期刊文献+
共找到1,470篇文章
< 1 2 74 >
每页显示 20 50 100
Development of Multi-PCR for Differentiation of Vaccine Strain and Field Isolate of Porcine Pseudorabies Virus 被引量:2
1
作者 蔺芳 尹双辉 +2 位作者 尚佑军 刘艳红 刘湘涛 《Animal Husbandry and Feed Science》 CAS 2009年第2期36-38,46,共4页
Three pairs of primer were designed for amplification of porcine pseudorabies virus (PRV) gB, gE, and TK gene by multiplex PCR (multi-PCR) in order to differentiate vaccine strains from field isolates. Three speci... Three pairs of primer were designed for amplification of porcine pseudorabies virus (PRV) gB, gE, and TK gene by multiplex PCR (multi-PCR) in order to differentiate vaccine strains from field isolates. Three specific bands were obtained respectively at the expected size, 427 bp (gB gene), 298 bp (gEgene), and 208 bp (TKgene), Then four different gene-deleted vaccines of PRV were detected by multi-PCR. One ex- pected specific band was observed in one of samples, while two bands in the others. As shown by the detection results, the multi-PCR has high sensitivity and specificity and should be applied in pathogen diagnosis and epidemiological investigation in the future. 展开更多
关键词 Porcine pseudorabies virus multi-pcr Differentiation detection
在线阅读 下载PDF
易错PCR技术改造黑曲霉β-甘露聚糖酶的耐温性
2
作者 陈晓飞 李珊珊 +3 位作者 周伏忠 刘德海 王佰涛 刁文涛 《中国饲料》 北大核心 2025年第17期53-60,共8页
为改造黑曲霉来源的β-甘露聚糖酶基因Man26A,获得耐温性重组β-甘露聚糖酶,本试验通过易错PCR技术(在PCR体系中加入不同水平的MnCl_(2)),将目的基因Man26A克隆至载体pGAPZαA上,构建重组质粒pGAPZαA-Man26A,将重组质粒电转化至毕赤酵... 为改造黑曲霉来源的β-甘露聚糖酶基因Man26A,获得耐温性重组β-甘露聚糖酶,本试验通过易错PCR技术(在PCR体系中加入不同水平的MnCl_(2)),将目的基因Man26A克隆至载体pGAPZαA上,构建重组质粒pGAPZαA-Man26A,将重组质粒电转化至毕赤酵母GS115中,在含有100μg/mL博来霉素的YPDS平板上筛选耐温性突变体,并测定重组酶的酶学性质。本试验筛选出2株产耐温性β-甘露聚糖酶的重组突变体3-228和4-59,两重组酶的最适pH和温度分别为5.0和45℃,均与野生型酶相同,但与野生型相比,两重组酶的工作温度范围更加宽泛,且温度稳定性显著提高;金属离子Fe^(2+)、Mg^(2+)、Mn^(2+)、K+、Ca^(2+)、Co^(2+)对β-甘露聚糖酶活力有不同程度的激活作用,SDS、EDTA、Cd^(2+)、Cu^(2+)、Ni^(2+)、Ag^(2+)、Fe^(3+)、Pb^(2+)等对酶活力有不同的抑制作用。2个耐温性重组β-甘露聚糖酶均具有工作温度范围广、耐温性强等特点,提高了其在饲料工业上的应用潜力,证明了易错PCR技术是提高酶温度稳定性的有效方法。 展开更多
