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A型塞内卡病毒和水泡性口炎病毒多重纳米PCR方法的建立及初步应用
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作者 李晓君 兰云刚 +7 位作者 赵越 李思锐 尚丽元 呼延含蓉 宋斯伟 贺文琦 高飞 王改丽 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第5期934-939,970,共7页
由于A型塞内卡病毒(SVA)、水泡性口炎病毒(VSV)新泽西血清型(VSNJV)和印第安纳血清型(VSIV)均可感染猪群,引起口唇及蹄部水疱性损伤,且临床症状相似,易造成误诊。因此,本研究根据SVA-P基因、VSNJV-N基因、VSIV-N基因的保守区分别设计了... 由于A型塞内卡病毒(SVA)、水泡性口炎病毒(VSV)新泽西血清型(VSNJV)和印第安纳血清型(VSIV)均可感染猪群,引起口唇及蹄部水疱性损伤,且临床症状相似,易造成误诊。因此,本研究根据SVA-P基因、VSNJV-N基因、VSIV-N基因的保守区分别设计了3对特异性引物,优化了退火温度、引物浓度及反应体系;并利用纳米金材料,建立了一种能同时检测SVA、VSNJV和VSIV的新型、快速、灵敏的多重纳米PCR检测方法。特异性试验结果表明,该检测方法可特异性扩增SVA、VSNJV和VSIV目的基因,且与猪伪狂犬病毒(PRV)、非洲猪瘟病毒(ASFV)、猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)和猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV)均无交叉反应性。敏感性试验结果显示,该检测方法的最低核酸检测限为10拷贝/μL,敏感性较好。此外,最优引物比对不同批次的酶和质粒反应性良好,稳定性强。应用该方法对50份病猪样品进行检测,检出SVA阳性样品7份,普通单一PCR方法检出SVA阳性样品5份;2种检测方法均未检出VSNJV和VSIV阳性。结果表明,本研究建立的多重纳米PCR方法在检测SVA、VSNJV和VSIV方面具有更高的特异性和敏感性,可为猪病毒性水疱性疾病的快速鉴别诊断及防控提供技术支持。 展开更多
关键词 A型塞内卡病毒 水泡性口炎病毒 多重纳米pcr方法
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产毒艰难梭菌多重实时荧光PCR检测方法的建立与应用
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作者 殷仑仑 万旺 +3 位作者 邓中平 田向荣 周强 任小梅 《生命科学研究》 2025年第1期62-68,共7页
本研究建立了一种能同时快速检测艰难梭菌(Clostridioides difficile)不同毒力基因的四重实时荧光PCR方法。首先,分别以艰难梭菌的tcdA(毒素A基因)、tcdB(毒素B基因)、cdtB(二元毒素B亚基基因)和TPI(丙糖磷酸异构酶基因)为靶基因设计特... 本研究建立了一种能同时快速检测艰难梭菌(Clostridioides difficile)不同毒力基因的四重实时荧光PCR方法。首先,分别以艰难梭菌的tcdA(毒素A基因)、tcdB(毒素B基因)、cdtB(二元毒素B亚基基因)和TPI(丙糖磷酸异构酶基因)为靶基因设计特异性引物和探针,建立多重实时荧光PCR体系;然后,优化该体系中的引物、探针以及退火温度,并检测优化后体系的灵敏度、特异性、重复性等;最后,将其应用于临床样本检测。结果表明,该方法特异性强、重复性好、成本低,能够检测1000 copies/mL的样本,与其他常见肠道致病菌无交叉反应。 展开更多
关键词 艰难梭菌 毒力基因 多重实时荧光pcr 检测方法
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单管闭管多重PCR检测技术的发展
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作者 胡婷婷 张云龙 邹秉杰 《中国生物化学与分子生物学报》 北大核心 2025年第8期1115-1126,共12页
核酸检测技术因快速、灵敏和特异等特点,在病原体检测等领域广泛应用。因疾病相关的核酸标志物众多,多重核酸检测需求渐增。多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)可对多种靶标同时扩增,但扩增后分析过程存在开管易污染和... 核酸检测技术因快速、灵敏和特异等特点,在病原体检测等领域广泛应用。因疾病相关的核酸标志物众多,多重核酸检测需求渐增。多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)可对多种靶标同时扩增,但扩增后分析过程存在开管易污染和技术要求高等问题。随着检测技术的不断进步,一系列简便和可靠且无需开管处理的单管多重PCR检测技术相继出现。常见的技术有基于荧光探针的单管闭管多重PCR检测方法,主要利用不同荧光标记对多种靶标进行区分,与不同的特异性酶切反应结合,能够实现肿瘤罕见突变的多重检测以及单核苷酸特异性分型。此外,基于熔解温度差异的单色熔解曲线分析方法,在单个荧光通道内实现了多靶标并行检测,若在多个荧光通道内进行则称为多色熔解曲线分析方法,可将检测靶标数量提升至数十种,显著突破了荧光通道数量对检测重数的限制。同时,利用荧光标记进行不同组合的荧光编码方法,也为单管闭管多重PCR检测提供了新的思路,包括编码同一靶标对应的不同荧光标记产生信号的先后顺序、利用2种荧光标记组合识别特定靶标、控制不同靶标荧光信号幅度等方式,也能够提高检测重数。本文从原理、应用及方法优缺点等多个维度出发,对近年来单管闭管多重PCR检测技术的研究进展进行概括并展望,为此后的科研探索与应用提供有价值的参考。 展开更多
