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外泌体递送CRISPR/Cas系统在靶细胞内可实现基因编辑
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作者 王白燕 杨树 +5 位作者 王弋鸣 吴梦晴 肖瑀 郭梓璇 张博艺 冯书营 《中国组织工程研究》 北大核心 2026年第7期1839-1849,共11页
背景:CRISPR/Cas基因编辑系统具有精准基因编辑、靶向设计简单、低成本以及高效率等特性,已被广泛应用于科学研究和相关临床治疗。然而,CRISPR/Cas系统如何更安全、更高效、更精准地递送到靶细胞内,仍是一个急需解决的难题。目的:从递送... 背景:CRISPR/Cas基因编辑系统具有精准基因编辑、靶向设计简单、低成本以及高效率等特性,已被广泛应用于科学研究和相关临床治疗。然而,CRISPR/Cas系统如何更安全、更高效、更精准地递送到靶细胞内,仍是一个急需解决的难题。目的:从递送CRISPR/Cas系统的外泌体来源及工程化策略、外泌体对CRISPR/Cas系统的装载方法、CRISPR/Cas系统的生物形式及其在细胞内的作用途径等方面进行全方面综述,为该领域的研究者提供更直观、更系统的视角。方法:以“exosome,drug delivery systems,delivery,CRISPR/Cas,gene editing,engineered exosomes,targeting”为英文检索词,以“外泌体,药物递送,CRISPR/Cas,工程化”为中文检索词,分别检索Pub Med数据库及中国知网,检索时限为2014-2024年。通过仔细阅读文献的标题和摘要进行初步筛选,排除研究内容相关性差及内容重复的文献,最终纳入了78篇文献进行归纳和探讨。结果与结论:(1)外泌体是一种直径30-150 nm的脂质囊泡,具有循环半衰期长、靶向组织的内在能力、良好的生物相容性以及较小的固有毒性等优势,显现出强大的靶向递送能力;(2)CRISPR/Cas系统虽是一种强大的基因编辑工具,然而现有的CRISPR/Cas系统递送载体各有利弊,无法完全满足需求;(3)递送CRISPR/Cas系统的外泌体主要来源于高产外泌体的细胞或组织,但研究者们依然需要根据研究所需进行选择或进一步工程化;(4)递送CRISPR/Cas系统的外泌体主要通过基因工程修饰、化学修饰、外泌体-脂质体杂交等策略实现工程化;(5)外泌体装载CRISPR/Cas系统的方法包括电穿孔、孵育、转染和主动装载途径等,选择合适的装载方法取决于CRISPR/Cas系统的理化性质;(6)外泌体递送CRISPR/Cas系统的生物形式包括质粒和核糖核蛋白复合体,两种形式各具特点,成功递送的CRISPR/Cas系统在靶细胞内实现基因编辑。 展开更多
关键词 外泌体 CRISPR/cas系统 基因编辑 药物负载 靶向递送 工程化
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高职专业群与区域产业集群深度融合的案例研究——基于CAS理论视域
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作者 牛同训 《高等工程教育研究》 北大核心 2026年第1期128-133,139,共7页
产教融合是高职院校和产业高质量发展的重要举措。针对高职专业群与区域产业集群“合而不融”等问题,基于复杂适应系统(CAS)理论,分析了集群系统与CAS的相似性,构建了集群系统产教融合分析框架。采用扎根理论方法对9个集群系统案例进行... 产教融合是高职院校和产业高质量发展的重要举措。针对高职专业群与区域产业集群“合而不融”等问题,基于复杂适应系统(CAS)理论,分析了集群系统与CAS的相似性,构建了集群系统产教融合分析框架。采用扎根理论方法对9个集群系统案例进行了质性研究,设计了以政府-市场为主的外部环境系统驱动的集群系统产教融合行为产生机理和产教深度融合的机理模型。突破产教融合的静态研究视角,指出在集群系统产教深度融合中,外部环境系统是重要推手、多元主体适应系统是实施关键、“流”系统是重要保障。根据研究结论,提出了发挥外部环境对集群系统产教深度融合的推动作用、发挥产教融合实施主体的关键作用、发挥“流”系统的保障作用等对策建议,引领集群系统深度融合。 展开更多
关键词 高职专业群 区域产业集群 产教融合 caS理论 案例研究
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膀胱癌患者血清CEA、CA19-9、β2-MG水平与预后的相关性分析
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作者 孟佳丽 林海 孟伟 《医学临床研究》 2026年第1期69-72,共4页
【目的】探讨膀胱癌患者血清癌胚抗原(CEA)、糖类抗原19-9(CA19-9)和β2-微球蛋白(β2-MG)水平与患者预后的相关性。【方法】检测106例膀胱癌患者(观察组),85例体检健康者(对照组)的血清CEA、CA19-9、β2-MG水平,分析其与膀胱癌患者预... 【目的】探讨膀胱癌患者血清癌胚抗原(CEA)、糖类抗原19-9(CA19-9)和β2-微球蛋白(β2-MG)水平与患者预后的相关性。【方法】检测106例膀胱癌患者(观察组),85例体检健康者(对照组)的血清CEA、CA19-9、β2-MG水平,分析其与膀胱癌患者预后的关系及患者死亡的危险因素。【结果】观察组术前、术后的CEA、CA19-9、β2-MG水平高于对照组,且观察组患者术前CEA、CA19-9、β2-MG水平高于术后(均P<0.05)。随访36个月,106例膀胱癌患者中63例存活(生存组),43例死亡(死亡组)。死亡组TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤低分化的比例,以及CEA、CA19-9、β2-MG表达水平均高于生存组(P<0.05)。Logistic多因素回归分析结果显示,TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤低分化,CEA、CA19-9、β2-MG高表达均是膀胱癌患者死亡的危险因素(P<0.05)。CEA、CA19-9、β2-MG高表达组的3年生存率均显著低于低表达组(P<0.05)。【结论】膀胱癌患者血清CEA、CA19-9、β2-MG水平与患者的预后密切相关,其可作为预测膀胱癌患者预后的指标。 展开更多