关键词 Β-甘露聚糖酶 易错pcr 耐温性 酶学性质
在线阅读 下载PDF
转基因耐除草剂玉米LW2-1转化体特异性数字PCR检测方法的建立
3
作者 龙丽坤 杨帆 +6 位作者 闫伟 何禹璇 赵宁 邢珍娟 董立明 马月 李飞武 《玉米科学》 北大核心 2025年第11期28-36,共9页
基于微滴式数字PCR平台,开发一种针对转基因玉米LW2-1转化体的二重微滴式数字PCR定量检测方法。通过设计针对LW2-1特异性插入片段序列的引物和探针,优化其工作浓度和退火温度,建立了最佳反应条件;对方法的特异性、动态线性范围、检测限... 基于微滴式数字PCR平台,开发一种针对转基因玉米LW2-1转化体的二重微滴式数字PCR定量检测方法。通过设计针对LW2-1特异性插入片段序列的引物和探针,优化其工作浓度和退火温度,建立了最佳反应条件;对方法的特异性、动态线性范围、检测限、定量限及重复性进行参数的验证。结果表明,该方法具有优良的特异性,线性范围覆盖20~40000拷贝的LW2-1基因组DNA,检测限低至10拷贝,定量限达到0.1%。在对不同含量转基因玉米LW2-1样品的ddPCR定量分析中,与实时荧光定量PCR相比,该方法表现出更高的灵敏度、稳定性和准确性,适用于无需依赖标准物质的精确转基因成分定量分析。 展开更多
关键词 转基因玉米 LW2-1 微滴式数字pcr 定量检测
原文传递
转基因耐除草剂大豆LP012-1转化体实时荧光定量PCR检测方法的研究 被引量:1
4
作者 张月秋 傅芳奇 +9 位作者 张华 陈一帆 王晨尧 蒋红叶 李亚辉 廖一尘 王丹 孙宇 付伟 陈红 《生物技术进展》 2025年第2期276-286,共11页
转化体标准化检测方法为生物育种产业化的应用和定量标识制度实施提供了重要的技术支撑。基于插入序列左边界的信息,以耐除草剂大豆LP012-1转化体为研究对象,建立了实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测方法。以外源... 转化体标准化检测方法为生物育种产业化的应用和定量标识制度实施提供了重要的技术支撑。基于插入序列左边界的信息,以耐除草剂大豆LP012-1转化体为研究对象,建立了实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测方法。以外源插入序列位点左边界为靶标序列设计引物及其相应的探针,筛选获得了最优的引物组合,并优化引物探针浓度和退火温度,确定线性动力学范围在0.018~100 ng,检出限和定量限分别为0.05%、0.10%;正确度、精密度、实验室内稳健性和实验室间的联合验证误差均小于25%。研究建立的qPCR检测方法特异性好、灵敏度高、稳健性强,可以为耐除草剂转基因大豆LP012-1的安全监管提供技术支撑,并服务于生物育种商业化。 展开更多
关键词 转基因大豆 实时荧光定量pcr LP012-1转化体
在线阅读 下载PDF
血清学检测指标及实时荧光定量PCR检测在侵袭性念珠菌病患者中的诊断价值
5
作者 MD ALI HOSSAIN 彭亮 +2 位作者 袁余 周晓涵 马莹 《四川大学学报(医学版)》 北大核心 2026年第1期170-176,共7页
目的 评估血清学检测指标1, 3-β-D-葡聚糖试验(G试验)、念珠菌甘露聚糖(Mn)抗原、念珠菌甘露聚糖IgG抗体(Mn-IgG)和实时荧光定量PCR(qPCR)检测在侵袭性念珠菌病(IC)患者中的临床诊断价值。方法 收集四川大学华西医院2022年12月-2024年1... 目的 评估血清学检测指标1, 3-β-D-葡聚糖试验(G试验)、念珠菌甘露聚糖(Mn)抗原、念珠菌甘露聚糖IgG抗体(Mn-IgG)和实时荧光定量PCR(qPCR)检测在侵袭性念珠菌病(IC)患者中的临床诊断价值。方法 收集四川大学华西医院2022年12月-2024年12月期间通过血培养及无菌体液培养确诊为IC患者的血清样本79例作为IC组,排除IC感染患者的血清样本83例作为非IC组,进行G试验(磁微粒化学发光法)、Mn抗原(ELISA法)、Mn-IgG抗体(化学发光法)和qPCR检测。