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miR403分子进化特性及其在龙眼体胚发生早期的表达模式分析 被引量：3
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作者 苏立遥 蒋梦琦 +5 位作者 黄倏祺 徐小萍 厉雪 陈旭 赖钟雄 林玉玲 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期846-856,共11页
【目的】探究miR403的分子进化特性及其在龙眼体胚发生早期中的表达模式。【方法】根据龙眼转录组数据库结合miRBase数据库下载得到植物miR403成熟体(miRNA,MicroRNA)和前体(pre-miRNA,Precursor MicroRNA)序列,对其构建系统发育树、序... 【目的】探究miR403的分子进化特性及其在龙眼体胚发生早期中的表达模式。【方法】根据龙眼转录组数据库结合miRBase数据库下载得到植物miR403成熟体(miRNA,MicroRNA)和前体(pre-miRNA,Precursor MicroRNA)序列,对其构建系统发育树、序列多重比对、前体二级结构分析;并克隆龙眼miR4035’末端cDNA序列,比较miR403启动子顺式作用元件。利用qPCR(Quantitative real time-PCR)探究龙眼体胚发生早期miR403和pre-miR403的表达模式。【结果】龙眼及其他17个物种中miR403的36个前体和42成熟体序列的系统发育树以及序列多重比对显示,植物miR403高度保守且主要来源于pre-miR403的3臂,而pre-miR403分歧较大,序列仅在miRNA生成区域保守;不同物种之间miR403成员数量差异不大;pre-miR403最小折叠自由能为-35.70^-55.50kal·mol^-1。克隆获得龙眼primiR403(miR403初级体)5’末端cDNA序列,确认其第一个碱基A为转录起始位点(TSS,transcription start site)。龙眼等5种植物MIR403启动子中具有大量光、激素和逆境胁迫等元件。龙眼早期体胚发生过程中miR403和pre-miR403整体为显著下调趋势。【结论】龙眼miR403与其他植物miR403具有高度的保守性以及物种之间的特异性,miR403和pre-miR403下调表达可能有利于促进龙眼早期体胚发生。 展开更多
关键词 龙眼 microrna403 进化特性 启动子 体胚发生 表达分析
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龙眼miR403及其候选靶标对外源激素的响应模式以及在龙眼体胚中的表达模式 被引量：4
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作者 苏立遥 黄倏祺 +5 位作者 蒋梦琦 厉雪 徐小萍 陈旭 赖钟雄 林玉玲 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期977-984,共8页
MicroRNA403(miR403)为双子叶植物特有的miRNA家族,其在双子叶植物抗病、逆境胁迫和生长发育中具有重要作用.为了解miR403及其候选靶标对外源激素的响应模式以及在龙眼体胚发生过程中的表达模式,利用psRNAtarget对miR403潜在靶标进行预... MicroRNA403(miR403)为双子叶植物特有的miRNA家族,其在双子叶植物抗病、逆境胁迫和生长发育中具有重要作用.为了解miR403及其候选靶标对外源激素的响应模式以及在龙眼体胚发生过程中的表达模式,利用psRNAtarget对miR403潜在靶标进行预测,采用改良RLM-RACE技术验证其裂解位点,通过qPCR技术检测miR403及其候选靶标对外源激素的应答及在龙眼体胚中的表达模式.结果显示,共获得41个龙眼miR403的潜在靶标,包含4个PPR(Pentatricopeptide repeat protein)和3个PCNT115(Auxin-induced protein PCNT115),却未发现AGO2(Argonaute2).4个PPR中Dlo014588.1和Dlo014589.1序列一致,而3个PCNT115基因序列在所预测的miR403结合位点上下游序列基本一致.裂解位点显示,miR403不具备裂解AGO2 mRNA的能力,但介导PPR(Dlo014588.1)和PCNT115 mRNA的裂解,裂解位点位于miR403 5′端的第2和第3个碱基之间. qPCR显示,miR403响应脱落酸(ABA)信号并显著上调,PPR和PCNT115对不同浓度的ABA呈现不同的表达模式,PPR和PCNT115在5μg/L ABA时显著上调,随后,PPR先显著下调(50μg/L ABA),而后显著上调(5 000μg/L ABA),而PCNT115呈显著下调趋势;miR403不响应赤霉素(GA3)信号,而PPR和PCNT115随着GA3浓度升高而上调;miR403可以响应不同浓度的水杨酸(SA)和2,4-D信号显著下调,而其靶基因显著上调.不同胚性培养物中qPCR显示,miR403仅在龙眼胚性愈伤组织(EC)高度表达且在龙眼体胚发生过程中显著下调,PPR在EC和子叶胚(CE)高度表达,PCNT115在CE和成熟胚(ME)高水平表达,三者之间并未呈现明显的负调控趋势.本研究表明在龙眼体胚中miR403并不靶向调控AGO2,而是调控PPR和PCNT115;另外,miR403可能响应ABA、SA和2,4-D调控PPR和PCNT15参与到龙眼体胚发生过程中. 展开更多
关键词 龙眼 miR403 靶基因 PPR PCNT115 AGO2 激素响应 体胚发生
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