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TAIL-PCR方法快速分离Xcc致病相关基因序列 被引量：23
1
作者 应革 武威 何朝族 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期182-186,共5页
以mini Tn5gfp km转座子中nptII片段作为探针 ,对已获得的五株野油菜黄单胞菌野油菜黑腐病致病型(Xcc)非致病突变体进行了Southernblot分析 ,结果表明 ,这五株突变体确由mini Tn5gfp km转座子插入致病相关基因所致 ,且为单拷贝不同位点... 以mini Tn5gfp km转座子中nptII片段作为探针 ,对已获得的五株野油菜黄单胞菌野油菜黑腐病致病型(Xcc)非致病突变体进行了Southernblot分析 ,结果表明 ,这五株突变体确由mini Tn5gfp km转座子插入致病相关基因所致 ,且为单拷贝不同位点的插入。提取这五株突变体总DNA作为模板 ,采用改进的热不对称交错PCR (TAIL PCR)方法从其中克隆到了各自转座子插入区侧翼序列 ,对这些侧翼序列进行了序列测定并将分析结果与GenBankdatabase及Xcc全基因组序列做了比较 ,结果表明 ,五个侧翼序列所在的基因确与Xcc致病性有关。这种改进后的TAIL 展开更多
关键词 Xcc 致病相关基因 mini-tn5 gfp-km转座子 TAIL-PCR 分离 野油菜黄单胞菌
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杀虫荧光假单胞工程菌的构建及其杀虫效果 被引量：3
2
作者 段灿星 张青文 +3 位作者 徐静 张正伟 熊延坤 杨青芹 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期419-424,共6页
以转座子mini Tn5为介导 ,用高压电激转化法将BtcryIA(c)基因整合到生防细菌荧光假单胞菌P30 3 1的染色体上。通过对重组菌株染色体DNA酶切分析、PCR检测 ,表明转化子DNA中含有cryIA(c)基因及其营养期表达的强启动子。SDS PAGE鉴定、EL... 以转座子mini Tn5为介导 ,用高压电激转化法将BtcryIA(c)基因整合到生防细菌荧光假单胞菌P30 3 1的染色体上。通过对重组菌株染色体DNA酶切分析、PCR检测 ,表明转化子DNA中含有cryIA(c)基因及其营养期表达的强启动子。SDS PAGE鉴定、ELISA检测及电镜观察证实了杀虫晶体蛋白在P30 3 1中的高效表达。生物测定结果显示工程菌对棉铃虫Heli coverpaarmigera具有显著毒杀作用。工程菌PT4 5、PT5 1、PT6 1、PT71和野生菌HD 73对棉铃虫 2龄幼虫 5天的LC50 值分别为5 0 12 81μg g、 71 776 3μg g、 6 9 0 82 0 μg g、 5 7 9895 μg g、 192 874 7μg g。死亡率与浓度呈正相关 ,体重与浓度呈负相关。 展开更多
关键词 杀虫荧光假单胞工程菌 构建 杀虫效果 转座子 mini-tn5 棉铃虫 苏云金杆菌
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遗传稳定型六六六、多菌灵降解基因工程菌构建(英文) 被引量：5
3
作者 武俊 许敬亮 +1 位作者 洪青 李顺鹏 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期45-50,共6页
通过PCR的方法从六六六降解菌Sphingomonas sp.BHC-A扩增出完整的脱氯化氢酶基因linA。将其克隆到含有mini-Tn5的自杀性质粒pUT4K上,构建成质粒pUT/mini-Tn5-linA.通过三亲杂交,在辅助质粒RK600的帮助下,将pUT/mini-Tn5-linA转移到一株... 通过PCR的方法从六六六降解菌Sphingomonas sp.BHC-A扩增出完整的脱氯化氢酶基因linA。将其克隆到含有mini-Tn5的自杀性质粒pUT4K上,构建成质粒pUT/mini-Tn5-linA.通过三亲杂交,在辅助质粒RK600的帮助下,将pUT/mini-Tn5-linA转移到一株高效降解多菌灵菌株Rhodococcus sp.DJL-6中。利用mini-Tn5的转座作用将linA基因整合到DJL-6的染色体DNA上,得到工程菌株DJL-6A。该工程菌具有同时降解多菌灵和六六六的功能,且对于初始浓度为0.05μg/mL和5μg/mL的六六六的降解活性与亲本菌株BHC-A相当。在不加任何选择压力的条件下工程菌株进行连续传代,结果证明linA基因可以持续稳定的存在于宿主的染色体DNA上。 展开更多