关键词 核酸检测 多重核酸检测 聚合酶链式反应 单管反应 检测方法
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One-Step Multiplex PCR for Simultaneous Detection and Identification of Eight Medically Important <i>Candida</i>Species 被引量:2
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作者 Akira Fukatsu Osamu Tsuzukibashi +13 位作者 Hidenori Suzuk Katsuhiro Asaka Yoshinori Ono Mana Fuchigami Taira Kobayashi Satoshi Uchibori Yuji Takahashi Chiaki Komine Yoshimi Konishi Yuki Ogura Hiroko Omori Masanobu Wakami Hiroshi Murakami Masahiko Fukumoto 《Open Journal of Stomatology》 2021年第1期14-24,共11页
Recently, the incidence of<span> </span><i><span>Candida</span></i><span> infections has substantially increased. Conventional identification methods for </span><... Recently, the incidence of<span> </span><i><span>Candida</span></i><span> infections has substantially increased. Conventional identification methods for </span><i><span>Candida</span></i><span> species are technically difficult to conduct and cannot accurately distinguish each species. The purpose of the present study was to design primers to identify and detect simultaneously</span><span> </span><span>eight medically important </span><i><span>Candida</span></i><span> species using one-step multiplex PCR. PCR primers were designed based on partial sequences of intergenic spacer (IGS) and internal transcribed spacer (ITS) genes of eight medically important </span><i><span>Candida</span></i><span> species. These primers were able to distinguish each </span><i><span>Candida</span></i><span> species and did not display cross-reactivity with representative </span><i><span>Candida </span></i><span>species other than the eight</span><i><span> Candida</span></i><span> species. Moreover, our developed one-step multiplex PCR method is accurate, specific, cost-effective, time-saving, and worked without requiring DNA extraction.</span> 展开更多
关键词 Candida Candida albicans One-Step multiplex pcr pcr method
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ASFV和PRV野毒及PRV疫苗毒多重纳米PCR检测方法的建立及应用 被引量:1