比较分析G试验、Mn抗原、Mn-IgG抗体和qPCR检测及联合检测对IC诊断的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值,绘制受试者工作特征(ROC)曲线并计算ROC曲线下面积(AUC)。结果 3种血清学检测指标单独检测对IC诊断的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为:G试验62.03%、94.87%、92.45%、71.15%;Mn抗原65.63%、86.59%、79.25%、76.34%;Mn-IgG抗体31.65%、87.95%、71.43%、57.48%。G试验、Mn抗原、Mn-IgG三项联合检测敏感性提高至73.44%。基于ROC曲线分析,各血清学检测指标诊断IC的AUC分别为:G试验0.862(95%CI:0.803-0.922)、Mn试验0.853(95%CI:0.790-0.915)、Mn-IgG 0.603(95%CI:0.514-0.692)。G试验+Mn试验两项联合检测、G试验+Mn-IgG两项联合检测、G试验+Mn试验+Mn-IgG三项联合检测的AUC分别为0.875(95%CI:0.809-0.925)、0.869(95%CI:0.805-0.917)和0.875(95%CI:0.809-0.924),优于单独检测。qPCR对IC诊断的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为100.00%、98.80%、98.75%、100.00%。以培养菌株基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF MS)鉴定结果为金标准,qPCR检测对白念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌的诊断一致性分别为100.00%、100.00%、94.44%和90.00%。结论 G试验、Mn抗原和Mn-IgG抗体联合检测可提高诊断敏感性,有助于IC的早期诊断。qPCR对IC具有优异的诊断性能,可将IC常见念珠菌鉴定至种水平,并可覆盖其他念珠菌种,与临床培养方法结果一致性好。 展开更多
关键词 1 3-β-D葡聚糖 念珠菌甘露聚糖抗原 念珠菌甘露聚糖IgG抗体 实时荧光定量pcr 侵袭性念珠菌病
原文传递
转基因耐除草剂大豆LP012-1转化体普通PCR定性检测方法的研究
6
作者 张月秋 傅芳奇 +8 位作者 赵桐桐 陈子言 裴欣瑶 高芳瑞 李佳岢 李辉 江晓丹 王颢潜 陈红 《生物技术进展》 2025年第3期466-475,共10页
转基因耐除草剂大豆LP012-1转化体由我国企业自主研发,具有广阔的生物育种产业化应用前景。通过建立LP012-1转化体的定性检测方法,可为标识管理和安全监管提供有力支撑。基于此,从优化DNA提取方法、设计转化体特异性引物并优化引物浓度... 转基因耐除草剂大豆LP012-1转化体由我国企业自主研发,具有广阔的生物育种产业化应用前景。通过建立LP012-1转化体的定性检测方法,可为标识管理和安全监管提供有力支撑。基于此,从优化DNA提取方法、设计转化体特异性引物并优化引物浓度和退火温度、验证方法特异性、测试检出限以及其稳健性等方面构建LP012-1转化体的普通PCR定性检测方法。研究建立了灵敏度高、特异性好的LP012-1转化体检测方法,填补了该转化体定性检测方法的空白,可为后期的规范管理和推广应用提供支持。 展开更多
关键词 转基因耐除草剂大豆 pcr定性检测 LP012-1转化体
在线阅读 下载PDF
γ-干扰素体外释放试验与荧光PCR探针熔解曲线法应用于结核病及其耐药性快速诊断的价值
7
作者 杨清梅 邱艺辉 《福建医药杂志》 2025年第12期41-44,共4页
