该研究通过3管型微量MPN计数法(Mini Most Probable Number,mini-MPN)建立了一种快速定量检测食源性沙门氏菌的荧光定量环介导等温扩增(Quantitative Loop-Mediated Isothermal Amplification,qLAMP)方法。依据沙门菌属ttr基因设计了qL...该研究通过3管型微量MPN计数法(Mini Most Probable Number,mini-MPN)建立了一种快速定量检测食源性沙门氏菌的荧光定量环介导等温扩增(Quantitative Loop-Mediated Isothermal Amplification,qLAMP)方法。依据沙门菌属ttr基因设计了qLAMP和荧光定量PCR(Quantitative Polymerase Chain Reaction,qPCR)引物,结合5 h BPW增菌和MPN计数法建立了mini-MPN-qLAMP沙门氏菌快速定量检测方法;使用两种人工污染样品对mini-MPN-qLAMP法进行验证,使用Bland-Altman分析比较不同检测方法检测结果的一致性。结果表明,建立的qLAMP法与qPCR法反应特异性均良好,纯培养时qLAMP法检出限为500 CFU/mL。通过Bland-Altman分析表明所建立的mini-MPN-qLAMP法在速冻乌米饭中检测结果与mini-MPN-qPCR、mini-MPN计数法、平板计数法相比均具有较高的一致性,r^(2)≥0.994,检出限为-0.44 lg MPN/mL;而在速冻鸡胸肉中该法检测结果与mini-MPN-qPCR结果一致性最佳,r^(2)=0.990,检出限为-0.64 lg MPN/mL。肉制品中腐败杂菌会影响mini-MPN计数和平板计数结果,mini-MPN-qLAMP可排除肉制品中腐败杂菌对检测结果的影响。该研究所建立的mini-MPN-qLAMP法简单易行,准确度高,可用于食品中沙门氏菌的快速定量检测。展开更多
文摘该研究通过3管型微量MPN计数法(Mini Most Probable Number,mini-MPN)建立了一种快速定量检测食源性沙门氏菌的荧光定量环介导等温扩增(Quantitative Loop-Mediated Isothermal Amplification,qLAMP)方法。依据沙门菌属ttr基因设计了qLAMP和荧光定量PCR(Quantitative Polymerase Chain Reaction,qPCR)引物,结合5 h BPW增菌和MPN计数法建立了mini-MPN-qLAMP沙门氏菌快速定量检测方法;使用两种人工污染样品对mini-MPN-qLAMP法进行验证,使用Bland-Altman分析比较不同检测方法检测结果的一致性。结果表明,建立的qLAMP法与qPCR法反应特异性均良好,纯培养时qLAMP法检出限为500 CFU/mL。通过Bland-Altman分析表明所建立的mini-MPN-qLAMP法在速冻乌米饭中检测结果与mini-MPN-qPCR、mini-MPN计数法、平板计数法相比均具有较高的一致性,r^(2)≥0.994,检出限为-0.44 lg MPN/mL;而在速冻鸡胸肉中该法检测结果与mini-MPN-qPCR结果一致性最佳,r^(2)=0.990,检出限为-0.64 lg MPN/mL。肉制品中腐败杂菌会影响mini-MPN计数和平板计数结果,mini-MPN-qLAMP可排除肉制品中腐败杂菌对检测结果的影响。该研究所建立的mini-MPN-qLAMP法简单易行,准确度高,可用于食品中沙门氏菌的快速定量检测。