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作者 赵越 姚来顺 +7 位作者 涂忠忠 曹泽昭 王炳量 薛珺 王改丽 贺文琦 宋德光 兰云刚 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1345-1350,共6页
为建立一种可同时检测ASFV、PRV野毒和PRV疫苗毒(缺失g E基因)的方法,本研究以ASFV的B646L基因、PRV的g E基因以及PRV的g D基因为检测对象,建立了可同时检测ASFV、PRV野毒和PRV疫苗毒的多重纳米PCR方法,并对其特异性、敏感性进行了研究... 为建立一种可同时检测ASFV、PRV野毒和PRV疫苗毒(缺失g E基因)的方法,本研究以ASFV的B646L基因、PRV的g E基因以及PRV的g D基因为检测对象,建立了可同时检测ASFV、PRV野毒和PRV疫苗毒的多重纳米PCR方法,并对其特异性、敏感性进行了研究。结果显示,该方法可特异性扩增ASFV、PRV野毒和PRV疫苗毒的目的基因,而检测塞内卡病毒、猪血凝性脑脊髓炎病毒、猪水疱性口炎病毒、猪圆环病毒2型时结果均呈阴性;B646L基因、g D基因和g E基因的检测限分别为4、7和8 copies/μL。此外,将商品化试剂盒检验结果与本试验建立的多重纳米PCR检测结果进行比对,结果表明符合率为100%。综上所述,本试验建立的多重纳米PCR方法具有特异性好、灵敏度高的优点,且能够同时检测ASFV、PRV野毒和PRV疫苗毒,可用于猪重大疾病的鉴别诊断和疫病防控。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 非洲猪瘟病毒 多重纳米pcr检测方法 冷链猪肉
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Advance of Multiplex PCR in Rapid Detecting Transgenic Soybean Oil 被引量:1
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作者 Yi Liu Siya Yin 《American Journal of Plant Sciences》 2020年第3期382-392,共11页
Transgenic food safety is a high-profile public health issue in worldwide, especially transgenic soybean (Glycine max L.) oil. To rapidly and effectively detect transgenic components of soybean oil, in the present stu... Transgenic food safety is a high-profile public health issue in worldwide, especially transgenic soybean (Glycine max L.) oil. To rapidly and effectively detect transgenic components of soybean oil, in the present study, we isolated DNA from transgenic soybean oil by modified method, and employed the multiplex PCR method to identify targeted genes, including CaMV35S promoter, Nos terminator, NPTII, CP4-EPSPS and endogenous gene Lectin. The research aims to build a method which is accurate, rapid and reliable for detection of genetically modified soybeans oil. The targeted gene including DNA was successfully established by the improved method, and then amplified by PCR. Five genes are simultaneously specifically detected. Commercial soybean, genetically modified soy bean and oil were detected with the Multiplex PCR. The improved method of DNA extraction was rapid and accurate to extract high quality total DNA which was amplified by PCR. The method could eliminate the PCR inhibitor. A way of detecting the genetically modified soybean and Oil was set up in this study. 展开更多
