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弥漫大B细胞淋巴瘤OCI-Ly3细胞中TALEN介导的microRNA-21基因敲除 被引量:1
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作者 陈步远 胡建达 +1 位作者 林仁章 陈鑫基 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期422-426,共5页
目的:在转染效率极低的血液肿瘤细胞株中探索敲除microRNA基因的有效方法,以方便microRNA基因在血液肿瘤疾病中功能的研究。方法:应用转录激活因子样效应蛋白核酸酶(Transcription activator-like effector nuclease,TALEN)介导的基因... 目的:在转染效率极低的血液肿瘤细胞株中探索敲除microRNA基因的有效方法,以方便microRNA基因在血液肿瘤疾病中功能的研究。方法:应用转录激活因子样效应蛋白核酸酶(Transcription activator-like effector nuclease,TALEN)介导的基因工程技术敲除人类弥漫大B细胞淋巴瘤OCI-Ly3细胞中的microRNA-21(miR-21)基因,然后通过流式细胞仪富集e GFP+表达细胞、PCR筛选和microRNA定量检测,筛选并建立不表达miR-21的OCI-Ly3单细胞克隆。最后,对不表达miR-21的OCI-Ly3单细胞克隆进行miR-21基因测序。结果:通过两轮的电转染和筛选实验,获得了4个几乎不表达miR-21的OCI-Ly3单细胞克隆,突变率约为实验起始细胞数的十万分之一。对突变克隆的测序结果显示,多种miR-21序列缺失或插入均可能导致该基因表达显著下调。结论:本方法可以推广、应用于在转染效率极低的血液肿瘤细胞株中敲除任何感兴趣的microRNA基因。 展开更多
关键词 转录激活因子样效应蛋白核酸酶 弥漫大B细胞淋巴瘤 OCI-Ly3 microrna-21
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稳定表达HBx和MicroRNA-21基因肝卵圆细胞株构建的试验研究
2
作者 张鸿晖 谢斌辉 《中国当代医药》 2016年第34期4-6,10,共4页
目的研究构建可以稳定表达HBx和MicroRNA-21基因的肝卵圆细胞株的方法。方法采用LE培养基培养大鼠卵圆细胞株(LE/6),以质粒Pc DNA3.1-HBVx中的HBVx序列为模板,PCR法扩增得到目的基因片段A。将HBx目的基因片段和质粒载体p EGFP-Nl进行双... 目的研究构建可以稳定表达HBx和MicroRNA-21基因的肝卵圆细胞株的方法。方法采用LE培养基培养大鼠卵圆细胞株(LE/6),以质粒Pc DNA3.1-HBVx中的HBVx序列为模板,PCR法扩增得到目的基因片段A。将HBx目的基因片段和质粒载体p EGFP-Nl进行双酶切,线性化得到重组质粒命名为p EGFP-HBx。重组质粒转化感受态大肠埃希菌DH5a,并进行筛选培养。用脂质体法将质粒转染卵圆细胞,作为p EGFP-HBx组;用脂质体法将质粒转染质粒载体p EGFP-Nl,作为p EGFP-NI质粒组。最后将Pre-MicroRNA-21与HBx-LE/6共培养,培养24 h后用荧光显微镜观察转染细胞的荧光表达情况。结果 p EGFP-HBx中GFP表达量经荧光定量PCR仪器确定为92.28%,且表达程度强;Pre-MicroRNA-21与HBx-LE/6共培养完成后,p EGFP-HBx组内MicroRNA-21的转录水平经仪器测量为1.77±0.24,显著高于p EGFP-NI质粒组内的0.36±0.21,差异有统计学意义(P<0.05)。结论本研究成功地构建了稳定表达HBx和MicroRNA-21基因肝卵圆细胞株,为进一步研究HBx蛋白、mi RNA-21、肝卵圆细胞与肝癌之间的关系提供了实验基础。 展开更多
关键词 HBX Micro RNA-21基因 肝卵圆细胞 大肠埃希菌DH5a 质粒载体p EGFP-Nl
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稳定表达乙型肝炎病毒X和MicroRNA-21基因肝细胞株的构建方法研究 被引量:2
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作者 舒涛 丁彦 +1 位作者 肖丽霞 谢斌辉 《实用心脑肺血管病杂志》 2014年第10期26-27,共2页
目的探讨稳定表达乙型肝炎病毒X(HBVX)和MicroRNA-21基因肝细胞株的构建方法。方法应用LE培养基对大鼠肝细胞株进行培养,将pcDNA 3.1-HBVX质粒中的HBVX序列作为实验模板,采用PCR法对获得的目的基因HBVX片段进行扩增,构建稳定表达的HBVX... 目的探讨稳定表达乙型肝炎病毒X(HBVX)和MicroRNA-21基因肝细胞株的构建方法。方法应用LE培养基对大鼠肝细胞株进行培养,将pcDNA 3.1-HBVX质粒中的HBVX序列作为实验模板,采用PCR法对获得的目的基因HBVX片段进行扩增,构建稳定表达的HBVX和MicroRNA-21基因肝细胞株。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后观察HBVX基因克隆结果,鉴定pcDNA 3.1(+)/HBVX重组质粒和MicroRNA-21质粒。结果 PCR产物HBVX基因片段中存在全部HBVX基因编码序列;RT-PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后可见长度为300 bp的MicroRNA-21前体片段。结论本研究成功构建了稳定表达HBVX和MicroRNA-21基因肝细胞株,为临床进行深入研究提供了实验基础。 展开更多
