灵芝外泌体样纳米囊泡的提取鉴定及小RNA表达

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作者 孙一鸣 杨挺 +4 位作者 张紫琪 庄金格 周佳渝 魏玉霞 郝巍 《北华大学学报(自然科学版)》 2025年第6期729-735,共7页

目的 建立灵芝外泌体样纳米囊泡(exosome-like nanovesicles, ELNVs)提取及鉴定方法,探讨灵芝ELNVs中小RNA(small RNA,sRNA)的种类与功能。方法 应用差速离心法及外泌体提取试剂盒提取、纯化新鲜灵芝ELNVs;应用透射电镜观察ELNVs形态,利... 目的 建立灵芝外泌体样纳米囊泡(exosome-like nanovesicles, ELNVs)提取及鉴定方法,探讨灵芝ELNVs中小RNA(small RNA,sRNA)的种类与功能。方法 应用差速离心法及外泌体提取试剂盒提取、纯化新鲜灵芝ELNVs;应用透射电镜观察ELNVs形态,利用NTA粒径分析技术测量ELNVs粒径;利用NextSeq CN500测序平台测序sRNA文库;应用生物信息学分析ELNVs sRNA表达水平,预测潜在靶基因,进行GO和KEGG分析,探讨靶基因潜在功能。结果 透射电镜和NTA粒径分析结果证实成功提取灵芝ELNVs,电镜下呈典型茶托形态,平均粒径为208.5 nm的颗粒浓度为1.22×10^(12)颗粒/mL。NextSeq CN500测序平台分析鉴定出miRNA、piRNA和tsRNA等多种类型sRNA,其中miRNA占比对成功序列的52.94%,为主要组分,miRNA靶基因GO生物过程分析显示与细胞周期、染色质结合能力、细胞蛋白质代谢过程、蛋白激酶结合程度及病毒-宿主相互作用等功能相关;KEGG通路分析显示,miRNA数量最多的靶基因共同富集于18条信号通路,其中,PI3K-Akt信号通路的富集具有统计学意义(P<0.05)。此外,有11条通路表现出显著富集(P<0.01),包括细胞周期、Rap1信号通路、肌动蛋白细胞骨架调控、脂质与动脉粥样硬化、Ras信号通路等;6条miRNA靶基因在淋巴瘤通路中表现出极显著富集(P<0.001)。结论 提取并确认了灵芝ELNVs的存在,共检测出9 155 101条纯净sRNA序列,长度多为18~24 nt;20种sRNA表达量超过500 TPM;tsRNA表达量突出;GO生物过程分析显示,检测出的miRNA参与细胞周期调节、染色质结合等功能;KEGG分析显示,miRNA靶基因富集于淋巴瘤、细胞周期调控等通路。研究结果证实了灵芝ELNVs中sRNA的功能及其药理学潜力。 展开更多

关键词 灵芝 外泌体样纳米囊泡 MIRNA PIRNA tsRNA

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参蛤益肺胶囊对脂多糖诱导急性肺损伤小鼠的miRNA-21和TLR4/NF-κB信号通路的影响

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作者 黄江 邓健 +5 位作者 王耀辉 林宗耀 程然 黄得艳 张胜男 杨云芳 《中国中医急症》 2025年第9期1447-1451,共5页

目的观察参蛤益肺胶囊对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)小鼠的防治效果,及药物是否通过调控miRNA-21表达和TLR4/NF-κB信号通路发挥治疗作用。方法将60只BALB/c小鼠随机分为假手术组、模型组、地塞米松组和参蛤益肺胶囊低、中、高剂量... 目的观察参蛤益肺胶囊对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)小鼠的防治效果,及药物是否通过调控miRNA-21表达和TLR4/NF-κB信号通路发挥治疗作用。方法将60只BALB/c小鼠随机分为假手术组、模型组、地塞米松组和参蛤益肺胶囊低、中、高剂量组,每组10只。模型组按1 mg/kg支气管灌注LPS 10μL,假手术组小鼠支气管灌注等量无菌生理盐水,参蛤益肺胶囊各剂量组造模后分别按0.1、0.2、0.4 g/kg进行灌胃,连续7 d。地塞米松组造模前3 d按0.4 mg/kg灌胃。造模后12 h采集小鼠血液,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺脏,HE染色观察肺组织病理变化,测肺湿/干重比,荧光定量PCR检测肺组织miRNA-21表达,蛋白质印迹法(Western blotting)检测Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB(NF-κB)蛋白表达。酶联免疫吸附分析(ELISA)检测血浆和BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)含量。结果与模型组比较,服用参蛤益肺胶囊后,肺泡内炎症细胞浸润程度明显减轻,肺湿/干重比下降(P<0.01),miRNA-21表达增加(P<0.01),TLR4、NF-κB表达减少(P<0.01),血清和肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6含量均显著下降(P<0.01)。结论参蛤益肺胶囊能减轻LPS诱导的小鼠ALI,其机制可能与通过上调miRNA-21和抑制TLR4/NF-κB以及炎症因子表达有关。 展开更多

关键词 急性肺损伤 参蛤益肺胶囊 miRNA Toll样受体4 小鼠

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三氯乙烯药疹样皮炎患者血清miRNAs差异表达谱分析 被引量：3

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作者 郑剑 蓝涛 +4 位作者 刘威 邓荣霞 李培茂 张艳芳 刘建军 《癌变·畸变·突变》 CAS CSCD 2016年第6期468-471,共4页