关键词 TRANSGENIC SOYBEAN OIL DNA EXTRACTION method multiplex pcr
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水禽4种常见致病菌多重PCR方法的建立及应用 被引量:1
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作者 蒲龄 张亚楠 +2 位作者 彭珊 杨茂生 徐景峨 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第5期66-72,共7页
为建立一种能同时检测大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌的多重PCR方法,试验根据大肠杆菌phoA基因、鸭疫里默氏杆菌ompA基因、多杀性巴氏杆菌kmt 1基因、金黄色葡萄球菌FemB基因的保守区域设计4对特异性引物,... 为建立一种能同时检测大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌的多重PCR方法,试验根据大肠杆菌phoA基因、鸭疫里默氏杆菌ompA基因、多杀性巴氏杆菌kmt 1基因、金黄色葡萄球菌FemB基因的保守区域设计4对特异性引物,通过优化退火温度和引物浓度建立多重PCR方法,检验该方法的特异性、敏感性性、重复性,应用该方法检测145份病死水禽临床样品,并与传统细菌分离鉴定方法进行比较。结果表明:优化后的最佳退火温度为52℃,引物浓度为10μmol/L。建立的多重PCR方法能特异性地扩增出靶基因,沙门氏菌、链球菌、产气荚膜梭菌等临床常见菌均未扩增出条带,对大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌4种细菌的检出下限是0.4 pg/mL,单一PCR扩增ompA、kmt 1、phoA和FemB基因的检出下限分别为4×10^(-3),0.4,4×10^(-3),4×10^(-6)pg/mL。多重PCR方法对临床样品的检测结果与传统细菌分离鉴定方法的符合率均在90%以上。说明试验建立的多重PCR方法具有结果稳定、重复性高的特点,适合水禽病原微生物流行病学调查。 展开更多
关键词 多重pcr方法 大肠杆菌 鸭疫里默氏杆菌 多杀性巴氏杆菌 金黄色葡萄球菌
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转基因抗草甘膦油菜的实用PCR检测方法 被引量:17
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作者 潘爱虎 张大兵 +3 位作者 潘良文 陈家华 袁政 梁婉琪 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第7期856-860,共5页
利用定性PCR技术 ,建立了检测孟山都公司培育的转基因抗草甘膦油菜中的epsps、gox和fmv35s的方法 ,同时设立了阳性内对照napin。该方法的检测灵敏度为 0 .0 5 %。利用复合PCR可以在一个PCR反应中同时检测出epsps、gox、fmv35s和napin基... 利用定性PCR技术 ,建立了检测孟山都公司培育的转基因抗草甘膦油菜中的epsps、gox和fmv35s的方法 ,同时设立了阳性内对照napin。该方法的检测灵敏度为 0 .0 5 %。利用复合PCR可以在一个PCR反应中同时检测出epsps、gox、fmv35s和napin基因。这种方法可以有效地用于转基因抗草甘膦油菜中的外源基因的检测。 展开更多
关键词 转基因抗草甘膦油菜 pcr检测方法 灵敏度 外源基因 检测技术
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荧光假单胞菌、沙门氏菌和单增李斯特菌多重PCR检测方法的建立 被引量:22
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作者 胡冰雪 舒沿沿 +2 位作者 潘道东 曾小群 吴振 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第20期209-214,共6页
针对肉制品中易污染的荧光假单胞菌、沙门氏菌和单增李斯特菌等有害微生物,通过3种标准菌株及肉制品建立多重聚合酶链式反应方法,实现肉制品中这3种菌的同时、快速检测。利用荧光假单胞菌的gyrB基因、沙门氏菌的invA基因和单增李斯特菌... 针对肉制品中易污染的荧光假单胞菌、沙门氏菌和单增李斯特菌等有害微生物,通过3种标准菌株及肉制品建立多重聚合酶链式反应方法,实现肉制品中这3种菌的同时、快速检测。利用荧光假单胞菌的gyrB基因、沙门氏菌的invA基因和单增李斯特菌的hly A基因设计3对特异性引物,在确定引物特异性的基础上,对3种标准菌株及在冷却肉上过夜富集后进行灵敏度检测。结果表明,该多重聚合酶链式反应方法对于同时检测这3种有害微生物具有高度的特异性;同时检测这3种菌时,纯菌DNA检测限可达1 pg/μL;将3种菌一起接种到冷却肉中35℃过夜培养后,荧光假单胞菌、沙门氏菌和单增李斯特菌的检测限分别可达到9、5、70 CFU/m L。 展开更多
关键词 多重聚合酶链式反应 检测方法 荧光假单胞菌 沙门氏菌 单增李斯特菌