关键词 病毒 乙型肝炎 微RNAS microrna-21基因 肝细胞株
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MicroRNA-21相关靶基因的研究进展 被引量:13
4
作者 惠越 张鑫 +3 位作者 刘国跃 戢慧 李冲 陈淼 《重庆医学》 CAS 北大核心 2016年第8期1121-1124,共4页
MicroRNA(miRNA)是一类新近发现的非编码小分子RNA,广泛表达于机体的各个组织和器官,主要通过与相关靶基因结合在转录后水平负性调控约60%的人类基因[1]。其中,miRNA-21在心脑血管、肝脏、肺脏、肾脏等多种疾病中异常表达,明确其所调... MicroRNA(miRNA)是一类新近发现的非编码小分子RNA,广泛表达于机体的各个组织和器官,主要通过与相关靶基因结合在转录后水平负性调控约60%的人类基因[1]。其中,miRNA-21在心脑血管、肝脏、肺脏、肾脏等多种疾病中异常表达,明确其所调控的靶基因对阐明miRNA-21的功能及在各种生命过程和疾病发生机制中的作用非常关键。 展开更多
关键词 MIRNA-21 基因 细胞凋亡 潜在靶点
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MicroRNA-21(miR-21)在大肠癌细胞中的表达及其靶基因 被引量:7
5
作者 熊兵红 马利 +1 位作者 程勇 张才全 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第23期6688-6691,共4页
目的探讨微RNA(miRNA)-2l在大肠癌(CRC)细胞中的表达,抑制miRNA-21(miR-21)表达对大肠癌细胞中磷酸醋酶张力蛋白同源物(PTEN)、PI3K、蛋白激酶B(Akt)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、mTOR表达的影响及其可能调控的靶基因。方法通过反义寡核... 目的探讨微RNA(miRNA)-2l在大肠癌(CRC)细胞中的表达,抑制miRNA-21(miR-21)表达对大肠癌细胞中磷酸醋酶张力蛋白同源物(PTEN)、PI3K、蛋白激酶B(Akt)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、mTOR表达的影响及其可能调控的靶基因。方法通过反义寡核苷酸(ASO)技术抑制大肠癌细胞株HCT116中miR-21的表达并加以验证。通过荧光定量PCR(FQ-PCR)技术及Western印迹法检测HCT116细胞中PTEN、PI3K、Akt、MMP-9、mTOR表达的改变。利用生物信息学分析预测miRNA-21可能的靶基因,荧光素酶双报告基因系统检测PTEN活性。结果 miR-21在HCT116中表达最高,在SW480中表达最低。miRNA-21在细胞株HCT116中的表达得到有效抑制,并且PTEN蛋白的表达明显上调,PI3K、Akt、MMP-9、mTOR表达下调。筛选并确认了PTEN为miR-21的调控靶基因之一。结论抑制miR-21的表达可促进HCT116细胞PTEN表达升高,PI3K、Akt、MMP-9、mTOR表达下调,PTEN可作为miR-21的靶基因参与调控过程。miRNA-21在CRC中表达失控,通过抑制PTEN表达促进肿瘤细胞侵袭转移。 展开更多
关键词 大肠癌 MIR-21 肿瘤抑制基因 PTEN AKT MMP-9
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MicroRNA-218下调肝细胞癌中的E2F2基因表达抑制细胞增殖的研究 被引量:7
6
作者 王涛 马思聪 +6 位作者 戚星星 汤晓寅 崔丹 王智 池嘉昌 李萍 翟博 《肝脏》 2016年第3期179-182,共4页
目的探讨MicroRNA-218(miRNA-218)下调肝细胞癌中的E2F2基因表达,从而抑制细胞增殖的机制。方法从细胞库中取得人类肝癌细胞株HepG2、Huh7、MHCC-97H、BEL-7402和正常肝细胞株L02。随后进行细胞培养和转移、反转录多聚酶链反应、免疫印... 目的探讨MicroRNA-218(miRNA-218)下调肝细胞癌中的E2F2基因表达,从而抑制细胞增殖的机制。方法从细胞库中取得人类肝癌细胞株HepG2、Huh7、MHCC-97H、BEL-7402和正常肝细胞株L02。随后进行细胞培养和转移、反转录多聚酶链反应、免疫印迹分析、细胞增殖和集落形成试验、细胞周期分析和相应的统计学处理。结果 miR-218表达水平在癌细胞中下调。MTT生长曲线表明,当miR-218过度表达时(Huh7中的miR-218 P=0.001;在MHCC-97中的miR-218 P=0.013)细胞增殖能力明显降低。双荧光素酶实验证实,转染了miRNA-218模拟物的细胞的荧光素酶活性显著降低(P<0.01),荧光酶报告基因含有E2F2野生型的第3′非翻译区。这些结果表明E2F2是miR-218的直接作用对象。与阴性对照组相比,转染了miR-218模拟物的Huh7和MHCC-97细胞株中的E2F2的相对mRNA表达显著下调(P<0.05)。结论 miR-218通过直接作用于E2F2基因的第3′非翻译区调节E2F2的表达,从而抑制HCC细胞增殖。 展开更多