目的探讨γ-干扰素体外释放试验(IGRA)与荧光PCR探针熔解曲线法(PMCA)在结核病及其耐药性快速诊断中的应用价值。方法回顾性分析2023年7月至2024年10月厦门市第三医院收治的100例结核病患者及同期50例非结核病就诊者的临床资料。以分枝... 目的探讨γ-干扰素体外释放试验(IGRA)与荧光PCR探针熔解曲线法(PMCA)在结核病及其耐药性快速诊断中的应用价值。方法回顾性分析2023年7月至2024年10月厦门市第三医院收治的100例结核病患者及同期50例非结核病就诊者的临床资料。以分枝杆菌液体培养阳性且鉴定为结核分枝杆菌复合群为结核病诊断金标准,评估IGRA的诊断效能;以基于液体培养的药物敏感性试验(DST)为耐药结核病诊断金标准,分析PMCA检测患者对一线抗结核药物(利福平、异烟肼、链霉素和乙胺丁醇)的耐药效能。结果150例就诊者中,IGRA共检出阳性83例,漏诊19例,误诊2例;其在结核病诊断中的灵敏度、特异度及符合率分别为81.00%、96.00%和86.00%。在100例结核病患者药物特异性耐药检测中,PMCA诊断利福平、异烟肼、链霉素和乙胺丁醇的灵敏度分别为97.06%、94.59%、78.57%和74.07%;特异度分别为96.97%、96.83%、87.50%和84.93%;与DST结果的总符合率分别为97.00%、96.00%、85.00%和82.00%。结论IGRA与PMCA在结核病及其耐药性的快速诊断中具有较高的应用价值。 展开更多
关键词 耐药结核病 γ-干扰素体外释放试验 荧光pcr探针熔解曲线法 快速诊断
暂未订购
调理肉制品中的小肠结肠炎耶尔森氏菌叠氮溴化丙锭-实时荧光定量PCR检测方法的建立
8
作者 宋帆 《现代食品》 2025年第7期209-214,共6页
为缩短检测周期,排除死菌DNA的干扰,采用实时荧光定量PCR对调理肉制品中的小肠结肠炎耶尔森氏菌进行检测。方法:采用叠氮溴化丙锭(Propidium Monoazide,PMA)鉴别死活菌,检测目标菌中的特异性基因片段,构建利用PMA预处理结合实时荧光定量... 为缩短检测周期,排除死菌DNA的干扰,采用实时荧光定量PCR对调理肉制品中的小肠结肠炎耶尔森氏菌进行检测。方法:采用叠氮溴化丙锭(Propidium Monoazide,PMA)鉴别死活菌,检测目标菌中的特异性基因片段,构建利用PMA预处理结合实时荧光定量PCR的特异性检测方案。结果:在PMA工作浓度为40μg·mL^(-1)、暗孵育时间为10 min、曝光时间为20 min的最佳方案下处理,可在不影响目标活菌正常扩增的同时抑制死菌的干扰。本方法快速准确,检验周期可缩短到48 h,在1.2×10^(3) CFU·mL^(-1)菌量下仍能有效检出目标菌。结论:本方法特异性强、灵敏度高,适用于突发事件中检测调理肉制品中的小肠结肠炎耶尔森氏菌。 展开更多
关键词 调理肉制品 小肠结肠炎耶尔森氏菌 叠氮溴化丙锭-实时荧光定量pcr
在线阅读 下载PDF
犬瘟热、犬冠状病毒联合RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量:24
9
作者 乔军 孟庆龄 +2 位作者 夏咸柱 何宏彬 范泉水 《西南农业学报》 CSCD 2002年第1期93-95,共3页
用CDV、CCV特异性引物对同一样品中CDV和CCVRNA模板进行联合RT PCR扩增 ,并对扩增条件进行了优化。结果同时得到了两条大小与试验设计完全相符的特异性扩增带 ,且不扩增犬细小病毒、犬腺病毒、犬副流感病毒、轮状病毒的核酸。敏感性试... 用CDV、CCV特异性引物对同一样品中CDV和CCVRNA模板进行联合RT PCR扩增 ,并对扩增条件进行了优化。结果同时得到了两条大小与试验设计完全相符的特异性扩增带 ,且不扩增犬细小病毒、犬腺病毒、犬副流感病毒、轮状病毒的核酸。敏感性试验表明 ,该联合PCR能检测出 10 - 4倍稀释的CDV模板 (10 6 6 TCID50 / 0 1mL)和 10 - 3倍稀释的CCV模板 (10 5 9TCID50 /0 1mL)。通过对 7份临床发病犬病料的检测 ,其阳性检出率高于电镜负染检查。初步应用表明 ,此法具有高度敏感、特异、准确、快速等特点 ,适用于兽医临床对CDV。 展开更多
关键词 犬瘟热 犬冠状病毒 RT-pcr检测 应用 特异性引物 核酸 敏感性 CCV模板 电镜负染 兽医临床
在线阅读 下载PDF
多重PCR技术鉴定番茄Ty-1和Mi基因 被引量:27
10
作者 于力 朱龙英 +3 位作者 万延慧 杨少军 朱为民 薛林宝 《分子植物育种》 CAS CSCD 2008年第1期165-169,共5页