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多重PCR方法同时鉴别人参、西洋参、三七 被引量:20
10
作者 刘丽 肖炳燚 +5 位作者 罗晖明 聂平 李文莉 丁野 孙辉 李玲 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期668-677,共10页
目的:建立一种能同时鉴别人参属人参、西洋参、三七3种药材的多重聚合酶链反应(PCR)方法。方法:通过分析人参、西洋参、三七psb A-trn H基因序列的差异设计了特异性引物对1,利用随机扩增多态性DNA(RAPD)分子标记技术筛选获得的特异性片... 目的:建立一种能同时鉴别人参属人参、西洋参、三七3种药材的多重聚合酶链反应(PCR)方法。方法:通过分析人参、西洋参、三七psb A-trn H基因序列的差异设计了特异性引物对1,利用随机扩增多态性DNA(RAPD)分子标记技术筛选获得的特异性片段的基因序列,设计了特异性引物对2;优化了多重PCR鉴别体系并验证其耐受性和实用性。结果:构建的多重PCR鉴别体系能够成功地鉴别人参、西洋参、三七,人参样本可扩增出片段大小约为150 bp的特异性条带,西洋参样本可扩增片段大小出约为150 bp和400bp 2条特异性片段,三七样本可扩增出片段大小约为400 bp的特异性条带。结论:本多重PCR鉴别体系特异性好,可准确、可靠地鉴别人参、西洋参、三七。 展开更多
关键词 中药材分子鉴别 psb A-trn H基因序列分析 DNA分子标记技术 多重聚合酶链反应 多重pcr方法 人参 西洋参 三七
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靶序列富集多重PCR-液相芯片联合检测4种常见呼吸道病毒的初步应用 被引量:7
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作者 王洁 王卫萍 +4 位作者 胡毓安 孙宁 杨波 夏正坤 李晓军 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2016年第9期958-963,共6页
目的呼吸道病毒是引起婴幼儿呼吸道感染的最主要病原体,为快速准确诊断其感染,文中建立一种基于液相芯片系统的4种常见呼吸道病毒快速分子检测方法,为有效防控其发生和流行提供有力手段。方法采集南京总医院儿科就诊的有急性呼吸道感染... 目的呼吸道病毒是引起婴幼儿呼吸道感染的最主要病原体,为快速准确诊断其感染,文中建立一种基于液相芯片系统的4种常见呼吸道病毒快速分子检测方法,为有效防控其发生和流行提供有力手段。方法采集南京总医院儿科就诊的有急性呼吸道感染症状的患儿咽拭子标本120例及30例正常对照标本,分别纳入患儿组和对照组。针对A型流感病毒(Flu A)、B型流感病毒(Flu B)、呼吸道合胞病毒A型(RSVA)和B型(RSVB)的保守区序列分别设计并合成了特异性引物、探针和通用引物,构建4种病原体阳性参比品,通过对扩增和杂交条件的优化,建立了靶序列富集多重PCR(Tem-PCR)和Luminex液相芯片(x MAP)技术相结合的检测系统,并对该检测系统进行了特异性、灵敏度评价。收集以急性上呼吸道感染为主要表现的患儿咽拭子标本,用上述建立的方法进行检测分析,分别与单病毒基因荧光定量PCR检测方法及x TAG液相芯片法进行比对检测。结果建立了Flu A、Flu B、RSVA和RSVB4种呼吸道病毒的特异性快速分子检测方法且灵敏度可达10拷贝/μL。用快速分子检测方法和单病毒基因荧光定量PCR法对120例疑似患儿咽拭子标本进行检测,快速法阳性检出率为31.7%(38/120),荧光定量法阳性检出率为29.2%(35/120)。经一致性检验分析提示2种方法一致性较强(k>0.7)。部分标本同时采用x TAG液相芯片试剂盒进行检测,经一致性检验分析提示2种方法一致性较好(k>0.6)。结论临床的初步应用证实了4种常见呼吸道病毒快速分子检测方法具备灵敏、特异、快速等优点,为临床早期、准确判断呼吸道感染的病原体提供实验依据。 展开更多
关键词 呼吸道病毒 靶序列富集多重-聚合酶链反应 液相芯片技术[
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马铃薯5种病毒多重PCR检测技术的建立及应用 被引量:30
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作者 罗文彬 李华伟 +5 位作者 汤浩 邱思鑫 纪荣昌 许泳清 刘中华 邱永祥 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期280-288,共9页
