现582和891 bp 2条核酸片段,而其他血清型只出现582 bp 1条核酸片段,新城疫病毒、传染性喉气管炎、鹅副粘病毒则无任何条带出现。【结论】所建立的TR-PCR方法具有一定的特异性,可用于IBV的快速检测和793/B血清型的临床诊断。 展开更多
关键词 多重RT-PCR 传染性支气管炎 793/B血清型 检测方法
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猪繁殖与呼吸综合征病毒一步多重RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量:2
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作者 吴锦艳 田宏 +6 位作者 尚佑军 陈妍 魏衍全 侯相民 赵娜 何建辉 刘湘涛 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1485-1490,共6页
本研究旨在建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的一步多重RT-PCR检测方法。通过多序列比对以及反应条件的优化,从4对引物中精选了3对特异性和敏感性较好、扩增片段分别为228、345和490bp的引物,并应用所建立的方法对4种分离株的细胞毒... 本研究旨在建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的一步多重RT-PCR检测方法。通过多序列比对以及反应条件的优化,从4对引物中精选了3对特异性和敏感性较好、扩增片段分别为228、345和490bp的引物,并应用所建立的方法对4种分离株的细胞毒和组织毒、田间样品及临床症状相似的疾病猪瘟和猪伪狂犬病毒做了检测;并对田间及实验室样品进行符合率试验,对阳性样品进行重复性试验。与常规RT-PCR法进行比较,证明该方法比常规RT-PCR法敏感性提高了10倍;而且利用该方法可使检测时间大大缩短;特异性试验证实该方法无交叉反应;阳性和阴性样本的符合率均为100%;3次阳性样品重复性检测结果完全相同;稳定性试验显示该试剂盒至少可保存1年以上。本研究所建立的PRRSV一步多重RT-PCR检测方法的敏感性高、特异性强、操作简便、省时、结果重复性好,不仅适用于临床病例尤其低微含量样品的诊断,而且在筛查隐形带毒动物及兽医检疫方面具有重要的应用价值。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 一步多重RT-PCR 检测方法
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