利用同一PCR反应体系,对分别与番茄(Lycopersion esculentum)抗黄化曲叶病毒(Tomato YellowLeaf Curl virus)病的Ty-1基因和番茄抗根结线虫(root-knot nematode)的Mi基因紧密连锁的SCAR标记进行同时扩增筛选,扩增的特异性片段与单引物... 利用同一PCR反应体系,对分别与番茄(Lycopersion esculentum)抗黄化曲叶病毒(Tomato YellowLeaf Curl virus)病的Ty-1基因和番茄抗根结线虫(root-knot nematode)的Mi基因紧密连锁的SCAR标记进行同时扩增筛选,扩增的特异性片段与单引物扩增片段完全吻合。与Ty-1基因紧密连锁的SCAR1标记为共显性标记,抗感材料均产生398bp的特异片段,纯合和杂合抗病基因型存在Taq I酶切位点,酶切后分别产生了303bp和95bp以及398bp、303bp和95bp的特异性片段,而感病基因型无此酶切位点。与Mi基因紧密连锁的SCAR2标记也为共显性标记,抗感材料均产生750bp的特异片段,纯合和杂合抗病基因型存在Taq I酶切位点,酶切后分别产生了570bp和180bp以及750bp、570bp和180bp的特异性片段,而感病基因型无此酶切位点。酶切结果仍为750bp的产物。经反复验证,结果准确可靠,可以用于在同一PCR反应体系中对两个抗病基因进行同时筛选鉴定。 展开更多
关键词 番茄 Ty-1 MI 多重pcr 分子标记
在线阅读 下载PDF
利用多重PCR反应同时筛选番茄Cf-9和Tm-1基因 被引量:9
11
作者 宋燕 陈丽静 +4 位作者 李君明 张智 李天来 徐和金 周永健 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 2006年第2期165-169,共5页
利用同一PCR反应体系,对分别与番茄抗叶霉病的Cf-9基因和抗番茄烟草花叶病毒病的Tm-1基因紧密连锁的PCR标记进行了同时扩增筛选,扩增的特异性片段与单引物扩增片段吻合。其中与Cf-9基因紧密连锁的CAPs标记在抗感试材均可扩增出560bp的... 利用同一PCR反应体系,对分别与番茄抗叶霉病的Cf-9基因和抗番茄烟草花叶病毒病的Tm-1基因紧密连锁的PCR标记进行了同时扩增筛选,扩增的特异性片段与单引物扩增片段吻合。其中与Cf-9基因紧密连锁的CAPs标记在抗感试材均可扩增出560bp的特异片段,且都存在TaqI酶切位点,抗病基因型酶切后分别产生了450bp、330bp和290bp的不同特异性片段,而感病基因型试材酶切后产生450bp和290bp的特异性片段;与Tm-1基因紧密连锁的SCAR标记为显性标记,只有抗病试材产生750bp的特异片段,不能被TaqI酶切。经反复验证,结果稳定准确,可用于在同一PCR反应体系中对两个抗病基因进行同时筛选鉴定。该体系的建立不仅省时、省工、节省费用,而且可用于苗期辅助选育,加快番茄抗病育种进程。 展开更多
关键词 番茄 多重pcr反应 叶霉病 番茄烟草花叶病毒病
在线阅读 下载PDF
应用多重荧光Real-time PCR快速鉴定猪链球菌2型 被引量:5
12
作者 王君玮 王志亮 +5 位作者 王伟伟 赵永刚 孙承英 李林 赵云玲 张维 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1083-1087,共5页
目的建立能同时鉴定链球菌2型(S.suis2)和确定主要毒力标志MRP的快速检测方法。方法根据S.suis2CPS2J与MRP的保守序列,设计并合成了2对引物及其相应探针。通过优化各反应物的浓度、配比和循环程序,建立能从组织中直接检测CPS2J和MRP的... 目的建立能同时鉴定链球菌2型(S.suis2)和确定主要毒力标志MRP的快速检测方法。方法根据S.suis2CPS2J与MRP的保守序列,设计并合成了2对引物及其相应探针。通过优化各反应物的浓度、配比和循环程序,建立能从组织中直接检测CPS2J和MRP的实时荧光PCR方法。结果能在3h内对送检组织样品检测确定S.suis2型和MRP毒力基因,最低检测菌体浓度24CFU/ml。与普通PCR相比,敏感性在检测CPS2J时比普通PCR高至少10倍以上,而在检测MRP时比其高100倍。与葡萄球菌、化脓链球菌、沙门氏菌、S.suis1型、9型等无交叉反应。同一人在试剂放置0d、20d和60d检测,以及不同人用同一方法检测,变异系数均小于5%,差异不显著。用于检测SSsc0501攻毒后的样品,结果在心、肝、脾、肺、肾、淋巴结、脑中均检测到S.suis2阳性,MRP阳性。而在肌肉中,S.suis2和MRP均为阴性。结论建立的多重荧光Real-timePCR敏感性高、特异性强,稳定性和重复性好,能用于可疑S.suis2型组织样品的快速定型和毒力鉴定。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 多重荧光pcr MRP CPS2J