关键词 microrna-218 肝细胞癌 E2F2基因 细胞增殖
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MicroRNA-21及其靶基因程序性细胞死亡因子4在动脉粥样硬化中的作用 被引量:9
7
作者 朱晓彤 张圣洁 +1 位作者 梁雪 李广平 《中国心血管杂志》 2017年第3期201-205,共5页
目的探讨microRNA(miR)-21及其靶基因程序性细胞死亡因子4(PDCD4)在动脉粥样硬化(AS)发生发展中的作用。方法收集38例急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者及34例非冠心病患者的血浆,实时定量PCR检测miR-21的表达水平。在Lipo3 000的介导... 目的探讨microRNA(miR)-21及其靶基因程序性细胞死亡因子4(PDCD4)在动脉粥样硬化(AS)发生发展中的作用。方法收集38例急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者及34例非冠心病患者的血浆,实时定量PCR检测miR-21的表达水平。在Lipo3 000的介导下,将miR-21类似物、抑制剂及沉默PDCD4(siP DCD4)分别转染鼠巨噬细胞系RAW 264.7细胞,并用氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)与细胞共同孵育,设立空白对照组(未转染且未加ox-LDL)及ox-LDL组(仅加oxLDL)。采用油红O染色检测细胞泡沫化程度,实时定量PCR及Western blot分别检测泡沫细胞中miR-21及PDCD4蛋白水平。此外,建立ApoE^(-/-)小鼠AS模型20只,按随机数字表法分为3组:单纯高脂喂养组6只、过表达miR-21组7只及阴性对照组(NC,7只),鼠尾静脉注射胆固醇包裹的miR-21激动剂(agomiR-21)及阴性对照agomiR-NC分别建立过表达miR-21组及NC组。选用正常饲料喂养的C57BL/6小鼠作为正常对照组。实时定量PCR检测miR-21在AS斑块及正常动脉组织中的表达;Western blot及免疫组化分别检测PDCD4蛋白水平。结果与相应的对照组比较,miR-21在STEMI患者血浆、泡沫细胞及单纯高脂喂养ApoE^(-/-)小鼠斑块组织中的表达水平均明显升高(P<0.001;P<0.01;P<0.01);泡沫细胞及单纯高脂喂养ApoE^(-/-)小鼠斑块内PDCD4蛋白水平明显增多;与ox-LDL组比较,ox-LDL+miR-21类似物组及ox-LDL+siP DCD4组巨噬细胞泡沫化程度明显下降,ox-LDL+miR-21抑制剂组细胞泡沫化程度明显增加。过表达miR-21组AS斑块内PDCD4蛋白水平较NC组明显减少,且斑块较NC组明显减小。结论 miR-21在急性STEMI患者血浆中、泡沫细胞及AS斑块内的水平明显升高。过表达miR-21及沉默PDCD4可抑制巨噬细胞向泡沫细胞的转化,这与动物组织实验结果一致,表明miR-21或可靶向调控PDCD4的表达,从而发挥抗AS的作用。 展开更多
关键词 microrna-21 程序性细胞死亡因子4 动脉粥样硬化 急性ST段抬高型心肌梗死 泡沫细胞
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MicroRNA-218靶向神经元表达发育下调基因9对胃癌细胞增殖和侵袭的影响 被引量:1
8
作者 夏云展 李荣振 +1 位作者 杨金花 李琼 《新乡医学院学报》 CAS 2020年第3期219-224,共6页
目的观察microRNA-218(miR-218)对胃癌细胞SGC-7901增殖和侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养人胃癌细胞SGC-7901,将对数生长期细胞分为空白对照组、阴性对照组和miR-218 mimics组,阴性对照组和miR-218 mimics组细胞分别转染阴... 目的观察microRNA-218(miR-218)对胃癌细胞SGC-7901增殖和侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养人胃癌细胞SGC-7901,将对数生长期细胞分为空白对照组、阴性对照组和miR-218 mimics组,阴性对照组和miR-218 mimics组细胞分别转染阴性对照序列和miR-218 mimics,空白对照组细胞不进行转染。