关键词 膀胱肿瘤 癌胚抗原 ca19-9抗原 Β2微球蛋白 预后
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CRISPR/Cas基因编辑技术在艾滋病治疗中的研究现状与挑战
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作者 杨灿 刘真 +5 位作者 张敏 张清燕 邓博文 李承乘 李杰 郭会军 《中国艾滋病性病》 北大核心 2026年第1期114-119,共6页
艾滋病基因治疗一直是研究者们关注的热点。成簇规律间隔短回文重复序列/CRISPR相关蛋白系统(CRISPR/Cas)设计简单、操作方便、靶向性强、灵敏度高,是新颖有效的第三代“基因组定点编辑技术”。本文综述了CRISPR/Cas系统的历史由来、作... 艾滋病基因治疗一直是研究者们关注的热点。成簇规律间隔短回文重复序列/CRISPR相关蛋白系统(CRISPR/Cas)设计简单、操作方便、靶向性强、灵敏度高,是新颖有效的第三代“基因组定点编辑技术”。本文综述了CRISPR/Cas系统的历史由来、作用机理及艾滋病治疗中的CRISPR/Cas类型,在此基础之上,聚焦于该系统在艾滋病治疗领域的研究进展和应用,从干扰病毒复制周期,清除潜伏前病毒以及调节宿主免疫三方面进行深入分析。同时提出目前存在的诸多挑战:HIV对CRISPR/Cas系统的逃逸、HIV感染细胞中CRISPR/Cas系统的高效递送、针对HIV的CRISPR/Cas独特且多靶点设计、AIDS患者Cas免疫炎症交错复杂。探讨其可能策略,以期为艾滋病基因治疗的开发和临床应用提供方向。 展开更多
关键词 艾滋病 基因治疗 CRISPR/cas基因编辑
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基于CRISPR/Cas9技术构建猪GRSF1基因敲除细胞系及其对细胞活性的影响分析
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作者 杜鹏飞 彭听雨 +3 位作者 范双旗 郑海学 朱紫祥 陈金顶 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第2期161-167,共7页
利用CRISPR/Cas9技术构建鸟嘌呤富含序列因子1(GRSF1)基因敲除的PK-15细胞并探究GRSF1基因敲除对于细胞活性的影响。首先,设计了4条靶向猪源GRSF1基因的sgRNAs(sgRNA-1、sgRNA-2、sgRNA-3和sgRNA-4),经退火后与慢病毒载体质粒(Lenti-CRI... 利用CRISPR/Cas9技术构建鸟嘌呤富含序列因子1(GRSF1)基因敲除的PK-15细胞并探究GRSF1基因敲除对于细胞活性的影响。首先,设计了4条靶向猪源GRSF1基因的sgRNAs(sgRNA-1、sgRNA-2、sgRNA-3和sgRNA-4),经退火后与慢病毒载体质粒(Lenti-CRISPR v2)连接。随后将构建成功的慢病毒载体与辅助质粒pMD2.G和psPAX2共转染人胚胎肾细胞(HEK-293T),获得慢病毒并感染PK-15细胞。最终经嘌呤霉素筛选和梯度稀释法获得GRSF1敲除的PK-15单克隆细胞系。通过Western-blot及测序验证GRSF1的敲除效率,然后进行单克隆细胞活性检测及IL-6水平检测。结果表明,本研究成功获得3株GRSF1基因敲除成功的PK-15单克隆细胞系,并证实GRSF1基因敲除影响PK-15细胞中IL-6表达的上调,为后续研究猪GRSF1的生物学功能提供细胞模型。 展开更多
关键词 GRSF1 PK-15 CRISPR/cas9 基因敲除
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Fixed Point of a Countable Family of Uniformly Totally Quasi- <i>&Oslash</i>-Asymptotically Nonexpansive Multi-Valued Mappings in Reflexive Banach Spaces with Applications 被引量:1
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作者 Yi Li 《Applied Mathematics》 2013年第9期6-12,共7页
The purpose of this article is to discuss a modified Halpern-type iteration algorithm for a countable family of uniformly totally quasi- ? -asymptotically nonexpansive multi-valued mappings and establish some strong c... The purpose of this article is to discuss a modified Halpern-type iteration algorithm for a countable family of uniformly totally quasi- ? -asymptotically nonexpansive multi-valued mappings and establish some strong convergence theorems under certain conditions. We utilize the theorems to study a modified Halpern-type iterative algorithm for a system of equilibrium problems. The results improve and extend the corresponding results of Chang et al. (Applied Mathematics and Computation, 218, 6489-6497). 展开更多