在线阅读 下载PDF
铜绿假单胞菌采用肠杆菌属重复基因间隔共有序列-PCR的分析 被引量:8
13
作者 周俊英 周新 +1 位作者 付有荣 郭清莲 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期846-849,共4页
目的探讨铜绿假单胞菌(PAE)多重耐药情况,为临床治疗和防治医院感染提供依据。方法从重症监护病房(ICU)〉60岁的患者中分离到的14株PAE,进行传统的生化、PCR方法、药敏分型和质粒、肠杆菌重复基因间隔共有序列(ERIC)-PCR多态性... 目的探讨铜绿假单胞菌(PAE)多重耐药情况,为临床治疗和防治医院感染提供依据。方法从重症监护病房(ICU)〉60岁的患者中分离到的14株PAE,进行传统的生化、PCR方法、药敏分型和质粒、肠杆菌重复基因间隔共有序列(ERIC)-PCR多态性分析。结果传统的生化分为一个型,API20NE结果为1344575,药敏则呈现出多重耐药,质粒分型有10株得到约23kb的质粒,其余4株则无,质粒的有无与多重耐药无直接关系;运用ERIC—PCR技术进行基因谱系,聚类分析将株菌主要分为3大类,相似系数从0.62~0.88。结论ICU的PAE在老年患者中呈现出散发的状态,ERIC-PCR指纹图谱基因技术分型方法分辨率高,可重复性好,简便快捷,可用于PAE医院感染流行病学监测。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 多重耐药性 ERIC—pcr 医院感染
暂未订购
PCR-DGGE研究微生物种群中多条带产生原因分析 被引量:9
14
作者 陈章宝 向少能 +1 位作者 江震献 周泽扬 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期147-154,共8页
鸡肠道微生物菌群经PCR-DGGE分析,回收PCR-DGGE分析胶上的一条DNA片段,回收的DNA片段再重复进行2次PCR-DGGE分析,以及分别用PCR反复循环扩增和PCR高保真酶扩增后再进行DGGE分析等方法研究PCR-DGGE分析中多条带产生原因。结果显示PCR-DGG... 鸡肠道微生物菌群经PCR-DGGE分析,回收PCR-DGGE分析胶上的一条DNA片段,回收的DNA片段再重复进行2次PCR-DGGE分析,以及分别用PCR反复循环扩增和PCR高保真酶扩增后再进行DGGE分析等方法研究PCR-DGGE分析中多条带产生原因。结果显示PCR-DGGE分析中多条带产生原因可能是作PCR扩增模板的DNA混杂有少量其他DNA片段,多条带现象不易被消除。DGGE分析胶上的DNA片段测序时,将该DNA片段回收、PCR扩增后克隆,提取多个阳性克隆菌的质粒DNA片段,分别与其原目的DNA片段进行DGGE分析,在DGGE分析胶上选取与原目的DNA片段处于同一电泳位置的质粒DNA测序,提高测序的准确性。 展开更多
关键词 pcr—DGGE技术 多条带 原因分析 微生物种群
原文传递
MPCR-DHPLC检测大肠杆菌O157研究 被引量:2
15
作者 许龙岩 刘静宇 +3 位作者 袁慕云 陈碧玲 阳静 焦红 《中国卫生检验杂志》 北大核心 2012年第5期1057-1059,共3页
目的:建立多重PCR(Multiplex PCR,MPCR)结合变性高效液相色谱(Denaturing High-PerformanceLiquid Chromatography,DHPLC)检测大肠杆菌O157的方法,并了解食品中分离的O157毒力基因携带情况。方法:针对大肠杆菌O157的rfbE、flicH7、eaeA... 目的:建立多重PCR(Multiplex PCR,MPCR)结合变性高效液相色谱(Denaturing High-PerformanceLiquid Chromatography,DHPLC)检测大肠杆菌O157的方法,并了解食品中分离的O157毒力基因携带情况。