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测3组细胞中miR-218表达,细胞计数试剂盒-8检测3组细胞培养24、48、72、96 h时的增殖活性;平板细胞克隆形成实验检测3组细胞克隆能力;Transwell实验检测3组细胞侵袭能力;Western blot法检测3组细胞中神经元表达发育下调基因9(NEDD9)蛋白、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、神经型钙黏附蛋白(N-cadherin)的表达。将SGC-7901细胞分为阴性对照组+NEDD93′非编码区(3′UTR)-Wt组(阴性对照序列、pCHECK2-NEDD93′UTR-Wt共转入SGC-7901细胞)、miR-218 mimics+NEDD93′UTR-Wt组(miR-218 mimics、pCHECK2-NEDD93′UTR-Wt共转入SGC-7901细胞)、阴性对照组+NEDD93′UTR-Mut组(阴性对照序列、pCHECK2-NEDD93′UTR-Mut共转入SGC-7901细胞)、miR-218 mimics+NEDD93′UTR-Mut组(miR-218 mimics、pCHECK2-NEDD93′UTR-Mut共转入SGC-7901细胞),常规培养48 h后收集各组细胞,采用发光检测仪测定各组细胞中荧光素酶活性,分析miR-218与NEDD9的靶向关系。结果与空白对照组和阴性对照组比较,miR-218 mimics组细胞中miR-218表达及培养24、48、72、96 h时细胞增殖抑制率显著升高(P<0.05),NEDD9蛋白表达及细胞克隆形成数量和侵袭细胞数量显著减少(P<0.05);空白对照组与阴性对照组细胞中以上各指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。miR-218 mimics+NEDD93′UTR-Wt组细胞中荧光素酶活性显著低于阴性对照组+NEDD93′UTR-Wt组、阴性对照组+NEDD93′UTR-Mut组和miR-218 mimics+NEDD93′UTR-Mut组(P<0.05)。与空白对照组和阴性对照组比较,miR-218 mimics组细胞中E-cadherin蛋白表达显著升高,vimentin、N-cadherin蛋白表达显著降低(P<0.05)。空白对照组与阴性对照组细胞中E-cadherin、vimentin、N-cadherin蛋白表达比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论miR-218过表达胃癌细胞SGC-7901中NEDD9蛋白表达显著下调,microRNA-218可能通过靶向下调NEDD9表达而抑制SGC-7901细胞的增殖及侵袭能力。 展开更多
关键词 胃癌 增殖 侵袭 microrna-218 神经元表达发育下调基因9
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MicroRNA-21靶调控NCM460细胞ROCK1基因上调occludin表达 被引量:1
9
作者 李超 刘敏 刘志华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期729-734,共6页
目的:探讨微小RNA-21(micro RNA-21,miR-21)对人正常结肠上皮细胞系NCM460中紧密连接相关蛋白——闭合蛋白(occludin)表达的影响,并分析其可能的靶基因。方法:利用miR-21过表达慢病毒建立miR-21过表达NCM460细胞系,q PCR检测miR-21表达... 目的:探讨微小RNA-21(micro RNA-21,miR-21)对人正常结肠上皮细胞系NCM460中紧密连接相关蛋白——闭合蛋白(occludin)表达的影响,并分析其可能的靶基因。方法:利用miR-21过表达慢病毒建立miR-21过表达NCM460细胞系,q PCR检测miR-21表达水平,Western blot检测occludin表达情况。生物信息学方法预测miR-21的靶基因,根据评分和文献检索选择相应靶基因ROCK1进行进一步研究,利用miR-21 mimic和inhibitor转染NCM460细胞,同时检测miR-21以及ROCK1的表达水平;采用双萤光素酶报告基因实验验证ROCK1是miR-21的靶基因。结果:在NCM460细胞中过表达miR-21后可上调紧密连接相关蛋白occludin的表达。生物信息学分析预测ROCK1可能为miR-21的靶基因。在NCM460细胞中过表达miR-21可下调ROCK1的m RNA和蛋白水平,抑制miR-21可上调ROCK1的m RNA和蛋白水平。萤光素酶报告基因验证ROCK1为miR-21的靶基因。结论:在NCM460细胞中,miR-21能上调肠屏障功能相关蛋白occludin的表达。ROCK1是miR-21的靶基因,miR-21可能通过靶调控ROCK1促进occludin的表达。 展开更多
关键词 微小RNA-21 NCM460细胞 紧密连接 闭合蛋白 ROCK1基因
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大鼠心室重构中c-kit与microRNA-21基因表达的研究
10