目的:分析三氯乙烯药疹样皮炎(OMLDT)患者和三氯乙烯接触者血清micro RNA(mi RNA)表达谱的差异。方法:分别采集5名三氯乙烯药疹样皮炎患者和5名接触者血液,分离血清,抽提总RNA进行Hy3荧光标记,然后浓缩标记的样品,运用mi RCURY LNA芯片... 目的:分析三氯乙烯药疹样皮炎(OMLDT)患者和三氯乙烯接触者血清micro RNA(mi RNA)表达谱的差异。方法:分别采集5名三氯乙烯药疹样皮炎患者和5名接触者血液,分离血清,抽提总RNA进行Hy3荧光标记,然后浓缩标记的样品,运用mi RCURY LNA芯片进行mi RNA芯片杂交,杂交后进行图像扫描,所得数据使用Gene Pix Pro V6.0软件进行mi RNA差异表达分析并采用q PCR进行验证。对差异较大的mi RNA用mi RWalk 2.0进行靶基因预测,并与其他预测软件结果进行比较。结果:OMLDT患者与三氯乙烯接触者比较,共有69个差异表达的mi RNAs,其中低表达30个,高表达39个(包含mi R-199b)。q PCR验证亦显示mi R-199b在OMLDT中高表达。靶基因预测结果显示mi R409-3p和mi R485-3p在5个预测软件均预测到了共同的靶基因。结论:三氯乙烯药疹样皮炎患者血清mi RNAs表达谱发生了显著改变,mi R-199b可能是OMLDT潜在的易感生物标志物。 展开更多

关键词 MIRNA 三氯乙烯药疹样皮炎 靶基因预测 生物标志物

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氧化苦参碱通过胰腺星状细胞中miRNA-211-5p调节TLR4／NF-κB通路调控炎性反应 被引量：11

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作者 李如月 向晓辉 +2 位作者 张斌 张青 夏时海 《药物评价研究》 CAS 2018年第4期540-546,共7页

目的探讨氧化苦参碱(OM)是否通过胰腺星状细胞株(LTC-14)中mi R-211-5p调节TLR4/NF-κB通路调控炎性反应。方法用生物预测、文献分析筛选出目的 mi R;脂多糖(LPS)刺激LTC-14细胞制备炎症模型,通过实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法检测mi R... 目的探讨氧化苦参碱(OM)是否通过胰腺星状细胞株(LTC-14)中mi R-211-5p调节TLR4/NF-κB通路调控炎性反应。方法用生物预测、文献分析筛选出目的 mi R;脂多糖(LPS)刺激LTC-14细胞制备炎症模型,通过实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法检测mi R的变化以及OM对其的调节作用;通过转染mimics和inhibitor来过表达和低表达目的 mi R后,以Western Blotting法、实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法检测LTC-14细胞中TLR4/NF-κB信号通路相关分子(TLR4、My D88、NF-κB)的表达情况,ELISA法检测细胞上清中炎性因子TNF-α的表达情况。结果经生物信息学预测筛选出的目的 mi R为mi R-211-5p;与对照组比较,LPS刺激LTC-14细胞后mi R-211-5p表达明显下降(P<0.001);与模型组比较,经OM干预后mi R-211-5p表达显著上升(P<0.001)。过表达mi R-211-5p后,TLR4、My D88、NF-κB的m RNA和蛋白水平,以及炎性因子TNF-α表达显著下降(P<0.05、0.01、0.001);低表达mi R-211-5p后,TLR4、My D88、NF-κB的m RNA和蛋白水平,以及炎性因子TNF-α表达上升(P<0.05、0.01、0.001)。结论 PSCs中的mi R-211-5p通过调节TLR4/NF-κB信号通路调节炎症反应,OM可以调节炎症模型中mi R-211-5p的表达,OM调节炎症反应的作用机制可能是通过mi R-211-5p调节TLR4/NF-κB信号通路实现的。 展开更多

关键词 miR-211-5p 氧化苦参碱 TLR4 胰腺星状细胞 炎症反应

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高脂饮食诱导胰岛素抵抗小鼠血浆microRNA表达谱及其与TLR4的关系 被引量：3

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作者 马科 朱晓波 +1 位作者 徐志伟 常晓彤 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1745-1752,共8页