关键词 multi-valueD Mapping Totally Quasi- Ø -Asymptotically NONEXPANSIVE Countable FAMILY of UNIFORMLY Totally Quasi- Ø -Asymptotically NONEXPANSIVE multi-valueD Mappings Firmly Convergence
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Multi-Valued Neuron with Sigmoid Activation Function for Pattern Classification 被引量:2
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作者 Shen-Fu Wu Yu-Shu Chiou Shie-Jue Lee 《Journal of Computer and Communications》 2014年第4期172-181,共10页
Multi-Valued Neuron (MVN) was proposed for pattern classification. It operates with complex-valued inputs, outputs, and weights, and its learning algorithm is based on error-correcting rule. The activation function of... Multi-Valued Neuron (MVN) was proposed for pattern classification. It operates with complex-valued inputs, outputs, and weights, and its learning algorithm is based on error-correcting rule. The activation function of MVN is not differentiable. Therefore, we can not apply backpropagation when constructing multilayer structures. In this paper, we propose a new neuron model, MVN-sig, to simulate the mechanism of MVN with differentiable activation function. We expect MVN-sig to achieve higher performance than MVN. We run several classification benchmark datasets to compare the performance of MVN-sig with that of MVN. The experimental results show a good potential to develop a multilayer networks based on MVN-sig. 展开更多
关键词 PATTERN Classification multi-valueD NEURON (MVN) DIFFERENTIABLE ACTIVATION Function Backpropagation
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CRISPR/Cas系统在分子诊断领域的应用研究进展
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作者 王珂 陈文慧 +1 位作者 雷春阳 聂舟 《合成生物学》 北大核心 2026年第1期3-31,共29页
CRISPR/Cas系统因其高特异性、可编程性和便捷性,已成为分子诊断领域的重要工具。本文综述了CRISPR/Cas系统的技术原理、诊断平台优化及其在精准医学中的应用进展。概述了CRISPR/Cas系统的作用机制与分类,重点讨论了CRISPR诊断技术的创... CRISPR/Cas系统因其高特异性、可编程性和便捷性,已成为分子诊断领域的重要工具。本文综述了CRISPR/Cas系统的技术原理、诊断平台优化及其在精准医学中的应用进展。概述了CRISPR/Cas系统的作用机制与分类,重点讨论了CRISPR诊断技术的创新优化策略,包括基于核酸预扩增[如SHERLOCK(specific highsensitivity enzymatic reporter unlocking)、DETECTR(DNA endonuclease targeted CRISPR trans reporter)]和免扩增的检测方法。探讨了CRISPR/Cas技术在感染性疾病(病原体筛查、耐药性检测)、肿瘤分子分型(癌症早筛、遗传变异分析)及非核酸标志物检测中的临床应用。最后展望了该技术的未来发展方向,包括微型化设备开发、高通量智能化诊断体系构等,并分析了其在临床转化中面临的关键挑战(如灵敏度标准化、成本控制等)。通过总结目前研究,为CRISPR/Cas技术在分子诊断领域的进一步优化和医学应用提供理论参考。 展开更多