作者 刘振 李硕 +2 位作者 刘玲玲 郭志坤 王鹏飞 《临床心血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期287-290,共4页
目的:研究c-kit与microRNA-21基因在大鼠左室重构中的动态表达,探讨其内在联系和作用机制。方法:SD雄性大鼠随机分为正常对照组和心衰模型组。心衰模型制作:4 mg/kg阿霉素腹腔注射,每周1次,共6周。正常对照组给予等量0.9%氯化钠溶液。在... 目的:研究c-kit与microRNA-21基因在大鼠左室重构中的动态表达,探讨其内在联系和作用机制。方法:SD雄性大鼠随机分为正常对照组和心衰模型组。心衰模型制作:4 mg/kg阿霉素腹腔注射,每周1次,共6周。正常对照组给予等量0.9%氯化钠溶液。在8周时对大鼠进行心功能检测,证明心衰形成。取心脏组织,冰冻切片,利用免疫组织化学、免疫荧光显色、RT-PCR等技术检测心肌组织中microRNA-21和c-kit的基因表达变化。结果:HE染色示:各个时间点呈现不同的病理学变化;对照组未出现心肌梗死表现。免疫组织化学和免疫荧光显示:在正常和心衰心肌中microRNA-21阳性细胞主要表达于血管内皮,少量心肌细胞和干细胞,而在心衰心肌组织中的表达量明显减少;c-kit阳性细胞常成群分布,主要聚集于心外膜及其附近,心衰后表达量较正常心肌明显减少。在两组心肌组织中均有少数细胞存在microRNA-21和c-kit共表达。RT-PCR结果显示:心衰模型组c-kit和microRNA-21表达比正常对照组明显减少(P<0.05)。结论:阿霉素致大鼠左室重构的心肌内c-kit和microRNA-21阳性干细胞减少,其表达异常与左室重构具有高度的相关性且存在一定的内在联系。 展开更多
关键词 C-KIT microrna-21 免疫组织化学 免疫荧光 心室重构
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珠海地区21-羟化酶缺乏症患儿CYP21A2 基因突变及表型分析
11
作者 王山杉 汪国庆 姚双 《海南医学》 2025年第21期3145-3149,共5页
目的分析珠海地区21-羟化酶缺乏症患儿的CYP21A2基因突变特征,并探讨基因型与临床表型的关系。方法回顾性分析2014年1月至2022年12月在珠海地区出生并确诊为21-羟化酶缺乏症的10例患儿的基因检测结果。采用长片段-聚合酶链反应(LR-PCR)... 目的分析珠海地区21-羟化酶缺乏症患儿的CYP21A2基因突变特征,并探讨基因型与临床表型的关系。方法回顾性分析2014年1月至2022年12月在珠海地区出生并确诊为21-羟化酶缺乏症的10例患儿的基因检测结果。采用长片段-聚合酶链反应(LR-PCR)技术联合二代测序进行CYP21A2基因检测,并分析患儿基因型与临床表型的相关性。结果10例患儿中失盐型(salt wasting,SW)7例、单纯男性化型(simple virilizing,SV)3例;复合杂合突变9例、纯合突变1例。共检出13种突变,包括c.293-13A/C>G(I2G)、c.515T>A(p.I172N)、c.332_339delGAGACTAC(p.G111fs)、c.955C>T(p.Q319*)、c.1069C>T(p.R357W)、c.1078G>A(p.V360M)、c.1481G>A(p.S494N)、c.710T>A(p.I237N)、c.713T>A(p.V238E)、c.719T>A(p.M240K)、c.1451_1452delGGinsC(p.Arg484fs)11种点突变和Exon1-3 Del和Exon1-4 Del两种大片段缺失,其中c.293-13A/C>G为最常见突变,c.1078G>A为新发突变。基因型与临床表型的一致率为88.9%(8/9)。结论珠海地区新生儿21-羟化酶缺乏症患儿CYP21A2基因突变类型以复合杂合突变为主,主要突变基因为c.293-13A/C>G;基因型与临床表型有较高的一致性。 展开更多
关键词 珠海地区 21-羟化酶缺乏症 CYP21A2 基因突变
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基于CRISPR∕Cas9技术创制抗稻瘟病基因pi21突变体
12
作者 谢留杰 段敏 黄善军 《上海农业学报》 2025年第2期8-15,共8页
利用CRISPR∕Cas9技术对台15-7糯的抗稻瘟病基因pi21进行编辑。选择位于pi21基因第一、第二外显子上的2段序列作为靶点构建双元表达载体pHUE411-pi21-Cas9,通过农杆菌侵染法获得21个以台15-7糯为背景的T0代单株。加代后在149个T1代单株... 利用CRISPR∕Cas9技术对台15-7糯的抗稻瘟病基因pi21进行编辑。选择位于pi21基因第一、第二外显子上的2段序列作为靶点构建双元表达载体pHUE411-pi21-Cas9,通过农杆菌侵染法获得21个以台15-7糯为背景的T0代单株。加代后在149个T1代单株中检测出6个不含载体的纯合突变体,包含3种突变类型,分别命名为pi21-t1、pi21-t2、pi21-t3,每种突变分别导致pi21基因编码的蛋白缺失227、239、99个氨基酸。稻瘟病鉴定结果表明:成熟期时,3种突变体中仅pi21-t3的病斑数量和面积较台15-7糯显著降低,其他2种突变体发病水平与台15-7糯基本相同。除抗稻瘟病能力有所提高外,突变体pi21-t3在成熟期的其他农艺性状,如株高、每穗粒数、结实率等,与台15-7糯没有显著差异。本研究可为抗稻瘟病水稻育种提供借鉴。 展开更多