目的:筛选高脂饮食诱导的胰岛素抵抗小鼠,以及应用Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)抑制剂TAK-242干预的胰岛素抵抗小鼠血浆差异表达的微小RNA(microRNA,miRNA),探讨胰岛素抵抗、TLR4和差异表达miRNAs的关系。方法:血浆标本来自... 目的:筛选高脂饮食诱导的胰岛素抵抗小鼠,以及应用Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)抑制剂TAK-242干预的胰岛素抵抗小鼠血浆差异表达的微小RNA(microRNA,miRNA),探讨胰岛素抵抗、TLR4和差异表达miRNAs的关系。方法:血浆标本来自前期实验的3组小鼠,即以普通基础饲料喂养(Low fat diet,LFD)的正常对照组、给予TAK-242的高脂饮食组(Treated high fat diet,HFD-T)和单纯高脂饮食组HFD-C,应用小鼠miRNA芯片检测血浆miRNA表达谱,筛选差异表达的miRNAs;采用实时荧光定量PCR方法验证芯片结果。应用生物信息学方法,以TLR4及其信号传导通路为中心,预测差异表达miRNAs的靶基因,并对靶基因分别进行GO和KEGG富集分析,以判定差异miRNAs主要影响的生物学功能或者通路。结果:miRNA基因芯片筛查结果显示,单纯高脂饮食组与正常饮食组比对,筛选出差异显著的miRNAs共计185种,其中6种miRNAs表达上调,179种miRANs表达下调;给予TAK-242的高脂饮食组与正常饮食组比对,筛选出差异显著的miRANs共计171种,均表达下调;给予TAK-242的高脂饮食组与单纯高脂饮食组比对,筛选出差异表达的miRNAs共计13种,均为下调。生物信息学分析结果显示,以TLR4为中心挖掘与其互作的蛋白质,共发现有10种蛋白;在TAK-242给予的高脂饮食组与单纯高脂饮食组中差异表达倍数均在1 000以上的4种miRNAs(mmu-miR-3095-3p、mmu-miR-5113、mmu-miR-709和mmumiR-335-3p),可在TLR4的互作蛋白质或Toll样受体信号通路中找到其作用的靶基因,发现这些靶基因74%属于生物过程基因,其中转录调控因子占82%。实时荧光定量PCR检测mmu-miR-3095-3p、mmu-miR-5113、mmu-miR-709和mmu-miR-335-3p水平,变化趋势与芯片结果一致。结论:胰岛素抵抗发生时,血浆miRNAs表达谱存在改变,此变化与TLR4及其信号通路相关。该研究结果丰富了胰岛素抵抗发生的机制,为寻找胰岛素抵抗血浆miRNAs诊断标志物提供了实验依据。 展开更多

关键词 高脂饮食 胰岛素抵抗 Toll样受体4 微小RNA表达谱

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肺鳞癌组织miRNA-29b表达及预后相关性研究 被引量：3

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作者 姜学东 李文雅 +1 位作者 叶圣权 张林 《解剖科学进展》 2016年第5期493-496,共4页

目的探讨miRNA-29b在可手术的肺鳞癌组织中的表达及其与转移及预后的关系。方法回顾性分析2006年6月至2013年12月间武警总医院与中国医科大学附属第一医院62例肺鳞癌手术患者的临床资料,采用RT-PCR方法检测上述病例肺鳞癌组织标本中miRN... 目的探讨miRNA-29b在可手术的肺鳞癌组织中的表达及其与转移及预后的关系。方法回顾性分析2006年6月至2013年12月间武警总医院与中国医科大学附属第一医院62例肺鳞癌手术患者的临床资料,采用RT-PCR方法检测上述病例肺鳞癌组织标本中miRNA-29b的表达水平,根据miRNA-29b相对表达量进行实验分组。应用x^2检验分析miRNA-29b表达与肺鳞癌患者转移的关系,应用Kaplan-Meier方法分析miRNA-29b表达与生存的关系,应用Cox风险比例模型分析miRNA-29b表达与预后的关系,应用Western blot分析肺鳞癌组织标本中胰岛素样生长因子-1(IGF1),分析miRNA-29b与IGF1表达的相关性。结果肺鳞癌组织中miRNA-29b的表达量显著低于正常肺组织,与转移相关(P<0.05),低表达组生存期较高表达组明显缩短(P<0.01),miRNA-29b表达可作为肺鳞癌患者预后的独立影响因素。IGF1在肺鳞癌组织标本中的表达显著高于正常肺组织(P<0.01)。结论 miRNA-29b低表达与非小细胞肺癌转移及生存期相关,miRNA-29b表达与IGF1的表达呈显著负相关。 展开更多

关键词 miRNA-29b 胰岛素样生长因子-1 肺鳞癌 转移 预后

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miRNA-27a对实验性肺结核大鼠免疫功能的调控作用及其机制 被引量：6

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作者 韩娜 刘凡平 +5 位作者 田彦卿 郑志清 郎伟明 王倩 刘亚涛 朱建光 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期104-110,共7页

目的:探讨miRNA-27a对实验性肺结核模型大鼠免疫功能的调控作用,阐明其可能的作用机制。方法:经尾静脉注射结核杆菌悬液建立肺结核大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组、miR-27a激动剂对照(agomir-NC)组和miR-27a激动剂(agomir)组... 目的:探讨miRNA-27a对实验性肺结核模型大鼠免疫功能的调控作用,阐明其可能的作用机制。方法:经尾静脉注射结核杆菌悬液建立肺结核大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组、miR-27a激动剂对照(agomir-NC)组和miR-27a激动剂(agomir)组,另取正常大鼠设为对照组,每组12只。agomir-NC组和agomir组大鼠经尾静脉注射agomir-NC或miR-27a agomir干预,每天1次,连续5 d。3周后,计算各组大鼠脾脏和胸腺指数,HE染色观察各组大鼠肺组织病理形态表现,流式细胞术检测各组大鼠外周血T淋巴细胞亚群百分率,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组大鼠肺组织中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组大鼠肺组织中miR-27a表达水平,Westernblotting法检测各组大鼠肺组织中Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)抑制蛋白α(IκBα)、磷酸化IκB(p-IκB)和NF-κB p65蛋白表达水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠肺组织损伤严重,脾脏及胸腺指数、外周血中CD4+T淋巴细胞百分率和肺组织中miR-27a表达水平及IκB蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),外周血中CD8+T淋巴细胞百分率及肺组织中IL-1β、IL-6、TNF-α水平和TLR4、p-IκB及NF-κB p65蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与模型组比较,agomir组大鼠肺组织病理形态表现明显改善,脾脏和胸腺指数、外周血中CD4+T淋巴细胞百分率、肺组织中miR-27a表达水平及IκB蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),外周血中CD8+T淋巴细胞百分率及肺组织中IL-1β、IL-6、TNF-α水平和TLR4、p-IκB、NF-κB p65蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),agomir-NC组大鼠上述各指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:过表达miR-27a可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路活化,减少炎症因子释放,调节机体免疫反应,从而改善肺结核大鼠肺损伤。 展开更多