关键词 CRISPR/cas系统 即时检测 临床转化应用 微型化设备 人工智能辅助分子诊断
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利用CRISPR/Cas9技术创制糯稻新种质
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作者 潘月云 黄雨青 +3 位作者 丁正权 施扬 黄海祥 李白 《浙江农业学报》 北大核心 2026年第1期17-23,共7页
稻米直链淀粉含量直接影响其蒸煮食味品质,该性状主要由Waxy(Wx)基因控制。本研究基于Wx基因上SNP的表型关联分析,选择其第3、第4外显子设计编辑靶点。利用CRISPR/Cas9技术,以水稻品种嘉禾香1号为受体,对Wx基因进行编辑。经PCR与Sanger... 稻米直链淀粉含量直接影响其蒸煮食味品质,该性状主要由Waxy(Wx)基因控制。本研究基于Wx基因上SNP的表型关联分析,选择其第3、第4外显子设计编辑靶点。利用CRISPR/Cas9技术,以水稻品种嘉禾香1号为受体,对Wx基因进行编辑。经PCR与Sanger测序验证,获得4个不同类型的双位点纯合突变体。4个双位点纯合T 2代突变体株系的稻米均呈蜡质状,其直链淀粉含量由野生型的16.9%降至0.83%~1.23%,达到糯稻水平。结果表明,利用CRISPR/Cas9技术可快速创制优质香糯型水稻种质资源。 展开更多
关键词 水稻 WX基因 CRISPR/cas9 直链淀粉
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基于CRISPR/Cas9技术的西方蜜蜂AmBgb敲除及功能分析
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作者 赖雨 许瑞鑫 +8 位作者 朱雅楠 傅云熙 田林艳 吴胜利 陈志杰 单简 付艳芳 苏松坤 聂红毅 《昆虫学报》 北大核心 2026年第1期34-41,共8页
【目的】核心结合因子(core binding factor,CBF)β亚基(CBFβ)是一种重要的转录因子,在昆虫胚胎发育和免疫调节等过程中发挥关键作用,但是其在西方蜜蜂Apis mellifera中尚未报道。本研究旨在利用CRISPR/Cas9技术探究CBFβ在西方蜜蜂中... 【目的】核心结合因子(core binding factor,CBF)β亚基(CBFβ)是一种重要的转录因子,在昆虫胚胎发育和免疫调节等过程中发挥关键作用,但是其在西方蜜蜂Apis mellifera中尚未报道。本研究旨在利用CRISPR/Cas9技术探究CBFβ在西方蜜蜂中的生理功能。【方法】克隆西方蜜蜂Bgb(big brother)基因AmBgb的编码序列(coding sequence,CDS),并进行生物信息学分析;运用qRT-PCR检测AmBgb在西方蜜蜂不同发育发育阶段(1-3日龄工蜂卵,1,3和5日龄工蜂幼虫,工蜂预蛹,1,3,5,7和9日龄工蜂蛹,刚出房工蜂,10日龄哺育蜂以及21日龄采集蜂)的表达量;采用CRISPR/Cas9敲除西方蜜蜂卵中AmBgb,监测卵的发育和存活情况,并通过PCR和测序的方法检测靶位点,验证AmBgb在西方蜜蜂中的生理功能。【结果】西方蜜蜂AmBgb的CDS全长为759 bp,编码252个氨基酸,第39-201位氨基酸存在1个CBFβ结构域;AmBgb分子量为28982.37 D,无信号肽和跨膜结构,预测其为胞内蛋白;系统进化树显示西方蜜蜂AmBgb与东方蜜蜂A.cerana的Bgb高度同源(氨基酸序列一致性为99.21%),且亲缘关系最密切。AmBgb在2和3日龄工蜂卵中的表达量明显高于其他发育阶段的。基于CRISPR/Cas9处理的西方蜜蜂43粒卵中,有5粒卵孵化为幼虫且AmBgb靶位点无突变;随机对7粒死亡卵进行检测,发现6粒卵中AmBgb的靶位点出现基因编辑,包括不同长度插入、缺失或替换。【结论】西方蜜蜂AmBgb在2和3日龄卵中高量表达,敲除AmBgb导致卵不能正常孵化为幼虫。这些结果表明AmBgb在西方蜜蜂胚胎发育过程中发挥重要作用,这将为其他膜翅目(Hymenoptera)昆虫中该基因的生理功能研究提供理论指导。 展开更多
关键词 西方蜜蜂 核心结合因子β亚基 基因克隆 时期表达谱 CRISPR/cas9
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基于CRISPR/Cas9技术提高番茄果实中番茄红素含量
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作者 张光智 史寒琪 +2 位作者 吴保唐 刘涛 祝建波 《江苏农业科学》 北大核心 2026年第1期27-34,共8页
旨在采用CRISPR/Cas9基因编辑技术对番茄中番茄红素代谢相关的关键基因进行定向编辑,从而提高番茄果实中番茄红素的含量。以石番43亲本为试验材料,基于CRISPR/Cas9系统,构建Sl LCY-E、Sl LCY-B基因的双元表达载体,用农杆菌介导的遗传转... 旨在采用CRISPR/Cas9基因编辑技术对番茄中番茄红素代谢相关的关键基因进行定向编辑,从而提高番茄果实中番茄红素的含量。以石番43亲本为试验材料,基于CRISPR/Cas9系统,构建Sl LCY-E、Sl LCY-B基因的双元表达载体,用农杆菌介导的遗传转化法获得15株番茄再生苗。经PCR检测发现,有9株番茄植株呈阳性,阳性转化率为60%;对阳性植株的靶序列进行测序发现,有7株番茄发生了基因编辑,编辑效率约为77.8%,其中有4株番茄在2个靶位点均发生了基因突变。此外,Sl LCY-E、Sl LCY-B基因之间的编辑效率也存在差异,分别为55.6%、66.7%。基因编辑类型包括碱基缺失、插入。对成熟期番茄进行检测发现,在突变株果实中,番茄红素的含量均高于野生型果实,且不影响其他农艺性状,其中,12号植株果实中的番茄红素含量最高,为野生型的3.2倍。qRT-PCR结果表明,突变株中Sl LCY-E、Sl LCY-B基因的相对表达量多较野生型显著降低。综上,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术抑制了番茄红素环化酶基因的表达,成功提高了果实中番茄红素的含量,同时证明Sl LCY-E、Sl LCY-B基因表达量与番茄红素积累量呈负相关。 展开更多