关键词 CRISPR∕Cas9技术 pi21基因 稻瘟病 纯合突变体
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基因芯片技术检测Shh蛋白对脑梗死小鼠脑皮质组织microRNA-210表达的影响
13
作者 何伟亮 田小超 +3 位作者 赵亚靖 张凯华 楚宝 王贺波 《脑与神经疾病杂志》 CAS 2021年第2期67-70,共4页
目的探讨Shh蛋白对脑梗死小鼠脑皮质组织microRNA-210表达的影响。方法建立小鼠脑皮质梗死模型,基因芯片技术筛选出脑梗死小鼠脑皮质组织差异表达基因,并应用qRT-PCR技术对其差异性表达进行验证。给予Shh蛋白治疗后,应用qRT-PCR技术观察... 目的探讨Shh蛋白对脑梗死小鼠脑皮质组织microRNA-210表达的影响。方法建立小鼠脑皮质梗死模型,基因芯片技术筛选出脑梗死小鼠脑皮质组织差异表达基因,并应用qRT-PCR技术对其差异性表达进行验证。给予Shh蛋白治疗后,应用qRT-PCR技术观察Shh蛋白对脑梗死小鼠脑皮质组织microRNA-210表达。应用ATP试剂盒检测Shh蛋白对脑梗死小鼠脑皮质组织ATP活性的变化。结果与对照组相比,基因芯片筛选出脑梗死小鼠脑皮质组织中差异表达microRNA 17个,其中表达上调8个,表达下调9个。进一步筛选出microRNA-210,运用q-PCR技术验证其在脑梗死后脑皮质组织中表达上调(P<0.05)。与脑梗死组相比较,经Shh蛋白干预后小鼠皮质组织microRNA-210表达上调(P<0.05)与对照组相比,脑梗死组ATP含量下降,Shh蛋白干预后,ATP含量有所上升(P<0.05)。结论Shh蛋白可能通过上调microRNA-210逆转能量生成障碍对脑梗死发挥治疗作用。 展开更多
关键词 脑梗死 基因芯片 Shh蛋白 microrna-210 能量生成
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血清TGF-β1、IL-17A、miR-21与非高龄卵巢功能减退不孕的关系探讨
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作者 何军晶 孟丽燕 +2 位作者 陈星慧 王媛 马丽莎 《中国妇幼健康研究》 2026年第3期61-68,共8页
目的探讨血清转化生长因子β1(TGF-β1)、白介素-17A(IL-17A)、microRNA-21(miR-21)与非高龄卵巢功能减退(DOR)不孕的关系,为临床诊疗提供有利参考。方法选取2022年8月至2023年10月昆明市妇幼保健院收治的134例非高龄DOR不孕患者为观察... 目的探讨血清转化生长因子β1(TGF-β1)、白介素-17A(IL-17A)、microRNA-21(miR-21)与非高龄卵巢功能减退(DOR)不孕的关系,为临床诊疗提供有利参考。方法选取2022年8月至2023年10月昆明市妇幼保健院收治的134例非高龄DOR不孕患者为观察组,另选取同期同年龄段100例卵巢功能正常的健康体检者为对照组,比较两组血清TGF-β1、IL-17A、miR-21水平,并比较观察组促排卵治疗不同卵巢反应患者临床资料、性激素[基础卵泡刺激素(bFSH)、基础雌二醇(bE_(2))、基础黄体生成素(bLH)、抗缪勒管激素(AMH)]及血清TGF-β1、IL-17A、miR-21水平,探究血清TGF-β1、IL-17A、miR-21与性激素、促排卵治疗卵巢反应性的相关性及其对非高龄DOR不孕患者促排卵治疗卵巢低反应的预测效能,Logistic回归分析影响非高龄DOR患者不孕的因素。结果观察组血清TGF-β1、IL-17A、miR-21水平均高于对照组,差异有统计学意义(t值介于9.676~37.579之间,P<0.05);与卵巢正常反应亚组比较,卵巢低反应亚组血清bFSH、bLH、TGF-β1、IL-17A、miR-21水平较高,bE 2、AMH较低(t值介于2.404~43.562之间,P<0.05);血清TGF-β1、IL-17A、miR-21与bFSH、bLH呈正相关性(r值介于0.575~0.643之间,P<0.05),与bE_(2)、AMH呈负相关性(r值介于-0.714~-0.582之间,P<0.05);卵巢反应性与血清TGF-β1、IL-17A、miR-21均呈正相关性(r值介于0.675~0.712之间,P<0.05);血清TGF-β1、IL-17A、miR-21联合预测非高龄DOR不孕患者卵巢低反应的曲线下面积(AUC)为0.936,大于单独预测(Z值介于3.225~3.817之间,P<0.05);性激素bE 2、AMH为非高龄DOR患者不孕的独立保护因素,血清TGF-β1、IL-17A、miR-21为独立危险因素,其OR值及95%CI分别为0.961(0.928~0.995)、0.957(0.938~0.976)、1.100(1.017~1.190)、1.090(1.025~1.160)、1.061(1.019~1.104)。结论非高龄卵巢功能减退不孕患者血清TGF-β1、IL-17A、miR-21异常升高,其水平与患者性激素水平、卵巢反应性联系密切,对促排卵治疗后卵巢低反应有一定预测价值。 展开更多