关键词 微小RNA miRNA-27a 肺结核 Toll样受体4/核因子κB信号通路 免疫功能 炎症

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microRNA-1诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化 被引量：17

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作者 文通 魏云峰 +4 位作者 王梦洪 汪泱 曾俊义 彭小平 李宾公 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2011年第1期41-46,共6页

目的研究microRNA-1(miRNA-1)能否诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌样细胞分化。方法构建大鼠miRNA-1表达载体,分离扩增培养及鉴定大鼠MSCs。脂质体法转染大鼠第4代MSCs,实时定量RT-PCR(qRT-PCR)检测转染miRNA-1质粒后MSCs的miRNA-1表... 目的研究microRNA-1(miRNA-1)能否诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌样细胞分化。方法构建大鼠miRNA-1表达载体,分离扩增培养及鉴定大鼠MSCs。脂质体法转染大鼠第4代MSCs,实时定量RT-PCR(qRT-PCR)检测转染miRNA-1质粒后MSCs的miRNA-1表达水平。分别于转染2、4和6 d后用RT-PCR检测心肌重要转录因子GATA4、NKx2.5和MEF2C的mRNA表达,免疫荧光检测心肌特异蛋白I(cTnI)的表达。结果 90%以上的MSCs表达MSCs重要标志物CD29、CD44;未检测到造血前体细胞标志抗原CD34、白细胞标志抗原CD45的表达。转染miRNA-1质粒后,miRNA-1表达水平明显上调。转染miRNA-1质粒2、4和6 d后,GATA4、NKx2.5和MEF2C的mRNA表达逐渐增强。第4和6天后可见cTnI阳性表达细胞。结论 miRNA-1能诱导大鼠MSCs向心肌样细胞分化。 展开更多

关键词 miRNA-1 骨髓间充质干细胞 心肌样细胞

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猪Toll样受体7基因人工miRNA表达质粒的构建与筛选 被引量：3

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作者 宋红芹 姜翠翠 孙怀昌 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期18-21,26,共5页

目的构建猪Toll样受体7(TLR7)基因的人工miRNA(amiRNA)特异性表达载体,筛选有效amiRNA。方法 RT-PCR扩增猪TLR7基因的1984～2648 bp序列,构建融合表达载体pTLR7-EGFP。设计针对猪TLR7的5对amiRNA,构建重组干扰质粒pcDNA5-miRTLR7。将pcD... 目的构建猪Toll样受体7(TLR7)基因的人工miRNA(amiRNA)特异性表达载体,筛选有效amiRNA。方法 RT-PCR扩增猪TLR7基因的1984～2648 bp序列,构建融合表达载体pTLR7-EGFP。设计针对猪TLR7的5对amiRNA,构建重组干扰质粒pcDNA5-miRTLR7。将pcDNA5-miRTLR7和pTLR7-EGFP共转染NIH-3T3细胞,通过RT-PCR检测amiTLR7的表达,以荧光显微镜观察和流式细胞术分析干扰效率。结果 5个amiTLR7都成功表达,且均能沉默NIH-3T3细胞中TLR7基因的表达,抑制效率为36.99%到97.28%,其中amiTLR7-3效果最佳。结论成功构建了针对猪TLR7基因的amiRNA表达质粒,筛选出了沉默猪TLR7基因的最佳干扰序列。 展开更多

关键词 Toll样受体7基因 人工miRNA RNA干扰 筛选

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植物Dicer-like功能及响应逆境的研究进展

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作者 马健 高振华 +1 位作者 李天来 刘玉凤 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期119-129,共11页

植物Dicer-like蛋白家族属于核糖核酸酶III (RNase III),主要在植物体内产生miRNA与siRNA等非编码RNA,在植物的生长发育、器官发生、昼夜节律、生物和非生物胁迫反应以及对病毒和转座子的防御中都起重要作用。本文综述了Dicer-like蛋白... 植物Dicer-like蛋白家族属于核糖核酸酶III (RNase III),主要在植物体内产生miRNA与siRNA等非编码RNA,在植物的生长发育、器官发生、昼夜节律、生物和非生物胁迫反应以及对病毒和转座子的防御中都起重要作用。本文综述了Dicer-like蛋白的结构、功能、种类、定位,以及在生物与非生物逆境研究中的进展,以期为Dicer-like家族在植物中的进一步的研究与利用提供理论参考。 展开更多

关键词 Dicer-like 逆境胁迫 MIRNA SIRNA

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经尿道膀胱肿瘤切除术患者TLR4、GR、miRNA-15a表达与尿道感染的关系 被引量：4

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作者 朱卫 吴亚明 +2 位作者 魏林 朱瑞芳 谢冲 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期1167-1170,共4页