关键词 番茄 CRISPR/cas9 SlLCY-E SlLCY-B 番茄红素
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类食品乳杆菌LBM 12001基于CRISPR/Cas9技术多基因编辑平台的构建
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作者 黄宗潇 侯倩 +2 位作者 徐岩 黄卫宁 穆晓清 《食品与发酵工业》 北大核心 2026年第3期11-19,共9页
作为传统发酵食品的核心功能菌株,类食品乳杆菌(Lactobacillus paralimentarius)的代谢调控网络解析常受限于低效的遗传操作体系。该研究旨在开发一种高效、无痕的CRISPR/Cas9基因编辑平台,以解决类食品乳杆菌多基因编辑的技术瓶颈。通... 作为传统发酵食品的核心功能菌株,类食品乳杆菌(Lactobacillus paralimentarius)的代谢调控网络解析常受限于低效的遗传操作体系。该研究旨在开发一种高效、无痕的CRISPR/Cas9基因编辑平台,以解决类食品乳杆菌多基因编辑的技术瓶颈。通过优化质粒大小以及引入λ-Red重组酶辅助同源重组,构建了双质粒系统(pCRI01/pCRI02)。实验结果表明,该系统显著提升了转化效率[单基因敲除转化子达(63±11)个,阳性突变率75%],并实现了三基因同步敲除[转化子(57±8)个,突变率(46±7)%]。创新性整合BioBricks模块化组装、温度敏感型复制子及自靶向诱导型sgRNA技术,使多基因编辑周期缩短40%以上。该体系突破了传统方法的效率限制,成功实现多基因无痕编辑,为构建类食品乳杆菌高效细胞工厂提供了关键性技术支撑。 展开更多
关键词 类食品乳杆菌 CRISPR/cas9 多基因编辑 λ-Red重组酶 BioBricks组装
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利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建番茄SlGATA1突变体
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作者 姜杏 刘永胜 +2 位作者 吴子睿 徐雨 苗敏 《合肥工业大学学报(自然科学版)》 北大核心 2026年第2期226-232,共7页
GATA作为一类广泛存在于真核生物中的转录因子,在植物各生长发育阶段和逆境胁迫响应过程中发挥着至关重要的作用。为探究转录因子SlGATA1在番茄植株生长发育和逆境胁迫响应中的具体生物学功能,文章通过实时荧光定量聚合酶链式反应(polym... GATA作为一类广泛存在于真核生物中的转录因子,在植物各生长发育阶段和逆境胁迫响应过程中发挥着至关重要的作用。为探究转录因子SlGATA1在番茄植株生长发育和逆境胁迫响应中的具体生物学功能,文章通过实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)对SlGATA1基因表达模式进行分析,并利用CRISPR/Cas9基因编辑技术对SlGATA1基因进行编辑。结果表明:SlGATA1基因在各组织中均有表达,在种子中的表达量最高;SlGATA1基因的表达受高盐、干旱、高温及病原菌丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae pv.tomato DC3000,Pst DC3000)的影响;通过根癌农杆菌介导的遗传转化体系和CRISPR/Cas9基因编辑技术获得4株稳定遗传的SlGATA1基因敲除突变体,为番茄品种改良提供新的遗传材料。该研究为探究SlGATA1基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 番茄 SlGATA1基因 基因编辑 CRISPR/cas9 逆境胁迫
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MULTI-VALUED TOTALLY QUASI-φ-ASYMPTOTICALLY NONEXPANSIVE SEMI-GROUPS AND STRONG CONVERGENCE THEOREMS IN BANACH SPACES
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作者 张石生 王林 赵云河 《Acta Mathematica Scientia》 SCIE CSCD 2013年第2期589-599,共11页