关键词 卵巢功能减退 非高龄 不孕 转化生长因子β1 白介素-17A microrna-21
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肾小管细胞外泌体miR-26a-5p靶向巨噬细胞FGF21促进肾小管间质炎症
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作者 田英 丁弘 +1 位作者 李作林 朱进华 《东南大学学报(医学版)》 2026年第1期11-23,共13页
目的:探讨肾小管上皮细胞外泌体microRNA-26a-5p(miR-26a-5p)在调控巨噬细胞成纤维细胞生长因子21(FGF21)表达及其促进肾小管间质炎症中的作用机制。方法:采用单侧输尿管梗阻(UUO)模型和脂多糖(LPS)诱导脓毒症小鼠模型,通过外泌体分泌... 目的:探讨肾小管上皮细胞外泌体microRNA-26a-5p(miR-26a-5p)在调控巨噬细胞成纤维细胞生长因子21(FGF21)表达及其促进肾小管间质炎症中的作用机制。方法:采用单侧输尿管梗阻(UUO)模型和脂多糖(LPS)诱导脓毒症小鼠模型,通过外泌体分泌抑制、敲减miR-26a-5p及过表达FGF21等手段,结合逆转录实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)、Western blotting、免疫组化、免疫荧光及荧光素酶实验,研究外泌体miR-26a-5p在肾小管上皮细胞与巨噬细胞间的信号传递作用。结果:体内实验显示,抑制外泌体分泌或敲减miR-26a-5p均减轻肾小管间质炎症,过表达FGF21缓解肾小管间质炎症。体外实验显示,抑制肾小管上皮细胞外泌体分泌及外泌体miR-26a-5p表达、过表达巨噬细胞FGF21均减轻LPS诱导的巨噬细胞炎症;荧光素酶报告基因显示miR-26a-5p特异性结合FGF21 mRNA。结论:肾小管上皮细胞分泌外泌体miR-26a-5p,靶向抑制巨噬细胞FGF21表达,促进肾小管间质炎症。 展开更多
关键词 肾小管间质炎症 肾小管上皮细胞 巨噬细胞 microrna-26a-5p 成纤维细胞生长因子21 小鼠
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茶树泛素连接酶基因CsPUB21对非生物胁迫的响应 被引量:1
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作者 邓淑琴 高莹瑞 +3 位作者 李雨桐 王瑛 龚春梅 白娟 《园艺学报》 北大核心 2025年第3期655-670,共16页
以‘陕茶1号’茶树品种为材料,克隆得到U-box家族泛素E3连接酶基因CsPUB21并进行功能分析。序列分析发现CsPUB21编码区长度为1242 bp,共编码413个氨基酸,在N端含有U-box保守结构域、C端含有ARM结构域,为不稳定的亲水性蛋白。启动子区含... 以‘陕茶1号’茶树品种为材料,克隆得到U-box家族泛素E3连接酶基因CsPUB21并进行功能分析。序列分析发现CsPUB21编码区长度为1242 bp,共编码413个氨基酸,在N端含有U-box保守结构域、C端含有ARM结构域,为不稳定的亲水性蛋白。启动子区含有多个响应干旱、高盐、低温胁迫的顺式作用元件。亚细胞定位结果表明,CsPUB21定位于细胞膜和细胞质。基因表达模式分析显示,在5个供试茶树品种中,CsPUB21受干旱和盐胁迫诱导表达上调,而在低温胁迫下降低。在拟南芥中过表达CsPUB21,显著增强了植株对干旱和盐胁迫的抗性。qRT-PCR结果显示,CsPUB21过表达拟南芥在干旱和盐胁迫后CsPUB21表达量上调。与野生型相比,CsPUB21过表达拟南芥在干旱、盐胁迫处理条件下叶绿素含量、可溶性糖含量较高,抗氧化酶SOD、POD、CAT活性增强,相对电导率和MDA含量降低。研究结果说明CsPUB21在茶树应对干旱和盐胁迫时发挥正向调节作用。 展开更多
关键词 茶树 CsPUB21 基因克隆 非生物胁迫 表达分析 异源功能验证
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大片段缺失导致D21S11基因座出现稀有等位基因1例
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作者 周玮 吕文锐 +3 位作者 夏水秀 黄人婕 李立娟 高玉振 《中国法医学杂志》 2025年第2期255-257,共3页
1案例1.1简要案情检材来自于日常检案中的一起亲子鉴定案件,检材为血痕,检测中分型图谱出现异常。1.2 Sifa STR 23 plex v7.0试剂盒初次检验采用Sifa STR 23 plex v7.0试剂盒(司法鉴定科学研究院)对血痕进行直扩,PCR体系各成分构成比和... 1案例1.1简要案情检材来自于日常检案中的一起亲子鉴定案件,检材为血痕,检测中分型图谱出现异常。1.2 Sifa STR 23 plex v7.0试剂盒初次检验采用Sifa STR 23 plex v7.0试剂盒(司法鉴定科学研究院)对血痕进行直扩,PCR体系各成分构成比和PCR反应参数设置按试剂盒说明操作。 展开更多