目的 探讨经尿道膀胱肿瘤切除术(TURBT)患者外周血Toll样受体4(TLR4)、白细胞糖皮质激素受体(GR)、微小RNA-15a(miRNA-15a)表达与尿路感染的关系。方法 选取2017年4月-2020年10月江陵县人民医院接受经尿道膀胱肿瘤切除术患者76例作为研... 目的 探讨经尿道膀胱肿瘤切除术(TURBT)患者外周血Toll样受体4(TLR4)、白细胞糖皮质激素受体(GR)、微小RNA-15a(miRNA-15a)表达与尿路感染的关系。方法 选取2017年4月-2020年10月江陵县人民医院接受经尿道膀胱肿瘤切除术患者76例作为研究对象。根据是否发生尿路感染分为感染组(26例)及未感染组(50例),统计两组患者的临床特征及外周血TLR4、GR、miRNA-15a水平,受试者工作特征曲线(ROC)分析TLR4、GR、miRNA-15a诊断术后尿路感染的价值,并采用Logistic回归分析尿路感染的危险因素。结果 ROC分析结果表明,TLR4、GR及miRNA-15a对术后尿路感染诊断的曲线下面积(AUC)值分别为0.817、0.847、0.773,低于三者联合诊断的0.912(P<0.05);Logistic回归分析结果表明,糖尿病史、术前留置导尿管、TLR4≥0.208为TURBT术后尿道感染的独立危险因素,GR≥45.943、miRNA-15a≥0.459为TURBT术后尿道感染保护因素(P<0.05)。结论 TURBT术后尿路感染受糖尿病、术前留置导尿管、外周血TLR4、GR、miRNA-15a表达水平等因素影响,TLR4的高表达,GR、miRNA-15a的低表达在术后尿路感染的早期诊断方面具有较高应用价值。 展开更多

关键词 尿路感染 经尿道膀胱肿瘤切除术 TOLL样受体4 白细胞糖皮质激素 微小RNA-15a 诊断

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Toll样受体4的表达及miR-TLR4干扰对HBV相关肝癌细胞生物学活性的影响 被引量：5

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作者 曾治民 钟琼 +3 位作者 何静 欧阳玉茗 肖震宇 刘安文 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期116-122,共7页

目的观察Toll样受体4在乙肝病毒相关肝癌细胞系中的表达及对其生物学活性的影响。方法Western blot检测Hep3B、Hep G2.2.15、Hep G2、SMMC7721及Huh7五种肝癌细胞中TLR4蛋白表达情况,选择TLR4表达高的HBV阳性肝癌细胞作为研究对象。构建... 目的观察Toll样受体4在乙肝病毒相关肝癌细胞系中的表达及对其生物学活性的影响。方法Western blot检测Hep3B、Hep G2.2.15、Hep G2、SMMC7721及Huh7五种肝癌细胞中TLR4蛋白表达情况,选择TLR4表达高的HBV阳性肝癌细胞作为研究对象。构建4个mi R-TLR4质粒和一个阴性对照质粒,选择干扰效果明显的质粒转染TLR4表达高的HBV阳性肝癌细胞。实验分为正常组,阴性对照组,干扰质粒3组及干扰质粒4组。通过MTT法、克隆平板形成实验、流式细胞术分别检测干扰TLR4表达对肝癌细胞增殖、克隆形成、周期及凋亡的影响。结果 TLR4基因在五种肝癌细胞株中均有表达,在Hep3B细胞中表达最高。与正常组和阴性对照组相比,干扰TLR4表达后,Hep3B细胞的增殖能力明显受到抑制(P<0.05),克隆形成率显著下降(P<0.05),周期阻滞于G2/M期,并促进细胞凋亡(P<0.05)。结论 TLR4表达上调促进HBV相关肝癌细胞Hep3B生长增殖、周期再分布以及抑制凋亡,在肝癌发生发展过程中起重要作用。 展开更多

关键词 TOLL样受体4 乙肝病毒 肝细胞癌 MI R-TLR4质粒

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Antagomir-320对胫骨骨折小鼠围术期神经认知障碍的影响 被引量：1

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作者 周加慧 宋作艳 +7 位作者 谢春晖 陶和 郭雨薇 牟传琳 符丽 林旭 王彬 毕燕琳 《实用药物与临床》 CAS 2021年第9期788-793,共6页

目的探究antagomir-320对胫骨骨折小鼠围术期神经认知障碍及相关蛋白IGF-1、APP的影响。方法选择健康雄性C57/BL小鼠120只,12~14周龄,体重20~30 g,采用随机数字表法将其分为4组(n=30):正常对照组(C组)、麻醉手术组(AS组)、局部海马注射... 目的探究antagomir-320对胫骨骨折小鼠围术期神经认知障碍及相关蛋白IGF-1、APP的影响。方法选择健康雄性C57/BL小鼠120只,12~14周龄,体重20~30 g,采用随机数字表法将其分为4组(n=30):正常对照组(C组)、麻醉手术组(AS组)、局部海马注射生理盐水+麻醉手术组(NS组)、局部海马注射antagomir-320+麻醉手术组(AT组)。于术后1、3、7 d进行Morris水迷宫实验和旷场实验,进行神经行为学评分,取海马组织,Western blot检测海马组织胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、淀粉样前体蛋白(APP)表达,qRT-PCR检测miRNA-320与IGF-1 mRNA表达变化。结果与C组比较,术后AS组、NS组、AT组逃避潜伏期均延长,靶象限停留时间百分比均降低(P<0.05);AS组、NS组术后miRNA-320表达升高,IGF-1mRNA表达降低,APP蛋白表达升高;AT组术后miRNA-320表达降低,IGF-1mRNA在术后1 d表达降低,术后3、7 d升高,呈逐渐升高趋势,术后1、3 d APP蛋白表达升高,然后逐渐降低(P<0.05)。与NS组相比,AT组逃避潜伏期缩短,靶象限停留时间百分比增高,miRNA-320表达降低,IGF-1mRNA及蛋白表达升高,APP蛋白表达升高(P<0.05)。NS与AS组相比,术后1、3、7 d差异均无统计学意义(P>0.05)。结论Antagomir-320能改善胫骨骨折小鼠围术期认知功能障碍。 展开更多