方法:针对大肠杆菌O157的rfbE、flicH7、eaeA、stx1、stx2基因设计引物,其单一PCR扩增产物在DHPLC上出现的色谱峰为标准色谱峰,建立MPCR-DHPLC检测方法。结果:MPCR扩增产物在DHPLC上的色谱峰,在位置和峰型上与标准色谱峰有较好的对应性。DHPLC能分离大小4个碱基差异的DNA片段。4株分离株检测结果,O157-1出现rfbE、flicH7、eaeA基因色谱峰,O157-2、O157-3、O157-4只出现rfbE基因色谱峰。结论:建立的MPCR-DHPLC方法可用于大肠杆菌O157及其毒力基因的检测。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157 Mpcr DHPLC 毒力基因 检测
原文传递
荧光PCR和数字PCR法检测转基因DAS-44406-6品系大豆 被引量:18
16
作者 于晓帆 高宏伟 +2 位作者 孙?敏 肖西志 李荣贵 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第16期235-241,共7页
目的:建立实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测转基因DAS-44406-6品系大豆的定性检测方法和使用数字PCR检测转基因DAS-44406-6品系大豆的定量检测方法。方法:针对转基因DAS-44406-6大豆品系,进行5’-RACE,测定... 目的:建立实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测转基因DAS-44406-6品系大豆的定性检测方法和使用数字PCR检测转基因DAS-44406-6品系大豆的定量检测方法。方法:针对转基因DAS-44406-6大豆品系,进行5’-RACE,测定该品系转基因大豆外源片段与大豆染色体重组的边界序列,并根据该边界序列设计引物和探针。使用23种非DAS-44406-6品系转基因植物作为阴性对照测试实时荧光PCR引物和探针的特异性,以DAS-44406-6品系样品制备6个含量梯度的样品进行检测低限实验。使用数字PCR技术进行定量检测,并确定定量检测的低限。结果:建立的转基因DAS-44406-6大豆品系的实时荧光PCR特异性检测方法品系鉴定特异性较强,实时荧光PCR检测方法的检测低限在模板DNA浓度为100 ng/反应时,为0.01%的转基因大豆含量,约为16.6个拷贝的DAS-44406-6基因组DNA;数字PCR检测方法的检测低限在模板DNA浓度为0.5 ng/反应、转基因大豆含量为1%时,相对标准偏差为0.7%。因此,建立的转基因DAS-44406-6大豆品系实时荧光PCR和数字PCR特异性检测方法符合转基因检测的要求。 展开更多
关键词 转基因大豆 DAS-44406-6品系 品系鉴定 实时荧光pcr 数字pcr
在线阅读 下载PDF
鸡IFN-α和IFN-β及IFN-γ基因实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量:17
17
作者 张贺楠 赖汉漳 +4 位作者 齐岩 孔留五 张小桃 曹伟胜 廖明 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期173-177,共5页
根据GenBank上鸡α-、β-、γ-干扰素(ChIFNα-、β-、γ-)基因的序列,在保守区设计并合成各自特异引物,并以鸡3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)基因为内参,采用SYBRGreen工染料以建立实时荧光定量PCR检测方法。将IFNα-、β-、γ-基因... 根据GenBank上鸡α-、β-、γ-干扰素(ChIFNα-、β-、γ-)基因的序列,在保守区设计并合成各自特异引物,并以鸡3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)基因为内参,采用SYBRGreen工染料以建立实时荧光定量PCR检测方法。将IFNα-、β-、γ-基因克隆至pGEM-T载体上,以各阳性质粒作为标准品,构建标准曲线,并进行了熔解曲线分析。结果表明,鸡IFNα-、β-、γ-和GAPDH基因的C1值与标准品稀释度在1×10^2~1×10^8 copies/μL范围分别呈良好的线性关系,r^2均大于0.990。熔解曲线分析表明,产物为特异的单峰,检测周期从RNA提取到荧光定量PCR结束只需4h。建立的鸡IFNα-、β-、γ-基N实时荧光定量PCR灵敏度高、特异性强、检测周期短,为在mRNA水平对鸡IFN的定量分析奠定了基础。 展开更多