关键词 法医遗传学 D21S11基因 稀有等位基因 OL峰
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利用CRISPR/Cas9系统编辑Pi21基因改良‘大粒香’稻瘟病抗性
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作者 彭强 李佳丽 +3 位作者 徐海峰 张习春 张大双 朱速松 《分子植物育种》 北大核心 2025年第17期5734-5739,共6页
稻瘟病严重危害水稻产量,抗稻瘟病成为水稻新品种选育和大规模生产应用的前提。功能缺失的Pi21基因具有稻瘟病抗性,为改良优质稻‘大粒香’的稻瘟病抗性,本研究对Pi21基因进行定向基因编辑。利用CRISPR/Cas9系统,Pi21基因作为编辑靶基因... 稻瘟病严重危害水稻产量,抗稻瘟病成为水稻新品种选育和大规模生产应用的前提。功能缺失的Pi21基因具有稻瘟病抗性,为改良优质稻‘大粒香’的稻瘟病抗性,本研究对Pi21基因进行定向基因编辑。利用CRISPR/Cas9系统,Pi21基因作为编辑靶基因,构建基因编辑载体CRISPR-Pi21,通过农杆菌介导方法转化优质稻‘大粒香’愈伤组织。创建16份发生Pi21基因编辑事件的CRISPR-Pi21材料,获得了不含Cas9外源的Pi21纯合突变植株。与表现为高感(综合指数为9.0)的对照‘大粒香’相比,2份改良株系的叶瘟和穗瘟抗级显著降低,其稻瘟病抗性评价为中感(综合指数为4.5)。利用CRISPR/Cas9系统能有效地编辑目标基因Pi21,提高改良株系的稻瘟病抗性,在水稻生物育种领域具有应用价值。 展开更多
关键词 稻瘟病 Pi21 基因编辑 遗传转化
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简易方法富集肿瘤细胞对乳腺癌21基因评分的影响
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作者 朱慧娟 汤惠 +2 位作者 彭会贞 赵平 丁伟 《临床与实验病理学杂志》 北大核心 2025年第11期1521-1524,1528,共5页
目的探讨简易方法富集肿瘤细胞对乳腺癌21基因检测的影响及其临床病理意义。方法采用手术刀片富集11例乳腺癌患者的石蜡包埋样本的肿瘤细胞,运用RT-PCR对乳腺癌的21基因表达进行检测,并比较肿瘤细胞富集前与富集后风险评分(risk score,... 目的探讨简易方法富集肿瘤细胞对乳腺癌21基因检测的影响及其临床病理意义。方法采用手术刀片富集11例乳腺癌患者的石蜡包埋样本的肿瘤细胞,运用RT-PCR对乳腺癌的21基因表达进行检测,并比较肿瘤细胞富集前与富集后风险评分(risk score,RS)检测结果的异同。结果本实验发现2例10%肿瘤细胞占比的患者,在肿瘤细胞富集后风险等级发生改变;1例20%肿瘤细胞占比的患者在肿瘤细胞非富集时RS 23.75,肿瘤细胞富集时RS 15.14,风险等级由中风险转变为低风险;3例30%肿瘤细胞占比的患者,在肿瘤细胞富集后风险等级同样也发生改变,2例由中风险变为低风险,1例由高风险变为低风险;而2例40%肿瘤细胞占比患者及1例50%肿瘤细胞占比的乳腺浸润性癌患者,肿瘤细胞富集与非富集RS值差异较小,且风险等级不变。尚有2例10%肿瘤占比在肿瘤细胞富集与非富集前后RS不变。结论对于肿瘤细胞占比低于30%的乳腺癌石蜡组织样本,若淋巴细胞较多,需进行肿瘤细胞富集,有助于减少淋巴细胞对肿瘤细胞基因表达信号的干扰,从而更准确地反映肿瘤细胞本身的基因组状态。该方法可能有助于提高21基因表达检测的敏感性与特异性,为患者靶向治疗的临床筛选提供更可靠依据。 展开更多
关键词 乳腺癌 21基因 影响因素 分子病理 预后 复发风险
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D21S11稀有等位基因9.2的确认
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作者 周雅婷 李晨昕 +4 位作者 张洪波 魏曙光 张宝 朱永生 余兵 《中国法医学杂志》 2025年第5期644-646,共3页
1案例资料1.1案例简介本研究中的案例来自日常所受理的一起二联体亲子鉴定,根据知情同意原则,采集两名被鉴定人(下文代称:孩子、被检父,图示中分别标注C、F)的指尖血样。1.2初次检验本研究使用Chelex-100法提取被鉴定人血样DNA,使用深... 1案例资料1.1案例简介本研究中的案例来自日常所受理的一起二联体亲子鉴定,根据知情同意原则,采集两名被鉴定人(下文代称:孩子、被检父,图示中分别标注C、F)的指尖血样。1.2初次检验本研究使用Chelex-100法提取被鉴定人血样DNA,使用深圳华大法医科技有限公司华大-人类DNA分型盒(炎黄),在美国Applied Biosystems公司9700型PCR仪上对提取的DNA进行复合PCR扩增,经美国Applied Biosystems公司ABI-3130XL基因分析仪进行毛细管电泳后,使用GeneMapper^(TM)ID-X 1.4软件获得STR基因分型。 展开更多
关键词 法医物证学 D21S11 稀有等位基因 三带型 测序
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