关键词 Antagomir-320 围术期神经认知障碍 miRNA-320 胰岛素样生长因子 淀粉样前体蛋白

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香蕉枯萎病菌Dicer-like基因的功能分析 被引量：1

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作者 张欣 漆艳香 +4 位作者 曾凡云 王艳玮 谢培兰 谢艺贤 彭军 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期279-294,共16页

香蕉枯萎病病原菌尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)4号生理小种(Foc4)含有两个进化上高度保守的Dicer-like基因FocDCL1和FocDCL2。为了探究该基因的功能及其在RNAi中的作用机制,利用同源重组的方法获得ΔFocDCL1... 香蕉枯萎病病原菌尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)4号生理小种(Foc4)含有两个进化上高度保守的Dicer-like基因FocDCL1和FocDCL2。为了探究该基因的功能及其在RNAi中的作用机制,利用同源重组的方法获得ΔFocDCL1、ΔFocDCL2和ΔFocDCL1/2基因敲除突变体。表型分析显示,与Foc4野生型相比,突变体菌丝的营养生长无显著差异,但产孢量下降;ΔFocDCL2突变体在非生物胁迫刚果红处理后菌落明显变小且气生菌丝增多;ΔFocDCL2和ΔFocDCL1/2的致病力下降。miRNA深度测序数据显示,与Foc4野生型相比,ΔFocDCL1、ΔFocDCL2和ΔFocDCL1/2敲除突变体的miRNA长度分布和5′–端首位碱基出现频率都发生了改变,都能产生自身特异miRNA。DCL功能存在交叉和冗余,miRNA可以通过依赖独立的、交叉的或者联合的DCL发生;此外,鉴定到不依赖DCL形成的miRNA。这些结果表明FocDCL在产孢量、非生物胁迫、致病力以及小RNA发生中发挥作用。 展开更多

关键词 香蕉 枯萎病 Fusarium oxysporum f.sp.cubense Dicer-like基因 致病力测试 miRNA

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连续性血液滤过治疗对严重脓毒症患者炎症介质及单核细胞中TLR4和miRNA-146a的影响 被引量：12

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作者 张烈 严一核 谢渭根 《中国急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期961-965,共5页

目的 探讨连续性血液滤过（CBP）治疗对严重脓毒症患者血液中炎症介质、单核细胞中Toll样受体4（TLR4）和miRNA-146a的影响.方法 选择符合纳入标准的脓毒症患者40例,分为CBP组及脓毒症组,另选15例健康医务人员为对照组.动态检测患者第0... 目的 探讨连续性血液滤过（CBP）治疗对严重脓毒症患者血液中炎症介质、单核细胞中Toll样受体4（TLR4）和miRNA-146a的影响.方法 选择符合纳入标准的脓毒症患者40例,分为CBP组及脓毒症组,另选15例健康医务人员为对照组.动态检测患者第0、12、24、48、72 h血液中TNF-α、IL-1、IL-6水平及外周血单核细胞中TLR4 mRNA、TLR4、miRNA-146a的表达量的变化,并将TLR4 mRNA、TLR4的表达水平和miRNA-146a的表达水平进行相关性分析.结果 CBP组及脓毒症组TNF-α、IL-1及IL-6的分泌水平较治疗前皆有不同程度下调（P＜0.05）,CBP组下调幅度明显大于脓毒症组.CBP组随着治疗的进行,TLR4 mRNA、TLR4及miRNA-146a的表达水平较治疗前有所下调（P＜0.05）,在第24 h前只有小幅度下调,而在第48 h才出现明显下调；脓毒症组在治疗后第72 h才出现小幅度下调.CBP组miRNA-146a表达水平与TLR4 mRNA、TLR4的表达水平呈正相关（P ＜0.001）.结论 CBP不仅能有效地清除脓毒症患者循环中高浓度的炎症因子,同时还可以对参与炎症反应发生和发展的相关分子,如TLR4及miRNA-146a进行调节,从而发挥对脓毒症的治疗作用. 展开更多

关键词 脓毒症 连续性血液滤过(CBP) 炎症因子 Toll样受体4(TLR4) miRNA-146a

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miR-149-5p靶向DCLK1基因对乳腺癌细胞MCF-7/DDP顺铂耐药的影响 被引量：1

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作者 朱会利 王清云 《生物技术》 CAS 2023年第2期202-207,共6页