采用多重RT-PCR方法,建立可同时检测马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯M病毒(PVM)、马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯A病毒(PVA)和马铃薯S病毒(PVS)的方法。根据Gen Bank中PVX、PVM、PVY、PVA及PVS(CP)基因序列设计特异引物,对多重RT-PCR退火温度、循... 采用多重RT-PCR方法,建立可同时检测马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯M病毒(PVM)、马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯A病毒(PVA)和马铃薯S病毒(PVS)的方法。根据Gen Bank中PVX、PVM、PVY、PVA及PVS(CP)基因序列设计特异引物,对多重RT-PCR退火温度、循环次数、延伸温度、引物组合浓度进行优化,建立了能同时检测5种马铃薯病毒的多重RT-PCR方法。该方法能同时扩增出PVX、PVM、PVY、PVA及PVS特异片段,其大小分别是138、213、369、468和657 bp。测序结果表明,5种病毒的序列与相应参考序列相似性达到97%以上。灵敏度分析结果表明,多重RT-PCR方法能够检测植物组织量为10-3 mg。应用建立的多重RT-PCR检测方法对田间样品和组培苗进行检测,结果显示,该方法可以准确、快速、灵敏地同时检测单一或复合侵染的5种马铃薯病毒。 展开更多
关键词 马铃薯 病毒 检测方法 多重RT-pcr
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同时检测美洲型及欧洲型PRRSV的多重RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量:12
13
作者 施开创 莫胜兰 +3 位作者 张步娴 屈素洁 赵日浪 钟诚 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期810-814,共5页
为建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的快速鉴别检测方法,本研究针对PRRSV基因序列设计3对特异性引物,即第1对通用引物扩增美洲型和欧洲型病毒株ORF7基因(433 bp/398 bp)、第2对引物扩增美洲型经典病毒株和高致病性变异株(HP-PRRSV)Nsp... 为建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的快速鉴别检测方法,本研究针对PRRSV基因序列设计3对特异性引物,即第1对通用引物扩增美洲型和欧洲型病毒株ORF7基因(433 bp/398 bp)、第2对引物扩增美洲型经典病毒株和高致病性变异株(HP-PRRSV)Nsp2基因(338 bp/248 bp)、第3对引物扩增欧洲型病毒株ORF5基因(614 bp)。经过反应条件的优化,建立了能够同时检测并区分美洲型经典病毒株、HP-PRRSV株以及欧洲型病毒株的多重RT-PCR检测方法。该方法可以特异扩增3种病毒的基因,其重组质粒标准品的检出下限均为1.67×103拷贝;而与猪的其它重要病原均无交叉反应。应用该方法检测176份临床疑似病料样品,结果 PRRSV阳性45份,其中美洲型变异病毒株41份、经典病毒株4份,未检测到欧洲型病毒株。表明本研究建立的多重RT-PCR检测方法可以用于PRRSV的快速鉴别诊断和流行病学调查。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 美洲型病毒株 欧洲型病毒株 多重RT.pcr 检测方法
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实验动物皮肤病原真菌多重PCR检测方法的建立与初步应用 被引量:3
14
作者 邢进 冯育芳 +1 位作者 岳秉飞 贺争鸣 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第12期65-70,共6页
目的建立石膏样毛癣菌(Tm)、石膏样小孢子菌(Mg)、犬小孢子菌(Mc)和猴类毛癣菌(Am)的多重PCR检测方法,用于实验动物皮肤病原真菌的快速检测。方法根据Genbank公布的四种皮肤病原真菌的18S-28S rRNA序列设计特异性引物,通过引物、d NTP、... 目的建立石膏样毛癣菌(Tm)、石膏样小孢子菌(Mg)、犬小孢子菌(Mc)和猴类毛癣菌(Am)的多重PCR检测方法,用于实验动物皮肤病原真菌的快速检测。方法根据Genbank公布的四种皮肤病原真菌的18S-28S rRNA序列设计特异性引物,通过引物、d NTP、Taq DNA聚合酶浓度及退火温度和时间的优化,建立四种皮肤病原真菌的多重PCR体系。经特异性和敏感性检验后,对15份人工感染真菌大鼠毛和260份实验动物毛发样本进行检测。结果所建多重PCR方法能够有效区分四种皮肤病原真菌,产生192 bp(Tm)、460 bp(Mg)、290 bp(Mc)和602 bp(As)的目的片段,最低检测限分别为5.9 pg/μL、6.6 pg/μL、9.5 pg/μL和5.1 pg/μL。被检的15份人工感染样本扩增结果准确,260份毛发样本中未检测出四种真菌。结论所建立的多重PCR方法能够同时对实验动物中的四种皮肤病原真菌进行快速的检测,具有较高的应用价值。 展开更多
关键词 皮肤病原真菌 多重pcr 检测方法 实验动物
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侵染甘薯的SPCSV、SPVG、SPFMV多重RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量:15
15