关键词 实时荧光定量pcr Α-干扰素 Β-干扰素 γ-干扰素
在线阅读 下载PDF
一种快速获得基因密码子偏爱性改造的方法——SOE-PCR 被引量:7
18
作者 王艳君 杨谦 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期96-99,共4页
SOE-PCR采用具有互补末端的引物,使PCR产物形成重叠链,在不需要内切酶消化和连接酶处理的条件下实现DNA片段的拼接,能够高效、快速地实现基因的定点突变。应用SOE-PCR原理成功地实现了对几丁质酶基因chi58的5个位点的突变,构建了几丁质... SOE-PCR采用具有互补末端的引物,使PCR产物形成重叠链,在不需要内切酶消化和连接酶处理的条件下实现DNA片段的拼接,能够高效、快速地实现基因的定点突变。应用SOE-PCR原理成功地实现了对几丁质酶基因chi58的5个位点的突变,构建了几丁质酶基因密码子偏爱性改造突变体—chi58A。实验证明,SOE-PCR具有简捷、快速、高效的优点。扩增过程中未引入其他突变,获得的chi58A突变体基因片段可以用于后续的分子克隆。 展开更多
关键词 SOE—pcr 多点突变 密码子偏爱性改造
在线阅读 下载PDF
茶树新梢不同叶片中β-葡萄糖苷酶和β-樱草糖苷酶基因表达的实时定量PCR分析 被引量:31
19
作者 赵丽萍 陈亮 +1 位作者 王新超 姚明哲 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期11-16,共6页
在建立茶树基因表达绝对定量实时PCR检测方法后,检测了龙井43新梢不同部位叶片中的β-葡萄糖苷酶和β-樱草糖苷酶基因的表达情况,结果表明β-葡萄糖苷酶在一芽五叶新梢的第四叶中表达活性最高,为2.86E+08拷贝/μl,第四叶>第三叶>... 在建立茶树基因表达绝对定量实时PCR检测方法后,检测了龙井43新梢不同部位叶片中的β-葡萄糖苷酶和β-樱草糖苷酶基因的表达情况,结果表明β-葡萄糖苷酶在一芽五叶新梢的第四叶中表达活性最高,为2.86E+08拷贝/μl,第四叶>第三叶>第五叶>第二叶>一芽一叶;而β-樱草糖苷酶基因在一芽一叶中最高,为4.31E+06拷贝/μl,一芽一叶>第二叶>第三叶>第四叶>第五叶。与茶叶香气密切相关两个基因在茶树不同部位的叶片中表达量和表达类型存在明显差异。本实验建立的实时荧光定量PCR可有效地用于茶树基因表达的定量分析。 展开更多
关键词 茶树 Β-葡萄糖苷酶 β-樱草糖苷酶 实时定量pcr
在线阅读 下载PDF
应用多重PCR-RFLP技术检测头发、口腔腭粘膜的ABO基因型 被引量:2
20
作者 陈卫宾 郭忠慧 +1 位作者 朱自严 刘达庄 《上海医学检验杂志》 北大核心 2003年第4期211-215,共5页
目的 探讨对头发、口腔腭粘膜等组织标本进行ABO基因分型的可行性。方法 应用多重聚合酶链反应 限制性片段长度多态性 (多重PCR RFLP)技术 ,检测 8例头发和 6例口腔腭粘膜标本的ABO基因型 ,标本的基因组DNA经 2对引物同时进行扩增 ,... 目的 探讨对头发、口腔腭粘膜等组织标本进行ABO基因分型的可行性。方法 应用多重聚合酶链反应 限制性片段长度多态性 (多重PCR RFLP)技术 ,检测 8例头发和 6例口腔腭粘膜标本的ABO基因型 ,标本的基因组DNA经 2对引物同时进行扩增 ,扩增后的产物同时用MspⅠ和KpnⅠ 2种限制酶进行消化 ,通过消化后产生的片段即可判断结果。然后将分析结果与血清学技术检测的ABO表现型和受检者血液标本的基因型进行比较。结果  14例标本共检出 6种ABO基因型 ,与表现型和血液标本的基因型结果完全一致。结论 该方法操作方便 ,重复性、稳定性好 ,可鉴定 15种基因型 ,应用于法医学鉴定具有可行性。 展开更多
关键词 头发 口腔腭粘膜 ABO基因 基因分型 多重聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术
暂未订购
上一页 1 2 74 下一页 到第
使用帮助 返回顶部