[目的]探讨miR-149-5p靶向双皮质素样激酶1(DCLK1)基因对乳腺癌细胞MCF-7/DDP顺铂耐药的影响。[方法]构建DDP耐药乳腺癌MCF-7细胞,然后按细胞转染质粒的不同分入对照组(不转染质粒)、空载组(转染空载质粒3.1)、miRNA-149-5p组(转染miRNA... [目的]探讨miR-149-5p靶向双皮质素样激酶1(DCLK1)基因对乳腺癌细胞MCF-7/DDP顺铂耐药的影响。[方法]构建DDP耐药乳腺癌MCF-7细胞,然后按细胞转染质粒的不同分入对照组(不转染质粒)、空载组(转染空载质粒3.1)、miRNA-149-5p组(转染miRNA-149-5p-AH质粒)。采用CCK-8法检测细胞存活率,划痕实验检测细胞迁移力,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测细胞miRNA-149-5p和DCLK1 mRNA水平,Western Bloting检测细胞DCLK1蛋白表达水平。[结果] miRNA-149-5p组乳腺癌MCF-7/DDP细胞miRNA-149-5p水平、细胞凋亡率显著高于对照组和空载组,DCLK1 mRNA和蛋白水平、细胞存活率和细胞迁移率显著低于对照组和空载组,差异均有统计学意义(P<0.05)。空载组和对照组miRNA-149-5p水平、细胞凋亡率、DCLK1 mRNA和蛋白表达、细胞存活率和细胞迁移率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。[结论]过表达miRNA-149-5p可减弱乳腺癌MCF-7/DDP细胞的顺铂耐药性,使乳腺癌细胞增殖和迁移率降低,凋亡增加,其机制可能与靶向抑制DCLK1的表达有关。 展开更多

关键词 miRNA-149-5p 双皮质素样激酶1 乳腺癌 顺铂耐药

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微小RNA在类风湿关节炎Toll样受体信号通路中的研究进展 被引量：4

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作者 张娜 张莉芸 +4 位作者 张改连 高晋芳 马丹 李娟 许珂 《中国医药导报》 CAS 2019年第23期34-37,共4页

类风湿关节炎(RA)是一种以慢性滑膜增生导致的进行性软骨及骨质破坏的自身免疫病,致残致畸率高,病因尚不完全清楚。目前RA治疗主要包括非甾体类抗炎药、激素、慢作用抗风湿药及生物制剂,尽管提高了疾病缓解率,但对已经形成的关节破坏无... 类风湿关节炎(RA)是一种以慢性滑膜增生导致的进行性软骨及骨质破坏的自身免疫病,致残致畸率高,病因尚不完全清楚。目前RA治疗主要包括非甾体类抗炎药、激素、慢作用抗风湿药及生物制剂,尽管提高了疾病缓解率,但对已经形成的关节破坏无法修复,且存在副作用大、价格昂贵等缺点,因此急需寻找一种新的治疗手段,而深入了解RA的发病机制则尤为关键。本文综述了微小RNA在RA Toll样受体信号通路中的调控作用,以期为寻找新的RA治疗靶点提供参考。 展开更多

关键词 类风湿关节炎 微小RNA TOLL样受体信号通路 治疗靶点

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微小RNA-146a靶向调控Krüppel样转录因子7对强直性脊柱炎T细胞炎症反应及自噬的影响 被引量：3

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作者 李家江 王守鹏 +1 位作者 张兆川 赵腾 《安徽医药》 CAS 2022年第8期1611-1614,共4页

目的探讨微小RNA-146a(miR-146a)是否通过靶向调控Krüppel样转录因子7(KLF7)的表达而影响强直性脊柱炎病人T细胞炎症反应及自噬。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测强直性脊柱炎病人T细胞与健康人T细胞中miR-146a的... 目的探讨微小RNA-146a(miR-146a)是否通过靶向调控Krüppel样转录因子7(KLF7)的表达而影响强直性脊柱炎病人T细胞炎症反应及自噬。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测强直性脊柱炎病人T细胞与健康人T细胞中miR-146a的表达量;分别将anti-miR-NC、anti-miR-146a、pcDNA3.1、pcDNA3.1-KLF7转染至强直性脊柱炎病人T细胞;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-23(IL-23)的水平;双荧光素酶报告实验验证miR-146a与KLF7的靶向结合关系;蛋白质印迹法(Western blotting)检测KLF7、自噬相关基因5(ATG5)、Beclin-1的表达量。结果与健康人T细胞比较,强直性脊柱炎病人T细胞中miR-146a的表达量升高[(1.00±0.08)比(2.74±0.13),t=53.54,P<0.05];与anti-miR-NC组比较,anti-miR-146a组IL-6[(823.17±14.10)ng/L比(372.31±11.03)ng/L]、IL-17[(901.00±16.29)ng/L比(428.39±12.34)ng/L]、IL-23[(886.38±15.11)ng/L比(401.61±11.75)ng/L]的水平降低(t=43.62,40.06,43.87,P<0.05),ATG5[(0.33±0.03)比(0.79±0.07)]、Beclin-1[(0.42±0.04)比(0.91±0.08)]蛋白水平升高(t=10.46,9.49,P<0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-146a可靶向结合KLF7;转染pcDNA3.1-KLF7可明显降低IL-6[(823.17±14.10)ng/L比(477.37±12.01)ng/L]、IL-17[(901.00±16.29)ng/L比(558.67±13.16)ng/L]、IL-23[(886.38±15.11)ng/L比(531.69±12.75)ng/L]的水平(t=32.34,28.31,31.07,P<0.05),提高ATG5[(0.32±0.03)比(0.60±0.06)]、Beclin-1[(0.44±0.04)比(0.78±0.07)]的表达水平(t=7.23,7.30,P=0.002)。结论抑制miR-146a表达可通过靶向KLF7而抑制强直性脊柱炎病人T细胞炎症反应及促进细胞自噬。 展开更多

关键词 脊柱炎 强直性 微小RNA-146a Krüppel样转录因子7 T细胞 炎症 自噬

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环状RNA_PLEKHM3通过miR-320/KLF4轴调控宫颈癌细胞上皮间质转化 被引量：4