作者 李华伟 许泳清 +4 位作者 邱思鑫 刘中华 邱永祥 汤浩 余华 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1464-1470,共7页
为建立可同时检测甘薯褪绿矮化病毒(SPCSV)、甘薯G病毒(SPVG)和甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)多重RT-PCR检测方法,本文根据SPCSV热激蛋白基因(hsp70)及SPVG、SPFMV外壳蛋白基因(CP)基因核苷酸序列的保守区域设计特异性引物,通过引... 为建立可同时检测甘薯褪绿矮化病毒(SPCSV)、甘薯G病毒(SPVG)和甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)多重RT-PCR检测方法,本文根据SPCSV热激蛋白基因(hsp70)及SPVG、SPFMV外壳蛋白基因(CP)基因核苷酸序列的保守区域设计特异性引物,通过引物筛选,优化多重RT-PCR反应条件,建立了能同时检测SPCSV、SPVG和SPFMV 3种病毒的多重RT-PCR检测方法。该体系能有效扩增出大小为304、433、601 bp 3个特异性片段。测序结果表明3种病毒与参考序列的一致性达94%-99%。应用建立的多重RT-PCR检测方法可稳定、准确、灵敏地同时检测单一或复合侵染3种甘薯病毒,为甘薯脱毒和病毒病诊断奠定基础。 展开更多
关键词 甘薯病毒 褪绿矮化病毒 G病毒 羽状斑驳病毒 多重RT-pcr 检测方法
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呼吸道病原体核酸检测在下呼吸道感染中的诊断价值 被引量:1
16
作者 李群娟 包艳 +2 位作者 赵继华 高晶 李国华 《实用检验医师杂志》 2025年第1期27-30,共4页
目的 分析呼吸道病原体核酸检测在下呼吸道感染中的诊断价值。方法 收集2023年2月-2024年4月曲靖市妇幼保健院收治的500例疑似下呼吸道感染患儿的临床资料。采用多重荧光PCR法与微生物分离培养法分别检测呼吸道病原体,对比两种方法的阳... 目的 分析呼吸道病原体核酸检测在下呼吸道感染中的诊断价值。方法 收集2023年2月-2024年4月曲靖市妇幼保健院收治的500例疑似下呼吸道感染患儿的临床资料。采用多重荧光PCR法与微生物分离培养法分别检测呼吸道病原体,对比两种方法的阳性标本检出率;采用Kappa检验分析两种方法检测结果的一致性(κ > 0.4代表具有一致性)。结果 多重荧光PCR法检出阳性标本321例,总阳性率为64.20%(321/500);微生物分离培养法检出阳性标本179例,总阳性率为35.80%(179/500);两者比较差异有统计学意义(P < 0.05)。多重荧光PCR法与微生物分离培养法对肺炎克雷伯菌、流感嗜血杆菌、铜绿假单胞菌检出率的一致性分析显示,κ值分别为0.750、0.782、0.753,具有高度一致性(均P < 0.05)。结论 呼吸道病原体核酸检测在下呼吸道感染诊断中检出率较高,且操作简便,可为临床诊断提供可靠依据。 展开更多
关键词 呼吸道病原体 下呼吸道感染 多重荧光pcr 诊断价值
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猪群中7种高发传染病多重PCR诊断方法的建立 被引量:8
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作者 贺显晶 孙东波 +5 位作者 周玉龙 林云成 韩旭 王越强 郭婷婷 武瑞 《畜牧与饲料科学》 2010年第9期4-6,共3页
[目的]建立猪瘟、蓝耳病(又称猪繁殖与呼吸综合征)、圆环病毒2型感染、猪链球菌病、副猪嗜血杆菌病、猪多杀性巴氏杆菌感染和猪支原体感染7种猪病的多重PCR诊断方法。[方法]根据GenBank发表的核苷酸序列设计了分别针对猪瘟、蓝耳病、圆... [目的]建立猪瘟、蓝耳病(又称猪繁殖与呼吸综合征)、圆环病毒2型感染、猪链球菌病、副猪嗜血杆菌病、猪多杀性巴氏杆菌感染和猪支原体感染7种猪病的多重PCR诊断方法。[方法]根据GenBank发表的核苷酸序列设计了分别针对猪瘟、蓝耳病、圆环病毒2型感染、猪链球菌病、副猪嗜血杆菌病、猪多杀性巴氏杆菌感染和猪支原体感染的2套多重PCR特异性引物,优化多重PCR反应条件后进行敏感性与特异性评价。[结果]建立的2套多重PCR诊断方法对其他常见猪病病原的基因组无特异性扩增,检测病原基因组最低浓度可达到pg级。[结论]该研究建立的2套多重PCR诊断方法可以用于猪群中上述7种猪病病原的单一感染或混合感染的鉴别诊断。 展开更多
关键词 猪传染病 多重pcr 诊断方法
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多重PCR在瘢痕疙瘩Fas基因突变分析中的应用 被引量:3
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作者 靳睿 高建华 刘晓军 《中国临床康复》 CSCD 2003年第23期3190-3191,T004,共3页