The purpose of this article is first to introduce the concept of multi-valued to- tally Quasi-φ-asymptotically nonexpansive semi-groups, which contains many kinds of semi- groups as its special cases, and then to mod... The purpose of this article is first to introduce the concept of multi-valued to- tally Quasi-φ-asymptotically nonexpansive semi-groups, which contains many kinds of semi- groups as its special cases, and then to modify the Halpern-Mann-type iteration algorithm for multi-valued totally Quasi-cS-asymptotically nonexpansive semi-groups to have the strong convergence under a limit condition only in the framework of Banach spaces. The results presented in this article improve and extend the corresponding results announced by many authors recently. 展开更多
关键词 multi-valued totally Quasi-q^-asymptotically nonexpansive semi-groups mod-ified Halpern-Mann-type iteration multi-valued quasi-qS-symptotically nonex-pansive semi-groups multi-valued quasi-~b-nonexpansive semi-groups multi-valued relatively nonexpansive semi-groups generalized projection
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基于环介导等温扩增和CRISPR/Cas系统的转基因玉米和大豆快速准确现场检测
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作者 朱媛媛 杨天怡 +9 位作者 杜俊刚 马斯韩 陈艳菊 刘海荣 叶合肥 严忠军 黄之斌 虞子锋 杨群清 吴坚 《食品科学》 北大核心 2026年第2期21-29,共9页
为应对基于核酸扩增的分子生物学检测转基因粮食方法所面临操作复杂、检测时间长和设备昂贵等挑战,本研究以玉米和大豆为主要研究对象,研发了一种高效快速、无需纯化或稀释的核酸提取方法。同时筛选了高效、特异的转基因标签引物,建立... 为应对基于核酸扩增的分子生物学检测转基因粮食方法所面临操作复杂、检测时间长和设备昂贵等挑战,本研究以玉米和大豆为主要研究对象,研发了一种高效快速、无需纯化或稀释的核酸提取方法。同时筛选了高效、特异的转基因标签引物,建立了针对转基因玉米和大豆的转基因快速环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)体系和防污染体系。此外,建立了一种基于规律成簇间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeat,CRISPR)/CRISPR相关蛋白(CRISPR-associated protein,Cas)系统的可视化快速检测方法。该检测方法可在45 min内完成转基因检测,对转基因大豆和玉米的代表性转基因成分检测限达0.1%。该方法可实现转基因粮食的快速精准检测,有助于提高粮食监管水平,具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 转基因粮食 核酸提取 现场检测 环介导等温扩增 CRISPR/cas系统
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基于重组酶聚合酶扩增和CRISPR/Cas12a系统的2种快速检测奇异变形杆菌的方法
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作者 江艺浩 唐田 +6 位作者 余婕 甘善萍 谢轶 何秋蓉 杨罗 田绿波 汪川 《微生物学通报》 北大核心 2026年第1期519-535,共17页
【背景】奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)是一种重要的致病菌,能够引起人类和动物感染。目前针对该菌的快速检测技术研究较为匮乏,这为临床早期诊断和精准防治工作带来挑战。【目的】基于不同原间隔序列临近基序(protospacer adjacent ... 【背景】奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)是一种重要的致病菌,能够引起人类和动物感染。目前针对该菌的快速检测技术研究较为匮乏,这为临床早期诊断和精准防治工作带来挑战。【目的】基于不同原间隔序列临近基序(protospacer adjacent motif,PAM)序列策略,构建基于重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)和CRISPR/Cas12a系统的2种检测平台,实现对奇异变形杆菌的快速检测。【方法】针对奇异变形杆菌保守基因建立基于RPA和CRISPR/Cas12a系统的一步法和两步法检测平台。一步法平台在39℃条件下同时进行RPA与CRISPR/Cas12a反应,实时收集荧光信号;两步法平台则首先在39℃条件下进行RPA扩增,扩增完成后通过瞬时离心将CRISPR/Cas12a体系移至管底,继续在39℃条件下进行反应以产生荧光信号。优化反应条件后,评估2种方法对奇异变形杆菌临床分离株及其他常见细菌样本的检测灵敏度和特异性。【结果】成功建立了基于RPA和CRISPR/Cas12a的2种检测平台,均可在30 min内检测到最低2.8 copies/μL的标准质粒。在使用热裂解法对样本进行预处理时,一步法灵敏度为10~6 CFU/mL,而两步法灵敏度为10~3 CFU/mL;在对模拟样本进行基因组DNA提取后,一步法和两步法灵敏度分别为10~2 CFU/mL和10~1 CFU/mL。两种方法在30例临床分离株样本中均表现出良好的检出能力,与其他常见致病菌无交叉反应,具有良好的特异性。【结论】本研究基于不同的PAM序列设计策略,构建了针对奇异变形杆菌的RPA-CRISPR/Cas12a一步法和两步法检测平台,具有快速、灵敏、特异的优点,有望在奇异变形杆菌现场检测中应用。 展开更多