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作者 张亚男 崔莹 +1 位作者 王天娇 杜忠蕾 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第3期403-412,共10页

目的探讨环状RNA含普列克底物蛋白同源域的家族M3成员(PLEKHM3)(circRNA_PLEKHM3)通过调控微小RNA-320(miR-320)/畸变样因子4(KLF4)轴在宫颈癌细胞上皮间质转化(EMT)行为中的作用与机制。方法采用实时定量PCR(qRT-PCR)法检测宫颈癌细胞H... 目的探讨环状RNA含普列克底物蛋白同源域的家族M3成员(PLEKHM3)(circRNA_PLEKHM3)通过调控微小RNA-320(miR-320)/畸变样因子4(KLF4)轴在宫颈癌细胞上皮间质转化(EMT)行为中的作用与机制。方法采用实时定量PCR(qRT-PCR)法检测宫颈癌细胞Hela和CaSki中circRNA_PLEKHM3的表达水平;RNA荧光原位杂交检测circRNA_PLEKHM3在人宫颈癌上皮细胞CaSki中的定位;双荧光素酶报告基因实验检测circRNA_PLEKHM3和miR-320的靶向关系,以及miR-320和KLF4的靶向关系;对CaSki细胞过表达circRNA_PLEKHM3;另外设置三组,分别为在过表达circRNA_PLEKHM3的基础上过表达miR-320、沉默KLF4,以及在过表达miR-320的基础上沉默KLF4。qRT-PCR检测CaSki中miR-320的表达水平;Western blot检测CaSki细胞中KLF4和EMT标志物上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的表达;Transwell实验检测细胞迁移数和侵袭细胞数。结果circRNA_PLEKHM3在Hela和CaSki中的表达均降低(P<0.05),其主要定位在细胞质中;双荧光素酶报告基因实验显示miR-320和circRNA_PLEKHM3存在靶向关系,KLF4和miR-320存在靶向关系;过表达circRNA_PLEKHM3抑制miR-320和N-cadherin、Vimentin、MMP-2、MMP-9的蛋白表达,上调E-cadherin的蛋白表达,减少细胞迁移和侵袭数(P<0.05);在过表达circRNA_PLEKHM3的基础上过表达miR-320或沉默KLF4均能够促进miR-320和N-cadherin、Vimentin、MMP-2、MMP-9蛋白的表达,上调E-cadherin蛋白的表达,减少迁移和侵袭细胞数(P<0.05);然而在过表达miR-320的基础上沉默KLF4,KLF4和N-cadherin、Vimentin、MMP-2、MMP-9蛋白的表达受到抑制,E-cadherin蛋白的表达上调,细胞迁移和侵袭数减少(P<0.05)。结论circRNA_PLEKHM3过表达可能通过miR-320/KLF4轴调控宫颈癌细胞的EMT。 展开更多

关键词 cirRNA_PLEKHM3 miRNA-320 畸变样因子4 宫颈癌细胞 上皮间质转化 迁移 侵袭

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Luminal型与Basal-like型乳腺癌差异miRNAs的表达与预后分析 被引量：1

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作者 赵明娟 刘江波 +4 位作者 袁芊芊 邓通 黄桥 吴高松 方程 《医学新知》 CAS 2021年第3期178-185,共8页

目的分析Luminal型和Basal-like型乳腺癌之间差异表达的microRNAs(miRNAs),探讨其表达水平与Luminal型和Basal-like型乳腺癌预后的关系。方法从基因表达综合数据库(GEO)中下载包含Luminal和Basal-like乳腺癌患者相关的miRNAs微阵列数据... 目的分析Luminal型和Basal-like型乳腺癌之间差异表达的microRNAs(miRNAs),探讨其表达水平与Luminal型和Basal-like型乳腺癌预后的关系。方法从基因表达综合数据库(GEO)中下载包含Luminal和Basal-like乳腺癌患者相关的miRNAs微阵列数据集GSE81000与GSE40267,利用GEO2R在线分析工具筛选Luminal和Basal-like乳腺癌之间差异表达的miRNAs。通过mirDIP数据库预测其靶基因,并采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)在人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-468中验证miRNAs的差异表达。利用METABRIC数据库,采用KaplanMeier Plotter在线工具分析miR-199a-5p和miR-199b-5p表达水平与Luminal型和Basal-like型乳腺癌预后的关系。结果筛选出了35种在Luminal型和Basal-like型乳腺癌中差异表达的miRNAs。相较于Luminal型,18种miRNAs在Basal-like型中表达下调,17种表达上调。靶基因预测结果显示,35种差异表达miRNAs的潜在靶基因共4180个,其中最相关的靶基因有19个,对应的差异miRNAs为miR-199a-5p、miR-199b-5p。相较于Luminal型乳腺癌,miR-199a-5p和miR-199b-5p在Basal-like型乳腺癌中表达下调。qRT-PCR检测结果表明,miR-199a-5p和miR-199b-5p在MCF-7(Luminal型)和MDA-MB-468(Basal-like型)细胞中的表达水平与GEO2R分析结果趋势一致。生存分析结果表明,miR-199a-5p与miR-199b-5p低表达与Luminal A型乳腺癌患者的总生存率降低显著相关。结论共筛选出35个在Luminal型和Basal-like型乳腺癌中差异表达的miRNAs。其中,miR-199a-5p、miR-199b-5p与乳腺癌的预后相关,有望成为治疗的新靶点。 展开更多

关键词 MIRNAS Luminal型乳腺癌 Basal-like型乳腺癌 生存分析

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