目的:建立瘢痕疙瘩Fas基因常见突变外显子的多重PCR扩增反应体系,以利进行批量瘢痕疙瘩基因突变的筛选和检测。方法:取正常皮肤、增生瘢痕和瘢痕疙瘩组织DNA样本,根据瘢痕疙瘩Fas基因易发突变的外显子6,8,9之序列,按照多重PCR引物设计原... 目的:建立瘢痕疙瘩Fas基因常见突变外显子的多重PCR扩增反应体系,以利进行批量瘢痕疙瘩基因突变的筛选和检测。方法:取正常皮肤、增生瘢痕和瘢痕疙瘩组织DNA样本,根据瘢痕疙瘩Fas基因易发突变的外显子6,8,9之序列,按照多重PCR引物设计原则,建立3对相应引物,先分别找出各外显子的最佳扩增条件,再进行综合分析,最终找到一个理想的多重PCR扩增条件。结果:各外显子单一扩增片段和多重PCR扩增条带均清晰,产量较高,无非特异性扩增,产物长度与理论值一致;DNA测序证实,各扩增产物即各外显子基因片段。结论:成功建立了瘢痕疙瘩Fas基因常发突变外显子的多重PCR扩增体系,与以往单基因分次扩增相比,实现了一次同时扩增3个基因片段,为瘢痕疙瘩基因诊断和进一步相关的分子生物学研究提供了一个经济、快捷的方法,对于瘢痕疙瘩Fas基因的突变研究具有较高的应用价值。 展开更多
关键词 pcr 瘢痕疙瘩 Fas基因突变 应用 分子生物学
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猪繁殖与呼吸综合征病毒一步多重RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量:2
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作者 吴锦艳 田宏 +6 位作者 尚佑军 陈妍 魏衍全 侯相民 赵娜 何建辉 刘湘涛 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1485-1490,共6页
本研究旨在建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的一步多重RT-PCR检测方法。通过多序列比对以及反应条件的优化,从4对引物中精选了3对特异性和敏感性较好、扩增片段分别为228、345和490bp的引物,并应用所建立的方法对4种分离株的细胞毒... 本研究旨在建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的一步多重RT-PCR检测方法。通过多序列比对以及反应条件的优化,从4对引物中精选了3对特异性和敏感性较好、扩增片段分别为228、345和490bp的引物,并应用所建立的方法对4种分离株的细胞毒和组织毒、田间样品及临床症状相似的疾病猪瘟和猪伪狂犬病毒做了检测;并对田间及实验室样品进行符合率试验,对阳性样品进行重复性试验。与常规RT-PCR法进行比较,证明该方法比常规RT-PCR法敏感性提高了10倍;而且利用该方法可使检测时间大大缩短;特异性试验证实该方法无交叉反应;阳性和阴性样本的符合率均为100%;3次阳性样品重复性检测结果完全相同;稳定性试验显示该试剂盒至少可保存1年以上。本研究所建立的PRRSV一步多重RT-PCR检测方法的敏感性高、特异性强、操作简便、省时、结果重复性好,不仅适用于临床病例尤其低微含量样品的诊断,而且在筛查隐形带毒动物及兽医检疫方面具有重要的应用价值。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 一步多重RT-pcr 检测方法
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Chelex-100提取生物检材DNA实时PCR定量研究 被引量:16
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作者 杨电 刘超 +4 位作者 李越 陈玲 胡慧英 李红霞 陈向红 《中国法医学杂志》 CSCD 2008年第1期29-31,共3页
目的研究Chelex-100法提取的生物检材DNA用量与复合STR分型成功率的关系。方法113份各种生物检材采用Chelex-100法提取DNA,应用Quantifiler人类DNA定量试剂盒在ABI 7500荧光定量PCR仪上进行实时PCR定量,同时用Identifiler复合扩增系统... 目的研究Chelex-100法提取的生物检材DNA用量与复合STR分型成功率的关系。方法113份各种生物检材采用Chelex-100法提取DNA,应用Quantifiler人类DNA定量试剂盒在ABI 7500荧光定量PCR仪上进行实时PCR定量,同时用Identifiler复合扩增系统在ABI 3100遗传分析仪上对这些DNA样品进行STR分型。结果各种生物检材提取的DNA浓度分别为:37份滤纸、纱布血痕0.042~5.28ng/μl,16份口腔拭子1.15—4.21ng/μl,18份烟头0.016~1.46ng/μl,10份肋软骨0.531—14.40ng/μl,8份肌肉5.75—24.80ng/μl,7份指甲0.788—11.50ng/μl,17份精斑0.79~99.50ng/μl。在建立的8μl扩增体系中,根据上述结果,调整用于复合STR扩增的DNA模板量在0.5—3ng之间,大部分样品可获得完全的STR分型。结论Chelex-100法提取的检材DNA模板用量在0.5—3ng之间可得到有效STR扩增,浓度为0.5ng/μl以上的DNA样品,用小体积模板(1μl)比大体积(3μl)模板扩增效果好。 展开更多
关键词 法医物证学 实时定量pcr Chelex-100法 DNA定量 复合STR扩增
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