关键词 奇异变形杆菌 重组酶聚合酶扩增 CRISPR/cas12a 次优PAM序列
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益智清心方调控PKA/CaN通路改善阿尔茨海默病模型小鼠认知功能的机制
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作者 郭晓晨 刘剑刚 +4 位作者 石丹丹 宁梓淇 张瑶瑶 刘方 刘美霞 《中国实验方剂学杂志》 北大核心 2026年第3期97-108,共12页
目的:基于蛋白激酶A(PKA)/钙调磷酸酶(CaN)信号通路,探讨益智清心方调控线粒体Ca^(2+)稳态和动力学平衡改善阿尔茨海默病(AD)线粒体功能障碍的作用机制。方法:将60只3月龄淀粉样前体蛋白(APP)/早老素1(PS1)双转基因小鼠随机分为模型组... 目的:基于蛋白激酶A(PKA)/钙调磷酸酶(CaN)信号通路,探讨益智清心方调控线粒体Ca^(2+)稳态和动力学平衡改善阿尔茨海默病(AD)线粒体功能障碍的作用机制。方法:将60只3月龄淀粉样前体蛋白(APP)/早老素1(PS1)双转基因小鼠随机分为模型组、多奈哌齐组(0.65 mg·kg^(-1))、益智清心方低剂量组(2.6 g·kg^(-1))、益智清心方中剂量组(5.2 g·kg^(-1))及益智清心方高剂量组(10.4 g·kg^(-1)),每组12只。同遗传背景的C57BL/6J小鼠12只作为正常组。各治疗组每日灌胃给药,模型组与正常组给予等容积生理盐水,连续干预12周。采用新物体识别(NOR)和Morris水迷宫(MWM)实验评估小鼠学习记忆能力;苏木素-伊红(HE)/尼氏(Nissl)染色观察海马组织病理学改变;透射电子显微镜(TEM)观察线粒体超微结构;氟-4乙酰氧甲基酯(Fluo-4 AM)Ca^(2+)探针测定脑组织胞浆内Ca^(2+)浓度;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马组织中PKA、CaN、钠/钙/锂交换器(NCLX)、线粒体钙单向转运体(MCU)、钙调蛋白(CaM)、动力相关蛋白1(Drp1)、磷酸化(p)-Drp1[丝氨酸637位点(S637)]蛋白的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测PKA、CaN、CaM、NCLX、MCU、Drp1 mRNA的表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠识别指数(RI)降低(P<0.01),穿越原平台区域次数、目标象限停留时间及路程缩减(P<0.01),PKA、NCLX、p-DRP1(ser637)蛋白表达减少(P<0.05),PKA、NCLX mRNA表达减少(P<0.05);而逃避潜伏期延长(P<0.05),细胞内Ca^(2+)水平升高(P<0.01);CaN、CaM、MCU、Drp1蛋白表达及CaN、MCU、Drp1 mRNA表达增加(P<0.05)。经多奈哌齐及益智清心方干预后,与模型组比较,治疗组小鼠RI提升(P<0.05),穿越平台次数、目标象限停留时间增加(P<0.05),PKA、NCLX、p-Drp1(ser637)蛋白表达及PKA、NCLX mRNA表达增加(P<0.05);第4~5天逃避潜伏期缩短(P<0.05),细胞内Ca^(2+)水平降低(P<0.05),CaN、CaM、MCU、Drp1蛋白表达及CaN、MCU、Drp1 mRNA表达减少(P<0.05)。结论:益智清心方通过调控PKA/CaN通路,上调PKA、NCLX、p-Drp1(ser637)蛋白表达,降低CaN、CaM、MCU、Drp1蛋白表达,调节Ca^(2+)稳态和线粒体动力学平衡,从而提升AD小鼠的空间学习与记忆能力。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 益智清心方 蛋白激酶A(PKA)/钙调磷酸酶(caN)信号通路 ca^(2+)稳态 线粒体动力学
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左侧海马CA4区血脑屏障通透性升高与卒中后认知障碍的关系
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作者 王帅国 王子豪 +2 位作者 荆京 林金嬉 孟霞 《首都医科大学学报》 北大核心 2026年第1期54-61,共8页