关键词 脱氯化氢酶基因linA 转座载体pUT/mini-tn5 多功能工程菌
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利用转座子将parDE与pCPP430体内重组提高生防工程菌的遗传稳定性 被引量：2
4
作者 张丽 申泉 赵立平 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期662-668,共7页
带有梨火疫欧氏杆菌 (Erwiniaamylovora)完整的hrp基因簇的重组粘粒pCPP43 0转化到植物的附生菌成团泛菌 (Pantoeaagglomerans) 3 0 8R中后可以使成团泛菌获得在烟草等植物上引发过敏反应和诱导植物抗病性的能力。pCPP43 0携带着约 40k... 带有梨火疫欧氏杆菌 (Erwiniaamylovora)完整的hrp基因簇的重组粘粒pCPP43 0转化到植物的附生菌成团泛菌 (Pantoeaagglomerans) 3 0 8R中后可以使成团泛菌获得在烟草等植物上引发过敏反应和诱导植物抗病性的能力。pCPP43 0携带着约 40kb的梨火疫欧氏杆菌的染色体DNA ,在成团泛菌 3 0 8R中不能稳定遗传。本文首先把广宿主范围质粒RK2的控制质粒稳定性的parDE片段插入到转座载体pUT mini Tn5Km的唯一克隆位点NotI上 ,然后利用Tn5的转座特性 ,将parDE体内重组到pCPP43 0上 ,经过在无抗生素选择压下反复传代和过敏反应活性测定 ,筛选到了遗传稳定性显著提高的重组生防工程菌。 展开更多
关键词 过敏反应 质粒稳定性 parDE转座子 pUT/mini-tn5 KM 生防工程菌 重组
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利用转座系统在葡糖杆菌中表达山梨糖脱氢酶 被引量：7
5
作者 赵岩 张惟材 陈惠鹏 《生物技术通讯》 CAS 2007年第5期727-730,共4页
目的:利用Mini-Tn5转座系统在葡糖杆菌中表达山梨糖脱氢酶(SDH)。方法:分离得到从山梨醇产糖的快生型小菌Y25K2,利用PCR方法扩增并分析快生型小菌的16SrDNA;构建pUT-mini-Tn5-Tet转座载体,将SDH基因(sdh)插入该载体,利用接合转移,将sdh... 目的:利用Mini-Tn5转座系统在葡糖杆菌中表达山梨糖脱氢酶(SDH)。方法:分离得到从山梨醇产糖的快生型小菌Y25K2,利用PCR方法扩增并分析快生型小菌的16SrDNA;构建pUT-mini-Tn5-Tet转座载体,将SDH基因(sdh)插入该载体,利用接合转移,将sdh整合至快生型小菌Y25K2的染色体,通过Western印迹检测SDH的表达。结果:16SrDNA鉴定结果初步表明快生型小菌为葡糖杆菌;构建得到pUT-mini-Tn5-Tet-sdh,将sdh整合至快生型菌Y25K2基因组,并检测到其在快生型小菌Y25K2中的表达。结论:利用Mini-Tn5转座系统在葡糖杆菌中表达了山梨糖脱氢酶。 展开更多
关键词 葡糖杆菌 16S RDNA mini-tn5转座 山梨糖脱氢酶
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瓜类细菌性果斑病菌突变体文库的构建及群体感应信号分子突变株的筛选 被引量：1
6
作者 李晓霞 马俊义 +4 位作者 魏娜 胡白石 李晓娟 杨小丽 安仙丽 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期1036-1041,共6页
利用三亲杂交的方法将带卡那抗性的Mini-Tn5转座子随机插入瓜类细菌性果斑病菌xjl12基因组DNA中,构建插入不同位点的突变体文库,通过信号分子高效检测菌株JZAI,筛选群体感应信号分子失活突变株。挑取2株野生株和筛选出的4株突变株,进行S... 利用三亲杂交的方法将带卡那抗性的Mini-Tn5转座子随机插入瓜类细菌性果斑病菌xjl12基因组DNA中,构建插入不同位点的突变体文库,通过信号分子高效检测菌株JZAI,筛选群体感应信号分子失活突变株。挑取2株野生株和筛选出的4株突变株,进行Southern杂交,结果表明,转座子Mini-Tn5以单拷贝随机诱变瓜类细菌性果斑病菌获得成功;对筛出的4株突变株进行了致病性和烟草过敏反应测试,发现突变株明显降低了致病性,且2株突变株(5-17,2-57)在烟草上无过敏反应。瓜类细菌性果斑病菌突变体文库的成功构建及筛选到不同突变位点的群体感应信号分子失活突变株,对从基因水平研究瓜类细菌性果斑病菌致病分子机理及群体感应相关基因奠定了基础。 展开更多