目的探索左侧海马阿蒙角4(cornu ammonis 4,CA4)区血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性与卒中后认知障碍(post-stroke cognitive impairment,PSCI)之间的关系。方法本研究为多中心前瞻性队列研究,连续纳入97例短暂性脑缺血发作(tra... 目的探索左侧海马阿蒙角4(cornu ammonis 4,CA4)区血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性与卒中后认知障碍(post-stroke cognitive impairment,PSCI)之间的关系。方法本研究为多中心前瞻性队列研究,连续纳入97例短暂性脑缺血发作(transient ischemic attack,TIA)/轻型缺血性卒中患者。入院7 d内行动态对比增强磁共振成像,基于Patlak模型计算海马亚区BBB通透性参数——容积转运常数(volume transfer constant,K trans)。根据随访6个月时蒙特利尔认知评估量表(Montreal Cognitive Assessment,MoCA)评分,将患者分为PSCI与卒中后非认知障碍(post-stroke non-cognitive impairment,PSNCI)组。采用多因素Logistic回归探讨左侧海马CA4区BBB通透性与认知结局的关系。结果65例患者完成随访,其中PSCI组13例(20.0%)。PSCI组患者年龄大、教育年限短、基线MoCA评分低(P<0.05)。左侧海马CA4区BBB通透性升高与MoCA总分下降相关,并与执行功能和命名能力评分呈负相关。左侧海马CA4区BBB通透性升高是PSCI的独立危险因素。结论左侧海马CA4区BBB通透性升高与TIA/轻型缺血性卒中患者6个月时的认知评分较低独立相关,可作为预测PSCI的潜在影像学标志物。 展开更多
关键词 卒中后认知障碍 短暂性脑缺血发作 轻型缺血性卒中 血脑屏障 海马ca4区 动态对比增强磁共振成像
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外源Ca^(2+)通过提高抗氧化和渗透调节能力增强黄瓜幼苗耐热性
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作者 郑栋文 李旋 +4 位作者 胡欣蕊 席世博 肖怀娟 王吉庆 汪虎 《中国瓜菜》 北大核心 2026年第2期95-100,共6页
为了探究外源Ca^(2+)调控黄瓜幼苗耐热性的作用机制,以津优35号黄瓜为试验对象,设置5个外源Ca^(2+)处理水平,即5 mmol·L^(-1)(T1)、10 mmol·L^(-1)(T2)、20 mmol·L^(-1)(T3)、30 mmol·L^(-1)(T4)和40 mmol·L^(... 为了探究外源Ca^(2+)调控黄瓜幼苗耐热性的作用机制,以津优35号黄瓜为试验对象,设置5个外源Ca^(2+)处理水平,即5 mmol·L^(-1)(T1)、10 mmol·L^(-1)(T2)、20 mmol·L^(-1)(T3)、30 mmol·L^(-1)(T4)和40 mmol·L^(-1)(T5),以清水为对照(CK),筛选缓解黄瓜幼苗高温胁迫的适宜Ca^(2+)浓度和探索Ca^(2+)缓解高温胁迫的生理机制。结果表明,T2处理可有效降低黄瓜叶片细胞损伤,显著提高高温胁迫下黄瓜幼苗过氧化物酶和抗坏血酸过氧化物酶活性,相较于CK分别显著提高34.33%和22.71%,可溶性蛋白和脯氨酸含量相较于CK分别显著提高22.65%和20.04%,增强了黄瓜幼苗抗氧化和渗透调节能力。此外,T2处理显著缓解了高温胁迫对黄瓜幼苗最大光化学效率F_(v)/F_(m)和根系活力的抑制作用,相较于CK分别提高21.57%和30.77%,从而维持高温胁迫下黄瓜幼苗地上和地下部的正常代谢活动。综上,10 mmol·L^(-1)CaCl_(2)溶液为增强黄瓜幼苗耐热性的合适浓度,可在高温环境下的黄瓜生产中推广应用。 展开更多
关键词 黄瓜 耐热性 ca^(2+) 活性氧 渗透调节物质
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A NOVEL MULTI-VALUED BAM MODEL WITH IMPROVED ERROR-CORRECTING CAPABILITY
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作者 Zhang Daoqiang Chen Songcan (College of Info. Sci. Tech., Nanjing Univ. of Aeronautics and Astronautics, Nanjing 210016) 《Journal of Electronics(China)》 2003年第3期220-223,共4页
A Hyperbolic Tangent multi-valued Bi-directional Associative Memory (HTBAM) model is proposed in this letter. Two general energy functions are defined to prove the stability of one class of multi-valued Bi-directional... A Hyperbolic Tangent multi-valued Bi-directional Associative Memory (HTBAM) model is proposed in this letter. Two general energy functions are defined to prove the stability of one class of multi-valued Bi-directional Associative Mernorys(BAMs), with HTBAM being the special case. Simulation results show that HTBAM has a competitive storage capacity and much more error-correcting capability than other multi-valued BAMs. 展开更多
关键词 Bi-directional associative memory Recurrent neural network multi-value
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