关键词 瓜类细菌性果斑病菌 mini-tn5转座子 三亲杂交 群体感应 信号分子
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趋磁螺菌遗传操作体系的建立及磁小体缺失突变株的筛选 被引量：4
7
作者 李峰 李颖 +2 位作者 姜伟 王珍芳 李季伦 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期440-444,共5页
由于MagnetospirillumgryphiswaldenseMSR 1缺少简便有效的遗传操作体系和对常见抗生素的抗性 ,致使对该菌磁小体生物合成的机制等研究工作进展缓慢。为此建立了一套比较简便有效的遗传操作体系 ,其中包括 :以平板封膜培养技术获得单菌... 由于MagnetospirillumgryphiswaldenseMSR 1缺少简便有效的遗传操作体系和对常见抗生素的抗性 ,致使对该菌磁小体生物合成的机制等研究工作进展缓慢。为此建立了一套比较简便有效的遗传操作体系 ,其中包括 :以平板封膜培养技术获得单菌落、在选择性培养液中进行接合转移遗传因子 ,以液体培养和磁铁吸附技术筛选突变子。利用此体系 ,通过接合转座诱变技术 ,获得了 2个磁小体缺失突变株 。 展开更多
关键词 磁小体缺失突变株 接合转座突变 分子遗传学 趋磁细菌 抗生素
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影响鸡伤寒沙门氏菌毒力和侵袭力的基因突变
8
《中国家禽》 北大核心 2007年第2期62-62,共1页
韩国科研人员在对鸡伤寒沙门氏菌的毒力因子进行研究时，采用Mini-Tn5转座子插入灭活的方法获得了编码胱硫醚β裂解酶的metC基因突变体。接下来的试验显示，这个突变体对1日龄白莱航鸡的毒力显著减弱。
关键词 伤寒沙门氏菌 基因突变体 毒力因子 侵袭力 mini-tn5 鸡 科研人员 裂解酶
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Magnetospirillum gryphiswaldense MSR-1磁小体缺失突变株NM4Tn5侧翼序列的克隆及功能分析 被引量：3
9
作者 李峰 李颖 +2 位作者 姜伟 王珍芳 李季伦 《中国科学（C辑）》 CSCD 北大核心 2005年第4期349-358,共10页
利用mini-Tn5lacZ2对格瑞菲斯瓦尔德磁螺菌(Magnetospirillumgryphiswaldense)MSR-1进行转座插入突变,获得磁小体缺失突变株NM4.通过锚定PCR(anchoredPCR)从NM4中克隆出Tn5插入位点的侧翼序列,获得长5045bp的DNA片段,其中含有6个ORFs,Tn... 利用mini-Tn5lacZ2对格瑞菲斯瓦尔德磁螺菌(Magnetospirillumgryphiswaldense)MSR-1进行转座插入突变,获得磁小体缺失突变株NM4.通过锚定PCR(anchoredPCR)从NM4中克隆出Tn5插入位点的侧翼序列,获得长5045bp的DNA片段,其中含有6个ORFs,Tn5插入在ORF4中.功能互补实验证明该片段与磁小体的合成有关.对ORF4编码的蛋白进行同源比较和功能分析,发现ORF4编码的蛋白与CaulobactercrescentusCB15的长为200AA的趋化蛋白CheYIII的同源性为25%(30/116),且ORF4编码的蛋白也具有与CheYIII相同的接收磷酸基团的REC结构域,可进行信号传递,因此推测ORF4编码的蛋白可能参与磁小体合成过程中的某种(低氧分压或铁离子浓度)信号的转导. 展开更多
关键词 MAGNETOSPIRILLUM GRYPHISWALDENSE 磁小体缺失突变株 基因克隆 功能分析 mini-tn5 缺失突变株 侧翼序列 磁小体 克隆
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